关键词： 葫芦素B   Hippo-Yes相关蛋白通路   宫颈癌   调节性T细胞   免疫逃逸  

摘要： 目的探讨葫芦素B调节Hippo-Yes相关蛋白(YAP)通路对宫颈癌中调节性T细胞(Treg)介导的免疫逃逸的影响。方法选取BALB/c裸鼠32只作为研究对象,皮下注射人宫颈癌Hela细胞建立裸鼠移植瘤模型,将造模成功的裸鼠按照随机数字表法分为CON组、葫芦素B组、LPA组和葫芦素B-LPA组,每组8只。CON组采用腹腔注射生理盐水,葫芦素B组和LPA组采用腹腔注射剂量0.5 mg/kg的葫芦素B和剂量为3 mg/kg的JAP激活剂LPA,葫芦素B-LPA组采用腹腔同时注射0.5 mg/kg的葫芦素B和3 mg/kg的LPA,每2天给药一次,共处理21 d后取材;采用ELISA试剂盒法比较各组裸鼠血清白介素-2(IL-2)、IL-10和转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))水平;采用流式细胞术比较各组裸鼠淋巴细胞CD4^(+)、CD4^(+)CD25^(+)叉状头状螺旋转录因子3(Foxp3^(+))Treg水平;采用Western blot法比较各组瘤组织Foxp3、TGF-β、YAP、大肿瘤抑制基因1(LATS1)、哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)蛋白表达。结果21 d后,葫芦素B组裸鼠的肿瘤质量、血清IL-2、IL-10、TGF-β_(1)表达、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg/CD4^(+)比例、Foxp3、TGF-β、YAP蛋白表达低于CON组,LATS1、MST1蛋白表达高于CON组,差异有统计学意义(P<0.05);LPA组裸鼠的肿瘤质量、血清IL-2、IL-10、TGF-β_(1)表达、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg/CD4^(+)比例、Foxp3、TGF-β、YAP蛋白表达高于CON组,差异有统计学意义(P<0.05);LPA组和CON组的LATS1、MST1蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);葫芦素B-LPA组裸鼠的肿瘤质量、血清IL-2、IL-10、TGF-β_(1)表达、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg/CD4^(+)比例、Foxp3、TGF-β、YAP蛋白表达高于葫芦素B组,低于LPA组,差异有统计学意义(P<0.05);葫芦素B-LPA组和葫芦素B组的LATS1、MST1蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);葫芦素B-LPA组的LATS1、MST1蛋白表达高于LPA组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论葫芦素B可通过调节Hippo-YAP通路抑制宫颈癌中Treg介导的免疫逃逸。

关键词： 调节性B细胞   结肠癌   淋巴管生成   淋巴转移  

摘要： 目的:通过共培养模型,验证结肠癌相关性Breg细胞促进淋巴管生成的作用及相关机制。方法:利用结肠癌细胞CT26及MC38与B细胞构建共培养模型,诱导结肠癌相关性Breg细胞,流式细胞术鉴定CD19+IL-10+Breg细胞比例。ELISA法检测结肠癌相关性Breg细胞条件培养基中VEGF-A、VEGF-C和VEGF-D的分泌水平。利用划痕实验及管腔形成实验检测Breg条件培养基干预后淋巴结内皮细胞SVEC4-10的迁移及管腔形成能力。结果:与24 h共培养体系相比,Breg^(CT26)诱导组[(4.90±0.05)%vs.(27.63±1.12)%]和Breg^(MC38)诱导组[(5.85±0.86)%vs.(24.27±2.27)%]在48 h共培养体系中能诱导更多的Breg细胞,且结肠癌相关性Breg诱导组VEGF-A和VEGF-C的表达水平与空白组相比显著增加(P<0.05)。管腔形成实验及划痕实验结果表明,结肠癌相关性Breg细胞能增强SVEC4-10的成管和迁移能力。结论:在肿瘤微环境中,结肠癌细胞通过诱导B细胞向Breg细胞转化,上调VEGF-A和VEGF-C分泌水平,增强SVEC4-10的成管和迁移能力,从而促进肿瘤淋巴管生成。

关键词： 调节性B细胞   肿瘤免疫逃逸   肿瘤浸润细胞   免疫调节  

摘要： 近年来,调节性B细胞(Breg)在肿瘤免疫研究中备受瞩目,多种实体肿瘤中均发现其大量浸润,直接或间接影响抗肿瘤免疫功能,发挥免疫调节效应。然而肿瘤浸润Breg的表型特征及其复杂的功能和机制尚有待系统解析。在此,基于现有研究成果,本文对肿瘤浸润Breg的表型、作用模式、驱动因素及临床相关性进行论述。

关键词： 系统性红斑狼疮(SLE)   疾病状态   IL-10   CD24^(high)CD27^(+)型Breg细胞   CD24^(mid)CD27^(+)型Breg细胞  

摘要： 目的 探究CD19^(+)CD24^(+)CD27^(+)调节性B细胞在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)中的作用和临床相关性。方法 收集23例SLE患者和23例健康人群的外周血以及血浆标本,使用流式细胞仪检测并比较两组人群外周血标本中的CD19^(+)CD24^(+)CD27^(+)调节性B细胞与细胞内IL-10的表达水平,并将其细分为CD24^(high)CD27^(+)以及CD24^(mid)CD27^(+)两个亚群,同时比较血浆中各细胞因子的浓度并分析其与Breg细胞的相关性。检测治疗后SLE患者外周血中Breg细胞的变化并与治疗前进行比较,分析其与疾病发展状态之间的关系。结果 SLE患者体内的两种Breg细胞均显著升高,分别为6.09%±2.61%和12.28%±4.90%,其细胞内IL-10表达也明显增强,且CD24^(high)CD27^(+)型Breg细胞内IL-10水平高于CD24^(mid)CD27^(+)型亚群。患者血浆中IL-1β为(9.24±9.97) pg/mL,IL-10为(43.50±23.06) pg/mL,TNF-α为(11.26±7.48) pg/mL,IFN-γ为(12.83±7.27) pg/mL,较正常人均显著升高,且IL-10浓度与CD24^(mid)CD27^(+)型亚群细胞比例存在正相关。外周血中两种Breg细胞均与患者的疾病状态存在关联,经过临床药物治疗后,患者体内的Breg细胞显著下降。结论 SLE患者外周血中调节性B细胞显著升高,其分泌的IL-10相应增高,免疫调控作用增强。经过治疗,两者显著下降,提示其具有反映患者疾病状态的潜在价值。

关键词： 淋巴瘤,大B细胞,弥漫性   消癌解毒方   抗肿瘤联合化疗方案   T淋巴细胞,调节性   CD4阳性T淋巴细胞  

摘要： 目的检测初诊弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)采用R-CDOP(利妥昔单抗联合环磷酰胺、脂质体多柔比星、长春新碱及泼尼松)方案联合或不联合消癌解毒方治疗前后外周血调节性T细胞(Treg)百分比的变化,探讨Treg对于DLBCL发病及预后可能的影响以及消癌解毒方是否具有调控Treg表达的作用。方法入组2018年1月至2022年1月南京中医药大学附属医院收治的初诊DLBCL病人共47例(治疗组24例,对照组23例)和健康对照45例,治疗组采用消癌解毒方联合R-CDOP方案,对照组单纯采用R-CDOP方案治疗,两组均化疗6个周期,采用流式细胞术检测两组病人治疗前后及健康对照的外周血CD4+CD25+CD127^(low) Treg百分比,观察两组病人的临床疗效以及治疗前后CD4+CD25+CD127^(low) Treg百分比的变化。结果治疗前,治疗组及对照组两组病人和健康对照的CD4+CD25+CD127^(low) Treg百分比中位数分别为6.01%、5.73%、7.32%,两组病人外周血Treg百分比均低于健康人(P<0.05)。治疗6周期结束后,治疗组及对照组两组病人的CD4+CD25+CD127^(low) Treg百分比中位数分别为7.33%和5.85%,治疗组Treg百分比较治疗前明显上升(P<0.05),对照组治疗前后Treg百分比变化差异不明显(P>0.05)。治疗组和对照组相比,治疗组比对照组的CD4+CD25+CD127^(low) Treg百分比明显上升(P<0.05)。两组病人临床疗效评估结果比较,治疗组和对照组的总缓解率(ORR)分别为79.17%和69.56%,两组ORR差异无统计学意义(P>0.05)。结论消癌解毒方有可能通过上调DLBCL病人失衡的Treg百分比发挥调控肿瘤免疫环境的作用。

关键词： 白细胞介素10   银屑病   调节性B细胞   调节性T细胞  

摘要： 目的:分析银屑病患者及银屑病小鼠模型皮损处白细胞介素10(IL-10)特点及其与银屑病严重程度的相关性,探讨IL-10的表达对银屑病的影响。方法:收集2018年10月至2019年12月温州医科大学附属第二医院育英儿童医院收治的40例银屑病患者病损皮肤,同时通过咪喹莫特(IMQ)分别诱导C57BL/6(WT)小鼠和IL-10敲除(IL-10^(-/-))小鼠致银屑病模型。采用PASI评分观察皮损动态变化;HE染色观察皮损组织形态学变化、表皮厚度及炎症细胞浸润程度;免疫组化检测皮损组织中IL-10和CD19蛋白表达;免疫荧光染色分析皮损组织中CD4定位改变情况。结果:IMQ造模可以取得与临床银屑病患者相类似的皮肤表现。IL-10^(-/-)造模组小鼠背部皮损处红斑评分、鳞屑评分、皮肤浸润厚度评分及PASI总评分和耳朵厚度较WT造模组和IL-10^(-/-)对照组均明显升高(P<0.05)。免疫组化结果显示WT造模组小鼠皮损组织中IL-10的表达阳性率低于WT对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-10^(-/-)造模组小鼠CD19阳性表达率略高于IL-10^(-/-)对照组和WT造模组,差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光结果显示,WT造模组小鼠CD4阳性表达从表皮-真皮交界处向整个表皮层扩散,与银屑病患者样本CD4阳性定位类似。IL-10^(-/-)造模组小鼠表皮层和真皮层均存在CD4阳性表达。结论:IL-10的缺乏会导致持续的免疫激活,加重银屑病的发生和进展,其可能通过增加鳞屑发生,促进皮肤表皮层角质形成细胞的增殖与分化,从而加重银屑病样皮损改变。

关键词： 细胞毒T淋巴细胞相关抗原4   调节性T细胞   弥漫大B细胞淋巴瘤   肿瘤微环境   细胞因子  

摘要： 【目的】:弥漫大B细胞淋巴瘤（Diffuse large B-cell lym Phoma,DLBCL）是最常见的侵袭性淋巴瘤,占成人非霍奇金淋巴瘤的30-40%。目前CD20单抗联合化疗使缓解率大大增加,但部分人群仍出现复发进展。为了进一步改善疗效,需要增加新的预后指标。近年来,肿瘤微环境在弥漫大B细胞淋巴瘤发生发展中的作用得到进一步研究,但调节性T细胞和CTL表面CTLA-4在其中的机制仍需进一步阐明。本研究旨在分析CTL表面CTLA-4、Tregs、淋巴细胞亚群、细胞因子在初诊弥漫大B细胞淋巴瘤及4个周期化疗后的表达情况与疗效的关系,寻找新的疗效评估相关指标以更好的指导患者的治疗方案的选择,使DLBCL患者得到更好的生存获益。【方法】:根据纳入及排除标准,收集2021年1月至2023年1月在云南省第一人民医院收治的76例初发弥漫大B细胞淋巴瘤患者临床资料、调节性T细胞、细胞因子及淋巴细胞亚群。按照IPI评分将其分为低危组、低中危组、高中危组、高危组。采集DLBCL患者在化疗前、化疗后4个周期后外周血,流式细胞术检测外周血CTL表面CTLA-4水平。使用SPSS 25.0软件进行统计分析。计数资料采用[n（%）]表示;采用Sha Piro-Wilk test检验计量资料的正态性,非正态资料采用[M(P25,P75)]表示。采用Mann-Whitney U检验或Kruskal-Wails H检验,对比分析各指标在两组或三组之间的差异;采用SPearman相关性分析分析各指标间的相关性。P<0.05表示有差异。分析初诊DLBCL患者不同危险分层组间调节性T细胞、淋巴细胞亚群、细胞因子及CTL表明CTLA-4水平差异;分析治疗4周期后各指标较初诊时的差异;4周期治疗后不同疗效间初诊时各指标的差异;不同疗效组间治疗前后各指标的差异;选取疗效相关指标分析其与临床特征的关系。【结果】:1.不同危险分层组间对比,低危组的调节性T细胞明显高于高危组（P<0.05）;高危组CD4+T细胞数量明显低于低危组（P<0.05）、低中危组（P<0.05）;低危组CD19+细胞数量明显高于高危组（P<0.05）;高危组IL-6明显高于低危组（P<0.05）、低中危组（P<0.05）;低危组IL-8明显低于高危组（P<0.05）;其余指标在组间无差异（P>0.05）。2.规律化疗4周期后,CD4+T细胞数量、B淋巴细胞数量、NK细胞数量、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17F、IL-22均较初诊时下降（P<0.05）。调节性T细胞、CD8+T细胞、IL-4、IL-5、IL-12P70、IL-1β、IL-2、IFN-γ、TNF-α、TNF-β、IL-17A、CTLA-4在治疗前后无明显差异（P>0.05）。3.在4周期治疗后不同疗效分组中,CR组CD8+T细胞明显高于PR组（P<0.05）、疗效不佳组（P<0.05）,其余指标在三组间均无明显差异（P>0.05）。在完全缓解组,治疗后CD4+T细胞、B淋巴细胞、IL-6、IL-8较初诊时下降（P<0.05）。调节性T细胞、CD8+T细胞、NK细胞、IL-4、IL-5、IL-10、IL-12P70、IL-1β、IL-2、IFN-γ、TNF-α、TNF-β、IL-17A、IL-17F、IL-22、CTLA-4在治疗前后无明显差异（P>0.05）。在部分缓解组,治疗后NK细胞、B淋巴细胞、IL-6、IL-8、IL-10、IL-22较初诊时下降（P<0.05）。调节性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、IL-4、IL-5、IL-12P70、IL-1β、IL-2、IFN-γ、TNF-α、TNF-β、IL-17A、IL-17F、CTLA-4在治疗前后无明显差异（P>0.05）。在疗效不佳组,治疗后CD4+T细胞、B淋巴细胞、NK细胞、IFN-γ、IL-17A较初诊时下降（P<0.05）。调节性T细胞、CD8+T细胞、NK细胞、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12P70、IL-1β、IL-2、TNF-α、TNF-β、IL-17F、IL-22、CTLA-4在治疗前后无明显差异（P>0.05）。4.初诊弥漫大B细胞淋巴瘤患者调节性T细胞与CD4+T细胞、CD8+T细胞、B淋巴细胞、NK细胞呈正相关;调节性T细胞与IL-6、IL-8、IL-10呈负相关。5.初诊时LDH、铁蛋白与IL-6、IL-8、IL-10呈正相关。【结论】1.初诊DLBCL患者IL-6、IL-8、IL-10的高水平提示患者肿瘤负荷高。***-6、IL-8、IL-10的持续高水平可能是DLBCL患者疗效欠佳的预测指标。3.初诊DLBCL患者外周血调节性T细胞的低水平可能作为DLBCL患者预后欠佳的危险因素。4.初诊DL

关键词： 原发性干燥综合征   血小板减少   调节性B细胞  

摘要： 研究背景与目的:原发性干燥综合征(Primary Sj?gren's Syndrome,pSS)是一种以大量淋巴细胞和浆细胞侵犯泪腺、唾液腺等外分泌腺体为主要特征的自身免疫性疾病,常累及全身多个系统,其中血液系统是其较常侵犯的系统之一。pSS并发血液系统损害约占33-43%,其中并发血小板减少占5-23%。pSS患者若出现重度的血小板减少,则可危及生命。目前pSS并血小板减少的发生机制尚未完全明确。既往的研究发现调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)参与了原发性免疫血小板减少症的发生、发展,并且其水平与血小板计数呈正相关。同时有研究表明Breg细胞在原发性干燥综合征中发挥负向免疫调节的作用。但目前尚不明确pSS并血小板减少是否也与Breg细胞水平相关。本研究通过检测pSS并血小板减少患者外周血中的Breg细胞(CD19+CD5+CD1d+B、CD19+CD24hi CD38hi B及CD19+CD24+CD27+B细胞)占B淋巴细胞的百分比,分析Breg细胞水平与pSS并血小板减少的关系,探讨Breg细胞在pSS并血小板减少中可能发挥的作用。材料与方法:纳入2021年7月-2022年6月于绵阳市中心医院风湿免疫科门诊部及住院部就诊的原发性干燥综合征(pSS)患者69例(33例pSS并血小板减少,36例pSS血小板正常)。通过流式细胞术方法检测CD19+CD5+CD1d+B、CD19+CD24hi CD38hi B及CD19+CD24+CD27+B细胞占B淋巴细胞的百分比。记录pSS患者其他的临床及实验室资料,包括年龄、性别、病程、淋巴细胞水平、B淋巴细胞水平、记忆B淋巴细胞水平、浆母细胞水平、补体C3、补体C4、免疫球蛋白G(Ig G)、免疫球蛋白M(Ig M)、免疫球蛋白E(Ig E)、免疫球蛋白A(Ig A)、抗SSA抗体、抗RO52抗体、抗SSB抗体、白细胞(WBC)计数、血小板(PLT)计数、血红蛋白(HGB)含量、ESSDAI评分等资料。将同期于我院体检中心行健康体检的体检者(30例)作为正常对照组。采用SPSS26.0统计分析软件包对相关数据进行分析。结果:***并血小板减少组的HGB水平及补体C4水平低于血小板正常组(P分别为<0.001,0.049),ESSDAI评分高于血小板正常组(P<0.001)。两组在病程、白细胞计数、补体C3、Ig G、Ig M、Ig E、Ig A、抗SSA抗体、抗RO52抗体、抗SSB抗体、高球蛋白血症占比上的差异无统计学意义(P>0.05)。2.与健康对照组相比:(1)pSS并血小板减少组的淋巴细胞、记忆B细胞、CD19+CD24+CD27+B细胞水平降低(P均<0.001),B淋巴细胞、CD19+CD24hi CD38hi B细胞水平升高(P分别为0.004、0.011),浆母细胞、CD19+CD5+CD1d+B细胞水平差异无统计学意义(P>0.05)。(2)pSS血小板正常组的记忆B细胞、CD19+CD24+CD27+B细胞水平降低(P均<0.001),B淋巴细胞、CD19+CD5+CD1d+B细胞、CD19+CD24hi CD38hi B细胞水平升高(P分别为0.043,P<0.001,0.002),浆母细胞、淋巴细胞水平差异均无统计学意义(P>0.05)。***并血小板减少组与血小板正常组之间各细胞水平的比较:pSS并血小板减少组的淋巴细胞、CD19+CD5+CD1d+B细胞水平均低于血小板正常组(P分别为0.001,0.014),而B淋巴细胞、记忆B细胞、浆母细胞、CD19+CD24hi CD38hi B细胞、CD19+CD24+CD27+B细胞水平在两组间的差异无统计学意义(P>0.05)。***回归分析显示CD19+CD5+CD1d+B细胞水平的降低是原发性干燥综合征发生血小板减少的危险因素(P=0.048)。***并血小板减少组中,疾病高度活动患者的CD19+CD5+CD1d+B细胞水平低于疾病中低度活动组(P=0.001)。***组中,三种Breg细胞的水平均与WBC计数呈负相关;CD19+CD5+CD1d+B细胞的水平与PLT计数、Ig A水平呈正相关;CD19+CD24+CD27+B细胞的水平与ESSDAI评分呈负相关。结论:Breg细胞参与pSS的发生、发展,CD19+CD5+CD1d+B细胞的水平在pSS并血小板减少组与血小板正常组间有显著差异,并且与PLT计数呈正相关。CD19+CD5+CD1d+B细胞水平的降低是原发性干燥综合征发生血小板减少的危险因素。

关键词： 多发性骨髓瘤   免疫麻痹   IgM   生存  

摘要： 目的: 本研究通过回顾性分析多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）患者临床特征、诊疗过程、实验室检查结果、生存情况等,旨在探索免疫麻痹以及调节性B细胞（regulatory B cells,Bregs）与患者疾病分期、生存预后等关系,及早进行关注、干预治疗,以改善患者免疫状态及预后;并且收集回顾性分析随访截止时间之后的初诊MM患者作为验证集,验证回顾性分析的结果可重复性。 材料和方法: 本研究纳入2016年1月至2021年11月期间于四川大学华西医院诊断为MM病例共320例作为研究对象,并收集相关临床资料,包括初诊时免疫球蛋白水平（血清蛋白电泳、免疫固定电泳）、Bregs占CD19+B淋巴细胞的比例、M蛋白类型、生存进展情况等。纳入2021年12月1日及以后初诊MM患者81例作为验证集。使用SPSS 25.0进行统计学分析。 结果: 在回顾性研究纳入的320例MM患者中,大部分患者均可见免疫麻痹现象。患者免疫麻痹率为85.6%。对于免疫麻痹的恢复情况,可查询到231例患者免疫麻痹恢复情况,仅有42例患者恢复,八成患者未恢复（189/231,81.8%）。在81例初诊MM患者的验证集中,患者免疫麻痹率为87.7%（71/81）,结果一致且可重复。 1.在320例MM患者中,具有免疫麻痹的患者β2-MG≥3.5mg/L的比例更高（P<0.05）,肾功能损伤的比例更高（P<0.05）。在验证集中,免疫麻痹的患者其白蛋白<35g/L的比例高于免疫球蛋白正常组（P<0.05）。 2.对于320例MM患者,免疫麻痹分别与DS分期、ISS分期、RISS分期具有相关性。R-ISSⅢ期、ISSⅢ期、DSⅢ期的MM患者相对于各分期Ⅰ期、Ⅱ期的患者出现免疫麻痹的可能性更高。在验证集中,因R-ISS分期数据较少,故未行R-ISS分期与免疫麻痹相关性分析。DSⅢ期和ISS分期与免疫麻痹也具有相关性。 3.对于MM患者单因素生存分析:肾功能损伤组的无进展生存期（PFS）和总生存期（OS）较差（P<0.05 HR=2.642 95%CI[1.534-4.550];P<0.05 HR=4.65595%CI[1.815-11.938]）。ISSⅢ期患者PFS和OS较差（P<0.05 HR=1.97995%CI[1.173-3.338];P<0.05 HR=5.381 95%CI[1.992-14.537]）。R-ISSⅢ期患者PFS和OS较差（P<0.05 HR=2.302 95%CI[1.330-3.985];P<0.05HR=8.535 95%CI[3.141-23.189]）。β2-MG≥3.5mg/L组的OS较差（P<0.05 HR=4.150 95%CI[1.208-14.263]）。Bregs<10%组的OS较差（P<0.05）。 4.免疫麻痹患者生存较差。根据免疫球蛋白状态,将MM患者分为免疫球蛋白正常组、部分免疫麻痹组和完全免疫麻痹组进行PFS单因素生存分析,生存差异有统计学意义（P<0.05）,继续计算后发现完全免疫麻痹组患者生存与免疫球蛋白正常组具有统计学差异（P<0.05 HR=3.069 95%CI[1.111-8.478]）。单独选取完全免疫麻痹组患者,其余两组合并进行OS分析,结果显示患者OS生存趋势差异有统计学意义（P<0.05 HR=4.481 95%CI[1.053-19.060]）。 5.免疫麻痹患者感染发生率更高,免疫球蛋白正常组患者、部分免疫麻痹患者和完全免疫麻痹患者的感染发生率分别为9.1%、22.2%和30.7%（P<0.05）。此外,研究发现同时具有免疫麻痹和Bregs<10%的患者感染率高于其他患者（29.6%vs.5.9%,P<0.05）。 6.对于免疫麻痹程度组,IgM或Ig A免疫麻痹患者的PFS较差（P<0.05HR=3.322 95%CI[1.332-8.288];P<0.05 HR=2.553 95%CI[1.085-6.004]）,且IgM麻痹的患者具有较差的OS（P<0.05）。IgM免疫麻痹患者感染发生率更高（31.4%vs.8.2%,P<0.05）。IgM免疫麻痹患者恢复情况更差,IgM麻痹患者与无IgM麻痹患者未恢复率为86.3%vs.31.6%（P<0.05）。 结论: 大部分MM患者初诊时均可见到免疫麻痹现象。免疫麻痹的患者具有更差的疾病分期,具有肾功能损伤等可能性更高。免疫麻痹的患者PFS更差;对于OS,免疫球蛋白正常和部分免疫麻痹组的患者的生存期优于完全免疫麻痹组。免疫麻痹的患者感染率高于免疫球蛋白正常组,IgM重度麻痹感染率更高。免疫麻痹恢复是个漫长的过程,大部分患者免疫麻痹持续存在,其中尤其是具有IgM麻痹的患者恢复率更低。目前对免疫麻痹

关键词： 早发性卵巢功能不全   B细胞亚群   调节性B细胞   免疫球蛋白   卵巢储备  

摘要： 研究背景:早发性卵巢功能不全(Premature ovarian insufficiency,POI)是导致育龄期女性不孕不育的常见生殖内分泌疾病,是指女性在40岁之前出现卵巢功能减退,主要表现为月经异常(闭经、月经稀发或频发)、促性腺激素水平升高(FSH>25 IU/L)、雌激素水平波动性下降。POI病因和发病机制复杂,涉及染色体异常、基因突变、自身免疫异常、医源性损伤等,半数以上患者迄今病因仍不明确。自身免疫异常可解释约5-30%的POI患者,包括伴发自身免疫性疾病,多种自身抗体异常、细胞免疫失衡及卵巢炎的存在等。但目前临床上仍缺乏可用于自身免疫性POI的有效预警和诊断指标。B细胞和免疫球蛋白在细胞免疫和体液免疫中发挥重要调节作用,其异常与系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等多种自身免疫性疾病发生相关。POI患者血清中多种抗卵巢自身抗体阳性,提示体液免疫异常可参与POI发病;但总免疫球蛋白在POI患者中的变化目前尚无报道。此外,对于POI患者的细胞免疫异常主要聚焦在T细胞,发现TH1/Treg失衡等,POI患者是否存在B细胞亚群分布及表型功能的异常目前尚不清楚。因此,POI患者的B细胞亚群和免疫球蛋白异常仍有待探究,以期为POI的病因诊断、早期预防和干预提供重要参考。研究目的:探讨POI患者外周及卵巢微环境B细胞亚群和免疫球蛋白异常,分析异常指标与卵巢功能减退的相关性,明确POI患者的体液免疫异常。研究方法:1.应用流式细胞术分析比较POI患者与健康对照女性外周血B细胞亚群的数量、表型及功能差异;2.应用免疫比浊法检测并比较POI患者与对照女性血清及卵泡液中免疫球蛋白及其亚类水平的差异;3.采用相关性分析验证异常免疫指标与卵巢储备功能的相关性;4.应用流式细胞术、免疫组化、免疫荧光染色等评估小鼠卵巢IgG各型受体的表达和定位,并比较不同卵泡发育阶段的表达差异。研究结果:1.相较于正常对照女性,POI患者外周血B细胞比例和数量显著升高,幼稚B细胞比例增加,类别转换记忆B细胞和浆细胞比例显著降低,过渡性B细胞和未类别转换记忆B细胞的比例在两组间无显著差异,提示POI患者存在B细胞及其亚群分布异常;2.相较于正常对照女性,POI患者外周血调节性B细胞(regulatory B cell,Breg),包括 CD19+IL-10+Breg、CD19+CD24hiCD27+Breg 和 CD19+CD24hiCD38hi Breg 亚群比例显著降低;进一步对Breg细胞功能表型进行探究,发现CD19+CD24hiCD27+Breg细胞对T细胞IFN-γ和TNF-α分泌的抑制作用在两组间无显著差异;***患者B细胞亚群及Breg细胞比例异常均与其疾病严重程度增加相关;4.相较于正常对照女性,POI患者血清IgG和IgM水平降低,生化异常期POI(biochemical POI,bPOI)患者血清IgG水平及卵泡液IgG、IgA和IgM水平均显著降低,且均与卵巢储备功能下降呈显著正相关。卵泡液IgG亚型分布在两组间无显著差异;5.随着卵泡发育,卵泡液中IgG 水平逐渐上升,IgM水平则逐渐下降;FcRn是卵巢中表达比例最高的IgG受体,FcRn的表达随卵泡发育无显著变化。研究结论:POI患者外周和卵巢微环境中存在B细胞亚群及免疫球蛋白水平异常,且与POI疾病严重程度相关,为POI自身免疫异常提供了新的证据。