关键词： 类风湿性关节炎   木犀草素   调节性B细胞   IL-10  

摘要： 目的类风湿性关节炎是由免疫系统异常攻击机体而导致的免疫性疾病,不仅损害关节,还引起多种并发症,致残率高。目前,临床上主要通过达标治疗延缓关节炎进展。在类风湿性关节炎的潜在治疗靶点中,具有负向免疫调节作用的调节性B细胞受到学者们的关注。研究发现,类风湿性关节炎患者体内调节性B细胞的数量减少、功能受损。本课题组在牙周炎小鼠诱导类风湿性关节炎的动物实验中,发现下调的调节性B细胞可能是牙龈卟啉单胞菌介导牙周炎进而增强类风湿性关节炎的重要因素,而注射调节性B细胞和用特定的药物诱导调节性B细胞的免疫疗法可能是治疗类风湿性关节炎的有效方法。木犀草素（LUT）作为一种黄酮类化合物广泛存在于人们日常饮食中,具有抗炎特性。本课题通过细胞实验探索LUT对调节性B细胞的诱导作用及内在机制,并通过动物实验探讨富含LUT的饮食对类风湿性关节炎的预防作用,旨在为类风湿性关节炎的预防与护理提供理论依据。方法（1）通过体外实验揭示LUT诱导调节性B细胞的作用与机制从文献中筛选出5种药物,分别为:LUT、山奈酚、绿原酸（CGA）、异甘草素（ISL）及芝麻素。流式细胞术比较5种药物处理对调节性B细胞的诱导作用,以确定本课题的研究药物。通过RT-q PCR、ELISA及Western Blot等实验检测LUT处理调节性B细胞后,细胞及上清液中细胞因子的比例、转录因子的转录水平、蛋白及蛋白磷酸化水平,并揭示LUT促进调节性B细胞分化的信号通路。（2）通过体内实验揭示LUT对类风湿性关节炎的影响将6～8 w雄性DBA/1小鼠分为:对照组、模型组（CIA组）、LUT组、CGA组及ISL组,小鼠数量分别为5只、8只、10只、10只及10只。利用牛Ⅱ型胶原乳剂对小鼠进行免疫,以建立胶原诱导性关节炎动物模型。造模过程中,CIA组2只小鼠因不耐受胶原乳剂死亡,最终纳入8只。LUT组、CGA组及ISL组小鼠在免疫的同时分别给予6 g/kg LUT饲料、4 m M/L CGA饮水及3 g/kg ISL饲料饲养,46天后采集小鼠标本进行分析。通过小鼠体重、关节炎指数评分、流式细胞术及微型CT评价富含LUT的饮食对类风湿性关节炎的预防作用。结果（1）LUT可能通过激活p38 MAPK信号通路及抑制组蛋白去乙酰化酶活性促进调节性B细胞分泌IL-10观察5种药物处理对调节性B细胞分泌IL-10的促进作用及IL-6的抑制作用,选定LUT作为本课题的研究药物,浓度为8μM。LUT上调调节性B细胞IL-10的转录水平（P<0.05）,下调IL-6及IL-1β的转录水平（P<0.05）;抑制细胞上清因子IL-6的表达（P<0.01）。在MAPK信号通路中,LUT处理调节性B细胞后,p38蛋白激酶的磷酸化水平上升（P<0.05）;抑制p38支路后,p38蛋白激酶的磷酸化水平下降（P<0.05）,且调节性B细胞分化能力下降（P<0.05）。ELISA实验表明,LUT抑制调节性B细胞组蛋白去乙酰化酶的活性（P<0.01）。（2）富含LUT的饮食减轻小鼠关节炎症状及降低关节损害程度相较于CIA组,LUT组小鼠体重无明显变化（P>0.05）,CGA组与ISL组小鼠体重上升程度较低（P<0.05）;三个药物组一定程度上减轻小鼠爪部的红肿症状;LUT组小鼠的关节炎指数评分较低,CGA组及ISL组小鼠的关节炎指数评分较高;各药物组的CD4+T细胞比例上升,但无统计学意义,调节性B细胞的IL-10及IL-6的分泌无明显变化（P>0.05）;CGA组小鼠关节骨侵蚀及破坏较严重,LUT及ISL组小鼠的关节骨侵蚀及破坏程度减轻。结论（1）LUT可能通过激活p38 MAPK信号通路及抑制组蛋白去乙酰化酶活性诱导调节性B细胞分化。（2）在CIA动物模型中,富含LUT的饮食对类风湿性关节炎小鼠的关节具有保护作用,延缓疾病的进展。

关键词： 淋巴细胞   调节性B细胞   Graves病   TRAb   免疫紊乱  

摘要： 目的:弥漫性毒性甲状腺肿,即Graves病（Graves disease,GD）是最常见的器官特异性自身免疫性疾病之一,是临床甲亢最普遍原因,受环境、基因及免疫多种因素影响。调节性B细胞（regulatory B cell,Breg）是重要的免疫抑制性淋巴细胞,在不同的自身免疫性疾病中发挥重要作用。目前,Breg水平在不同病情下的GD中有无区别及相关影响因素尚未完全明确。因此,我们研究不同病情程度的GD患者外周血Breg表达差异,及Breg水平与甲状腺相关指标之间的相关性。方法:研究对象包括进行了外周血Breg检测的GD患者153例,年龄匹配且同进行了外周血Breg水平检测的健康组45例。收集研究对象年龄、性别、甲状腺功能及甲状腺自身抗体指标、血常规相关指标、病历资料。通过入组的GD患者的病历资料,甲状腺功能及甲状腺激素受体抗体（anti-thyrotropin receptor antibody,TRAb）,将其分为甲功异常组（45例）,甲功正常组（60例）及TRAb正常组（48例）。通过流式细胞术评估所有研究对象外周血CD192438B淋巴细胞亚群的表达。结果:GD组外周血CD192438B细胞亚群较健康人群表达水平降低,不同时期GD患者之间CD192438B细胞亚群表达存在差异。以所有GD患者为样本进行分析,FT3、FT4及TRAb与CD192438B细胞呈负相关,r值分别为-0.38,-0.18,-0.40。根据甲状腺功能及自身抗体水平对GD患者进行分组,甲功异常组GD患者FT3、FT4及TRAb水平与CD192438B细胞呈负相关,r值分别为-0.27、-0.14和-0.37;甲功正常组GD患者FT3、TRAb与CD192438B细胞呈负相关,r值分别为-0.25及-0.26;TRAb正常GD患者中未观察到CD192438B细胞与甲功指标或甲状腺自身抗体水平有统计学意义的相关性。通过多元回归分析,分析以上甲功指标及自身抗体是否共同影响GD患者外周血Breg表达,经逐步纳入相关混杂因素,FT3及TRAb两项指标与Breg变化呈相关性,纳入该两种指标的模型可解释Graves病患者38%的Breg水平变化。结论:GD患者外周血调节性B细胞水平下降。在甲状腺相关指标中,FT3与TRAb与调节性B细胞水平相关,其中TRAb与调节性B细胞水平关系更密切。

关键词： 急性肺损伤   调节性B细胞   调节性T细胞   白介素10  

摘要： 研究背景:急性肺损伤（Acute lung injury,ALI）/急性呼吸窘迫综合征（Acute respiratory distress syndrome,ARDS）是各种直接（如细菌、病毒、真菌等）和间接（如重症胰腺炎、脓毒症、创伤等）原因引起的威胁生命的临床综合征。以肺泡上皮细胞及肺毛细血管内皮损伤、双肺弥漫性浸润及肺泡水肿,导致进行性加重的难以纠正的低氧血症为特征,肺部病理表现为大量炎症细胞浸润、肺泡水肿、肺间隔增宽、肺泡塌陷及肺泡内透明膜形成。 ARDS属临床急危重症,临床上脓毒症是导致ARDS的最常见病因之一,其发生与革兰氏阴性细菌细胞壁脂多糖（1ipopolysaccharide,LPS）密切相关,所以LPS经气管内或者腹腔内注射是诱导动物ALI/ARDS模型的经典方式。据估计,全球每年约有300万例ARDS病例,重症监护室中ARDS的发生率为10.4%,给全球重症监护系统带来沉重负担,死亡率高达40%,但目前美国FDA尚未批准其特效治疗药物,由于缺乏有效的药物与干预措施,目前ARDS的主要治疗方式仍以支持治疗和机械通气为主,是ICU患者死亡的主要原因之一。 ALI/ARDS的发病机制及病理生理过程,尤其是核心的免疫调节机制迄今仍缺乏深入理解,导致临床上尚无精确的治疗靶点。因此,积极研究ALI/ARDS的免疫调控机制对于寻找新的治疗靶点和促进ALI/ARDS损伤修复具有重要的科学意义和重要临床实用价值。ARDS的发病机制是在致病因素作用之后,天然免疫细胞及获得性免疫细胞参与其中,炎症级联反应瀑布样释放,细胞焦亡、凋亡、死亡,导致广泛肺损伤。因此,ARDS后免疫损伤及损伤修复与患者预后密切相关。 我们课题组前期临床研究发现,老年脓毒症患者外周血CD20+CD24hiCD38hi调节性B细胞（regulatory B cells,Bregs）水平,入院1、3、7天死亡组均显著低于存活组（均p<0.05）,提示Bregs在脓毒症中发挥保护作用;Logistic回归分析显示,Bregs和APACHEⅡ评分是影响老年脓毒症患者预后的独立危险因素。外周血Bregs表达水平在一定程度上可以用于判断老年脓毒症患者的预后。而抗体分泌细胞（antibody-Secreting Cells,ASCs）是B细胞的另一个独特亚群,在老年脓毒症患者外周血中明显升高,促进T细胞增殖并促进其分泌IFN-γ和IL-17;B细胞亚群中过渡性B淋巴细胞在重症社区获得性肺炎较普通社区获得性肺炎中明显降低;前期我们通过对3例脓毒症诱发ARDS患者和3例中毒气管插管患者进行支气管肺泡灌洗,发现肺泡灌洗液中存在CD3+CD19-T细胞和CD3-CD19+B细胞,Bregs初步表型分析为CD10-CD20lo/+CD24loCD27+CD38+,符合天然Bregs的表型特征。提示Bregs可能在脓毒症继发急性肺损伤中发挥着重要的免疫调节作用。近年来的研究显示B细胞除分泌抗体外,还具有免疫负调节和分泌白介素-10（interleukin-10,IL-10）的功能,因而形成调节性B细胞（regulatory B cells,Bregs）的概念,不同于表达特征性转录因子Foxp3的调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）,目前Bregs中尚未发现特征性转录因子。急性肺损伤修复过程中也有许多白细胞介素参与,其中IL-10是机体最重要的免疫负调节分子之一,主要通过抑制树突状细胞、巨噬细胞和粒细胞等天然免疫细胞的活化和炎症因子的分泌而发挥强大的免疫负调控作用,在抑制机体过度炎症反应和维持机体免疫稳态过程中发挥着关键作用。但对于ALI/ARDS病程中IL-10的具体来源及其抗炎贡献的大小尚缺乏明确的认识。Bregs在ARDS后的免疫调节作用,以及Bregs与T细胞间的作用关系尚无研究。因此,本研究通过临床发现拟采用动物和细胞试验进一步探讨LPS诱导的ALI小鼠模型Bregs应答特征、Bregs的保护功能及Bregs如何参与到炎症修复过程。 目的:明确小鼠ALI模型Bregs的应答特征,明确分泌IL-10的B细胞在急性肺损伤保护过程中的地位,阐明Bregs在ALI中对T细胞的免疫保护作用和机制,以期发现针对ALI/ARDS治疗的新靶点,提供急性肺损伤后功能修复的新思路。 方法:首先,通过LPS气道滴注的方法构建ALI野生型（wild type,WT）小鼠模型,观察小鼠体重变化及生存率,检测支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中白细胞数、蛋白、肺湿/干重（wet to dry ratio,W/D）比值,采用ELISA检测BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-10水平的变化;通过HE

关键词： 布鲁菌病   调节性B细胞   慢性化   细胞因子  

摘要： 目的:研究分析布鲁菌病患者不同疾病阶段调节性B细胞（B-regs）和相关细胞因子（IL-10、IFN-γ）变化规律,了解B-regs在布鲁菌病患者免疫反应中的作用,探讨B-regs在布鲁菌病慢性化中的作用机制。方法:采用前瞻性研究,选择于2021年9月-2022年4月就诊于新疆医科大学第一及第八附属医院的急、慢性期布鲁菌病患者各30例,设立健康对照组30例。收集三组人群的一般资料（性别、年龄）,应用流式细胞仪检测所有布鲁菌病患者治疗前、后外周血CD19+CD24hiCD27+B-regs水平,并用ELISA法检测其血清IL-10及IFN-γ水平,将其与30例健康对照组进行比较,采用统计学方法分析探讨其变化特点及相关性。结果:1.三组人群性别和年龄差异无统计学意义（P>0.05）。2.三组人群B-regs水平进行比较,急、慢性期两组治疗前明显高于健康对照组,经治疗后下降,但慢性期组依旧比健康对照、急性期两组高,差异有统计学意义（P<0.05）。3.细胞因子的检测结果进行比较,IL-10水平在急、慢性期组治疗前明显升高,高于健康对照组,在治疗后两组水平均有下降,仍高于健康对照组,且差异有统计学意义（P<0.05）。相关性分析表明,血清IL-10和B-regs水平呈正相关性（P<0.05）。IFN-γ水平在急、慢性期组治疗前比健康对照组明显升高,治疗后呈变低趋势,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:人体感染布鲁杆菌后,伴随着高水平的IFN-γ,B-regs在布鲁菌病不同疾病阶段中均有升高,同时与IL-10水平呈正相关。急性期患者的B-regs水平明显增加且IFN-γ水平升高,而治疗后可下降,提示预后良好。慢性期患者常出现B-regs明显增加且有IFN-γ水平偏低,检测B-regs为临床布鲁菌病慢性期的诊断和预后的判断可提供重要参考价值。

关键词： 调节性B细胞   分类   肿瘤   免疫应答  

摘要： 在免疫系统中,B细胞通常在免疫反应中发挥正向应答作用,在体液免疫的调节过程中作用巨大,也可以通过分泌抗体在细胞免疫中发挥重要的调控作用。一类特殊的B细胞亚群,即调节性B细胞(Bregs),可通过分泌一些生物活性物质在免疫应答中主要起负向调节作用,被认为是小鼠和人类免疫系统的一个新的重要组成部分。Bregs可以调控包括炎症、感染、自身免疫性疾病以及肿瘤等多种疾病进程的发展,是一种在机体出现免疫功能障碍时发挥重要作用的保护性细胞。本文就Bregs的发现、Bregs分类与功能及其在肿瘤中的研究进展进行综述。

关键词： 免疫疗法   北卡罗来纳大学   免疫治疗   免疫反应   NK细胞   实体瘤   免疫系统  

摘要： 据Li S 2022年10月5日[Nature,2022,610(7931):373-380.]报道,美国北卡罗来纳大学教堂山分校的研究人员发现了一种潜在的方法来克服阻断有效抗癌免疫反应的障碍,从而为在人体内进行更有效的免疫治疗提供了可能性。肿瘤细胞周围不利的免疫环境是使用免疫疗法治疗许多实体瘤的主要障碍,特别是胰腺癌和乳腺癌,因为这种抑制性的环境可以阻止有助于攻击肿瘤的免疫反应。一种称为STING(stimulator of interferon genes)的蛋白有希望有力地触发免疫系统的多个部分并破坏业已建立的障碍。

关键词： 变应性鼻炎   CD23   调节性B细胞  

摘要： 目的:研究外周血及鼻黏膜中CD23的表达与变应性鼻炎的相关性,探讨变应性鼻炎治疗的新方法。方法:采用ELISA法、流式细胞术、HE染色和免疫荧光法分别检测变应性鼻炎组和对照组血清中总IgE、特异性-IgE、IFN-γ、IL-10、IL-4、CD19^(+)CD23^(+)B细胞、CD19^(+)CD5^(+)CD1d^(+)B细胞、CD3^(+)CD4^(+)T细胞数量、百分率以及B细胞CD23表面密度,鼻腔黏膜上CD23、CD19、IL-10的免疫荧光表达。结果:与对照组比较,变应性鼻炎组CD23平均荧光强度明显增强,CD19及IL-10表达明显减弱;变应性鼻炎组血清中总IgE、特异性-IgE、IL-4水平明显高于对照组;B细胞CD23的表面密度与总IgE、IL-4、特异性-IgE呈正相关,与IL-10、IFN-γ呈负相关。结论:B细胞CD23的表达,可能通过依赖Bregs分泌IL-10介导的T细胞活化参与变应性鼻炎的发生发展,有望成为控制和治疗变应性鼻炎的新方法。

关键词： 自身免疫性卵巢疾病   TGF-β   CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞   免疫抑制   B细胞  

摘要： 目的 通过建立小鼠自身免疫性卵巢疾病(autoimmune ovarian disease, AOD)模型,探索CD4^(+)CD25^(+)iTreg细胞对AOD模型诱导的卵巢功能不全(POI)小鼠的治疗作用。方法 建立出生第3天胸腺摘除Balb/c模型鼠(thymectomize on day3, D3tx),磁珠分选CD4^(+)幼稚T细胞经转化生长因子β(TGF-β)和IL-2体外诱导产生CD4^(+)CD25^(+)iTreg细胞,腹腔注射CD4^(+)CD25^(+)iTreg至5周龄的D3tx小鼠。苏木精-伊红染色(HE)和CD19免疫组化评估各级卵泡数目和B细胞浸润情况。CD4^(+)CD25^(+)iTreg与B细胞共培养,检测B细胞增殖及TGF信号通路分子表达量。结果 CD4^(+)CD25^(+)i Treg细胞回输显著增加D3tx小鼠卵巢组织中初级、次级和总卵泡数,并显著减少B细胞浸润。细胞共培养后B细胞的比例从41.4%显著降低至27.6%,共培养体系中加入TGF-β受体I特异性抑制剂ALK5i显著恢复了B细胞的增殖。结论 TGF-β和IL-2体外诱导的CD4^(+)CD25^(+)iTreg细胞可抑制D3tx小鼠卵巢中的B细胞浸润,改善POI小鼠卵巢储备功能,同时TGF-β参与了CD4^(+)CD25^(+)iTreg细胞对B细胞增殖的抑制作用。CD4^(+)CD25^(+)iTreg细胞可能通过TGF-β抑制B细胞增殖发挥对小鼠自身免疫性卵巢疾病的潜在治疗作用。

关键词： 吉兰-巴雷综合征   调节性B细胞   白细胞介素-10   白细胞介素-35   转化生长因子β1  

摘要： 目的研究吉兰-巴雷综合征(Guillain Barrésyndrome,GBS)患者外周血调节性B细胞和血清抑炎性细胞因子的变化。方法采用流式细胞术检测40例GBS患者外周血调节性B细胞(Regulatory B cells,Bregs)、记忆性B细胞和浆细胞的水平。采用酶联免疫吸附法检测GBS患者和健康对照组血清抑炎性细胞因子白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、白细胞介素-35(interleukin-35,IL-35)和转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)的水平。结果与健康对照组相比,GBS患者CD19+CD24hiCD38hiBregs水平显著降低(P<0.01),而CD19+CD27+CD24hi记忆性B细胞和CD19+CD27hiCD38hi浆细胞的数量与健康对照组相比无显著差异。与健康对照组相比,GBS患者血清IL-10、IL-35和TGF-β1水平均显著上调(P<0.01)。结论外周血调节性B细胞和血清抑炎性细胞因子IL-10、IL-35和TGF-β1水平可作为吉兰-巴雷综合征的生物标志物。

关键词： PD-1   PD-L1   乳腺癌   调节性B细胞  

摘要： 目的探讨程序性死亡受体1(PD-1)与程序性死亡受体配体1(PD-L1)在乳腺癌中的信号表达及对调节性B细胞的诱导意义。方法选择2018年10月至2020年10月我院收治的60例乳腺癌患者作为观察组,同期60例乳腺良性疾病患者作为对照组,比较两组乳腺组织中的PD-1、PD-L1蛋白表达情况。比较观察组中不同临床特征乳腺癌患者的PD-1、PD-L1蛋白表达情况。将观察组患者的石蜡切片分为A组、B组、C组各20例,采用三种不同浓度s PD-L1蛋白对CD19^(+)B细胞进行诱导培养,比较三组样本的Bregs比例。结果观察组的PD-1与PD-L1蛋白阳性表达率分别为31.67%,43.33%,均高于对照组的8.33%与11.67%(P<0.05)。观察组中不同临床特征乳腺癌患者的PD-1、PD-L1蛋白阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。C组的Bregs比例高于B组和A组(P<0.05)。结论乳腺癌组织中PD-1、PD-L1蛋白具有较高的阳性表达率,高表达的s PD-L1蛋白对调节性B细胞具有较为明显的诱导作用。