关键词： 系统性红斑狼疮(SLE)   疾病状态   IL-10   CD24^(high)CD27^(+)型Breg细胞   CD24^(mid)CD27^(+)型Breg细胞  

摘要： 目的 探究CD19^(+)CD24^(+)CD27^(+)调节性B细胞在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)中的作用和临床相关性。方法 收集23例SLE患者和23例健康人群的外周血以及血浆标本,使用流式细胞仪检测并比较两组人群外周血标本中的CD19^(+)CD24^(+)CD27^(+)调节性B细胞与细胞内IL-10的表达水平,并将其细分为CD24^(high)CD27^(+)以及CD24^(mid)CD27^(+)两个亚群,同时比较血浆中各细胞因子的浓度并分析其与Breg细胞的相关性。检测治疗后SLE患者外周血中Breg细胞的变化并与治疗前进行比较,分析其与疾病发展状态之间的关系。结果 SLE患者体内的两种Breg细胞均显著升高,分别为6.09%±2.61%和12.28%±4.90%,其细胞内IL-10表达也明显增强,且CD24^(high)CD27^(+)型Breg细胞内IL-10水平高于CD24^(mid)CD27^(+)型亚群。患者血浆中IL-1β为(9.24±9.97) pg/mL,IL-10为(43.50±23.06) pg/mL,TNF-α为(11.26±7.48) pg/mL,IFN-γ为(12.83±7.27) pg/mL,较正常人均显著升高,且IL-10浓度与CD24^(mid)CD27^(+)型亚群细胞比例存在正相关。外周血中两种Breg细胞均与患者的疾病状态存在关联,经过临床药物治疗后,患者体内的Breg细胞显著下降。结论 SLE患者外周血中调节性B细胞显著升高,其分泌的IL-10相应增高,免疫调控作用增强。经过治疗,两者显著下降,提示其具有反映患者疾病状态的潜在价值。

关键词： 淋巴瘤,大B细胞,弥漫性   消癌解毒方   抗肿瘤联合化疗方案   T淋巴细胞,调节性   CD4阳性T淋巴细胞  

摘要： 目的检测初诊弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)采用R-CDOP(利妥昔单抗联合环磷酰胺、脂质体多柔比星、长春新碱及泼尼松)方案联合或不联合消癌解毒方治疗前后外周血调节性T细胞(Treg)百分比的变化,探讨Treg对于DLBCL发病及预后可能的影响以及消癌解毒方是否具有调控Treg表达的作用。方法入组2018年1月至2022年1月南京中医药大学附属医院收治的初诊DLBCL病人共47例(治疗组24例,对照组23例)和健康对照45例,治疗组采用消癌解毒方联合R-CDOP方案,对照组单纯采用R-CDOP方案治疗,两组均化疗6个周期,采用流式细胞术检测两组病人治疗前后及健康对照的外周血CD4+CD25+CD127^(low) Treg百分比,观察两组病人的临床疗效以及治疗前后CD4+CD25+CD127^(low) Treg百分比的变化。结果治疗前,治疗组及对照组两组病人和健康对照的CD4+CD25+CD127^(low) Treg百分比中位数分别为6.01%、5.73%、7.32%,两组病人外周血Treg百分比均低于健康人(P<0.05)。治疗6周期结束后,治疗组及对照组两组病人的CD4+CD25+CD127^(low) Treg百分比中位数分别为7.33%和5.85%,治疗组Treg百分比较治疗前明显上升(P<0.05),对照组治疗前后Treg百分比变化差异不明显(P>0.05)。治疗组和对照组相比,治疗组比对照组的CD4+CD25+CD127^(low) Treg百分比明显上升(P<0.05)。两组病人临床疗效评估结果比较,治疗组和对照组的总缓解率(ORR)分别为79.17%和69.56%,两组ORR差异无统计学意义(P>0.05)。结论消癌解毒方有可能通过上调DLBCL病人失衡的Treg百分比发挥调控肿瘤免疫环境的作用。

关键词： 白细胞介素10   银屑病   调节性B细胞   调节性T细胞  

摘要： 目的:分析银屑病患者及银屑病小鼠模型皮损处白细胞介素10(IL-10)特点及其与银屑病严重程度的相关性,探讨IL-10的表达对银屑病的影响。方法:收集2018年10月至2019年12月温州医科大学附属第二医院育英儿童医院收治的40例银屑病患者病损皮肤,同时通过咪喹莫特(IMQ)分别诱导C57BL/6(WT)小鼠和IL-10敲除(IL-10^(-/-))小鼠致银屑病模型。采用PASI评分观察皮损动态变化;HE染色观察皮损组织形态学变化、表皮厚度及炎症细胞浸润程度;免疫组化检测皮损组织中IL-10和CD19蛋白表达;免疫荧光染色分析皮损组织中CD4定位改变情况。结果:IMQ造模可以取得与临床银屑病患者相类似的皮肤表现。IL-10^(-/-)造模组小鼠背部皮损处红斑评分、鳞屑评分、皮肤浸润厚度评分及PASI总评分和耳朵厚度较WT造模组和IL-10^(-/-)对照组均明显升高(P<0.05)。免疫组化结果显示WT造模组小鼠皮损组织中IL-10的表达阳性率低于WT对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-10^(-/-)造模组小鼠CD19阳性表达率略高于IL-10^(-/-)对照组和WT造模组,差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光结果显示,WT造模组小鼠CD4阳性表达从表皮-真皮交界处向整个表皮层扩散,与银屑病患者样本CD4阳性定位类似。IL-10^(-/-)造模组小鼠表皮层和真皮层均存在CD4阳性表达。结论:IL-10的缺乏会导致持续的免疫激活,加重银屑病的发生和进展,其可能通过增加鳞屑发生,促进皮肤表皮层角质形成细胞的增殖与分化,从而加重银屑病样皮损改变。

关键词： 原发性干燥综合征   血小板减少   调节性B细胞  

摘要： 研究背景与目的:原发性干燥综合征(Primary Sj?gren's Syndrome,pSS)是一种以大量淋巴细胞和浆细胞侵犯泪腺、唾液腺等外分泌腺体为主要特征的自身免疫性疾病,常累及全身多个系统,其中血液系统是其较常侵犯的系统之一。pSS并发血液系统损害约占33-43%,其中并发血小板减少占5-23%。pSS患者若出现重度的血小板减少,则可危及生命。目前pSS并血小板减少的发生机制尚未完全明确。既往的研究发现调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)参与了原发性免疫血小板减少症的发生、发展,并且其水平与血小板计数呈正相关。同时有研究表明Breg细胞在原发性干燥综合征中发挥负向免疫调节的作用。但目前尚不明确pSS并血小板减少是否也与Breg细胞水平相关。本研究通过检测pSS并血小板减少患者外周血中的Breg细胞(CD19+CD5+CD1d+B、CD19+CD24hi CD38hi B及CD19+CD24+CD27+B细胞)占B淋巴细胞的百分比,分析Breg细胞水平与pSS并血小板减少的关系,探讨Breg细胞在pSS并血小板减少中可能发挥的作用。材料与方法:纳入2021年7月-2022年6月于绵阳市中心医院风湿免疫科门诊部及住院部就诊的原发性干燥综合征(pSS)患者69例(33例pSS并血小板减少,36例pSS血小板正常)。通过流式细胞术方法检测CD19+CD5+CD1d+B、CD19+CD24hi CD38hi B及CD19+CD24+CD27+B细胞占B淋巴细胞的百分比。记录pSS患者其他的临床及实验室资料,包括年龄、性别、病程、淋巴细胞水平、B淋巴细胞水平、记忆B淋巴细胞水平、浆母细胞水平、补体C3、补体C4、免疫球蛋白G(Ig G)、免疫球蛋白M(Ig M)、免疫球蛋白E(Ig E)、免疫球蛋白A(Ig A)、抗SSA抗体、抗RO52抗体、抗SSB抗体、白细胞(WBC)计数、血小板(PLT)计数、血红蛋白(HGB)含量、ESSDAI评分等资料。将同期于我院体检中心行健康体检的体检者(30例)作为正常对照组。采用SPSS26.0统计分析软件包对相关数据进行分析。结果:***并血小板减少组的HGB水平及补体C4水平低于血小板正常组(P分别为<0.001,0.049),ESSDAI评分高于血小板正常组(P<0.001)。两组在病程、白细胞计数、补体C3、Ig G、Ig M、Ig E、Ig A、抗SSA抗体、抗RO52抗体、抗SSB抗体、高球蛋白血症占比上的差异无统计学意义(P>0.05)。2.与健康对照组相比:(1)pSS并血小板减少组的淋巴细胞、记忆B细胞、CD19+CD24+CD27+B细胞水平降低(P均<0.001),B淋巴细胞、CD19+CD24hi CD38hi B细胞水平升高(P分别为0.004、0.011),浆母细胞、CD19+CD5+CD1d+B细胞水平差异无统计学意义(P>0.05)。(2)pSS血小板正常组的记忆B细胞、CD19+CD24+CD27+B细胞水平降低(P均<0.001),B淋巴细胞、CD19+CD5+CD1d+B细胞、CD19+CD24hi CD38hi B细胞水平升高(P分别为0.043,P<0.001,0.002),浆母细胞、淋巴细胞水平差异均无统计学意义(P>0.05)。***并血小板减少组与血小板正常组之间各细胞水平的比较:pSS并血小板减少组的淋巴细胞、CD19+CD5+CD1d+B细胞水平均低于血小板正常组(P分别为0.001,0.014),而B淋巴细胞、记忆B细胞、浆母细胞、CD19+CD24hi CD38hi B细胞、CD19+CD24+CD27+B细胞水平在两组间的差异无统计学意义(P>0.05)。***回归分析显示CD19+CD5+CD1d+B细胞水平的降低是原发性干燥综合征发生血小板减少的危险因素(P=0.048)。***并血小板减少组中,疾病高度活动患者的CD19+CD5+CD1d+B细胞水平低于疾病中低度活动组(P=0.001)。***组中,三种Breg细胞的水平均与WBC计数呈负相关;CD19+CD5+CD1d+B细胞的水平与PLT计数、Ig A水平呈正相关;CD19+CD24+CD27+B细胞的水平与ESSDAI评分呈负相关。结论:Breg细胞参与pSS的发生、发展,CD19+CD5+CD1d+B细胞的水平在pSS并血小板减少组与血小板正常组间有显著差异,并且与PLT计数呈正相关。CD19+CD5+CD1d+B细胞水平的降低是原发性干燥综合征发生血小板减少的危险因素。

关键词： 细胞毒T淋巴细胞相关抗原4   调节性T细胞   弥漫大B细胞淋巴瘤   肿瘤微环境   细胞因子  

摘要： 【目的】:弥漫大B细胞淋巴瘤（Diffuse large B-cell lym Phoma,DLBCL）是最常见的侵袭性淋巴瘤,占成人非霍奇金淋巴瘤的30-40%。目前CD20单抗联合化疗使缓解率大大增加,但部分人群仍出现复发进展。为了进一步改善疗效,需要增加新的预后指标。近年来,肿瘤微环境在弥漫大B细胞淋巴瘤发生发展中的作用得到进一步研究,但调节性T细胞和CTL表面CTLA-4在其中的机制仍需进一步阐明。本研究旨在分析CTL表面CTLA-4、Tregs、淋巴细胞亚群、细胞因子在初诊弥漫大B细胞淋巴瘤及4个周期化疗后的表达情况与疗效的关系,寻找新的疗效评估相关指标以更好的指导患者的治疗方案的选择,使DLBCL患者得到更好的生存获益。【方法】:根据纳入及排除标准,收集2021年1月至2023年1月在云南省第一人民医院收治的76例初发弥漫大B细胞淋巴瘤患者临床资料、调节性T细胞、细胞因子及淋巴细胞亚群。按照IPI评分将其分为低危组、低中危组、高中危组、高危组。采集DLBCL患者在化疗前、化疗后4个周期后外周血,流式细胞术检测外周血CTL表面CTLA-4水平。使用SPSS 25.0软件进行统计分析。计数资料采用[n（%）]表示;采用Sha Piro-Wilk test检验计量资料的正态性,非正态资料采用[M(P25,P75)]表示。采用Mann-Whitney U检验或Kruskal-Wails H检验,对比分析各指标在两组或三组之间的差异;采用SPearman相关性分析分析各指标间的相关性。P<0.05表示有差异。分析初诊DLBCL患者不同危险分层组间调节性T细胞、淋巴细胞亚群、细胞因子及CTL表明CTLA-4水平差异;分析治疗4周期后各指标较初诊时的差异;4周期治疗后不同疗效间初诊时各指标的差异;不同疗效组间治疗前后各指标的差异;选取疗效相关指标分析其与临床特征的关系。【结果】:1.不同危险分层组间对比,低危组的调节性T细胞明显高于高危组（P<0.05）;高危组CD4+T细胞数量明显低于低危组（P<0.05）、低中危组（P<0.05）;低危组CD19+细胞数量明显高于高危组（P<0.05）;高危组IL-6明显高于低危组（P<0.05）、低中危组（P<0.05）;低危组IL-8明显低于高危组（P<0.05）;其余指标在组间无差异（P>0.05）。2.规律化疗4周期后,CD4+T细胞数量、B淋巴细胞数量、NK细胞数量、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17F、IL-22均较初诊时下降（P<0.05）。调节性T细胞、CD8+T细胞、IL-4、IL-5、IL-12P70、IL-1β、IL-2、IFN-γ、TNF-α、TNF-β、IL-17A、CTLA-4在治疗前后无明显差异（P>0.05）。3.在4周期治疗后不同疗效分组中,CR组CD8+T细胞明显高于PR组（P<0.05）、疗效不佳组（P<0.05）,其余指标在三组间均无明显差异（P>0.05）。在完全缓解组,治疗后CD4+T细胞、B淋巴细胞、IL-6、IL-8较初诊时下降（P<0.05）。调节性T细胞、CD8+T细胞、NK细胞、IL-4、IL-5、IL-10、IL-12P70、IL-1β、IL-2、IFN-γ、TNF-α、TNF-β、IL-17A、IL-17F、IL-22、CTLA-4在治疗前后无明显差异（P>0.05）。在部分缓解组,治疗后NK细胞、B淋巴细胞、IL-6、IL-8、IL-10、IL-22较初诊时下降（P<0.05）。调节性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、IL-4、IL-5、IL-12P70、IL-1β、IL-2、IFN-γ、TNF-α、TNF-β、IL-17A、IL-17F、CTLA-4在治疗前后无明显差异（P>0.05）。在疗效不佳组,治疗后CD4+T细胞、B淋巴细胞、NK细胞、IFN-γ、IL-17A较初诊时下降（P<0.05）。调节性T细胞、CD8+T细胞、NK细胞、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12P70、IL-1β、IL-2、TNF-α、TNF-β、IL-17F、IL-22、CTLA-4在治疗前后无明显差异（P>0.05）。4.初诊弥漫大B细胞淋巴瘤患者调节性T细胞与CD4+T细胞、CD8+T细胞、B淋巴细胞、NK细胞呈正相关;调节性T细胞与IL-6、IL-8、IL-10呈负相关。5.初诊时LDH、铁蛋白与IL-6、IL-8、IL-10呈正相关。【结论】1.初诊DLBCL患者IL-6、IL-8、IL-10的高水平提示患者肿瘤负荷高。***-6、IL-8、IL-10的持续高水平可能是DLBCL患者疗效欠佳的预测指标。3.初诊DLBCL患者外周血调节性T细胞的低水平可能作为DLBCL患者预后欠佳的危险因素。4.初诊DL

关键词： 类风湿性关节炎   木犀草素   调节性B细胞   IL-10  

摘要： 目的类风湿性关节炎是由免疫系统异常攻击机体而导致的免疫性疾病,不仅损害关节,还引起多种并发症,致残率高。目前,临床上主要通过达标治疗延缓关节炎进展。在类风湿性关节炎的潜在治疗靶点中,具有负向免疫调节作用的调节性B细胞受到学者们的关注。研究发现,类风湿性关节炎患者体内调节性B细胞的数量减少、功能受损。本课题组在牙周炎小鼠诱导类风湿性关节炎的动物实验中,发现下调的调节性B细胞可能是牙龈卟啉单胞菌介导牙周炎进而增强类风湿性关节炎的重要因素,而注射调节性B细胞和用特定的药物诱导调节性B细胞的免疫疗法可能是治疗类风湿性关节炎的有效方法。木犀草素（LUT）作为一种黄酮类化合物广泛存在于人们日常饮食中,具有抗炎特性。本课题通过细胞实验探索LUT对调节性B细胞的诱导作用及内在机制,并通过动物实验探讨富含LUT的饮食对类风湿性关节炎的预防作用,旨在为类风湿性关节炎的预防与护理提供理论依据。方法（1）通过体外实验揭示LUT诱导调节性B细胞的作用与机制从文献中筛选出5种药物,分别为:LUT、山奈酚、绿原酸（CGA）、异甘草素（ISL）及芝麻素。流式细胞术比较5种药物处理对调节性B细胞的诱导作用,以确定本课题的研究药物。通过RT-q PCR、ELISA及Western Blot等实验检测LUT处理调节性B细胞后,细胞及上清液中细胞因子的比例、转录因子的转录水平、蛋白及蛋白磷酸化水平,并揭示LUT促进调节性B细胞分化的信号通路。（2）通过体内实验揭示LUT对类风湿性关节炎的影响将6～8 w雄性DBA/1小鼠分为:对照组、模型组（CIA组）、LUT组、CGA组及ISL组,小鼠数量分别为5只、8只、10只、10只及10只。利用牛Ⅱ型胶原乳剂对小鼠进行免疫,以建立胶原诱导性关节炎动物模型。造模过程中,CIA组2只小鼠因不耐受胶原乳剂死亡,最终纳入8只。LUT组、CGA组及ISL组小鼠在免疫的同时分别给予6 g/kg LUT饲料、4 m M/L CGA饮水及3 g/kg ISL饲料饲养,46天后采集小鼠标本进行分析。通过小鼠体重、关节炎指数评分、流式细胞术及微型CT评价富含LUT的饮食对类风湿性关节炎的预防作用。结果（1）LUT可能通过激活p38 MAPK信号通路及抑制组蛋白去乙酰化酶活性促进调节性B细胞分泌IL-10观察5种药物处理对调节性B细胞分泌IL-10的促进作用及IL-6的抑制作用,选定LUT作为本课题的研究药物,浓度为8μM。LUT上调调节性B细胞IL-10的转录水平（P<0.05）,下调IL-6及IL-1β的转录水平（P<0.05）;抑制细胞上清因子IL-6的表达（P<0.01）。在MAPK信号通路中,LUT处理调节性B细胞后,p38蛋白激酶的磷酸化水平上升（P<0.05）;抑制p38支路后,p38蛋白激酶的磷酸化水平下降（P<0.05）,且调节性B细胞分化能力下降（P<0.05）。ELISA实验表明,LUT抑制调节性B细胞组蛋白去乙酰化酶的活性（P<0.01）。（2）富含LUT的饮食减轻小鼠关节炎症状及降低关节损害程度相较于CIA组,LUT组小鼠体重无明显变化（P>0.05）,CGA组与ISL组小鼠体重上升程度较低（P<0.05）;三个药物组一定程度上减轻小鼠爪部的红肿症状;LUT组小鼠的关节炎指数评分较低,CGA组及ISL组小鼠的关节炎指数评分较高;各药物组的CD4+T细胞比例上升,但无统计学意义,调节性B细胞的IL-10及IL-6的分泌无明显变化（P>0.05）;CGA组小鼠关节骨侵蚀及破坏较严重,LUT及ISL组小鼠的关节骨侵蚀及破坏程度减轻。结论（1）LUT可能通过激活p38 MAPK信号通路及抑制组蛋白去乙酰化酶活性诱导调节性B细胞分化。（2）在CIA动物模型中,富含LUT的饮食对类风湿性关节炎小鼠的关节具有保护作用,延缓疾病的进展。

关键词： 早发性卵巢功能不全   B细胞亚群   调节性B细胞   免疫球蛋白   卵巢储备  

摘要： 研究背景:早发性卵巢功能不全(Premature ovarian insufficiency,POI)是导致育龄期女性不孕不育的常见生殖内分泌疾病,是指女性在40岁之前出现卵巢功能减退,主要表现为月经异常(闭经、月经稀发或频发)、促性腺激素水平升高(FSH>25 IU/L)、雌激素水平波动性下降。POI病因和发病机制复杂,涉及染色体异常、基因突变、自身免疫异常、医源性损伤等,半数以上患者迄今病因仍不明确。自身免疫异常可解释约5-30%的POI患者,包括伴发自身免疫性疾病,多种自身抗体异常、细胞免疫失衡及卵巢炎的存在等。但目前临床上仍缺乏可用于自身免疫性POI的有效预警和诊断指标。B细胞和免疫球蛋白在细胞免疫和体液免疫中发挥重要调节作用,其异常与系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等多种自身免疫性疾病发生相关。POI患者血清中多种抗卵巢自身抗体阳性,提示体液免疫异常可参与POI发病;但总免疫球蛋白在POI患者中的变化目前尚无报道。此外,对于POI患者的细胞免疫异常主要聚焦在T细胞,发现TH1/Treg失衡等,POI患者是否存在B细胞亚群分布及表型功能的异常目前尚不清楚。因此,POI患者的B细胞亚群和免疫球蛋白异常仍有待探究,以期为POI的病因诊断、早期预防和干预提供重要参考。研究目的:探讨POI患者外周及卵巢微环境B细胞亚群和免疫球蛋白异常,分析异常指标与卵巢功能减退的相关性,明确POI患者的体液免疫异常。研究方法:1.应用流式细胞术分析比较POI患者与健康对照女性外周血B细胞亚群的数量、表型及功能差异;2.应用免疫比浊法检测并比较POI患者与对照女性血清及卵泡液中免疫球蛋白及其亚类水平的差异;3.采用相关性分析验证异常免疫指标与卵巢储备功能的相关性;4.应用流式细胞术、免疫组化、免疫荧光染色等评估小鼠卵巢IgG各型受体的表达和定位,并比较不同卵泡发育阶段的表达差异。研究结果:1.相较于正常对照女性,POI患者外周血B细胞比例和数量显著升高,幼稚B细胞比例增加,类别转换记忆B细胞和浆细胞比例显著降低,过渡性B细胞和未类别转换记忆B细胞的比例在两组间无显著差异,提示POI患者存在B细胞及其亚群分布异常;2.相较于正常对照女性,POI患者外周血调节性B细胞(regulatory B cell,Breg),包括 CD19+IL-10+Breg、CD19+CD24hiCD27+Breg 和 CD19+CD24hiCD38hi Breg 亚群比例显著降低;进一步对Breg细胞功能表型进行探究,发现CD19+CD24hiCD27+Breg细胞对T细胞IFN-γ和TNF-α分泌的抑制作用在两组间无显著差异;***患者B细胞亚群及Breg细胞比例异常均与其疾病严重程度增加相关;4.相较于正常对照女性,POI患者血清IgG和IgM水平降低,生化异常期POI(biochemical POI,bPOI)患者血清IgG水平及卵泡液IgG、IgA和IgM水平均显著降低,且均与卵巢储备功能下降呈显著正相关。卵泡液IgG亚型分布在两组间无显著差异;5.随着卵泡发育,卵泡液中IgG 水平逐渐上升,IgM水平则逐渐下降;FcRn是卵巢中表达比例最高的IgG受体,FcRn的表达随卵泡发育无显著变化。研究结论:POI患者外周和卵巢微环境中存在B细胞亚群及免疫球蛋白水平异常,且与POI疾病严重程度相关,为POI自身免疫异常提供了新的证据。

关键词： 淋巴细胞   调节性B细胞   Graves病   TRAb   免疫紊乱  

摘要： 目的:弥漫性毒性甲状腺肿,即Graves病（Graves disease,GD）是最常见的器官特异性自身免疫性疾病之一,是临床甲亢最普遍原因,受环境、基因及免疫多种因素影响。调节性B细胞（regulatory B cell,Breg）是重要的免疫抑制性淋巴细胞,在不同的自身免疫性疾病中发挥重要作用。目前,Breg水平在不同病情下的GD中有无区别及相关影响因素尚未完全明确。因此,我们研究不同病情程度的GD患者外周血Breg表达差异,及Breg水平与甲状腺相关指标之间的相关性。方法:研究对象包括进行了外周血Breg检测的GD患者153例,年龄匹配且同进行了外周血Breg水平检测的健康组45例。收集研究对象年龄、性别、甲状腺功能及甲状腺自身抗体指标、血常规相关指标、病历资料。通过入组的GD患者的病历资料,甲状腺功能及甲状腺激素受体抗体（anti-thyrotropin receptor antibody,TRAb）,将其分为甲功异常组（45例）,甲功正常组（60例）及TRAb正常组（48例）。通过流式细胞术评估所有研究对象外周血CD192438B淋巴细胞亚群的表达。结果:GD组外周血CD192438B细胞亚群较健康人群表达水平降低,不同时期GD患者之间CD192438B细胞亚群表达存在差异。以所有GD患者为样本进行分析,FT3、FT4及TRAb与CD192438B细胞呈负相关,r值分别为-0.38,-0.18,-0.40。根据甲状腺功能及自身抗体水平对GD患者进行分组,甲功异常组GD患者FT3、FT4及TRAb水平与CD192438B细胞呈负相关,r值分别为-0.27、-0.14和-0.37;甲功正常组GD患者FT3、TRAb与CD192438B细胞呈负相关,r值分别为-0.25及-0.26;TRAb正常GD患者中未观察到CD192438B细胞与甲功指标或甲状腺自身抗体水平有统计学意义的相关性。通过多元回归分析,分析以上甲功指标及自身抗体是否共同影响GD患者外周血Breg表达,经逐步纳入相关混杂因素,FT3及TRAb两项指标与Breg变化呈相关性,纳入该两种指标的模型可解释Graves病患者38%的Breg水平变化。结论:GD患者外周血调节性B细胞水平下降。在甲状腺相关指标中,FT3与TRAb与调节性B细胞水平相关,其中TRAb与调节性B细胞水平关系更密切。

关键词： 急性肺损伤   调节性B细胞   调节性T细胞   白介素10  

摘要： 研究背景:急性肺损伤（Acute lung injury,ALI）/急性呼吸窘迫综合征（Acute respiratory distress syndrome,ARDS）是各种直接（如细菌、病毒、真菌等）和间接（如重症胰腺炎、脓毒症、创伤等）原因引起的威胁生命的临床综合征。以肺泡上皮细胞及肺毛细血管内皮损伤、双肺弥漫性浸润及肺泡水肿,导致进行性加重的难以纠正的低氧血症为特征,肺部病理表现为大量炎症细胞浸润、肺泡水肿、肺间隔增宽、肺泡塌陷及肺泡内透明膜形成。 ARDS属临床急危重症,临床上脓毒症是导致ARDS的最常见病因之一,其发生与革兰氏阴性细菌细胞壁脂多糖（1ipopolysaccharide,LPS）密切相关,所以LPS经气管内或者腹腔内注射是诱导动物ALI/ARDS模型的经典方式。据估计,全球每年约有300万例ARDS病例,重症监护室中ARDS的发生率为10.4%,给全球重症监护系统带来沉重负担,死亡率高达40%,但目前美国FDA尚未批准其特效治疗药物,由于缺乏有效的药物与干预措施,目前ARDS的主要治疗方式仍以支持治疗和机械通气为主,是ICU患者死亡的主要原因之一。 ALI/ARDS的发病机制及病理生理过程,尤其是核心的免疫调节机制迄今仍缺乏深入理解,导致临床上尚无精确的治疗靶点。因此,积极研究ALI/ARDS的免疫调控机制对于寻找新的治疗靶点和促进ALI/ARDS损伤修复具有重要的科学意义和重要临床实用价值。ARDS的发病机制是在致病因素作用之后,天然免疫细胞及获得性免疫细胞参与其中,炎症级联反应瀑布样释放,细胞焦亡、凋亡、死亡,导致广泛肺损伤。因此,ARDS后免疫损伤及损伤修复与患者预后密切相关。 我们课题组前期临床研究发现,老年脓毒症患者外周血CD20+CD24hiCD38hi调节性B细胞（regulatory B cells,Bregs）水平,入院1、3、7天死亡组均显著低于存活组（均p<0.05）,提示Bregs在脓毒症中发挥保护作用;Logistic回归分析显示,Bregs和APACHEⅡ评分是影响老年脓毒症患者预后的独立危险因素。外周血Bregs表达水平在一定程度上可以用于判断老年脓毒症患者的预后。而抗体分泌细胞（antibody-Secreting Cells,ASCs）是B细胞的另一个独特亚群,在老年脓毒症患者外周血中明显升高,促进T细胞增殖并促进其分泌IFN-γ和IL-17;B细胞亚群中过渡性B淋巴细胞在重症社区获得性肺炎较普通社区获得性肺炎中明显降低;前期我们通过对3例脓毒症诱发ARDS患者和3例中毒气管插管患者进行支气管肺泡灌洗,发现肺泡灌洗液中存在CD3+CD19-T细胞和CD3-CD19+B细胞,Bregs初步表型分析为CD10-CD20lo/+CD24loCD27+CD38+,符合天然Bregs的表型特征。提示Bregs可能在脓毒症继发急性肺损伤中发挥着重要的免疫调节作用。近年来的研究显示B细胞除分泌抗体外,还具有免疫负调节和分泌白介素-10（interleukin-10,IL-10）的功能,因而形成调节性B细胞（regulatory B cells,Bregs）的概念,不同于表达特征性转录因子Foxp3的调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）,目前Bregs中尚未发现特征性转录因子。急性肺损伤修复过程中也有许多白细胞介素参与,其中IL-10是机体最重要的免疫负调节分子之一,主要通过抑制树突状细胞、巨噬细胞和粒细胞等天然免疫细胞的活化和炎症因子的分泌而发挥强大的免疫负调控作用,在抑制机体过度炎症反应和维持机体免疫稳态过程中发挥着关键作用。但对于ALI/ARDS病程中IL-10的具体来源及其抗炎贡献的大小尚缺乏明确的认识。Bregs在ARDS后的免疫调节作用,以及Bregs与T细胞间的作用关系尚无研究。因此,本研究通过临床发现拟采用动物和细胞试验进一步探讨LPS诱导的ALI小鼠模型Bregs应答特征、Bregs的保护功能及Bregs如何参与到炎症修复过程。 目的:明确小鼠ALI模型Bregs的应答特征,明确分泌IL-10的B细胞在急性肺损伤保护过程中的地位,阐明Bregs在ALI中对T细胞的免疫保护作用和机制,以期发现针对ALI/ARDS治疗的新靶点,提供急性肺损伤后功能修复的新思路。 方法:首先,通过LPS气道滴注的方法构建ALI野生型（wild type,WT）小鼠模型,观察小鼠体重变化及生存率,检测支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中白细胞数、蛋白、肺湿/干重（wet to dry ratio,W/D）比值,采用ELISA检测BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-10水平的变化;通过HE

关键词： 布鲁菌病   调节性B细胞   慢性化   细胞因子  

摘要： 目的:研究分析布鲁菌病患者不同疾病阶段调节性B细胞（B-regs）和相关细胞因子（IL-10、IFN-γ）变化规律,了解B-regs在布鲁菌病患者免疫反应中的作用,探讨B-regs在布鲁菌病慢性化中的作用机制。方法:采用前瞻性研究,选择于2021年9月-2022年4月就诊于新疆医科大学第一及第八附属医院的急、慢性期布鲁菌病患者各30例,设立健康对照组30例。收集三组人群的一般资料（性别、年龄）,应用流式细胞仪检测所有布鲁菌病患者治疗前、后外周血CD19+CD24hiCD27+B-regs水平,并用ELISA法检测其血清IL-10及IFN-γ水平,将其与30例健康对照组进行比较,采用统计学方法分析探讨其变化特点及相关性。结果:1.三组人群性别和年龄差异无统计学意义（P>0.05）。2.三组人群B-regs水平进行比较,急、慢性期两组治疗前明显高于健康对照组,经治疗后下降,但慢性期组依旧比健康对照、急性期两组高,差异有统计学意义（P<0.05）。3.细胞因子的检测结果进行比较,IL-10水平在急、慢性期组治疗前明显升高,高于健康对照组,在治疗后两组水平均有下降,仍高于健康对照组,且差异有统计学意义（P<0.05）。相关性分析表明,血清IL-10和B-regs水平呈正相关性（P<0.05）。IFN-γ水平在急、慢性期组治疗前比健康对照组明显升高,治疗后呈变低趋势,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:人体感染布鲁杆菌后,伴随着高水平的IFN-γ,B-regs在布鲁菌病不同疾病阶段中均有升高,同时与IL-10水平呈正相关。急性期患者的B-regs水平明显增加且IFN-γ水平升高,而治疗后可下降,提示预后良好。慢性期患者常出现B-regs明显增加且有IFN-γ水平偏低,检测B-regs为临床布鲁菌病慢性期的诊断和预后的判断可提供重要参考价值。