关键词： 原发性高血压   动态血压监测   动脉粥样硬化性脑梗死   颈动脉粥样硬化斑块   相关性  

摘要： 目的探讨原发性高血压患者血压昼夜节律变化与动脉粥样硬化性脑梗死及颈动脉粥样硬化斑块的相关性。方法回顾性分析2013年1—12月入院治疗的67例原发性高血压合并动脉粥样性脑梗死患者,比较病例组与对照组患者血压昼夜动态变化情况,同时比较不同血压昼夜变化类型的病例组患者,其颈动脉粥样硬化斑块的检查情况。结果与对照组相比,病例组的24 h平均收缩压、白天收缩压、夜间收缩压均显著高于对照组,夜间收缩压下降率、夜间舒张压下降率均显著低于对照组,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。对照组血压昼夜变化呈杓型的例数均显著高于病例组四种类型的脑梗死患者,差异具有统计学意义(P<0.05);病例组四种类型的脑梗死患者中,血压昼夜变化呈非杓型的患者数均显著高于对照组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。病例组中非杓型和反杓型患者检查到2级以上颈动脉粥样硬化斑块的情况明显高于dipper组和extreme-dipper组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。在杓型组和超杓型组患者中,均未检查到3级颈动脉粥样硬化斑块。结论原发性高血压患者的昼夜节律变化异常与动脉粥样硬化性脑梗死以及颈动脉粥样硬化斑块密切相关。

关键词： 钟基因Per2   钟控基因   昼夜节律   口腔   肿瘤  

摘要： 目的探讨钟基因Per2和钟控基因血管内皮生长因子(VEGF)、Ki67、c-Myc和P53在颊黏膜癌变不同阶段的昼夜节律变化规律以及与癌变发生发展的关系。方法 90只叙利亚金黄地鼠置于12 h光照和12 h黑暗交替环境中饲养,用二甲基苯并蒽(DMBA)涂抹颊黏膜建立金黄地鼠颊癌模型,分别在DMBA涂抹前,涂抹6周和14周后的24 h内的6个不同时间点处死动物,获取正常颊黏膜、癌前病变和癌症3个不同阶段昼夜6个不同时间的组织。经病理学检查确认后,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各时间点Per2、VEGF、Ki67、c-Myc和P53 m RNA的相对表达量,并行余弦分析,以中值、振幅和峰值位相时为指标反映各基因表达的昼夜节律特征。结果 Per2、VEGF、P53和c-Myc m RNA在癌变3个阶段的表达均具有昼夜节律性(P<0.05),而Ki67 m RNA仅在正常黏膜和癌前病变阶段的表达具有昼夜节律性(P<0.05)。Per2和P53 m RNA表达的中值随着癌症的发展而降低(P<0.05),VEGF、c-Myc和Ki67 m RNA表达的中值随着癌症的发展而上升(P<0.05);P53 m RNA的振幅随着癌症的发展而降低(P<0.05),Per2、VEGF、Ki67和c-Myc m RNA的振幅在癌前病变和癌症阶段均高于正常组(P<0.05);在癌前病变阶段,Per2、VEGF和c-Myc m RNA的峰值位相时较正常组提前,而Ki67和P53 m RNA的峰值位相时较正常组滞后。结论随着癌症的发生和发展,钟基因Per2和肿瘤相关钟控基因VEGF、Ki67、c-Myc、P53表达的昼夜节律特征发生明显改变。

关键词： 昆明种小鼠   肝脏   胆酸合成基因   胆酸转运体   昼夜节律   性别差异  

摘要： 目的观察昆明种小鼠肝脏胆酸合成基因及转运体表达的昼夜节律变化。方法成年昆明种小鼠48只,适应性饲养1周后,随机分为6组(每组8只,雌雄各半),分别于06∶00、10∶00、14∶00、18∶00、22∶00、02∶00不同时间点收集动物肝脏,提取肝脏总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR法检测肝脏胆酸代谢途径相关基因的mRNA表达。结果小鼠胆酸合成限速酶Cyp7a1,Cyp27a1mRNA最高表达在18∶00,且雌性表达高于雄性;而Cyp8b1和Cyp7b1表达最高则在10∶00,其中Cyp7b1表现为雄性高于雌性;肝脏核受体FXR在18∶00表达最高;且雌性表达高于雄性,SHP雌性表达最高在18∶00,而雄性最高表达则出现在10∶00;转运体Ntcp的最高表达在18∶00,Bsep最高表达则在14∶00,且雌性表达高于雄性。结论小鼠肝脏胆酸代谢基因表达存在昼夜节律性,且存在性别差异。

关键词： 基因表达   口腔肿瘤   癌,鳞状细胞   昼夜节律   细胞周期蛋白类  

摘要： 目的 探讨生物钟基因Perl和细胞周期基因p53、细胞周期蛋白（Cyclin）D1、B1、周期蛋白依赖性激酶（cyclin-dependent kinases,CDK）在口腔颊黏膜癌变不同阶段的昼夜节律表达变化及与癌变发生的关系.方法 90只金黄地鼠置于光照和黑暗交替环境中饲养,用二甲基苯并蒽涂抹颊黏膜建立金黄地鼠颊黏膜鳞状细胞癌模型,分别在涂抹二甲基苯并蒽前、6周和14周后的24 h开灯后时间（hour after lights onset,HALO）的4、8、12、16、20和24 HALO的6个时间点处死动物,每个时间点5只,分别获取正常颊黏膜、癌前病变和鳞状细胞癌3个癌变阶段各昼夜6个时间的组织.常规切片在HE染色下观察组织癌变情况;用实时定量荧光PC R（real time PCR,RT-PCR）检测各时间点组织中Perl、p53、CyclinD1及B1、CDK1 mRNA的表达;行余弦分析,以中值、振幅和峰值位相时为指标分析各基因的表达在癌变不同阶段的昼夜节律变化特征.结果 Perl、p53、CDK1和CyclinD1 mRNA分别在癌变3个阶段中的表达均具有昼夜节律性（P＜0.05）;CyclinB1 mRNA仅在正常颊黏膜和鳞状细胞癌阶段中的表达具有昼夜节律性（P＜0.05）,而在癌前病变阶段表现为昼夜节律紊乱（P＞0.05）;Per1和p53mRNA表达的中值随着鳞状细胞癌的发展而显著降低（P＜0.05）,CyclinD1、B1、CDKlmRNA表达的中值随着鳞状细胞癌的发展而显著上升（P＜0.05）;Per1、p53和CyclinD1 mRNA表达的振幅随着鳞状细胞癌的发展显著降低（P＜0.05）,CDK1mRNA的振幅随着鳞状细胞癌的发展显著增加（P＜0.05）,而CyclinB1 mRNA的振幅无显著性改变（P＞0.05）;在癌前病变阶段Per1和CDK1 mRNA峰值出现时间（即峰值位相时）较正常阶段明显提前,而p53和CyclinD1 mRNA峰值表现为明显滞后;在鳞状细胞癌阶段CDK1和CyclinB1 mRNA的峰值位相时较正常阶段明显滞后,而Per1、p53和CyclinD1 mRNA无明显变化.结论 随着鳞状细胞癌的发生和发展,生物钟基因Per1和细胞周期基因p53、CyclinB1、D1、CDK1、Cyclin表达的昼夜节律特征明显改变.

关键词： hypoxia   hypoxia-inducible factor-1 alpha   hypoxia-inducible factor-2 alpha   hepatocellular carcinoma   circadian clock  

摘要： Disturbance in the expression of circadian rhythm genes is a common feature in certain types of cancer, however the mechanisms mediating this disturbance remain to be elucidated. The present study aimed to investigate the effect of hypoxia on the expression of circadian rhythm genes in liver cancer cells and to identify the mechanisms underlying this effect in hepatocellular carcinoma (HCC). The HCC cell line, PLC/PRF/5. was treated With either a vehicle control or CoCl2 at 50, 100 or 200 mu M for 24 h. Following treatment, the protein expression levels of hypoxia-inducible factor (HIF)-1 alpha and HIF-2 alpha were detected by western blotting and the mRNA expression levels of circadian rhythm genes, including circadian locomotor output cycles kaput (Clock), brain and muscle Arnt-like 1 (Bmall), period (Per)1, Per2, Per3, cryptochrome (Cry)1, Cry2 and casein kinase l epsilon (CKI epsilon), were detected by reverse transcription quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR). Expression plasmids containing HIF-1 alpha or HIF-2 alpha were transfected into the PLC/PRF/5 cells using liposomes and RT-qPCR was used to determine the effects of the transfections on the expression levels of circadian rhythm genes. Following treatment with CoCl2, the protein expression levels of HIF-1 alpha and HIF-2 alpha were upregulated in a CoCl2 concentration-dependent manner. The mRNA expression levels of Clock, Bmall and Cry2 were increased, and the mRNA expression levels of Per1, Per2, Per3, Cry1 and CKI epsilon were decreased following CoCl2 treatment (P<0.05). In the PLC/PRF/5 cells transfected with the plasmid containing HIF-1 alpha, the mRNA expression levels of Clock, Bmall and Cry2 were increased, and the mRNA expression levels of Per1, Per2, Per3, Cry1 and CKI epsilon were decreased. In the PLC/PRF/5 cells transfected with the plasmid containing HIF-2 alpha, the mRNA expression levels of Clock, Bmall, Per1, Cry1, Cry2 and CKI epsilon were upregulated, and the mRNA expression

关键词： 血压变异性   血压昼夜节律   原发性高血压   动脉粥样硬化  

摘要： 目的:探讨原发性高血压患者的血压昼夜节律、血压变异性与动脉粥样硬化的关系。方法:入选原发性高血压患者120例,行24 h动态血压监测,根据血压昼夜节律分为杓型组(n=22)、非杓型组(n=36)和反杓型组(n=62)。分析比较3组的血压变异性、冠心病发生率及颈动脉斑块检出率。结果:反杓型组的24 h收缩压标准差(24hSSD)、24 h舒张压标准差(24hDSD)、白昼收缩压标准差(dSSD)、白昼舒张压标准差(dDSD)、24 h收缩压变异系数(24hSBP-CV)、夜间收缩压变异系数(nSBP-CV)均低于杓型组;反杓型组的24hDSD、dDSD、24hDBP-CV低于非勺型组;反杓型组冠心病发生率及颈动脉斑块检出率较杓型组明显升高(P均<0.05)。结论:原发性高血压患者血压昼夜节律异常对动脉粥样硬化进展可能有促进作用。

关键词： β-细辛醚   抑郁症   昼夜节律周期基因Per1  

摘要： 目的:探讨β-细辛醚对抑郁模型大鼠昼夜节律周期基因Per1(period1)表达的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、阿戈美拉汀组(40 mg·kg-1·d-1)、β-细辛醚低剂量组(12.5 mg·kg-1·d-1)、β-细辛醚高剂量组(25 mg·kg-1·d-1)共5组,每组20只。通过28 d慢性不可预见性应激刺激复制大鼠抑郁模型,于给药前及造模后对大鼠进行敞箱实验与糖水偏爱度行为学评估,应用实时定量PCR和Western blot检测各组大鼠脑中昼夜节律基因Per的表达。结果:行为学检测结果显示,与空白对照组相比,模型组的水平活动次数和糖水偏爱度均显著减少;与模型组相比,3个给药组的水平活动次数和糖水偏爱度均显著增加。PCR和Western blot检测检测结果显示,与空白对照组比较,模型组昼夜节律基因Per1的mRNA与蛋白表达均明显增高(P<0.05),而与模型组相比,阿戈美拉汀组和β-细辛醚高低剂量组昼夜节律基因Per1的mRNA与蛋白表达水平明显低于模型组(P<0.05)。结论:β-细辛醚可能通过影响抑郁大鼠昼夜节律基因Per1的脑表达进而改善大鼠的抑郁状态。

关键词： 视顶盖   生物钟基因   昼夜节律   单色光   鸡  

摘要： 生物体的行为活动与生理现象呈周期性波动,并与光照密切相关。本实验室前期研究发现光色能影响肉鸡和蛋鸡的生产性能,且禽类具有优越的视觉机能,视顶盖是禽类视觉信息加工和整合的部位,其结构复杂,那么在视觉传导通路中作为重要视觉中枢的视顶盖昼夜节律变化如何,为此我们将刚出壳的AA肉鸡分别饲养于白、红、绿和蓝光下,采用RT-PCR和Western blot等技术,研究鸡视顶盖是否存在生物钟基因的昼夜节律性表达,以及不同波长单色光对其昼夜节律表达的影响。研究发现,1除Per 2基因外,生物钟基因Clock、Bmal1、Bmal2、Per3、Cry1和Cry2的mRNA在鸡视顶盖中表达呈昼夜节律性。2相较于白光,红光和蓝光刺激使除Per 3外的其它钟基因Clock、Bmal 1、Bmal 2、Cry 1和Cry2昼夜节律性表达相位延迟,而绿光组钟基因相位与白光组相比无显著差异;单色光照射后,对钟基因产生的振幅改变不具有同向性,与白光相比,绿光刺激使Per3、Cry1和Cry2昼夜节律性表达振幅增强,红光组使Bmal1、Cry1和Cry2振幅减弱,而蓝光刺激后使Bmal2和Cry1振幅增加。3鸡视顶盖中BMAL1蛋白的昼夜节律性表达趋势与Bmal1基因mRNA表达相似。单色光照射后,其昼夜节律性不发生改变,但红光组比白、蓝光组相位发生了延迟,振幅降低,蓝光组的振幅较白、绿光组的提高。以上结果表明,除了Per2基因外,其余钟基因Clock、Bmal1、Bmal2、Per3、Cry1和Cry2在鸡视顶盖中表达均呈现昼夜节律性。不同单色光对生物钟基因和生物钟蛋白BMAL 1的昼夜节律性表达无影响,但在一定程度上影响其表达量、峰值以及相位。

关键词： 电针   节律   视交叉上核   生物钟基因  

摘要： 目的：通过对昼夜节律紊乱小鼠进行电针治疗,研究电针对节律的调整作用,以及节律紊乱小鼠视交叉上核(suprachiasmatic nucleus,SCN)内多种节律相关基因及节律相关转录因子参与电针重置昼夜节律的作用。方法：采用成都中医药大学时间生物学实验室动物自发活动记录及分析系统,以及Clocklab节律数据采集分析系统对实验动物进行监测和记录。将经过筛选的44只C57BL/6J近交系小鼠雄鼠分为：空白组(n=10)、模型组(n=12)、电针组(n=10)、自然恢复组(n=12)四组。小鼠驯化时维持光暗交替(Light and Dark,LD)光照条件,即开灯时间设置为06-00～18：00,关灯时间为18：00-次日06-00,使实验室光照条件与外界环境同步。空白组小鼠维持驯化同步时光照条件,不予其他处理,20天后于ZT18 (ZT:Zeitgeber time,为授时因子时间；本实验ZT0为06：00,ZT16即为22：00)时相点处死取材。模型组小鼠LD驯化10天后开始造模,即进行10天的超前性光暗周期转移(advances of light/dark cycle),10天后节律紊乱模型建立,造模成功后于ZT18时相点处死取材。自然恢复组及电针组小鼠LD驯化10天,节律同步后开始造模,造模10天后恢同步期光照条件。自然恢复组在造模结束后第1天至第3天于ZT16时相点进行捆绑以平衡电针组因捆绑造成的刺激,电针组于造模结束后第1天至第3天于ZT16时相点进行电针干预,选取“肝俞”和“至阳”穴,电针设置：2/15Hz,0.2mA,电针15min,每天1次,连续电针3天。第三次电针结束后2h处死动物并取材保存至-80℃冰箱。采用PCR Array高通量检测方法检测各组动物SCN内节律相关基因及部分节律相关转录因子相对表达量。结果：(1)电针重置昼夜节律结果：造模前各组动物峰相位、起始活动时间以及周期比较均无统计学差异(P>0.05)。造模后模型组、自然恢复组及电针组与造模前比较峰相位、起始活动时间、周期均显著超前(P<0.05)。再同步时期,电针组电针干预后峰相位、起始活动时间后移,与造模时及空白组比较具有统计学差异(P<0.05)；电针组再同步第一天及第二天周期与空白组和造模前比较有统计学差异(P<0.05),再同步第三天与空白组和造模前比较无统计学差异(P>0.05)。(2)电针影响视交叉上核节律相关基因结果：造模后模型组动物SCN节律相关基因与空白组比较,模型组小鼠节律相关基因表达上调8个(Aanat、 Crx、Epo、Nkx2-5、Pax4、Prfl、Rora、Stat5a),下调4个(Egr1、Per1、Per3、 Prokr2);自然恢复组与模型组比较上调3个基因(Esrra、Mat2a、Per3),下调11个(Cartpt、Crx、Epo、Kcnma1、Mtnr1b、Nkx2-5、Nms、Pax4、Prfl、Prkacb、 Prkca);电针组与模型组比较,节律相关基因上调6个(Egrl、Esrra、Mat2a、Per1、 Per3、Prokr2),下调21个(Aanat、Arntl、Cartpt、Crx、Csnkle、Epo、Kcnmal、 Mtnr1b、Myod1、Nkx2-5、Nms、Opn3、Pax4、Prfl、Prkacb、Prkca、Prkcb、 Prokr2、Rora、Rorb、Slc9a3、Tgfb1)。其中电针显著影响基因4个,分别是：生物钟基因：Perl；节律转录因子：Egrl；以及CREB信号：AANAT, Prokr2。 Perl, Egrl, Prokr2造模后均表现为明显下调,自然恢复组无显著改变,电针组表达明显上调；AANAT造模后表达显著升高,自然恢复未见显著改变,电针治疗后显著下调。结论：(1)小鼠节律紊乱模型建立后,昼夜节律时相特征表现为峰相位、起始活动时间及周期超前。(2)电针可缩短昼夜节律重置时间,加速紊乱的昼夜节律恢复。(3)电针对昼夜节律紊乱小鼠SCN内Per1、Egr1、AANAT、Prokr2等节律相关基因的调控作用,可能是电针重置昼夜节律在SCN内的分子机制。

关键词： 钟基因   钟蛋白   昼夜节律   视网膜   单色光   鸡  

摘要： 禽类具有优越的视觉机能,不仅具有明暗觉,还具有色觉。本实验室前期研究发现,单色光可影响家禽的生长发育、免疫机能和生产性能。视网膜作为禽类生物钟3大中枢振荡器之一,可以感受光照,自发产生分子昼夜节律震荡,与下丘脑和松果体共同调节机体的生物节律。因此,本试验采用红、绿、蓝和白光饲养AA肉鸡,研究单色光对视网膜钟基因昼夜节律表达的影响。结果发现,1不同光色下,鸡视网膜钟基因除Clock外,Bmal1、Bmal2、Cry1、Cry2、Per2和Per3均呈昼夜变化,其中Bmal1、Cry1、Per2和Per3呈昼夜节律性表达,而Bmal2、Clock和Cry2不具有节律性。在表达水平上,与白光相比,绿光使正调控基因Bmal1、Bmal2和Clock表达水平升高;而红光使负调控基因Cry1、Cry2、Per2和Per3表达水平升高。在昼夜节律性表达上,与白光相比,绿光使Bmal1中值升高,振幅增大,相位提前;红光则使Bmal1中值降低,振幅减小,相位提前;同时,红光使Cry1和Per3中值升高,相位延迟;蓝光使Cry1、Per2和Per3中值降低,振幅减小。2不同光色下,鸡视网膜钟蛋白BMAL1、CLOCK均呈现昼夜变化,其中BMAL1呈现昼夜节律性表达,CLOCK的表达不具有节律性。在表达水平上,与白光相比,绿光使BMAL1和CLOCK表达水平升高。在昼夜节律性表达上,与白光相比,绿光使BMAL1中值升高,振幅增大,相位提前,红光则使BMAL1中值降低,振幅减小,相位提前。以上结果表明,单色绿光促进鸡视网膜正调控钟基因Bmal1、Bmal2、Clock的表达,使正调控钟蛋白BMAL1和CLOCK水平升高;红光则促进负调控钟基因Cry1、Cry2、Per2、Per3的表达。