关键词： 疟疾   调节性B细胞   脑疟   IL-10   疫苗  

摘要： 疟疾是由原虫类寄生虫——疟原虫(Plasmodium spp.)感染引起的流行性疾病,是全球三大主要传染性疾病之一。流行病学调查数据表明,目前在世界许多地区,疟疾仍然呈现高发病率和高死亡率,特别是在撒哈拉以南的非洲地区;易感人群多为5岁以下的儿童,其感染后常表现严重的病理变化和症状,例如脑疟、严重贫血和肺功能衰竭等。然而,我们对疟疾感染所诱导的主要免疫病理变化—脑疟—及其调控机理尚未完全了解。在疟疾流行区,感染疟疾后的人群虽然能获得部分保护性免疫,但是这种免疫力维持时间短,并且在个体离开疟疾流行区后保护力快速消失。目前治疗疟疾的主要手段是药物治疗,可是由于疟原虫耐药性的产生及药物的不及时使用严重降低抗疟药的效果,所以疫苗被认为是目前应对疟疾的最理想方式。然而在疟疾疫苗研发方面我们仍然面临巨大的挑战,其原因之一是我们尚未完全探明疟原虫病原与宿主之间的复杂免疫学关系。在本论文报告的研究中,我们采用小鼠伯氏疟原虫(Plasmodium berghei)疟疾模型,(1)分析研究了与疟疾相关的主要免疫病理变化—脑疟的发生和调节机制;(2)比较和分析了诱导有效免疫保护力的疟疾疫苗的不同免疫策略。 1.调节性B细胞与脑疟 疟原虫感染诱发的神经系统功能障碍—脑疟,是疟疾感染时产生的主要病理变化和致死原因之一。大约有1%的恶性疟原虫感染个体可发生脑疟;其中,10%到20%的脑疟患者发生死亡。脑疟是免疫失调所导致的脑组织免疫病理反应。目前认为,其主要的诱发原因与感染疟原虫的红细胞粘附在脑组织毛细血管壁,并引起局部毛细血管堵塞和炎性细胞招募有关。淋巴细胞浸润、免疫杀伤性NK细胞和细胞毒性CD8+T细胞等破坏毛细血管壁和血脑屏障,导致脑组织出血和神经系统功能受损。 免疫调节性细胞因子IL-10在维持免疫自身稳定和控制感染诱导的免疫病理如脑疟的过程中发挥关键作用。近年来有大量实验表明,可分泌IL-10的调节性B细胞具有免疫调节功能,并证实其在维持免疫自身耐受和抑制免疫病理中发挥着重要作用。据此,本课题采用伯氏疟原虫感染C57BL/6小鼠的疟疾模型,研究了调节性B细胞在疟疾感染过程中调控过度免疫反应和脑疟病理的作用。 研究结果表明,伯氏疟原虫感染后可诱导血清中IL-10水平的增高;同时观察到小鼠脾脏细胞中可分泌IL-10的调节性B细胞比率显著增高。体内转输实验证实,IL-10+调节性B细胞明显抑制脑组织微血管出血性病理变化,并显著降低疟疾感染小鼠的死亡率;进一步研究发现,调节性B细胞能抑制免疫杀伤细胞向脑组织迁移,但对疟原虫血虫水平没有显著影响。用IL-10受体抗体阻断IL-10信号后,调节性B细胞抑制脑疟发生的作用消失,这说明调节性B细胞抑制脑疟发生是由IL-10介导的。我们还发现,转输CD4+CD25+调节性T细胞对脑疟发生没有显著作用。以上结果表明调节性B细胞,而不是调节性T细胞,抑制疟原虫感染的小鼠脑疟病理的发生。此项研究的成果不仅揭示疟疾病理新的调控机制,还对制定脑疟预防策略及抗疟疾药物研发提供重要理论依据。 2.疟疾活虫疫苗的免疫效能 目前疫苗被认为是控制疟疾最有效的方式。近半个多世纪以来人们尝试用各种疫苗方式来预防疟疾,然而到目前为止还没有成功的抗疟疾疫苗在临床上应用。亚单位疫苗被人们寄予厚望,但近三十年来许多亚单位疟疾疫苗临床试验都以失败告终,这可能与这些疫苗缺乏危险信号进而不能有效激活免疫应答和免疫保护力相关。人们发现放射线致弱和基因改造的减毒子孢子能够诱导针对疟疾的完全保护力,可是这种疫苗难以在体外大规模获得从而限制了在临床上的应用。 在本研究中,我们分析两种疫苗免疫策略诱导的免疫应答和保护力水平。一种是短期活虫感染加药物终止模拟活虫疫苗的方式,另一种是全虫抗原加佐剂的疫苗方式。研究目的是鉴定两种疫苗策略的免疫应答差异以及与有效保护力相关的免疫应答标志物。实验结果表明,短期活虫感染免疫可诱导较强的免疫保护力。二全虫抗原家佐剂仅可诱导部分保护。与全虫抗原加佐剂组相比,短期活虫感染加药物阻断组诱导更高的疟原虫特异的抗体水平和树突状细胞激活水平以及更强的CD4+T细胞应答。Thl型、Th2型和调节性细胞因子表达水平在两种疫苗策略之间都有类似的显著性差异。进一步的研究将验证这些免疫因素和保护力之间的相互联系。本项研究有助于设计出更理性的疟疾疫苗方案。

关键词： 调节性B细胞   食管癌   B10   Br3   Breg   IL-10   TGF-β   FoxP3  

摘要： 研究背景：食管癌是一种常见的恶性肿瘤，占全球癌症发病率的第八位。我国食管癌的发病率高于世界水平，在癌症中占第六位，发病率为20.85/10万。目前，食管癌的治疗仍以手术、放疗和化疗为主，很少注意到患者自身免疫的情况。近些年有很多关于肿瘤微环境的研究，T细胞中调节性T细胞（regulatoryTcells,Tregs）亚群是引起肿瘤患者体内免疫抑制的重要因素。随着Tregs研究的进展，近年来又发现一类具有负向调节功能的B细胞亚群—调节性B细胞（regulatoryBcell,Bregs）。已证实Bregs与自身免疫病关系密切，也有学者开始关注Bregs与肿瘤的关系，但到目前为止尚未见Bregs和食管癌相关性的报道。 目的：检测食管癌患者手术前、手术后1天和手术后7天以及健康对照者外周血Bregs动态变化，探讨Bregs在食管癌发生、发展中的作用。方法：选取食管癌患者30例和健康对照者30例，用流式细胞仪检测食管癌患者手术前、手术后1天和手术后7天以及健康对照者外周血Bregs亚群B10（CD5+CD19+IL-10）、Br3（CD5+CD19+TGF-β）和Breg（CD5+CD19+FoxP3）的表达量，比较食管癌与健康对照者及食管癌术后变化规律。 结果：食管癌患者B10的表达量（2.52±0.41%）高于健康对照者(1.56±0.28%)，P＜0.05；术后1天B10表达量（3.59±0.29%）高于术前（2.52±0.41%），术后7天B10的表达量（8.36%±0.51%）高于术后1天（3.59±0.29%），P＜0.05。食管癌患者Br3的表达量（6.13±0.57%）与健康对照者（5.91±0.23%）无明显差异，P＞0.05；术后1天Br3的表达量（4.54±0.41%）低于术前（6.13±0.57%），P＜0.05；术后7天Br3的表达量（5.62±0.42%）高于术后1天（4.54±0.41%），P＜0.05。食管癌患者Breg的表达量（8.35±1.04%）高于健康对照者（2.91±0.23%），P＜0.05；术后1天Breg的表达量（4.84±0.16%）较术前（8.35±1.04%）低，P＜0.05；术后7天Breg的表达量（4.02%±0.66%）同样低于术前（8.35±1.04%），P＜0.05；术后1天与术后7天无明显变化，P＞0.05。 结论：食管癌患者外周血中的B10高于健康对照者，食管癌患者术后B10升高，提示B10很可能参与了食管癌患者肿瘤免疫的抑制效应。Br3在食管癌患者与健康对照者无明显差异，但是术后1天Br3降低，术后7天高于术后1天，可能和TGF-β的双向调节有关。食管癌患者外周血中Breg较健康对照者高，术后降低，表明减少瘤负后机体免疫抑制减轻，机体免疫功能有所恢复。Bregs在食管癌的发生发展起重要作用。

关键词： 天疱疮   B淋巴细胞   抗体  

摘要： 目的探讨调节性B细胞（Breg）在天疱疮发病中的免疫介导机制。方法以CD19^＋CD24^hiCD38^hi作为Breg标记，流式细胞仪检测48例天疱疮患者及20例健康人外周血中Breg占CD19^＋B细胞的比例，观察不同严重程度患者的Breg比例变化趋势。采用ELISA法检测患者血清中特异性抗Dsg1、Dsg3抗体滴度、亚型，分析其与Breg比例的相关性。结果天疱疮患者外周血Breg占CDf19＋B细胞的比例（11．54％±0．97％）与健康对照组（8．19％±0．85％）相比差异有统计学意义（P=0．04），且急性期轻度患者该比例（5．17％±2．14％）与中度患者（11．38％±5．30％，P=0．042）、重度患者（11．17％±5．31％，P=0．046）相比，差异均有统计学意义；Breg比例与抗Dsgl抗体亚型IgG4以及IgG4／IgG1的比值均呈正相关（r值分别为0．527，0．565，P值均〈0．01）。结论Breg主要和抗体产生以及疾病活动相关，但其具体的作用机制尚待研究。

关键词： B细胞   调节性   接触性过敏性皮炎   转化生长因子β1   IL-10   抗原特异性抗体   类风湿性关节炎   调节免疫反应  

摘要： B细胞主要通过产生抗原特异性抗体、辅助诱导CD4＋T细胞活化发挥正向免疫调节作用[1].然而近年动物试验研究表明B细胞可以负向调节免疫反应[2,3],这类B细胞被称为调节性B细胞,并发现缺乏调节性B细胞会导致自身免疫性脑脊髓膜炎、慢性结肠炎、接触性过敏性皮炎、类风湿性关节炎、非肥胖型小鼠糖尿病等疾病的症状恶化.调节性B细胞主要通过产生白细胞介素10（IL-10）或转化生长因子β1（TGF-β1）等细胞因子调节免疫系统.其中产生IL-10的B细胞被称为B10细胞,而占成年小鼠脾脏B细胞1%-3%的CD19hiCD1dhiCD5＋B细胞产生的IL-10占B细胞产生IL-10的大部分[4].

关键词： 调节性B细胞   IL-10   转化生长因子β   自身免疫性疾病  

摘要： 以往认为，B细胞通过产生特异性抗体提呈抗原产生共刺激分子活化T细胞、并通过细胞因子发挥免疫作用。但是近年来研究发现，B细胞对免疫应答和炎性反应有调节作用，这种B细胞被命名为调节性B细胞（Br）。Br通过分泌调节性的细胞因子IL-10和TGF—β影响B细胞和致病性T细胞之间的相互作用而抑制病理性免疫反应。因而了解Br的生物学功能、活化机制以及在自身免疫性疾病中的作用具有重要意义。

关键词： 高迁移率族蛋白质类   T淋巴细胞,调节性   免疫  

摘要： 目的观察高迁移率族蛋白B1（high mobility group box-1 protein，HMGBl）对分泌IL-10树突状细胞（dendritic cell，DC）亚群CD11c^low CD45RB^high DC功能的影响。方法采用磁珠分选技术获得Bab／c小鼠脾脏CD11c^low CD45RB^high DC和CD4＋T淋巴细胞，加不同浓度HMGB1处理（20，100，500ng／ml，以不加HMGBI的细胞作为对照）CD11c^low CD45RB^high DC细胞；流式细胞术检测CD11c^low CD45RB^high DC表面分子CD40、CD80、CD86、I—a／e及Toll样受体（TLR）4的表达强度；应用ELISA检测CD11c^low CD45RB^high DC培养液中IL-10的含量。将CD4＋T淋巴细胞分为正常对照组（未作任何处理）、未刺激组（加入未经HMGB1处理的CD11c^low CD45RB^high DC与CD4＋T淋巴细胞混合培养）、高浓度HMGB1刺激组（加入经500ng／ml HMGB1处理后的CD11c^low CD45RB^high DC与CD4＋T淋巴细胞混合培养）、高浓度HMGB1刺激＋抗体1组（加入经500ng／ml HMGB1处理后的CD11c^low CD45RB^high DC、抗IL-10抗体与CD4＋T淋巴细胞混合培养）和高浓度HMGBI刺激＋抗体2组（加入经500ng／ml HMGB1处理后的CD11c^low CD45RB^high DC、IL-10的同型对照抗体与CD4＋T淋巴细胞混合培养）。流式细胞术检测CD4＋T淋巴细胞培养液中IL-4和干扰素-γ（IFN-γ）的含量。结果与未加HMGB1刺激相比，HMGB1能显著增强CD11c^low CD45RB^high DC表面分子CD86、TLR4的表达及IL-10的分泌，其中IL-10分泌呈HMGB1浓度依赖性。高浓度HMGB1刺激组IFN-γ水平为（279±17）pg／ml，显著低于未刺激组（963±11）pg／ml（P〈0．05）；高浓度HMGBl刺激组IL-4水平为（3724-14）pg／ml，明显高于未刺激组（213±10）pg／ml（P〈0．05）。结论HMGB1可促进CD11c^low CD45RB^high DC IL-10的分泌，诱导CD4＋T淋巴细胞向Th2型反应分化，通过激活CD11c^low CD45RB^high DC介导机体免疫抑制活性。

关键词： 变应性鼻炎   调节性B细胞   IL-10   CD19  

摘要： 变应性鼻炎是耳鼻喉科的常见疾病之一,是发生在鼻黏膜的变态反应性疾病,发病机制尚未完全清楚。新近有研究表明:一种新的B细胞亚群-调节性B细胞,通过刺激其表面、诱导释放调节性细胞因子如IL-10及CD19等发挥调节作用,可能在变应性鼻炎的发生发展的复杂的免疫调节网络中起着重要的调节作用。

关键词： 调节性B细胞   自身免疫性糖尿病   白细胞介素-10   转化生长因子-β1  

摘要： 调节性B细胞在自身免疫性糖尿病的发生、发展、转归过程中起重要调节作用。通过产生白细胞介素-10（IL-10）和转化生长因子-β1（TGF-β1）等抑制性细胞因子介导免疫耐受。体外诱导分泌TGF-β1的调节性B细胞可以为自身免疫性糖尿病的治疗提供新的方法。抗CD20单克隆抗体治疗自身免疫性糖尿病可使调节性B细胞数量增加。

关键词： 调节性免疫细胞   调节性B细胞   炎症免疫相关疾病   toll样受体   信号转导   天然免疫   适应性免疫  

摘要： 调节性免疫细胞具有广义和狭义概念,狭义上,调节性免疫细胞是指具有负性调节作用的免疫细胞。调节性B细胞(regulatory B cell,Breg)在控制炎症免疫相关疾病免疫应答、介导免疫耐受中可能发挥重要作用。Breg通过分泌抑制性细胞因子IL-10和TGF-β负性调控炎症免疫相关疾病的病理过程。TLRs/MyD88信号转导通路在介导Breg功能中起到关键作用。TLRs/MyD88信号转导活化促进Breg细胞产生IL-10,抑制T细胞活化及IFN-γ分泌。不同TLR控制着炎症免疫相关疾病的启动和恢复。运用优先触发Breg细胞调节功能的TLR激动剂,分离TLRs的相反作用,对控制免疫反应,制定合理的炎症免疫相关疾病治疗策略具有重要的意义。

关键词： 调节性T细胞   叉状头/翅膀状螺旋转录因子   急性B淋巴细胞白血病   微小残留病  

摘要： 目的通过检测急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿骨髓中叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA的表达及CD4+细胞中调节性T细胞(Treg)比例,探讨Treg与儿童B-ALL发生及预后的关系。方法用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测10名正常儿童、35例初发B-ALL患儿及68例临床缓解患儿骨髓中Foxp3mRNA水平;用流式细胞术检测上述骨髓标本中CD4+CD25highFoxp3+Treg的比例;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测骨髓中细胞因子白细胞介素10(IL-10)的表达情况。结果骨髓中Foxp3 mRNA表达水平在B-ALL初发患儿组是对照组的4.44倍,微小残留病(MRD)阳性组是阴性组的2.39倍;B-ALL初发患儿骨髓中Treg占CD4+T淋巴细胞的比例[中位数(M)=12.77%]较对照组(M=8.09%)增高,差异具有统计学意义(P<0.01);MRD阳性组Treg比例(M=14.74%)与MRD持续阴性组(M=11.30%)比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后MRD阳性组骨髓中IL-10水平[(24.69±11.73)pg/mL]显著高于MRD持续阴性组[(9.19±5.82)pg/mL,P<0.05]。结论 B-ALL初发和MRD阳性患儿骨髓中Foxp3 mRNA水平和Treg比例显著增高,且骨髓中IL-10水平与Treg的比例变化趋势相一致。Treg可作为评价B-ALL患儿预后和复发的指标,Treg可能是通过分泌抑制性细胞因子IL-10而发挥其抑制作用。