关键词： 胃肿瘤   临床   CD4+CD25+调节T细胞   COX-2   NF-κB   VEGF   VEGF-C   免疫组化   Real-time RT-PCR  

摘要： CD4+CD25+调节性T细胞、COX-2及NF-κB组成性激活在胃癌中的表达及意义 与所有肿瘤一样，胃癌的发生也是一种多因素作用，多基因参与，多阶段形成的复杂病理过程。胃癌作为一种发病率逐年上升的常见恶性肿瘤，因其缺乏特异性症状而早期诊断困难，兼之恶性程度高，对现有治疗方法无满意疗效，愈后极差。寻找新的治疗靶标及诊断标志是解决上述问题的根本途径。 为了探讨胃癌患者外周血CD4+CD25+调节T细胞水平的特点及其临床意义。本研究采用流式细胞术检测80例胃癌患者外周血CD4+CD25+调节T细胞、NK细胞水平及淋巴细胞亚群，并进行分层分析。结果显示外周血淋巴细胞亚群随着疾病进展（Ⅲ，Ⅳ期）CD4、CD4／CD8、CD16阳型细胞比例减低明显，差异有显著性意义（P＜0.05）；各期CD8、CD19、CD3与对照组接近（P＞0.05）。外周血CD4+CD25+调节T细胞比例随疾病进展水平升高，在进展期（Ⅳ期）尤其明显，统计学有极显著差异（P＜0.01）。表明胃癌患者外周血CD4+CD25+调节T细胞水平的升高与恶性肿瘤免疫功能低下及肿瘤的发生发展密切相关。去除这群细胞可有效诱导肿瘤免疫，为肿瘤治疗提供一种新的方法。 为了探讨COX-2与VEGF、VEGF-C在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理因素间的关系，并评价上述指标与肿瘤新生淋巴管、新生血管之间的相关性。我们用应用免疫组织化学（免疫组化）法检测86例胃癌手术切除标本中COX-2与VEGF、VEGF-C的蛋白表达情况。采用抗CD34抗体标记微血管内皮细胞，用LYVE-1标记微淋巴管内皮细胞。分析COX-2表达与MVD、LVD和胃癌主要临床病理特征的相关性。结果显示胃癌组织COX-2、VEGF、VEGF-C阳性表达率和LVD、MVD显著高于正常胃黏膜。临床TNM分期中Ⅲ、Ⅳ期及伴有淋巴结转的胃癌标本COX-2、VEGF、VEGF-C阳性表达率与LVD、MVD显著增高，差异有统计学意义（P＜0.05）。Spearman等级相关分析表明，COX-2表达与MVD、LVD呈显著正相关。提示胃癌组织中，COX-2、VEGF和VEGF-C的表达状态与肿瘤血管、淋巴管生成和胃癌的浸润和转移均呈明显相关。COX-2可能通过上调VEGF、VEGF-C表达，促进胃癌淋巴管生成，并顺次导致浸润和转移的发生。 为了探讨胃癌组织中是否存在有NF-κB组成性激活，研究COX-2、MMP-7及NF-κB的表达规律与胃癌病理特征的关系。本研究采用Western blot法检测46例NGM和GC组织中NF-κB p50，p65蛋白表达情况，并根据有无胞核蛋白的表达来判断是否存在NF-κB的组成性激活。采用RT-PCR法检测46例NGM和GC组织中COX-2，MMP-7和NF-κB p50，p65 mRNA表达情况。分析与胃癌临床病理特征的关系。结果显示GC组中COX-2、MMP-7、NF-κB p50，p65的阳性表达率显著高于NGM组，有统计学意义（P＜0.01）；COX-2，MMP-7和NF-κB p50，p65与GC的TNM分期、淋巴结及远处转移密切相关。可见人GC组织中存在有NF-κB组成性激活；肿瘤COX-2，MMP-7和NF-κB的表达水平升高与胃癌恶性潜能有关，可能在肿瘤的发展中起一定的作用；COX-2，MMP-7和NF-κB的表达水平对评价GC的恶性程度和有无转移有一定的参考价值。

关键词： 高迁移率族蛋白B1   调节性T细胞   免疫抑制   T淋巴细胞毒性相关抗原4   叉头翼状螺旋转录因子   抗-CD3   白介素-2   白介素-10   白介素-4   干扰素-γ   细胞功能极化  

摘要： 目的:高迁移率族蛋白B1(HMGB1)作为一种晚期炎症介质,介导了脓毒症和其他系统性炎症的致死性。本实验拟通过观察体外刺激小鼠调节性T细胞相关指标的表达变化规律,进而阐明HMGB1对该细胞免疫功能的影响并对其机制进行初步探讨。旨在为进一步体内实验及感染后期严重脓毒症的预防和治疗提供新思路。 方法:断颈处死小鼠无菌取脾脏,分离单个核细胞。①采用免疫磁珠法分离获取正常BALB/c小鼠脾脏CD4T,CD4CD25T细胞及CD4CD25reg,鉴定细胞纯度。②分别以植物凝集素(PHA)、刀豆素A(Con A)及固相包被抗-CD3这三种不同的刺激剂诱导活化Treg,观察T淋巴细胞毒性相关抗原4(cytotoxic Tlymphocyte-associated antigen 4,CTLA-4)及叉头翼状螺旋转录因子(forkhead/wingedhelix transcription factor,Foxp3)表达的时间-效应关系。③将Treg依HMGB1(100ng/ml)刺激时间不同设为24 h组、48 h组、72 h组观察HMGB1刺激与CTLA-4及Foxp3表达的时间-效应关系。将Treg依HMGB1浓度不同设为0ng/ml组(对照组)、10ng/ml组、100ng/ml组、1000ng/ml组,72h后用流式细胞仪分析CTLA-4、Foxp3表达情况及对IL-10分泌的影响(剂量-效应关系)。④分别提取CD4CD25Treg及CD4CD25T细胞,设单纯CD4CD25对照组,另依CD25:CD25比例分设1:1组、1:5组、1:10组、1:20组,通过MTT比色试验检测CD4CD25Treg对CD4CD25T细胞抑制的细胞比例关系。⑤HMGB1刺激Treg 72h。刺激后细胞依CD25:CD25比例设1:1及1:5组。各组分设CD25组、未刺激Treg组及HMGB1-Treg组。通过MTT比色试验分析HMGB1刺激对Treg细胞抑制功能的影响。⑥SYBR GREEN法测定HMGB1刺激与Foxp3基因表达的时间、剂量-效应关系。⑦分别留取细胞培养上清,ELISA法测定不同细胞因子的变化情况。 结果:1.小鼠CD4CD25Treg纯度分析:多次细胞分选实验证实,正常小鼠脾脏单个核细胞经过MACS两次分选后,CD4CD25T细胞纯度可达到91.74%～98.14%,其中CD25细胞低于3%;CD4CD25T细胞纯度达88.73%～93.85%,其中CD25细胞少于1%。所获得的CD4CD25T细胞经台盼蓝检测活性大于97%。***对于CD4CD25Treg细胞无明显活化作用,CTLA-4及Foxp3表达与对照组比较平均荧光强度没有明显差异(P＞0.05)。而Con A刺激Treg CTLA-4的表达上调呈一过性,作用持续时间不超过48 h,且对于Foxp3的表达也无明显的影响。抗-CD3则能够较好地活化Treg,表现为CTLA-4及Foxp3表达在24～72 h均明显增强(P＜0.05或P＜0.01),其中24、48 h表达上调更为明显(P＜0.01),并可延续至刺激后72 h。***1刺激Treg,CTLA-4表达在24～72 h均有所下降(P＜0.05或P＜0.01),其中以作用48、72h表达下调尤为明显(P＜0.01);而不同剂量HMGB1(10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)刺激均可诱导CTLA-4表达下降(P＜0.05或P＜0.01),其中HMGB1浓度在1000ng/ml时其表达减弱最明显。Foxp3表达与CTLA-4呈现出相同的趋势。细胞培养上清中IL-10水平呈现与HMGB1的剂量依赖关系,即HMGB1刺激浓度越高IL-10水平下降越明显。***4CD25T细胞在活化后表现出增殖反应,但随Treg比例增加,CD4CD25T细胞增殖反应抑制。当细胞比例达到1:1时表现为对其抑制效应达到90%左右。当加入HMGB1(1000ng/ml)刺激的Treg时,CD4CD25T细胞增殖受抑程度减轻。这一现象在细胞比例为1:1及1:5组均表现出相同的趋势。5.经HMGB1刺激后的Treg Foxp3 mRNA表达分别于24～72h明显下调(P＜0.05或P＜0.01),其中以作用48、72h后表达下降尤为显著(P＜0.01);给予HMGB1刺激72 h后,10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml的HMGB1刺激均可诱导Foxp3表达减弱(P＜0.0或P＜0.01),其中HMGB1的浓度在1000 ng/ml时Foxp3表达下调最明显。6.与正常对照组比较,不同时间及剂量HMGB1体外刺激Treg,其细胞培养上清中IL-2水平均无统计学差异(P＞0.05)。而细胞培养上清中IL-10水

关键词： CD4^+CD25^+Treg细胞   B细胞   抑制机制  

摘要： CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg细胞)主要来源于胸腺,在体内外抑制CD4+或CD8+T细胞的活化及增殖,是维持自身免疫耐受的重要机制之一。近来研究发现该调节性T细胞除了能够抑制T细胞的免疫应答外,还能够抑制B细胞免疫应答,包括抑制B细胞活化和抗体生成,从而抑制主要由抗体介导的自身免疫性疾病的发生。

关键词： B细胞非霍奇金淋巴瘤患者   外周血   调节性   T细胞分析  

摘要： 背景及目的:目前认为B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)常伴随免疫抑制,CD4+CD25+-Tregs细胞是一种新型免疫抑制性调节细胞,在肿瘤的免疫抑制及免疫逃逸机制中起重要作用,但它在B-NHL患者外周血的分布情况及其免疫抑制中的作用目前尚不清楚。本文通过分析它在化疗前及化疗后B-NHL患者外周血中比例及变化规律,初步探讨B-NHL的免疫抑制机制,以及化疗对免疫抑制的影响,为有效干预患者免疫功能提供参考。方法:应用流式细胞仪检测39例初治化疗前的B-NHL患者、32例经4～6周期化疗后完全缓解或部分缓解的B-NHL患者和25例健康志愿者外周静脉血中CD3+、CD4+、CD8+及CD4+CD25+CTLA4+-T细胞的比例。结果:化疗前组患者淋巴细胞总数及CD4+T细胞比例、CD4/CD8比值均低于正常对照组犤分别为(1.3±0.39)×109,(2.1±0.41)×109;(27.5±4.1)%,(32.9±5.8)%;0.9±0.21,1.31±0.4犦,但其CD4+CD25+-Tregs及CD4+CD25+CTLA4+-T细胞比例明显高于正常对照组犤分别为(14.7±3.1)%,(8.4±2.5)%;(7.4±1.6)%,(5.1±1.4)%犦。尽管化疗组CD4/CD8比值(1.19±0.3)与正常组接近,但其淋巴细胞总数犤(0.8±0.53)×109犦低于初治组和正常对照组,CD4+CD25+-Tregs比例犤(20.3±4.1)%犦及CD4+CD25+CTLA4+-T细胞比例犤(11.5±2.2)%犦则明显高于化疗前?

关键词： NF-κB诱导激酶   基因突变   CD4^+CD25^+调节性T细胞   产生   影响   自身免疫病  

摘要： 目的 :探讨NIK基因变异鼠—aly鼠自身免疫病的产生与CD4+ CD2 5 + 调节性T细胞的相关性。方法 :利用NIK基因自然突变鼠—aly aly鼠做为动物模型 ,aly +小鼠做为NIK基因正常对照鼠 ;CD4+ CD2 5 + T细胞亚群鉴定采用流式细胞分析仪 (FACS) ;用免疫组织化学方法观察胸腺结构。结果 :aly小鼠的CD4+ CD2 5 + CD8- 胸腺细胞数量和脾脏CD4+ CD2 5 + CD8- T淋巴细胞的数量明显低于aly +小鼠 ;aly小鼠胸腺髓质缺少UEA 1阳性细胞。结论 :NIK基因突变的aly小鼠CD4+ CD2 5 + 胸腺细胞和脾脏T淋巴细胞的数量明显降低可能是aly小鼠自身免疫病产生的原因 ;UEA 1阳性细胞很可能在CD4+ CD2 5 + 调节性T细胞选择中发挥作用。

关键词： 免疫应答   调节性   细胞   卵蛋白  

摘要： 调节性Ｂ－Ｂ细胞在卵蛋白的免疫应答中的相互作用［俄］／１９９５，１．－２１～２４抗原进入机体后，体内有相当数量的特异性的细胞克隆的激活，在体液免疫中。有ＴＨ细胞的介导，但也存在着Ｂ细胞的调节，而且是由Ｆａｂ段来完成，特别是独特型抗独特型的调节。该文以...