关键词： CD4+T细胞   调节性T细胞   FOXP3   前列腺素E2   白三烯B4  

摘要： 目的:初始CD4+T细胞接受抗原刺激后,首先分化为Th0细胞,在不同的细胞因子作用下,可分化为Th1、Th2、Th17及Treg（regulatory T cells, Treg）细胞,发挥不同的生物学作用。Treg细胞具有免疫抑制作用,主要功能是维持免疫耐受和免疫稳态,并与类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）密切相关。Treg细胞是由CD4+T细胞在TGF-β的作用下分化而来,而叉状/翼状螺旋转录因子（forkhead/wingedhelix transcription factor, FOXP3）是检测CD4+T细胞向Treg细胞分化程度的特异性转录因子。 前列腺素E2（Prostaglandin E2, PGE2）和白三烯B4（leukotriene B4, LTB4）均为花生四烯酸的代谢产物,是RA病程中的重要炎症介质。目前,临床上多用非甾体类抗炎药治疗RA,其作用机制正是通过抑制环氧化酶进而抑制PGE2的生成。有研究表明,应用LTB4受体阻断剂可以治疗RA。本室以往研究证实,PGE2通过前列腺素受体EP2和EP4抑制Th0细胞向Treg细胞分化,参与机体的免疫调节。LTB4可抑制Th0分化为Treg细胞,且抑制胶原诱导的关节炎（collagen induced arthritis,CIA）小鼠Th0细胞分化为Treg细胞,参与机体免疫调节。那么,PGE2和LTB4是否可以调节人CD4+T细胞向Treg细胞的分化,目前尚无文献报道,因此本课题以人外周血CD4+T细胞为研究对象,观察PGE2和LTB4对Treg细胞分化的影响,进而确定PGE2和LTB4是否通过调节Treg细胞的分化,参与人体的免疫调节,以期进一步揭示二者在RA中的免疫调节作用。 方法: 1 PGE2对Treg细胞分化的调节 （1）免疫磁珠法分选人外周血CD4+T细胞,流式细胞术检测分选细胞的纯度;收集分选后的细胞,接种于anti-CD3预先包被的24孔板,加入anti-CD28和TGF-β1,诱导CD4+T细胞向Treg细胞分化,于不同时间收集细胞,观察FOXP3 mRNA的时间依从性表达;收集分选后的细胞,接种于anti-CD3预先包板的24孔板,加入anti-CD28、TGF-β1和IL-2,7d后收集细胞,流式细胞术检测CD4+CD25+FOXP3+细胞数量。 （2）不同浓度PGE2对Treg细胞分化的影响。PGE2对Treg细胞FOXP3 mRNA表达的影响:分为四组,对照组和PGE2（0.1μM、1μM、10μM）组,孵育36h,收集细胞,观察FOXP3 mRNA的表达情况;不同时间10μM PGE2对Treg细胞分化的影响:分为对照组和PGE2 10μM组,于不同时间收集细胞,观察FOXP3 mRNA的表达情况;PGE2对CD4+CD25+ FOXP3+细胞数量的影响:分为四组,对照组和PGE2 （0.1μM、1μM、10μM）组,培养7d,收集细胞,流式细胞术观察CD4+CD25+FOXP3+细胞的数量。 2 LTB4对Treg细胞分化的调节 LTB4对Treg细胞FOXP3 mRNA表达的影响:分为四组,对照组和LTB4 （0.01μM、0.1μM、1μM）组,孵育36h,收集细胞,观察FOXP3 mRNA的表达情况;LTB4对CD4+CD25+FOXP3+细胞数量的影响:分为四组,对照组和LTB4 （0.01μM、0.1μM、1μM）组,培养7d,流式细胞术检测CD4+ CD25+FOXP3+细胞的数量。 应用SPSS13.0软件进行统计学分析,数据用均数±标准差（x±s）表示,各组均数的比较行单因素方差分析（one-way ANOVA）,用最小显著差法（least significant difference, LSD）作两两比较,P<0.05为有显著性差异。 结果: 1 PGE2对Treg细胞分化的调节 （1）经磁珠分选后,流式细胞仪检测CD4+T细胞的纯度达97%以上;在anti-CD3和anti-CD28,TGF-β1作用下Treg细胞关键转录因子FOXP3 mRNA在36h达表达高峰;在anti-CD3和anti-CD28存在的条件下,TGF-β1和IL-2作用7d后,可使（72.9533±17.2270）%的细胞同时表达CD4、CD25和FOXP3,证明体外成功诱导CD4+T细胞分化为Treg细胞。 （2）不同浓度的PGE2在CD4+T细胞诱导分化为Treg细胞36h时均对FOXP3 mRNA的表达有抑制作用,且呈剂量依赖性,PGE2（0.1μM、1μM、10μM）组（0.8544±0.0745、0.6

关键词： FOXP3   调节性T细胞   IL-10   弥漫性大B细胞淋巴瘤   预后  

摘要： 目的检测FOXP3+调节性T细胞(FOXP3+Treg)及IL-10在弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)组织中的表达状况,探讨其与各临床病理因素及预后的关系。方法收集2002年1月～2009年12月间经安徽医科大学第一附属医院病理科确诊并符合入选条件的DLBCL69例及反应性增生的淋巴结和扁桃体26例进行研究,采用免疫组织化学方法,以FOXP3及IL-10为标志物进行染色,对阳性细胞分别进行绝对值计数,同时对69例DLBCL病人进行随访。两两比较运用t检验,多组间差异比较运用方差分析,多因素分析采用COX回归模型。通过Kaplan-Meier即生存率曲线法运用ROC/Y得到的最佳临界值以及临床病理特征制作生存曲线。结果DLBCL中FOXP3+Treg细胞主要弥漫分布于肿瘤间质,表达变异较正常组织大,绝对阳性细胞数目为(55.7±40.5)个/mm2,变异系数为0.73;反应性增生的淋巴结和扁桃体中FOXP3+Treg细胞表达较稳定,绝对阳性细胞数目为(35.3±11.4)个/mm2,变异系数为0.32,其差异具有统计学意义(P<0.01)。DLBCL中IL-10阳性细胞散在分布于肿瘤间质,表达变异性较大,绝对阳性细胞数目为(79.0±39.8)个/mm2,变异系数为0.50;反应性增生的淋巴结和扁桃体中IL-10的表达较稳定,阳性细胞数目为(51.3±13.1)个/mm2,变异系数为0.43,其差异具有统计学意义(P<0.01)。DLBCL中FOXP3+ T reg细胞数目在不同性别(P=0.170)、年龄段(P=0.120)、临床分期(P=0.377)、病理分型(P= 0.339)、取材部位(P=0.996)、是否结外侵犯(P=0.996)、不同治疗方案(P=0.804)间差异无统计学意义(P>0.05);在LDH是否增高间差异具有统计学意义(P=0.019)。DLBCL中IL-10+细胞数目在不同性别(P=0.692)、年龄段(P=0.402)、临床分期(P=0.144)、病理分型(P=0.565)、取材部位(P=0.357)、是否结外侵犯(P=0.357)、LDH是否增高(P=0.577)、不同治疗方案(P=0.963)间差异无统计学意义(P>0.05)。DLBCL中FOXP3+Treg及IL-10的表达在不同的近期疗效间差异不具有统计学意义(P>0.05)。肿瘤组织间质中FOXP3+细胞数量的绝对值与非GC型DLBCL的预后,IL-10+细胞数量的绝对值与GC型DLBCL的预后具有相关性(P<0.05)。肿瘤组织间质中FOXP3+细胞数量的绝对值与GC型DLBCL的预后,IL-10+细胞数量的绝对值与非GC型DLBCL的预后不具有相关性(P>0.05)。多因素生存分析发现临床分期、FOXP3及病理亚型是DLBCL独立预后因素(P<0.05),而IL-10不是独立的预后因素。结论FOXP3+Treg与IL-10在DLBCL间质中呈散在分布,表达变异较大,与正常组织间差异具有统计学意义。FOXP3+Treg与IL-10可作为DLBCL预后因素之一。

关键词： 结肠癌   B7-H1   PD-1   调节性T细胞   IL-10  

摘要： 目的:分析B7-H1和PD-1分子在结肠癌组织中的表达水平,并分析结肠癌微环境中异常增高的TReg与B7-H1的关系。 方法:利用Western Blot和流式细胞技术研究结肠癌患者手术切除的癌组织及癌旁正常组织中B7-H1及PD-1的表达情况;使用流式细胞仪检测结肠癌组织及癌旁正常组织中浸润TReg量的差异;使用Western Blot技术检测结肠癌组织中提取的TReg与CD4+CD25- T细胞所表达IL-10的水平差异;免疫磁珠分选健康人外周血中分选的CD4+CD25+和CD4+CD25-细胞进行体外培养并用anti-CD3和anti-CD28刺激,ELISA检测培养体系中IL-10的表达量;免疫磁珠分选人结肠癌中浸润的TReg细胞,与从健康人外周血分选的单核细胞共培养,流式检测单核细胞表达B7-H1的水平;经TReg诱导高表达B7-H1的单核细胞和从结肠癌组织中分选的巨噬细胞与健康人外周血分选的Na（i|¨）ve T细胞共培养,CFSE法测定T细胞的增殖情况,以测定经TReg诱导高表达B7-H1的单核细胞对T细胞的免疫抑制能力。 结果:1. Western Blot结果显示结肠癌患者癌组织及癌旁正常组织均表达B7-H1分子,且癌组织比癌旁正常组织中B7-H1表达水平高; 2.流式细胞仪检测显示B7-H1主要表达于巨噬细胞,且癌组织比癌旁正常组织浸润的巨噬细胞表达的B7-H1的水平高,比例分别为38±4%和5±2%;平均荧光强度（MFI）分别为1900±20和250±100; 3.流式细胞仪检测显示PD-1主要表达于CD8+ T细胞,癌组织比癌旁正常组织浸润的CD8+ T细胞PD-1的表达水平高,比例分别为51±6%和6±2%; 4.将从结肠癌组织中分选的巨噬细胞分别与健康人外周血分选的经CFSE染色的Na（i|¨）ve T细胞共培养,流式检测发现经诱导高表达B7-H1的单核细胞或结肠癌来源的巨噬细胞组T细胞增殖功能(CFSEdim:30±5%)较对照组(Na（i|¨）ve T细胞单独培养组CFSEdim:63±7%、癌旁正常组织与Na（i|¨）ve T细胞共培养组CFSEdim:55±8%)明显受抑制,阻断B7-H1通路后受抑状态可以得到恢复(加入B7-H1阻断性抗体组CFSEdim:51±10%、加入PD-1阻断性抗体组CFSEdim:54±11%); 5.流式细胞仪检测显示结肠癌组织中浸润的TReg较癌旁正常组织增多,Foxp3+ TReg占CD3+CD4+细胞中的比例分别为18±5%和5±3%; 6. Western Blot检测从结肠癌组织中分选的CD4+CD25+细胞比CD4+CD25-细胞表达的IL-10高;将健康人外周血液中分选的CD4+CD25+和CD4+CD25-细胞分别进行体外培养并用CD3、CD28刺激48小时后,ELISA检测发现CD4+CD25+细胞组表达IL-10的浓度明显高于CD4+CD25-细胞组,浓度分别为180±27pg/ml、52±9pg/ml; 7.分选肿瘤组织中TReg与健康人外周血单核细胞共培养,流式检测发现TReg与单核细胞共培养组B7-H1表达量（比例:28±3%;MFI:1200±80）明显高于对照组（比例:5±1%;MFI:150±20）和加入IL-10拮抗性抗体组（比例:6±2%;MFI:350±50）; 8.将经TReg诱导高表达B7-H1的单核细胞与健康人外周血分选的经CFSE染色的Na（i|¨）ve T细胞共培养,流式检测发现经诱导高表达B7-H1的单核细胞组T细胞增殖功能(CFSEdim:32±8%)较对照组(Na（i|¨）ve T细胞单独培养组CFSEdim:60±7%、外周血未经诱导的单核细胞与Na（i|¨）ve T共培养组CFSEdim:64±11%)明显受抑制,阻断B7-H1通路后受抑状态可以得到恢复(加入B7-H1阻断性抗体组CFSEdim:52±8%、加入PD-1阻断性抗体组CFSEdim:55±5%)经TReg诱导高表达B7-H1是可以通过B7-H1/PD-1途径抑制T细胞增殖的。 结论:1.结肠癌微环境中巨噬细胞高表达B7-H1;结肠癌组织浸润性CD8+T细胞高表达PD-1; 2.结肠癌微环境中TReg异常增高,且高表达IL-10,结肠癌微环境中TReg可以通过高表达IL-10促进巨噬细胞表达B7-H1; 3.结肠癌微环境中B7-H1/PD-1通路可以抑制T细胞的增殖能力,促进结肠癌的肿瘤免疫逃逸; 4.阻断B7-H1/PD-1通路可恢复结肠癌微环境中T细胞的增殖能力,干预B7-H1/PD-1通路可能是将来辅助性免疫治疗结肠癌的方法之一。

关键词： 原发性干燥综合征   调节性B细胞(Breg)   CD69   CD80   B细胞激活因子受体(BAFF-R)  

摘要： [背景和目的] B细胞异常改变是干燥综合征(primary Sjogren syndrome, pSS)特征性表现之一。调节性B细胞(Regulatory B cell, Breg)是一组具有抑制免疫应答反应的新成员,在保持机体免疫功能平衡和耐受中具有重要作用。目前关于Breg的研究以动物模型为主,已知的Breg亚群有CD5+B-la细胞、CD19hiCDldhiCD5+B细胞、CD19+CD21hiCD23+CD24hi CD93+T2-MZP Breg细胞以及CD19hiCDldwCD5+B10细胞(IgM+CD21+CD23"CD24hi CD93-)[7]等,分泌IL-10是其发挥免疫调节功能的标志[8-11] Breg在人体中的研究不多；目前发现人外周血CD19+CD24hiCD38hiB细胞[12]具有免疫调节功能；CD19+CD5+Fox3+B细胞可能为潜在的Breg亚群。Breg在pSS发病机制中的作用及其与pSS临床表现方面的关系仍不明确。本研究中,我们尝试评价外周血Breg匕例、CD69、 CD80、 BAFF-R等B细胞活化标记的外周表达在pSS、系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus, SLE)患者及健康对照(Healthy Control, HC)间的差异及其与临床特征的相关性,并对Breg亚群的功能进行探索,尝试解释Breg在pSS发病机制中的作用。 [方法] 明确pSS诊断患者34例、明确SLE诊断10例,健康对照19例。采集抗凝外周静脉血分离单个核细胞(PBMC)。 流式细胞术检测外周血PBMC中Breg (CD19+CD24hiCD38hi)在淋巴细胞及CD19+B细胞中的比例；检测各组CD69、 CD80、 BAFF-R在CD19+B细胞Breg表达百分比及强度。 收集患者临床相关资料,按照2009年EULAR干燥综合征疾病活动评分(ESSDAI)评价pSS患者疾病活动度。根据治疗(初治组、免疫抑制治疗组和其他治疗组)、有无口眼干症状、ESSDAI评分及血清IgG水平对pSS患者进行分组。 流式细胞分选去除Breg细胞,CD3单抗刺激培养3天后检测去除Breg组和未去除Breg组CD4+IFN-Y+Thl细胞及CD19+IL-10+B细胞表达水平。Elisa法检测细胞培养上清中IL-10、IFN-γ浓度。 [结果] 1、pSS患者外周血Breg细胞占CD19+B细胞百分比(2.63+2.65%)高于SLE患者(0.93±1.18%,p=0.024)和HC组(1.32±±1.32%,p=0.025)；各治疗组间无显著性变化。初治pSS患者组Breg占CD19+B细胞百分比(3.544±3.01%)高于SLE组(p=0.005)和HC组(p=0.001)。初治pSS患者组Breg占淋巴细胞百分比(0.17±±0.21%)高于免疫抑制治疗组(0.10±±0.15%,p=0.026)和其他治疗组(0.05+0.04%,p=0.032)、SLE组(p=0.000)及HC组(p=0.004)。 2、有口干症状患者Breg细胞占淋巴细胞百分比(0.08±0.06%)低于无口干患者(0.25±±0.28%,p=0.029)；占CD19+B细胞百分比前组(1.88±±2.06%)亦显著低于后组(4.62±±3.11%,p=0.004)。有眼干症状患者Breg细胞占淋巴细胞百分比(0.09±±0.11%)低于无眼干症状患者(0.19±0.25%,p=0.014)。轻度活动(ESSDAI≤6)pSS患者和中度以上活动组(ESSDAI>6)间Breg无显著性差异。血清IgG>20g/L组Breg占CD19+B细胞百分比(3.82±3.34%)明显高于IgG≤20g/L组(1.63±1.31%,p=0.045)。 3、pSS患者Breg细胞表面BAFF-R表达百分比(87.42±±28.84%)和强度(10065.20±6526.50)均高于SLE组(43.73±±48.19%,p=0.009,2295.35±2580.39,p=0.000),低于HC组(99.38±1.52%,p=0.001,34017.21±56136.49,p=0.010)。 4、各治疗分组间Breg细胞表面CD69表达百分比(p=0.008)、强度(p=0.023)、CD80表达强度(p=0.025)、BAFF-R表达强度(p=0.003)均存在显著性差异。免疫抑制治疗Breg细胞表达CD69百分比(p=0.021)、CD80强度(p=0.020)及BAFF-R强度(p=0.038)较初治组均降低。 5、初治pSS患者Breg占淋巴细胞百

关键词： 英国诺丁汉大学   寄生虫感染   人体免疫系统   B细胞   调节性   影子   验证   多发性硬化  

摘要： 据2010年6月7日《参考消息》援引美国趣味科学网站6月2日报道，人罹患多发性硬化症（MS）后，免疫系统会像对待“外来”细胞一样攻击人体自身的细胞。最近的几项实验显示，感染寄生虫能缓解MS病人的炎症反应并降低复发率。据此，英国诺丁汉大学的克里斯·康斯坦丁内斯库及其同事计划让32名MS病人感染钩虫。

关键词： 调节性T细胞   供体特异性输血   可诱导共刺激分子   心脏移植耐受  

摘要： 目的 观察阻断ICOS/B7h信号的供体特异性输血（DST）对异基因小鼠心脏移植术后体内CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）的影响.方法 按陈氏方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型,实验分3组,异基因组及同基因组：供心分别来源于BALB/C和C57BL/6小鼠,受体均为C57BL/6小鼠,未予治疗.治疗组：移植当天给予受体鼠（C57BL/6）尾静脉注射5×106 ICOS-Fc靶定的供体（BALB/C）脾B淋巴细胞,d0～6连续给予受体鼠尾静脉注射ICOS-Fc 200 μg/d.术后统计各组移植物的存活时间,通过流式细胞术检测受体鼠外周血中CD4＋CD25＋Treg的亚群比例,利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测移植物中FOXP3的mRNA表达,在混合淋巴细胞反应中检测CD4＋CD25＋Treg对CD4＋CD25-效应T细胞（Teff）的增殖抑制效率.结果 与异基因组比较,治疗组心脏移植物存活时间明显延长[（84.38±29.14）d比（7.00±0.76）d,P＜0.01].各组中,治疗组受体外周血中CD4＋CD25＋Treg亚群比例显著上调[（15.60±5.69）%,P＜0.01].与其他两组比较,治疗组心脏移植物中FOXP3 mRNA表达显著上调.以正常鼠为对照,耐受鼠脾脏中获取的CD4＋CD25＋Treg能够更高效地抑制CD4＋CD25-Teff在混合淋巴细胞培养中的增殖效应.结论 通过阻断ICOS/B7h信号的DST可以诱导异基因小鼠心脏移植耐受,CD4＋CD25＋Treg在耐受的形成与维持中均起着重要作用.

关键词： HLA-B27   调节性T细胞   流式细胞术  

摘要： 目的了解CD4+CD25+调节性T细胞在HLA-B27阳性患者外周血中的表达水平及其对患者细胞免疫和体液免疫的影响。方法用流式细胞仪采用直接免疫荧光法测定37例HLA-B27阳性患者和20例健康对照者外周血淋巴细胞表面CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD19+及CD4+CD25+细胞的表达情况。用颗粒增强散射免疫比浊法测定血清中免疫球蛋白IgG、IgA和IgM的水平。结果 (1)HLA-B27阳性患者CD3+、CD3+CD4+、CD19+细胞较正常对照组显著增高(P<0.05),CD3+CD8+细胞较正常对照组显著降低(P<0.05);(2)HLA-B27阳性患者CD4+CD25+调节性T细胞较对照组显著降低(P<0.01);(3)HLA-B27阳性患者血清中2种免疫球蛋白IgG、IgA的水平均较对照组显著增高(P<0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞数量明显减少,对CD4+和CD8+T细胞活化和增殖的抑制能力下降,是HLA-B27阳性患者体内细胞免疫和体液免疫亢进的原因之一。

关键词： B淋巴细胞   调节性   生物学   皮肤疾病  

摘要： 调节性B细胞是一类具有免疫调节功能的B细胞亚群，目前已经在小鼠体内得到证实。该细胞亚群的起源与表型目前分歧较大。调节性B细胞主要通过细胞间直接接触和分泌IL-10、转化生长因子-β等方式下调免疫反应。现已发现这种B细胞亚群与SLE、接触性超敏反应等皮肤病相关，还参与多种疾病或生物学过程。对调节性B细胞的发现、起源、功能及作用机制、与疾病的关系、研究前景和挑战进行概述。

关键词： B细胞   调节性   免疫耐受   自身抗体   免疫功能   抗原递呈   细胞因子   细胞亚群  

摘要： B细胞的典型特征是可产生包括自身抗体的各种抗体。然而,B细胞还有其他的免疫功能,例如产生各种细胞因子和次级抗原递呈。与T细胞一样,B细胞中也有致病性和调节性的细胞亚群。[第一段]

关键词： 调节性B细胞   自身免疫病   IL-10  

摘要： 以往认为，B淋巴细胞在自身免疫病中作为致病性淋巴细胞发挥作用。近年却发现，在自身免疫病小鼠模型中，采用B细胞清除疗法会加重疾病进程，提示B细胞具有免疫调节功能。调节性B细胞（Breg）是新近发现的一群新的B细胞亚群，它存在于B细胞多个亚型中。Breg通过刺激其表面分子，诱导释放调节性细胞因子如IL-10发挥调节作用。在不同自身免疫性疾病中，各种免疫细胞都可以成为Breg作用的靶细胞，表明Breg在自身免疫病复杂网络中的强大调节作用。