关键词： Bmal1基因   昼夜节律   生物钟   认知   睡眠  

摘要： 时钟基因Bmal1属于bHLH-PAS结构域转录因子家族,在调节生物的昼夜节律行为中发挥着重要作用。在生理功能的昼夜节律行为方面,Bmal1可调节小鼠和人的血压、代谢、寿命、骨骼发育和机体免疫;另外,Bmal1基因可通过调节学习、记忆和睡眠实现对认知功能和睡眠觉醒的昼夜节律的调节。围绕Bmal1在睡眠-觉醒和认知功能方面的深入研究,将会为提高夜班工作人员和飞行人员夜间警觉度提供理论支持和可能的候选干预方案。

关键词： 果蝇   昼夜节律   生物钟   TTFL   发现  

摘要： 生物昼夜节律钟基因的发现开创了生物钟研究的新时代。通过对果蝇昼夜节律钟分子机制的研究首次提出了TTFL模型,并在此基础上,通过对其他模式生物尤其是小鼠的研究使该模型得到进一步的发展和完善,对模式生物表型和生理学方面的研究及对模式生物基因克隆的研究,不仅揭示出生物钟演化的过程,而且也展示了科学家对之认识深化的历程。

关键词： 高血压   昼夜节律   颈动脉疾病   血压   超声检查   高半胱氨酸  

摘要： 目的探讨老年高血压患者血压昼夜节律与颈动脉粥样硬化的关系。方法选择2016年9月～2018年6月青岛大学附属医院保健科住院的老年高血压患者117例,根据24h动态血压监测结果分为杓型组24例和异常昼夜节律组93例,异常昼夜节律组又分为非杓型组67例,反杓型组26例。所有患者行颈动脉超声检查,检测左右颈总动脉内膜中层厚度(IMT)、颈动脉斑块及管腔狭窄情况,对颈动脉粥样硬化进行分级。测定患者空腹血糖,血脂,同型半胱氨酸,记录24h收缩压、24h舒张压、昼间收缩压、昼间舒张压、夜间收缩压和夜间舒张压。结果异常昼夜节律组左侧IMT、右侧IMT、斑块发生率和颈动脉粥样硬化程度明显高于杓型组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。反杓型组夜间收缩压、夜间舒张压明显高于非杓型组[(132.92±15.75)mm Hg vs (122.85±14.91)mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),(72.38±8.75)mm Hg vs (64.34±9.98)mm Hg,P<0.01]。非杓型组和反杓型组左侧IMT和左侧斑块发生率明显高于右侧,差异有统计学意义(P<0.05)。结论老年高血压患者血压昼夜节律与颈动脉粥样硬化关系密切,异常血压昼夜节律损伤靶器官概率更大,并且对左侧颈动脉内膜损害较右侧明显。

关键词： 昼夜节律   肾脏   节律基因   肝俞   针刺  

摘要： 目的:主要研究电针“肝俞”穴对昼夜节律紊乱C57BL/6J小鼠行为方面及肾中生物钟基因表达的影响。通过针刺“肝俞”穴,观察小鼠昼夜行为的改变,研究针刺“肝俞”穴对外周生物钟肾内特定节律基因表达的影响,进而从基因层面探讨针刺“肝俞”穴对昼夜节律紊乱C57BL/6J小鼠的作用机制。方法:将72只C57BL/6J小鼠采取随机分组的方式,平均分成四组,分别为空白组、模型组、针刺非经非穴组和针刺肝俞组,每组18只。在光照同步(L:D=12;12,Light:08:00-20:00 Dark:20:08:00)驯化7天后,将模型组、针刺非经非穴组和针刺肝俞组小鼠,采用短时间剥夺睡眠法(L:D=2:2),造模5天,造模成功,获得无昼夜节律模型,之后恢复光照同步(L:D=12;12)。空白组全程采用光照同步方式。在造模成功后,即实验第13天,空白组与模型组在每天15:00进行捆绑20分钟,余两组在每天15:00进行针刺20分钟,连续进行5天,针刺组在双侧“肝俞”穴进行毫针针刺,非经非穴组选择小鼠腹部固定的非穴位点进行毫针针刺,针刺方法均为斜向内下方刺入0.5cm,两只针柄分别连接KWD-808I脉冲电针仪的输出导线上,将电针仪参数调整为:疏密波4/20Hz;疏密周期为6秒,至针刺部位肌肉或者下肢微微抽动即可,在最后一次针刺11小时后,即第18天02:00开始,四组同时进行,每组各处死三只取肾脏,每隔4小时,处死一批,直到第18天22:00,处死最后一批,全程用360智能红外线摄像机实时远程记录观察,并对实验过程中小鼠自发站立和活动次数进行记录,应用Real-Time-PCR法测量肾脏内Cry1和Cry2基因m RNA含量和运用Western Blot法测定Cry1和Cry2的蛋白表达量。运用余弦分析法和统计学分析验证基因表达是否具有节律性。结果:1.在360摄像机远程观察记录下,模型组、非经非穴组小鼠在实验后期与起初驯化期相比,表现出狂躁、易惊、大便不规律、质稀、皮毛暗淡等特性,站立、捋毛、攀爬次数明显增多,可听到笼内明显响声,抓取时反抗明显。而针刺组在针刺肝俞穴五天后,已恢复昼伏夜出特性,性情较温顺,站立、捋毛等行为与空白组类似,皮毛柔顺、大便较正常。运用统计学分析,在治疗后,在小鼠5min内的自发活动次数与站立次数方面,针刺组与空白组比较,非经非穴组与模型组比较,结果均无统计学意义(P>0.05)。而针刺组与模型组比较,针刺组与非经非穴组比较,活动与站立次数明显减少,有统计学意义(P<0.05)。2.在Real-Time-PCR法测量下,空白组、针刺组小鼠Cry1与Cry2基因表达呈现出节律性(P<0.3),模型组、非经非穴组小鼠Cry1与Cry2基因表达未体现节律性(P>0.3)。*** Blot蛋白检测发现,模型组与空白组相比,数值差异有统计学意义(P<0.05),显示模型组基因蛋白表达不具有节律性。针刺组与模型组相比,数值差异有统计学意义(P<0.05),显示针刺组基因蛋白表达具有节律性,非经非穴组与针刺组相比,差异有统计学意义(P<0.05),显示非经非穴组基因表达未呈现节律性。结论:1.正常C57BL/6J小鼠行为学方面和肾内Cry1与Cry2基因表达具备节律性。2.针刺肝俞穴有助于小鼠行为恢复正常,而针刺非经非穴则无此作用。3.针刺肝俞穴助于节律基因Cry1与Cry2在肾内表达基本恢复正常,具有节律性,已紊乱的昼夜节律周期逐渐恢复正常。而针刺非经非穴则未体现出该作用。

关键词： Genetics   Medicine  

摘要： Non human primates as models for human diseases are of unprecedented value as they parallel the human physiology, anatomy, pathology and social structures. Albeit they have been extensively used in research in biomedical sciences, the genomic underpinnings of their fidelity (or there lack of) in simulating human diseases haven’t been elucidated. This work addresses this issue on several levels: First, by creating the non-human primate reference transcriptome resource (NHPRTR) for comparative functional genomics, which aims to catalogue the transcriptomes of non human primates used in biomedical research, and to gain qualitative and quantitative estimates of gene expression profiles of specific tissues in primates. Second, this work expands the non-human primate reference transcriptome resource by profiling the dynamics of gene expression in rhesus macaque pineal gland and retina in circadian manner. Such an effort resulted in elucidating a possible novel signaling molecule in the melatonergic signaling in primates - N-acetyltryptamine. Third, this body of work addresses the veracity of rodent and other animal models in assessment of circadian dynamic changes of transcriptome, and consequentially, physiology and pathology of melatonergic signaling and circadian behavior. From the comparative analysis of the vertebrate pineal gland transcriptomes and their circadian changes it can be inferred that rodent and zebrafish, which have been considered valuable models for research in the field of chronobiology, do not mirror the circadian dynamics observed in primates. Additionally primates seem to show unique characteristics of the circadian dynamics of the transcriptome, which have not been observed in other mammal species. Such unique features include oscillations of several mitochondrial transcripts, all of them being positioned next to each other on the primate MT chromosome, bringing the oxidative phosphorylation as a novel potential mechanism associated with the circa

关键词： 职业危害因素   暴露组   昼夜节律基因   交互作用   钢铁企业   代谢综合征  

摘要： 目的 1探讨职业有害因素暴露组（高温、噪声、粉尘、一氧化碳、夜光暴露、倒班）及其交互作用与钢铁工人代谢综合征（Metabolic syndrome,MetS）及组分的关联性,寻找影响钢铁工人MetS及组分的优先可干预的职业环境因素;2探讨昼夜节律相关基因（CLOCK、RORA和PER2）、相关激素受体基因（MTNR1A和MTNR1B）多态性及其单体型与钢铁工人MetS的关联性,为钢铁工人MetS发生的遗传流行病学机制的研究提供线索;3探讨昼夜节律相关基因、相关激素受体基因多态性之间及其与职业有害因素暴露组之间的交互作用与钢铁工人MetS的关联性,为钢铁工人MetS发生的遗传和环境因素共同作用机制的研究提供线索。方法 1基于课题组在2017年2月至2017年6月建立的京津冀地区职业人群健康效应队列研究的基线资料,采用横断面研究设计,以问卷及体检信息完整的7664名钢铁工人作为研究对象。其中个体的机体因素、行为生活方式、社会经济和工作情况采用调查问卷收集;职业危害因素暴露量通过现场卫生学调查收集;血压、血糖、血脂和高密度脂蛋白胆固醇等生化指标通过实验室检测收集;人体测量学指标（腰围、腹围和颈围等）通过体格检查获取。以有害因素暴露组作为主要研究因素,采用限制性三次性样条函数（Restricted cubic spline,RCS）探索有害因素暴露组和MetS的剂量反应关系,采用非条件logistic回归方法分析有害因素暴露组和MetS的关联性（包括累积效应和交互效应）,并使用健康危险因素评分法（Health risk factor score,HRFS）探讨职业有害因素联合暴露对MetS的影响。2采用病例对照研究方法,使用SAS9.4编程从7664人中根据纳入和排除标准选择621名患MetS的职工作为病例组,选择898名与病例年龄和性别匹配的健康职工作为对照组。使用聚合酶链式反应—限制性片段长度多态性检测CLOCK（rs6850524和rs1801260）、RORA（rs8034880）、PER2（rs934945和rs2304672）、MTNR1A（rs2119882）和MTNR1B（rs10830963和rs1387153）基因多态性。使用非条件logistic回归方法分析不同遗传模型下昼夜节律相关基因与MetS之间的关联性。3采用病例对照研究方法,使用对数线性模型分析职业有害因素暴露组和昼夜节律相关基因两两之间的相乘和相加交互及其累积效应;采用广义多因子降维（Generalized multifactor dimensionality,GMDR）方法分析职业有害因素暴露组和昼夜节律相关基因之间的高维交互作用。结果 1横断面研究结果显示:1)钢铁工人MetS的患病率为37.0%,其中男性患病率为37.9%,女性患病率为26.1%;MetS组分中,腹型肥胖、甘油三酯升高、高密度脂蛋白胆固醇降低、血压升高和血糖水平升高的职工分别占46.6%、32.2%、21.4%、57.9%和60.8%。2)剂量反应关系分析结果显示:校正可能的混杂因素后,加权倒班作业指数（Weighted shift index,WSI）与钢铁工人MetS之间呈现线性剂量反应关系（总体关联性检验x2=9.351,P=0.025;非线性检验x2=0.180,P=0.915）;高温累积暴露量与钢铁工人MetS之间呈现线性剂量反应关系（总体关联性检验x2=8.611,P=0.035;非线性检验x2=0.532,P=0.766）;噪声累积暴露量与钢铁工人MetS之间呈现非线性剂量反应关系（总体关联性检验x2=21.400,P<0.001;非线性检验x2=7.182,P=0.028）;未发现粉尘累积暴露量与钢铁工人MetS之间有关联（总体关联性检验x2=2.910,P=0.406;非线性检验x2=0.582,P=0.746）;CO累积暴露量与钢铁工人MetS之间呈现非线性剂量反应关系（总体关联性检验x2=10.070,P=0.018;非线性检验x2=8.071,P=0.017）。3)有害因素暴露组与钢铁工人MetS多因素分析结果显示:与参照组（WSI<551.278天）相比,钢铁工人WSI指数在551.278～1475.082、1475.082～2384.207和≥2384.207天组时,其患MetS风险的OR（95%CI）值分别为1.075（0.929～1.243）、1.088（0.938～1.262）和1.204（1.037～1.397）;与参照组（<393.270℃·年）相比,钢铁工人高温累积暴露量在393.270～619.876,619.876～769.623和≥769.623℃·年组时,其患MetS风险的OR（95%CI）值分别为1.096（0.923～1.301

关键词： 高血压   昼夜节律   颈动脉硬化  

摘要： 目的:探讨老年高血压患者中不同类型的血压昼夜节律变化与颈动脉粥样硬化之间的相关性,为临床老年高血压及靶器官损害的防治提供依据。方法:选取2018年1月2018年10月青岛某三甲医院老年科住院的老年高血压患者117例（男性44例,女性73例）,所有患者均行24小时动态血压（24hABPM）监测,收集监测数据（包括24小时收缩压、24小时舒张压、日间收缩压、日间舒张压、夜间收缩压和夜间舒张压）,观察老年高血压患者所出现的不同的昼夜节律变化,按照患者间不同的血压昼夜节律变化类型可分为杓型组24例和异常昼夜节律组93例（其中非杓型组67例,反杓型组26例）。所有患者均行颈部超声检查,并对颈动脉粥样硬化进行分级。此外还需采集患者多项临床检测结果的数据,其中包括患者的空腹血糖（FBG）,血脂（包括甘油三酯、胆固醇）水平,同型半胱氨酸（Homocysteine,Hcy）。将杓型组患者与异常昼夜节律组患者（包括非杓型组患者与反杓型组患者）一般资料、颈动脉内膜中层厚度、斑块发生率、颈动脉粥样硬化程度、24小时收缩压、24小时舒张压、白天收缩压、白天舒张压、夜间收缩压、夜间舒张压进行比较,将杓型组患者、非杓型组患者与反杓型组患者左右侧颈动脉内膜中层厚度、斑块发生率、颈动脉粥样硬化程度进行比较,探索不同类型血压昼夜节律变化高血压患者间的差异性。将数据使用Excel2016进行整理,采用SPSS24.0软件进行统计分析,计量资料均采用±s表示。两组计量资料比较服从正态分布的使用T检验,两组计数资料用率表示,比较服从正态分布的使用?2检验。以P<0.05判定为有统计学意义。结果:老年高血压患者中,与杓型血压组相比较,异常血压昼夜节律组患者在颈动脉内膜中层厚度（左侧IMT、右侧IMT）、斑块发生率、颈动脉粥样硬化方面差异有统计学意义（P<0.05、P<0.01）;非杓型血压组与反杓型血压组在颈动脉内膜中层厚度（左侧IMT、右侧IMT）、斑块发生率、颈动脉粥样硬化方面相比较,差异无统计学意义（P>0.05）;杓型血压组在颈动脉内膜中层厚度、斑块发生率、颈动脉粥样硬化方面,左侧颈动脉与右侧颈动脉相比,差异无统计学意义（P>0.05）;非杓型血压组、反杓型血压组在颈动脉内膜中层厚度、斑块发生率、颈动脉粥样硬化方面,左侧颈动脉与右侧颈动脉相比较,差异有统计学意义（P<0.05）;老年高血压患者在夜间收缩压、夜间舒张压方面,反杓型组平均血压水平高于非杓型组[（132.92±15.75）mmHg vs（122.85±14.91）mmHg,（72.38±8.75）mmHg vs（64.34±9.98）mmHg,（1mmHg=0.133kPa）,P<0.01]。结论:老年高血压患者血压昼夜节律与颈动脉粥样硬化关系密切,异常血压昼夜节律损伤靶器官概率更大。并且首次说明老年高血压患者异常血压昼夜节律（非杓型、反杓型）左侧颈动脉内膜损害程度较右侧更加明显。

关键词： 抑郁症   昼夜节律紊乱   静息态功能磁共振   TPH2基因多态性  

摘要： 目的:既往对于抑郁症昼夜节律紊乱的研究提示中枢5-HT(5-hydroxytryptamine,5-羟色胺)系统可能参与昼夜节律的调节,但具体机制仍然不清。中枢5-HT系统可能通过影响SCN(suprachiasmatic nucleus,视交叉上核)的协调功能参与昼夜节律的调节。本文从昼夜节律紊乱的角度探讨伴早醒症状抑郁症患者的遗传易感性和相应的静息态磁共振脑影像学特征,以期探索与抑郁症睡眠相关的昼夜节律紊乱有关的遗传学基础及脑功能改变。方法:从南京医科大学附属脑科医院招募符合入组标准的被试共249人,其中抑郁症患者185人,健康对照64人。根据汉密尔顿抑郁量表第6项早醒评分对患者进行分组:评分≥1分者为伴早醒症状抑郁症组(早醒组,n=123),而0分者为不伴早醒症状抑郁症组(非早醒组,n=62)。采集被试静脉血及静息态功能磁数据,数据处理及分析方法如下:1 TPH2基因多态性与抑郁症睡眠相关的昼夜节律紊乱的关联研究使用二代测序对TPH2基因的6个候选位点进行测序,根据分组情况在PLINK软件内建立逻辑回归模型探索与抑郁症早醒症状相关的风险位点,以性别、年龄、婚姻状态、受教育年限及家族史作为协变量。使用Bonferroni法进行多重比较矫正,得到具有统计学差异的位点。2 TPH2基因rs4290270位点多态性对抑郁症患者的静息态脑功能特征的影响2.1携带与不携带风险等位基因型患者静息态磁共振功能连接间的差异在Matlab软件中对所获脑影像学数据经头动校正、配准、分割、空间标准化等预处理后,从全脑活动协调性的角度考虑,计算双侧SCN对全脑其他体素的FC(functional connectivity,功能连接)值。根据所获位点的基因分型进行分组,使用双样本t检验分析携带与不携带风险等位基因患者组间FC值的差异。使用Alphasim法进行多重比较校正,得到具有有统计学意义的脑区。2.2携带与不携带风险等位基因型患者视觉网络功能连接动态属性的差异以滑动时间窗算法对预处理后所获时间序列进行处理,得到交叠的子时间序列矩阵。使用LASSO模型对矩阵进行稀疏后构建动态功能连接矩阵。使用动态模块化算法对每个窗的功能连接进行模块划分,按节点间连接的紧密程度分至同一模块或者不同模块。根据模块划分矩阵,进一步定义某个脑区的模块转换频率为flexibility值,某些脑区划分到同一个模块的概率为这些脑区的MA(module allegiance,模块忠诚度)值。患者分组情况同上,在Matlab软件中使用置换检验对所获得的视觉网络16个节点的flexibility值及视觉网络MA值进行比较,以P<0.05为存在显著性差异。使用Bonferroni法进行多重比较校正。3探讨静息态磁共振功能连接特征在rs4290270位点多态性与抑郁症患者临床表型之间的中介效应以第一步所得位点分型数据作为自变量(X),作为内表型的异常静息态磁共振指标分别做为中介变量(M),反映临床表型的量表评分别作为因变量(Y),在R软件中使用mediate包构建中介效应模型,以探索风险等位基因、部分脑区的异常影像学特征及临床特征三者之间潜在的联系。结果:1 TPH2基因多态性与抑郁症睡眠相关的昼夜节律紊乱的关联研究所有被检测的位点都符合分析要求。在抑郁症组与健康对照组中,rs4290270位点显示出关联趋势(P=0.0167),但是未能通过Bonferroni校正。进一步根据特征性症状进行分层后,该位点多态性对抑郁症早醒症状的作用具有统计学意义(P=0.0047;OR=2.0270);风险等位基因型为T)。并且,该位点在非早醒组中未显示出作用(P=0.1750;OR=1.4890)。2 TPH2基因rs4290270位点多态性对抑郁症患者的静息态脑功能特征的影响2.1携带与不携带风险等位基因型患者静息态磁共振功能连接间的差异共158例静息态功能核磁共振数据通过了数据质量控制,其中A等位基因型患者组为58例,携带T等位基因型组为100例。与A等位基因型组比,携带T等位基因组患者右侧SCN到右侧梭状回(34,-4,-44)和右侧额中回(50,46,4)的FC值增高;左侧SCN到右侧舌回(12,-60,6)和左侧距状裂(-26,-58,6)的FC值降低。所有结果均通过Alphasim多重比较校正。2.2携带与不携带风险等位基因型患者视觉网络功能连接动态属性的差异与A等位基因型组比,携带T等位基因型组右侧梭状回(30,-42,-15;P=0.0029)flexibility值在A、携带T等位基因组患者间的差异具有统计学意义,通过Bonferroni多重比较校正。视觉网络内MA值(P=0.031)在组间也具有统计学差异。3探讨静息态磁共振功能连接特征在rs4290270位点多态性与抑郁症患者

关键词： 哺乳动物   视交叉上核   细胞类型   基因表达   昼夜节律   调控机制  

摘要： 位于下丘脑腹侧部位的视交叉上核(Suprachiasmatic nucleus，SCN)是哺乳动物中控制昼夜节律的核心核团。但是对于组成SCN的细胞类型以及不同细胞类型对于昼夜节律的维持和调控的作用尚缺乏系统性的研究。本工作利用单细胞测序技术将小鼠的SCN系统性地分为了10种非神经元细胞类型和5种神经元亚型，并且利用了不同的技术平台对5种神经元亚类的分型进行了佐证。通过在单细胞测序的同时引入昼夜节律时间点的信息，得到了不同细胞类型中基因表达随时间的变化情况。在此基础上，通过在主观黑夜的前半夜进行光照刺激，进一步探究了光照调节昼夜节律的细胞类型基础。在本研究中，发现星形胶质细胞中存在广泛的节律基因表达，其中一些星形胶质细胞的经典功能，例如脂类代谢，氨基酸代谢等生物过程都存在昼夜节律。在此启发下，通过微透析技术发现了下丘脑细胞间隙中的谷氨酸浓度存在节律变化。此外，还发现了谷氨酸对于体外培养的星形胶质细胞存在同步化作用。在对SCN的5种神经元亚类的研究中，也发现了5种神经元的节律基因表达不仅存在强弱的差异，也存在时序结构。并且，5种亚类对于光刺激的响应并不相同。最后，通过肽段受体网络的构建和分析对5种神经元在昼夜节律稳态维持和调控中的作用机制进行了阐释。

关键词： 卵巢癌   昼夜节律基因   自噬   顺铂耐药   mTOR信号通路  

摘要： 目的通过研究昼夜节律基因及自噬相关基因在卵巢癌OVCAR3细胞及其顺铂耐药细胞株OVCAR3/DDP中表达的差异性与相关性,探讨细胞自噬在昼夜节律基因介导卵巢癌OVCAR3细胞对顺铂产生耐药中的作用及可能机制。方法利用表达谱芯片技术筛选卵巢癌耐药细胞株OVCAR3/DDP与非耐药细胞株OVCAR3之间表达差异明显的昼夜节律基因和自噬相关基因,通过RT-qPCR进行验证;Western blot检测OVCAR3/DDP与OVCAR3细胞株之间自噬相关基因LC3、BECN1与P62表达的差异性;细胞免疫荧光观察两种细胞LC3蛋白分布及表达量的不同;含有0μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml顺铂浓度的培养基分别培养OVCAR3细胞12 h、24 h、48 h后RT-qPCR检测昼夜节律基因(CLOCK、PER1、CRY2)、自噬相关基因(LC3、BECN1、P62)及mTOR基因mRNA的表达变化,Western blot检测LC3、BECN1和P62蛋白表达的变化;雷帕霉素处理OVCAR3细胞24 h后RT-qPCR检测昼夜节律基因(CLOCK、PER1、CRY2)、自噬相关基因(LC3、BECN1、P62)及mTOR基因mRNA的表达情况,Western blot检测LC3蛋白表达变化。结果1.表达谱芯片结果显示,与OVCAR3细胞株相比,卵巢癌OVCAR3/DDP细胞株中表达差异性明显的自噬相关基因共13个(其中11个表达上调,2个表达下调),昼夜节律基因共6个(全部表达上调)。***-qPCR验证表达谱芯片结果提示差异性表达的基因mRNA在OVCAR3及其耐药细胞株OVCAR3/DDP中均有表达,其中昼夜节律基因(CLOCK、PER1、CRY2)、自噬相关基因(LC3、BECN1、P62)及mTOR基因mRNA的表达水平在两种细胞株中具有显著差异性,与芯片结果基本一致,差异有统计学意义(P<0.05)。3.细胞免疫荧光结果提示OVCAR3/DDP细胞中有大量LC3蛋白表达在细胞核周围,OVCAR3细胞中LC3蛋白表达明显较少。*** blot结果提示耐药细胞株OVCAR3/DDP与非耐药细胞株OVCAR3相比,BECN1和LC3蛋白表达升高,LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化增强,P62蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。5.随着顺铂处理OVCAR3细胞时间的延长与浓度梯度的提高,CLOCK、PER1、CRY2、BECN1和LC3 mRNA的表达水平均上调,mTOR、P62 mRNA的表达水平下调,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot结果提示LC3蛋白表达增强,而mTOR、P62蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。6.雷帕霉素处理OVCAR3细胞后RT-qPCR检测CLOCK、PER1和CRY2mRNA的表达水平无明显变化,BECN1和LC3 mRNA的表达水平明显上调,P62和mTOR mRNA的表达水平明显下调;Western blot结果提示LC3蛋白表达显著升高。结论1.利用表达谱芯片、RT-qPCR及Western blot等不同检测方法从分子与蛋白水平检测均证明昼夜节律基因(CLOCK、PER1、CRY2)、自噬相关基因(LC3、BECN1、P62)及mTOR基因在卵巢癌OVCAR3细胞株及其顺铂耐药细胞株OVCAR3/DDP中表达具有差异性。2.昼夜节律基因与自噬相关基因在卵巢癌OVCAR3细胞株及其顺铂耐药细胞株OVCAR3/DDP中表达具有相关性。3.昼夜节律基因可能通过mTOR信号通路调控自噬影响卵巢癌OVCAR3细胞对顺铂的敏感性。