关键词： 结直肠腺癌   PER3   Notch1   昼夜节律基因   Notch信号通路  

摘要： 目的:观察正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤及结直肠腺癌组织中PER3、Notch1的蛋白表达情况,探讨两者与结直肠腺癌发生发展以及与临床病理特征之间的关系。方法:收集10例正常结直肠黏膜、25例结直肠腺瘤及50例结直肠腺癌组织,采用免疫组化的方法检测上述三种组织中PER3、Notch1的蛋白表达水平,计数细胞着色强度及阳性细胞所占同类型细胞的百分比相加所得总和来判定PER3、Notch1的蛋白表达水平,探讨上述两个指标的表达情况及其与临床病理特征之间的关系,并分析两者在结直肠腺癌中的相关性。结果:PER3及Notch1在结直肠腺癌中均有表达。PER3在正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤及结直肠腺癌组织中的阳性率分别为100%(10/10)、80%(20/25)、56%(28/50),腺癌组分别和腺瘤组及正常组比较,其差异有统计学意义(P<0.05),而腺瘤组与正常组比较差异无意义(P>0.05);Notch1在上述组织中阳性率分别为10%(1/10)、52%(13/25)、74%(37/50),腺癌组分别和腺瘤组及正常组比较,其差异有统计学意义(P<0.05),而腺瘤组与正常组比较差异无意义(P>0.05)。PER3、Notch1在结直肠腺癌组织中的表达均与有无淋巴结转移、肿瘤临床分期、分化程度及肿瘤浸润深度有关(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小无关(P>0.05)。与有淋巴结转移组对比,PER3的阳性表达率明显低于无淋巴结转移组(P<0.05),且PER3的阳性表达与肿瘤的分期以及分化程度有关,肿瘤分期越高,分化程度越低,PER3的阳性表达率越低(P<0.05),而Notch1则相反。运用Spearman检测法分析两者相关性,我们发现PER3和Notch1之间呈负相关关系(r=-0.455,P<0.01)。结论:1.与正常组织及腺瘤组织相比,PER3在腺癌中的阳性表达率逐渐下降,Notch1则表现为逐渐上调,说明PER3、Notch1的异常表达可能参与结直肠癌的发生及发展。2.在结直肠腺癌组织中,PER3、Notch1均与有无淋巴结转移、肿瘤临床分期、分化程度及肿瘤浸润深度有关,说明PER3的表达降低与Notch1的表达升高可能影响结直肠腺癌的转移能力及恶性程度。这提示未来可以将PRE3及Notch1作为预测结直肠癌预后的新指标。3.在结直肠腺癌中,PER3的表达与Notch1存在负相关关系。

关键词： 生物钟   BMAL1   NCX1   兴奋收缩偶联  

摘要： 由于地球自转导致光照等环境因子形成约24h为周期的昼夜循环变化,使得地球上的生物进化出可以适应这些环境因子周期变化的生物钟(CircadianClocks)系统。生物钟赋予生物体可以预测时间和环境变化的能力,调控自身行为和生理活动,使得机体活动与外界变化周期保持同步。哺乳动物生物钟主要由中枢生物钟和外周生物钟两部分构成,中枢生物钟位于下丘脑视交叉上核(Suprachiasmatic Nucleus,SCN),作为起搏点,通过接受外界光线刺激产生并维持日周期节律,同时通过神经体液信号传递同步调节外周生物钟,进而控制一系列生理活动和行为的生物节律,如心率、心输出量、激素分泌、能量代谢及睡眠-觉醒周期等。心脏活动和心脏疾病发作呈昼夜节律性。研究提示,这是生物钟分子控制下刺激-反应偶联的重要体现。生物钟赋予心肌预测环境变化、针对性进行自我调控的能力,其受损会导致心脏病理变化。心肌-收缩偶联是心脏舒缩活动的重要环节,由Ca2+操控蛋白协调控制下的Ca2+循环而实现。NCX1是此循环中Ca2+迅速回落至静息水平的重要执行者。我们在前期实验中观察到,12:12明暗条件饲养的小鼠心脏呈现Bmal1相关的Ncx1节律性表达。本研究通过建立全黑暗的小鼠饲养模型(允许内源性生物节律自由运转)以及马血清休克处理小鼠心房瘤细胞系HL-1细胞和原代培养的新生大鼠心肌细胞体外模拟生物钟振荡的细胞模型,进一步研究小鼠心脏核心生物时钟基因Bmal1对Ncx1表达和功能的调节作用。主要结果如下:1.在持续黑暗饲养2周的条件下,小鼠心肌Ncx1的表达存在内在的昼夜节律性振荡,表现其mRNA和蛋白表达在CT9最低,CT21最高,且其振荡的周期节律与核心生物钟基因Bmal1相似。2.利用腺病毒在小鼠HL-1细胞和原代培养的新生大鼠心肌细胞过表达钟基因Bmal1,随Bmal1节律性表达振幅的增加,Ncx1的节律性表达振幅增加;相反,在HL-1和新生大鼠心肌细胞用shRNA敲减Bmal1,随Bmal1节律性表达振幅的降低,Ncx1的节律性表达振幅也相应降低,但不论是下调或是过表达Bmal1,Ncx1节律性表达的相位并未收到改变,二者呈依从性关系。***(chromatin immunoprecipitation)检测结果显示,核心生物钟基因Bmal1可以被招募到Ncx1启动子上游序列;而荧光素酶报告基因检测进一步证明,核心生物钟基因Bmal1可以通过结合Nx1启动子上游-542bp内的4个E-box(CATATG、CATGTG、CACTTG、CAAATG,转录应答元件)位点,直接调控Ncx1的转录表达。4.用全细胞膜片钳技术在HL-1细胞记录NCX1电流(INCx1)的结果表明,与Ad-GFP组相比,过表达Bmal1使INCx1电流密度显著增加,提示BMAL1对NCX1的功能具有调节作用。上述结果表明,在小鼠心脏中Ncx1受到Bmal1的调控而呈现出内源性节律表达,这种调控是通过BMAL1直接结合到Ncx1启动子上游的4个转录应答元件而实现的。

关键词： 金黄地鼠   口腔颊黏膜   癌变   生物钟基因   细胞周期基因   昼夜节律  

摘要： 目的探讨生物钟基因Perl和细胞周期基因p53、Cyclin D1、B1、CDK在金黄地鼠口腔颊黏膜癌变不同阶段昼夜节律表达变化及与癌变发生的相关性。方法在黑暗和光照交替环境下饲养90只金黄地鼠,在地鼠的颊黏膜上涂抹二甲基苯并蒽(DMBA)以建立颊黏膜鳞状细胞癌模型,分别在涂抹DMBA前和涂抹DMBA6周、14周后的24小时开灯后时间(HALO)的第4个HALO开始,每隔4HALO处死5只金黄地鼠,分别获取正常颊黏膜和癌前病变以及鳞状细胞癌3个阶段各昼夜6个时间点的组织。按照常规将获取的组织进行切片,在HE染色下对组织的癌变情况进行观察;对各时间点组织中p53、Cyclin D1和B1、CDK1 mRNA、Perl等表达水平采用定时定量荧光PCR(RT-PCR)进行检测。结果 Perl mRNA在鳞状细胞癌组和癌前病变组以及正常颊黏膜组中各时间点的表达均有明显差异(P<0.05);鳞状细胞癌组和癌前病变组的Perl mRNA表达中值及振幅均显著低于正常颊黏膜组(P<0.05),且鳞状细胞癌组又显著低于癌前病变组(P<0.05)。细胞周期基因p53、细胞周期蛋白D1和周期蛋白依赖性激酶的mRNA在三组各时间点之间的表达差异均有统计学意义(P<0.05),而细胞周期蛋白B1的mRNA则仅在鳞状细胞癌组和正常颊黏膜组各时间点中的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。鳞状细胞癌组和癌前病变组的p53 mRNA表达中值均显著低于正常颊黏膜组(P<0.05),且鳞状细胞癌组又显著低于癌前病变组(P<0.05)。鳞状细胞癌组和癌前病变组的CDK1 mRNA表达中值均显著高于正常颊黏膜组(P<0.05),鳞状细胞癌组的Cyclin B1 mRNA表达中值显著高于正常颊黏膜组(P<0.05)。结论金黄地鼠实验结果提示,生物钟基因Perl和细胞周期基因p53、Cyclin D1、B1、CDK的昼夜节律均随着口腔颊黏膜癌变的发生发展而变化,即细胞周期和昼夜节律之间的相互作用与癌变的发生具有极为密切的关系。

关键词： molecular clock   chronic inflammation   macrophage  

摘要： BMAL1, the nonredundant transcription factor in the core molecular clock, has been implicated in cardiometabolic diseases in mice and humans. BMAL1 controls the cyclic trafficking of Ly6c(hi) monocytes to sites of acute inflammation. Myeloid deficiency of Bmal1 also worsens chronic inflammation in diet-induced obesity. We studied whether myeloid Bmal1 deletion promotes atherosclerosis by enhancing monocyte recruitment to atherosclerotic lesions. By generating Bmal1(FloxP/Floxp);LysM(Cre) mice on the Apoe(-/-) background, we showed that Bmal1 deletion in myeloid cells increased the size of atherosclerotic lesions. Bmal1 deficiency in monocytes and macrophages resulted in an increased total number of lesional macrophages in general and Ly6c(hi) infiltrating monocyte-macrophages in particular, accompanied by skewed M2 to M1 macrophage phenotype. Ly6c(hi) and/or Ly6c(lo) monocyte subsets in blood, spleen, and bone marrow were not altered. Cell tracking and adoptive transfer of Ly6c(hi) monocytes showed Bmal1 deficiency induced more trafficking of Ly6c(hi) monocytes to atherosclerotic lesions, preferential differentiation of Ly6c(hi) monocytes into M1 macrophages, and increased macrophage content and lesion size in the carotid arteries. We demonstrated that Bmal1 deficiency in macrophages promotes atherosclerosis by enhancing recruitment of Ly6c(hi) monocytes to atherosclerotic lesions.

关键词： 生慧汤   痴呆   昼夜节律   自主活动   生物钟基因  

摘要： 目的观察生慧汤对APP/PS1双转基因痴呆小鼠昼夜节律的影响并探讨其机制。方法将40只5月龄APP/PS1双转基因痴呆小鼠随机分为模型对照组、褪黑素组和生慧汤高、低剂量组,10只相同遗传背景性C57BL/6J小鼠为空白对照组,灌胃给药1个月。用自发活动实验视频分析系统观察小鼠24h内8个时间点的自主活动时间,比较各组8个时点自主活动时间之和(t_(all))、光照时段4个时点自主活动时间之和(t_L)及黑暗时段4个时点自主活动时间之和(t_D),并用Cosinor Matlab软件余弦法分析其时间生物学特征;用Real Time-PCR法检测小鼠下丘脑一系列生物钟基因mRNA的表达。结果与空白组比较,模型组的t_(all)、t_L、t_D均显著性增加(P<0.01);与模型组比较褪黑素组和生慧汤高、低剂量组的t_(all)、t_L均显著性缩短(P<0.05,P<0.01),而t_D无显著性差异(P>0.05)。空白组、褪黑素组和生慧汤高、低剂量组小鼠自主活动时间均能拟合余弦曲线(P<0.05),呈现典型的昼夜节律,其拟合的余弦曲线振幅排序依次为:生慧汤高剂量组>空白组>生慧汤低剂量组>褪黑素组;与空白组比较,模型组Perl mRNA、Cry-1 mRNA、Clock mRNA、Bmall mRNA和Rev-erba mRNA表达均显著性下调(P<0.01)。与模型组比较,褪黑素组Perl mRNA、Cry-1 mRNA、ClockmRNA、Bmall mRNA、Rev-erba mRNA表达均显著性上调(P<0.01);生慧汤高剂量组Perl mRNA、Cry-1 mRNA、Clock mRNA、Bmall mRNA、Rev-erba mRNA表达显著性上调(P<0.01);生慧汤低剂量组Perl mRNA、Cry-1 mRNA、Clock mRNA表达显著性上调(P<0.01)。结论 6月龄APP/PS1双转基因痴呆小鼠的自主活动丧失正常小鼠昼少夜多的节律特征,表现为自主活动增多。生慧汤和褪黑素能有效的减少自主活动,又以减少白昼自主活动为主,使其恢复昼伏夜出的活动节律,其机制与上调一系列下丘脑生物钟基因有关。

关键词： 阿尔茨海默病   昼夜节律   3xTg-AD小鼠  

摘要： 目的 研究三转基因阿尔茨海默病小鼠（3xTg-AD）昼夜节律紊乱的行为特征.方法 利用跑轮实验观察不同月龄的C57BL/6小鼠及3xTg-AD小鼠在12 h光照/12 h黑暗环境和持续黑暗环境中的自由运转周期、每小时平均活动量、总运动量和昼夜振幅,从而确定其昼夜节律变化特点.结果 在持续黑暗环境下,3月龄3xTg-AD小鼠的自由运转周期为（23.2±0.4）h,短于C57BL/6小鼠的（23.5±0.2）h,6月龄和9月龄时活动模式紊乱,活动相与休息相分界不清,自由运转周期不可测;3月龄、6月龄、9月龄的3xTg-AD小鼠昼夜振幅和总运动量分别为（40.6±11.5）圈/5min和（2.6±0.1）×10^4圈/d、（37.0±20.8）圈/5min和（2.3±0.4）×10^4圈/d、（29.3±11.0）圈/5min和（1.6±0.9） ×10^4圈/d,均明显低于相同月龄C57BL/6小鼠（均P＜0.05）.在12h光照/12 h黑暗环境中,3月龄、6月龄、9月龄3xTg-AD小鼠的昼夜振幅和总运动量分别为（87.0±37.8）圈/5min和（2.2±0.8） ×10^4圈/d、（25.9±6.3）圈/5min和（1.1±0.2）×10^4圈/d、（14.3±5.7）圈/5min和（0.6±0.3） ×10^4圈/d,从6月龄开始振幅和总运动量均明显降低,出现运动活性夜间降低而白天升高（P＜0.05）.结论 3xTg-AD小鼠在3月龄已经出现内源性昼夜节律紊乱,6月龄出现外源性昼夜节律紊乱,其昼夜节律紊乱程度随月龄增加逐渐加重.

关键词： 阿尔茨海默病   昼夜节律   转基因小鼠   per1   per2  

摘要： 目的:观察不同月龄雌雄PS1M146V/APPSwe/tau P301L三转基因阿尔茨海默病小鼠（triple-transgenic model mice,3xTg-AD mice）昼夜节律变化的行为特点和下丘脑视交叉上核（suprachiasmatic nucleus,SCN）中节律基因per1、per2基因表达特征的改变,从而为初步阐明AD病程中昼夜节律紊乱的具体特征及机制提供一定的实验依据。方法:将3月龄、6月龄、9月龄雌雄3xTg-AD小鼠和相应月龄的雌雄C57BL/6小鼠分别放入跑轮装置,在12 h光照12 h黑暗（Light-Dark,LD）环境活动7天后转入持续黑暗（Constant darkness,DD）环境继续活动12天,通过Vital View数据收集系统及Acti View生物节律分析系统检测小鼠跑轮运动的自由运转周期、运动活性和昼夜振幅,从而确定其昼夜节律变化的特点。行为学结束后,小鼠转到LD环境下适应至少7天后,于授时时间（zeitgeber time,ZT）ZT 0、ZT 4、ZT 8、ZT 12、ZT 16、ZT 20六个时间点分别提取雌雄3xTg-AD模型组和C57BL/6小鼠对照组的SCN组织,通过Real-time PCR实验检测per1基因及per2基因的变化情况。结果:（1）3xTg-AD小鼠随月龄增加内源性和外源性昼夜节律紊乱逐渐出现并加重。3月龄3xTg-AD小鼠在LD环境中表现为夜晚运动活跃而白天几乎不活动,具有明显的昼夜节律;6月龄时关灯后的跑轮活动虽然迅速增加但变得较分散,同时开灯后的活动有所增加,表现出一定程度的昼夜节律紊乱;9月龄时则出现明显的白天活动增加以及夜晚活动分散,表现出外源性昼夜节律的明显紊乱。在DD环境下,3月龄3xTg-AD小鼠的活动主要集中在主观夜晚,雄性和雌性小鼠的自由运转周期分别为（23.2±0.1）h和（23.3±0.1）h,短于同性别同月龄C57BL/6小鼠的（23.5±0.1）h和（23.5±0.1）h;6月龄时,3xTg-AD小鼠的跑轮活动变得分散,雌性小鼠尚可测得自由运转周期为（23.3±0.2）h,雄性小鼠的活动相与休息相则难以区分,也无法计算自由运转周期,表现出明显的内源性昼夜节律紊乱;9月龄的雌雄3xTg-AD小鼠均无法区分活动相与休息相,也无法计算自由运转周期。（2）3xTg-AD小鼠在LD和DD环境中的运动活性和运动分布的昼夜节律性均随月龄增加而下降,且存在性别差异。在LD环境中,3月龄3xTg-AD小鼠在黑暗环境ZT12-ZT24的平均活动量均明显高于明亮环境ZT0-ZT12（P<0.001）,其活动均存在明显的昼夜节律性;6月龄时,虽然3xTg-AD小鼠在ZT12-ZT24的平均活动量也明显高于ZT0-ZT12（P<0.001）,但雌雄3xTg-AD小鼠在ZT12-ZT24的平均活动量均明显低于同性别C57BL/6小鼠（P<0.001）,且雄性3xTg-AD小鼠在ZT0-ZT12的平均活动量较雌性小鼠有所增加（P<0.01）,而在ZT12-ZT24则有所下降（P<0.05）。9月龄时,与同性别C57BL/6小鼠相比,雄性3xTg-AD小鼠的平均活动量在ZT0-ZT12明显增加（P<0.01）,在ZT12-ZT24则明显降低（P<0.001）;雌性3xTg-AD小鼠的平均活动量在ZT0-ZT12无明显改变,但在ZT12-ZT24明显降低（P<0.001）;且雌雄3xTg-AD小鼠在明亮和黑暗环境中的平均活动量均无统计学差异（P>0.05）。在DD环境中,3月龄雌性3xTg-AD小鼠在主观夜晚近日时间（circadian time,CT）CT12-CT24的平均活动量明显高于主观白天CT0-CT12（P<0.01）,但雄性3xTg-AD小鼠在主观白天和主观夜晚的平均活动量无统计学差异（P>0.05）。6月龄时,雌性3xTg-AD小鼠在CT0-CT12和CT12-CT24的平均活动量均较雌性C57BL/6小鼠降低（P<0.001）;雄性3xTg-AD小鼠在CT0-CT12的平均活动量与雌性3xTg-AD小鼠及同性别C57BL/6小鼠无明显差异（P>0.05）,但在CT12-CT24的平均活动量明显降低（P<0.01）。9月龄时,雌雄3xTg-AD小鼠在主观白天和主观夜晚的平均活动量均明显低于同性别C57BL/6小鼠（P<0.05）,且雌雄3xTg-AD小鼠的平均活动量在各时间段均无统计学差异。（3）3xTg-AD小鼠在LD和DD环境中均随月龄增加出现振幅明显降低,且存在性别差异。在LD环境中,3月龄、6月龄、9月龄雄性和雌性3xTg-AD小鼠的昼夜振幅分别为（87.0±13.4）圈/5min、（25.9±2.2）圈/5min、（14.

关键词： 电针   肝癌   生物钟基因   昼夜节律   视交叉上核  

摘要： 目的:研究在LD状态下肝癌小鼠的昼夜节律特征,以及不同时间点电针对其昼夜节律的时相作用及其相关Per基因影响研究。方法:(1)采用具有装置自动监测和记录生物节律的动物实验室和配套的数据采集分析系统。将满足实验条件的6～7w龄的126只雄性C57BL/6J小鼠随机分为6个时相点进行研究。每个时相点分为空白组、模型组、电针组(6个时相点为:ZT0、ZT4、ZT8、ZT12、ZT16、ZT20),每组7只小鼠。将动物在光暗交替状态(LD 12:12,7:00～19:00为光期,19:00~次日7:00为暗期)下驯化10天后开始造模。(2)模型组和电针组小鼠在腹腔手术下沿小鼠肝叶长轴注射入0.01mL H22肝癌细胞悬液复制肝癌小鼠模型,空白组注射同等剂量的生理盐水。(3)造模后连续监测10天,第11天开始进行电针干预。电针组取“肝俞”、“至阳”2穴连续电针10天,每天1次;空白组和模型组不电针,采取同样的刺激的捆绑。第10次电针后2h脱颈处死小鼠取材保存待测。(4)采用实时荧光定量PCR法检测各组小鼠SCN内生物钟基因Per1和Per2的相对表达量。对造模前后和电针后的节律参数变化进行统计分析,研究6个不同时相点电针对肝癌小鼠昼夜节律的作用及其相关Per基因的影响研究。结果:(1)造模前,各组动物起始活动时间、活动度、周期、振幅、峰相位比较均无统计学意义(P>0.05),其昼夜活动现象表现近似昼夜节律的特点。(2)造模后的模型小鼠与造模前比较其相位滞后、振幅和总活动度下降,模型组和电针组造模前后比较均有统计学意义(P<0.05),空白组前后比较均无统计学意义(P>0.05)。(3)电针后,电针组小鼠滞后的相位前移,与造模后和空白组比较均有统计学意义(P<0.05),总活动度有所增加,但与造模后比较无统计学意义(P>0.05)。在针刺的6个不同时相点中以ZT8电针效应最为显著。而电针组小鼠电针前后周期、总活动度与模型组比较均无统计学意义(P>0.05)。(4)造模后,6组模型小鼠SCN内生物钟基因Per1、Per2基因的表达较空白组均异常增高,其表达量与空白组比较均有统计学意义(P<0.05)。电针后,在ZT0、ZT4、ZT8、ZT20相点电针均能一定程度下调SCN内Per1基因的表达水平,与模型组比较均具有统计学意义(P>0.05);电针后,ZT4、ZT8、ZT12相点电针均能一定程度下调SCN内Per2基因的表达水平,与模型组比较均具有统计学意义(P>0.05)。然而均在时相点ZT8电针可显著下调以上2种基因mRNA在SCN的表达水平。结论:(1)造模后,肝癌小鼠昼夜节律异常,电针可以在一定程度上恢复其异常的节律,其中在ZT8时相点调节其节律的电针效应最为显著。(2)造模后,肝癌小鼠SCN内Per1、Per2基因的相对表达量异常升高,电针后可以在一定程度上下调以上两种基因的相对表达量,其中在ZT8时相最明显。(3)电针对节律异常肝癌小鼠SCN内Per1、Per2节律基因的调控作用,可能是电针调整昼夜节律在SCN内的分子机制。

关键词： 昼夜节律   CGDB数据库   核膜蛋白LBR  

摘要： 昼夜节律存在于地球上几乎所有的生物中。在分子层面上,由一系列的转录和转录后反馈环路构成的生物钟驱动昼夜节律,使得大量基因呈现出节律性表达。在真核生物中,约1%-70%的基因呈现出节律性表达。节律基因的广泛存在意味着生物钟功能的重要性。深入了解生物钟的功能和调控机理,是本领域的重要研究方向。本研究通过文献检索收集了多种真核生物中1382个在转录水平存在节律振荡的基因,并利用这些基因通过直系同源搜索,在148个真核生物中计算鉴定了潜在节律基因。我们还整合了高通量芯片(microarray)和转录组测序(RNAsequencing,RNA-seq)数据分析鉴定的潜在节律基因,以及节律基因相关的蛋白质翻译后修饰信息(PTMs),统一构建了包含148个真核生物的72800个已知和潜在节律基因的数据库CGDB(http://***)。此外,我们利用 Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)分析了小鼠、果蝇、拟南芥和脉胞菌等四种模式生物以及人的节律基因的富集规律,发现节律基因都显著性的富集在代谢途径中,暗示生物钟对于代谢的调节可能是其基础功能之一,因此在演化上得以保守。鉴于核膜与染色质广泛作用从而影响基因组的空间构象,且核膜上的一些成分参与调节转录水平的昼夜节律,本研究以核膜蛋白LaminBReceptor(LBR)为切入点,在模式动物果蝇和小鼠里进行研究,力图解释核膜蛋白LBR调控昼夜节律的机理。首先,利用upstream activating sequence(UAS)/GAL4系统和果蝇活动监测系统,我们发现LBR参与调节果蝇的昼夜活动节律,过表达和干扰LBR均导致果蝇活动节律的周期显著延长,节律减弱。在S2细胞里,同时转染LBR siRNA和pAC-period-v5质粒,我们观察到LBR的减少会引起核心生物钟蛋白PERIOD(PER)表达水平显著下降。在果蝇里,通过荧光定量反转录PCR和免疫印迹的方法,我们发现LBR影响果蝇核心生物钟基因的转录本和蛋白水平,利用timGAL4在果蝇的生物钟细胞里干扰LBR显著降低了生物钟蛋白PER的表达水平;用cryGAL4-16在果蝇的昼夜节律神经元里过表达LBR则导致PER蛋白节律振荡的相位延迟。遗传互作的研究进一步显示LBR与调控生物钟的重要磷酸酶microtubule star(mts)和异染色质蛋白heterochromation protein(HP1c)协同作用来调控果蝇的活动节律周期。具体为利用pdfGAL4在果蝇的昼夜节律神经元里同时降低LBR和减弱mts功能,协同延长了果蝇的活动节律周期;相反,同时过表达LBR和mts,协同缩短了果蝇的活动节律周期。利用cryGAL4-39在果蝇的昼夜节律神经元里同时过表达LBR和干扰HP1c则协同延长了果蝇的活动节律周期。最后,在小鼠中我们同样发现LBR影响核心生物钟基因的转录本水平。总而言之,我们的结果显示LBR可能通过与MTS作用来增加PER蛋白水平,从而影响昼夜节律周期。综上所述,这两部分工作的结合将有助于我们深入理解生物钟的功能及其调控机理,为利用昼夜节律辅助疾病治疗、促进健康提供理论基础。