关键词： 缺氧缺血性脑损伤   松果体   昼夜节律   miR-375-3p   Rasd1   Cry1  

摘要： 目的:建立体外新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)模型,观察大鼠HIBD后松果体内微RNA-375-3p(microRNA-375-3p,mi R-375-3p)、地塞米松诱导的Ras相关蛋白1(dexamethasone-induced Ras-related protein 1,Rasd1)、隐花色素1(Cryptochrome1,Cry1)的表达变化,通过荧光素酶报告基因实验证实Rasd1是miR-375-3p的靶基因,初步探讨miR-375-3p调控Rasd1在HIBD后昼夜节律紊乱中的作用。方法:采用7日龄的SD(Sprague-Dawley)大鼠,按随机原则,分假手术组(Sham组)和缺氧缺血组(HIBD组),根据Rice-Vannucci改良法,制作体外大鼠HIBD模型。利用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)法测定两组在HIBD后0 h、8 h、16 h、24 h、32 h、40 h、48 h七个时间点松果体内miR-375-3p、Rasd1、Cry1的表达变化;利用荧光素酶报告基因实验验证miR-375-3p的靶基因是Rasd1。结果:1、在HIBD模型建立后,HIBD组miR-375-3p的表达水平在8 h高于相应观察点的Sham组(P<0.05),在24 h、32 h、40 h、48 h低于相应观察点的Sham组(P<0.05),而HIBD组miR-375-3p的表达水平在0 h、16 h与相应观察点Sham组比较,差异无统计学意义(P>0.05);在HIBD后miR-375-3p的表达在16 h达到高峰,24 h起降低,持续至48 h。2、在HIBD模型建立后,HIBD组Rasd1的表达水平在8 h、16 h、48 h低于相应观察点的Sham组(P<0.05),在0 h、24 h、32 h、40 h高于相应观察点的Sham组(P<0.05);在HIBD后Rasd1 mRNA的表达在24 h明显上升,32 h起降低,48h达最低。3、HIBD后早期,在松果体内8 h和16 h miR-375-3p表达上调,Rasd1基因表达下调;24小时起miR-375-3p表达明显下调,Rasd1基因表达上调。4、在HIBD模型建立后,HIBD组Cry1的表达水平在16 h、24 h高于相应观察点的Sham组(P<0.05),在32 h、40 h低于相应观察点的Sham组(P<0.05),而HIBD组Cry1的表达水平在0 h、8 h、48 h与相应观察点Sham组比较,差异无统计学意义(P>0.05);在HIBD后Cryl mRNA的表达在16 h开始上升,24 h达到顶峰,32 h起降低,持续至48 h。5、HIBD后,Cry1与Rasd1在松果体中的mRNA水平均呈现先升高后降低的趋势,在24 h达到高峰,32 h开始降低。6、荧光素酶报告基因实验验证Rasd1是miR-375-3p的靶基因。结论:1、HIBD后早期,在松果体内mi R-375-3p表达上调,Rasd1基因表达下调;中晚期miR-375-3p表达明显下调,Rasd1基因表达上调。2、HIBD后,Cry1与Rasd1在松果体中mRNA水平均呈现先升高后降低的趋势,提示Rasd1可能参与HIBD后昼夜节律紊乱的病理生理过程。3、Rasd1是miR-375-3p的靶基因之一。

关键词： 注意力缺陷障碍伴多动   睡眠   多态性,单核苷酸  

摘要： 目的 探讨昼夜节律钟（clock circadian regulator,CLOCK）基因多态性与儿童注意缺陷多动障碍（attention-deficit/hyperactivity disorder,ADHD）及其症状的关联,以及与睡眠问题的交互作用.方法 对977例ADHD患儿（患者组）和537名健康对照者（对照组）的CLOCK基因2个单核苷酸多态性位点（single nucleotide polymorphisms,SNPs）进行基因型检测.采用Conners父母症状问卷评估睡眠问题,ADHD症状评定量表评定ADHD患儿的临床核心症状,并通过协方差分析检验CLOCK基因与ADHD症状的关联及与睡眠问题的交互作用.结果 患者组较对照组睡眠问题出现的频率更高[（14.8％（145/977）与1.5％（8/537）,x2=68,P＜0.01].rs6832769、rs11932595的等位基因频率、基因型频率2组间差异无统计学意义.患者组CLOCK基因与ADHD症状的关联无统计学意义.rs6832769基因型与睡眠问题对ADHD患儿注意缺陷分（F=9.17,P＜0.01）、全量表分（F=6.21,P=0.01）存在交互作用;伴睡眠问题组中,携带AA基因型较携带AG/GG基因型的患儿注意缺陷分[（20.3±3.9）分与（18.7±4.0）分,F=7.06,P＜0.01]和全量表分[（37.3±8.0）分与（34.8±7.9）分,F=4.77,P=0.03]更高;在不伴睡眠问题组中,携带AG/GG基因型较携带AA基因型的患儿注意缺陷分更高[（19.4±4.3）分与（18.7±4.0）分,F=4.44,P=0.04].结论 CLOCK基因rs6832769与睡眠问题对ADHD患儿的核心症状存在交互作用,尤其是注意缺陷症状.

关键词： 家蚕   昼夜节律   生物钟   生物信息学   分子进化  

摘要： 昼夜节律是最普遍的生物节律现象,受遗传基因调控,其分子机制在黑腹果蝇Drosophila melanogaster中有较为深入的研究,在其他昆虫中的研究相对较少。家蚕Bombyx mori的滞育是对昼夜节律授时因子响应的一种现象,可作为研究的参照。通过电子克隆的方法获得了家蚕生物钟基因Bmvri,Bmcyc,Bmtim2,Bmpdp完整的开放阅读框(ORF)序列,以及Bmclk基因的ORF片段,并对上述基因及其表达产物进行了结构分析、染色体定位和系统的分子进化分析,根据这些基因及其表达产物的结构特征结合现有的数据资源,整合了家蚕昼夜节律生物钟反馈环路。

关键词： 昼夜节律   BMAL1基因   基因表达   肿瘤  

摘要： 目的:昼夜节律基因在分子遗传学水平构成生物钟,使得生物体的行为和内分泌、代谢及细胞分裂等各项生命活动呈现周期性、有序性和协同性。Brain and muscle arnt-like 1(BMAL1)基因是昼夜节律基因家族中的一员,在细胞中的表达具有特定的节律和水平,BMAL1蛋白能与CLCOK(clock circadian regulator)蛋白形成异质二聚体,参与调控细胞节律性的变化,BMAL1基因的表达异常与肿瘤的发生、发展、治疗疗效及预后判断有着密切联系。

关键词： 昼夜节律   地塞米松   Per1   ALP   OC   MMP-2  

摘要： 目的:研究体外成骨细胞中,昼夜节律基因PER1对成骨相关基因表达的影响。方法:体外培养小鼠成骨细胞系MC3T3-E1,加入地塞米松干预,按时间节点0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h收集细胞,使用荧光定量PCR检测Per1(Period1)和成骨细胞相关基因碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达。结果:使用地塞米松干预后,Per1基因表达在8 h达到峰值,约为初始表达量的9倍。成骨细胞相关基因ALP表达在8 h出现峰值;成骨细胞相关基因OC在12 h达到峰值,为初始表达量的20余倍;成骨细胞相关基因MMP2表达量明显降低,4 h出现低值后缓慢增加,12 h达到与原始值持平。结论:使用地塞米松干预MC3TE-E1细胞后,成骨细胞相关基因ALP、OC、MMP2的表达量会随Per1基因表达量发生相应的改变。

关键词： Neuroscience   Transcription factors   Gene expression   Circadian rhythms   Thesis  

摘要： Krüppel-like factor 9 (Klf9) is a transcription factor that has diverse roles in development and physiology. Earlier work showed that Klf9 functions in neuronal differentiation, but nothing was known of its target genes in neurons. I used the mouse hippocampus-derived cell line HT22 to identify Klf9 genomic targets. I engineered HT22 cells to express Klf9 under the control of the tet repressor, and used RNA sequencing to identify genes modulated by Klf9. I identified 567 genes repressed, and 201 induced by Klf9. I also engineered HT22 cells to co-express biotin ligase and a Klf9 fusion protein containing an N-terminal polypeptide that can be biotinylated. Using chromatin-streptavidin precipitation (ChSP) sequencing I identified 3,516 genomic regions where Klf9 associated. Seventy five percent were <1 kilobase from transcription start sites, and Klf9 associated in chromatin with 60% of repressed genes. Computer analysis revealed GC-rich consensus motifs at 98% of regions where Klf9 associated. Transient transfection assays showed that Klf9 repressed promoter activity, which was abrogated after mutation of GC-rich motifs. Expression analysis of a subset of Klf9 target genes in hippocampus of wild type and Klf9-null mice showed that all were dysregulated in the mutants. Gene ontology analysis revealed that Klf9 regulates genes involved in neuronal morphogenesis, neurotrophin signaling, apoptosis and cell division. Analysis of my ChSP-seq data showed that Klf9 associated in chromatin with genes involved in the cellular circadian clock. Klf9 mRNA showed circadian oscillation in synchronized HT22 cells, and in mouse liver and hippocampus in vivo. Klf9 showed rhythmic association with several clock-output genes in mouse liver, supporting a role in regulating circadian gene expression. Forced expression of Klf9 repressed transcription of the clock-output gene Dbp and inhibited activation of the Dbp promoter by CLOCK/Bmal1, supporting that Klf9 antagonizes the CLOCK/Bmal1 co

关键词： 昼夜节律   Per1   DEX   ALP   OC   MMP-2   昼夜节律   Per1   正畸加力   牙齿移动   动物模型  

摘要： 第一部分昼夜节律基因Per1对成骨相关基因表达影响的体外研究目的研究体外成骨细胞中,昼夜节律基因Per1对成骨相关基因表达的影响。方法体外培养小鼠成骨细胞系MC3T3-E1,加入地塞米松(dexamethasone,DEX)干预按时间节点0h、2h、4h、8h、12h、16h、20h、24h收集细胞,使用荧光定量PCR检测Per1(Period1)和成骨细胞相关基因ALP、OC和MMP-2的表达。结果使用DEX干预后,Per1基因表达在8h达到峰值,约为初始表达量的9倍。成骨细胞相关基因ALP表达在8h出现峰值;成骨细胞相关基因OC在12h达到峰值,为初始表达量的20余倍;成骨细胞相关基因MMP2表达量明显降低,4h出现低值后缓慢增加,12h达到与原始值持平。结论使用DEX干预MC3TE-E1细胞后,成骨细胞相关基因ALP、OC、MMP2的表达量会随Per1基因表达量发生相应的改变。第二部分正畸牙移动模型的建立及昼夜节律基因Per1对牙周组织中相关基因表达的影响目的建立正畸牙移动模型并研究正畸加力组织中昼夜节律基因Per1表达的规律性。方法选取8周龄的雄性SD大鼠,按照照明和黑暗时间相等的条件下饲养1周后,每只鼠在上颌前牙与右侧上颌第一磨牙间安装正畸加力装置。矫正2周,Micro-CT测量牙齿水平移动距离。2周后将9组SD鼠分别在24小时内的9个等距时间节点处死,取正畸加力组织分别行组织学分析和昼夜节律基因Per1、成骨相关基因ALP、OC、MMP-2,破骨相关基因TRAP、DC-STAMP的定量检测。结果矫正2周后,牙齿平均移动距离是0.45毫米。形态学分析显示第一磨牙近中牙槽骨吸收。远中出现新形成骨。实时荧光定量PCR结果提示Per1基因24小时内有两个峰值出现在ZT3和ZT15。ZT15大概是ZT0的8倍。成骨细胞相关基因ALP表达在ZT3和ZT15为峰值。成骨细胞相关基因OC在ZT6和ZT18达现峰值,ZT18为初始表达量的10余倍。成骨细胞相关基因MMP2表达量明显降低,ZT3出现低值后开始增加,ZT9达到与峰值,破骨细胞相关基因TRAP在ZT3和ZT15出现峰值,ZT15约为初始值7倍。破骨细胞相关基因DC-STAMP在ZT18出现峰值。约为初始值5倍。结论使用正畸加力装置矫正的牙周组织中存在昼夜节律基因per1的表达并有昼夜节律性,成骨相关基因ALP、OC、MMP-2及破骨相关基因TRAP、DC-STAMP会随着Per1基因表达量发生变化。

关键词： 乳腺癌   Per3基因   单核苷酸多态性   DNA甲基化   病例对照研究  

摘要： 目的:探讨昼夜节律基因Per3多态性及其启动子区甲基化水平,社会环境危险因素,以及其交互作用与乳腺癌的关系,为乳腺癌的发病机制,心理干预和预后提供一定的理论依据。方法:通过流行病学调查、病例对照研究,对按照1:1匹配原则设计的134对病例组和对照组研究对象进行一般人口学问卷,匹茨堡睡眠质量指数量表(PSQI)、简明职业紧张问卷、特质应对方式量表和社会支持量表等社会环境因素进行流行问卷调查。同时采用聚合酶链式反应对外周血中Per3基因进行扩增,并直接测序进行SNP检测和硫酸氢盐测序(BSP)检测该基因启动子区甲基化情况。结果:(1)病例对照组社会环境因素分析:病例组在睡眠质量、入睡时间、睡眠障碍、日间功能障碍维度及PSQI总分得分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),病例组职业紧张社会支持维度低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),其他各维度和总分两组间得分差异无统计学意义(P>0.05),病例组特质应对方式量表中消极应对得分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)病例组主观支持、支持利用度和社会支持总分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);多因素logistic回归分析筛选出影响乳腺癌的社会危险因素有睡眠时间、睡眠效率、睡眠障碍、社会支持、积极应对、客观支持和支持利用度(P<0.05);(2)病例对照组Per3基因多态性分析:rs2797687、rs2794664位点基因型在两组间分布差异均具有统计学意义(P<0.05),rs228730、rs571514100位点各基因型在两组间分布差异均无统计学意义(P>0.05);交互作用分析显示,rs2797687位点TT基因型与睡眠质量有正相乘交互作用(OR=1.313,P<0.01),其共同作用可能会使乳腺癌的患病风险增加1.313倍;rs2797687位点TT基因型、GT基因型与社会支持有负相乘交互作用(OR=0.948,P<0.01;OR=0.959,P=0.036),其共同作用可能会使乳腺癌的患病风险分别降低5.2%、4.1%;rs2794664位点AA基因型与睡眠质量有正相乘交互作用(OR=1.29,P<0.01),其共同作用可能会使乳腺癌的患病风险增加1.29倍;rs2794664位点AA基因型与社会支持有负相乘交互作用(OR=0.951,P<0.01),其共同作用可能分别会使乳腺癌的患病风险降低4.9%;rs228730位点GA基因型与消极应对有正相乘交互作用(OR=1.366,P=0.036),其共同作用可能会使乳腺癌的患病风险增加1.366倍;rs228730位点GA基因型与社会支持有负相乘交互作用(OR=0.82,P=0.044),其共同作用可能分别会使乳腺癌的患病风险降低18%。(3)病例对照组Per3基因启动子区甲基化分析:病例组Per3基因总甲基化率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),二元Logistic回归分析结果显示:相比于rs2797687位点野生型个体,rs2797687位点突变型的个体有可能会引起Per3基因CpG岛的甲基化率升高(OR=1.960),两者之间没有明显的相关性(P>0.05),Per3基因SNP位点rs2794664、rs228730基因型与Per3基因CpG岛甲基化无显著相关性(OR=0.964,0.889,P>0.05)。结论:睡眠质量、职业紧张、应对方式和社会支持是影响乳腺癌的社会危险因素,Per3基因rs2797687位点、rs2794664位点和rs228730位点突变和社会环境因素存在交互作用,Per3基因单核苷酸多态性是影响CpG岛甲基化的独立危险因素,通过对乳腺癌患者Per3基因多态性及CpG岛甲基化检测对乳腺癌的预防和预后可能有意义。

关键词： 高血压   血压昼夜节律   颈动脉粥样硬化  

摘要： 目的对高血压患者血压昼夜节律对颈动脉粥样硬化的影响和治疗进行分析。方法选取2012年7月2015年7月我院收治的原发性高血压患者99例为研究对象,根据夜间血压下降情况将患者分为非勺形组50例与勺形组49例。使用彩色多普勒超声仪检测两组患者的颈动脉内膜中层厚度（IMT）和动脉粥样硬化情况。结果非勺形组患者的IMT及超敏C-反应蛋白（hs-CRP）值比勺形组患者增加,差异有统计学意义（P<0.05）。且非勺形组患者动脉粥样斑块形成率为62.0%,明显高于勺形组形成率的44.8%,差异有统计学意义（P<0.05）。结论高血压患者血压昼夜节律异常,是形成颈动脉粥样硬化的重要影响因素。

关键词： 昼夜节律   per1   正畸加力   牙齿移动   余弦分析   动物模型  

摘要： 目的:建立正畸牙移动模型并研究正畸加力组织中昼夜节律基因per1表达的规律性。方法:选取8周龄雄性SD大鼠,按照照明和黑暗时间相等的条件下饲养1周后,每只鼠在上颌前牙与右侧上颌第一磨牙间安装正畸加力装置。矫正2周,micro-CT测量牙齿水平移动距离。2周后将9组SD鼠分别在24h内的9个等距时间节点处死,处死后取正畸加力组织分别行组织学分析和昼夜节律基因per1的定量检测。结果:矫正2周后,牙齿的平均移动距离0.45 mm。形态学分析显示第一磨牙近中牙槽骨吸收,远中有新形成骨。实时荧光定量PCR结果提示昼夜节律基因per1在24 h内的变化呈余弦函数曲线。结论:使用正畸加力装置矫正的牙周组织中存在昼夜节律基因per1的表达并有昼夜节律性。