关键词： 疟疾   调节性B细胞   脑疟   IL-10   疫苗  

摘要： 疟疾是由原虫类寄生虫——疟原虫(Plasmodium spp.)感染引起的流行性疾病,是全球三大主要传染性疾病之一。流行病学调查数据表明,目前在世界许多地区,疟疾仍然呈现高发病率和高死亡率,特别是在撒哈拉以南的非洲地区;易感人群多为5岁以下的儿童,其感染后常表现严重的病理变化和症状,例如脑疟、严重贫血和肺功能衰竭等。然而,我们对疟疾感染所诱导的主要免疫病理变化—脑疟—及其调控机理尚未完全了解。在疟疾流行区,感染疟疾后的人群虽然能获得部分保护性免疫,但是这种免疫力维持时间短,并且在个体离开疟疾流行区后保护力快速消失。目前治疗疟疾的主要手段是药物治疗,可是由于疟原虫耐药性的产生及药物的不及时使用严重降低抗疟药的效果,所以疫苗被认为是目前应对疟疾的最理想方式。然而在疟疾疫苗研发方面我们仍然面临巨大的挑战,其原因之一是我们尚未完全探明疟原虫病原与宿主之间的复杂免疫学关系。在本论文报告的研究中,我们采用小鼠伯氏疟原虫(Plasmodium berghei)疟疾模型,(1)分析研究了与疟疾相关的主要免疫病理变化—脑疟的发生和调节机制;(2)比较和分析了诱导有效免疫保护力的疟疾疫苗的不同免疫策略。 1.调节性B细胞与脑疟 疟原虫感染诱发的神经系统功能障碍—脑疟,是疟疾感染时产生的主要病理变化和致死原因之一。大约有1%的恶性疟原虫感染个体可发生脑疟;其中,10%到20%的脑疟患者发生死亡。脑疟是免疫失调所导致的脑组织免疫病理反应。目前认为,其主要的诱发原因与感染疟原虫的红细胞粘附在脑组织毛细血管壁,并引起局部毛细血管堵塞和炎性细胞招募有关。淋巴细胞浸润、免疫杀伤性NK细胞和细胞毒性CD8+T细胞等破坏毛细血管壁和血脑屏障,导致脑组织出血和神经系统功能受损。 免疫调节性细胞因子IL-10在维持免疫自身稳定和控制感染诱导的免疫病理如脑疟的过程中发挥关键作用。近年来有大量实验表明,可分泌IL-10的调节性B细胞具有免疫调节功能,并证实其在维持免疫自身耐受和抑制免疫病理中发挥着重要作用。据此,本课题采用伯氏疟原虫感染C57BL/6小鼠的疟疾模型,研究了调节性B细胞在疟疾感染过程中调控过度免疫反应和脑疟病理的作用。 研究结果表明,伯氏疟原虫感染后可诱导血清中IL-10水平的增高;同时观察到小鼠脾脏细胞中可分泌IL-10的调节性B细胞比率显著增高。体内转输实验证实,IL-10+调节性B细胞明显抑制脑组织微血管出血性病理变化,并显著降低疟疾感染小鼠的死亡率;进一步研究发现,调节性B细胞能抑制免疫杀伤细胞向脑组织迁移,但对疟原虫血虫水平没有显著影响。用IL-10受体抗体阻断IL-10信号后,调节性B细胞抑制脑疟发生的作用消失,这说明调节性B细胞抑制脑疟发生是由IL-10介导的。我们还发现,转输CD4+CD25+调节性T细胞对脑疟发生没有显著作用。以上结果表明调节性B细胞,而不是调节性T细胞,抑制疟原虫感染的小鼠脑疟病理的发生。此项研究的成果不仅揭示疟疾病理新的调控机制,还对制定脑疟预防策略及抗疟疾药物研发提供重要理论依据。 2.疟疾活虫疫苗的免疫效能 目前疫苗被认为是控制疟疾最有效的方式。近半个多世纪以来人们尝试用各种疫苗方式来预防疟疾,然而到目前为止还没有成功的抗疟疾疫苗在临床上应用。亚单位疫苗被人们寄予厚望,但近三十年来许多亚单位疟疾疫苗临床试验都以失败告终,这可能与这些疫苗缺乏危险信号进而不能有效激活免疫应答和免疫保护力相关。人们发现放射线致弱和基因改造的减毒子孢子能够诱导针对疟疾的完全保护力,可是这种疫苗难以在体外大规模获得从而限制了在临床上的应用。 在本研究中,我们分析两种疫苗免疫策略诱导的免疫应答和保护力水平。一种是短期活虫感染加药物终止模拟活虫疫苗的方式,另一种是全虫抗原加佐剂的疫苗方式。研究目的是鉴定两种疫苗策略的免疫应答差异以及与有效保护力相关的免疫应答标志物。实验结果表明,短期活虫感染免疫可诱导较强的免疫保护力。二全虫抗原家佐剂仅可诱导部分保护。与全虫抗原加佐剂组相比,短期活虫感染加药物阻断组诱导更高的疟原虫特异的抗体水平和树突状细胞激活水平以及更强的CD4+T细胞应答。Thl型、Th2型和调节性细胞因子表达水平在两种疫苗策略之间都有类似的显著性差异。进一步的研究将验证这些免疫因素和保护力之间的相互联系。本项研究有助于设计出更理性的疟疾疫苗方案。

关键词： 变应性鼻炎   调节性B细胞   IL-10   CD19  

摘要： 目的 测定调节性B细胞(CD19)及其细胞因子(IL-10)在变应性鼻炎患者鼻腔粘膜中的表达情况(荧光强度),探讨变应性鼻炎患者体内的调节性B细胞的数量和功能是否发生改变,论证变应性鼻炎患者的调节性B细胞(CD19)与IL-10的相关关系,研究两者在变应性鼻炎中的临床意义,并为进一步研究调节性B细胞的作用机制奠定基础。 方法 按2009年我国最新颁布的变应性鼻炎的诊断标准选取30例患有变应性鼻炎伴下鼻甲肥大或伴鼻中隔偏曲的患者作为变应性鼻炎组,25例鼻中隔偏曲或伴下鼻甲肥大患者作为对照组,于鼻内镜手术中严格无菌操作取得鼻粘膜。标本进行相关处理后用免疫荧光双标记法分别对变应性鼻炎组和对照组进行染色,并制成病理切片。在激光扫描共聚焦显微镜下观察变应性鼻炎组和对照组的CD19和IL-10的表达水平(荧光强度),最后进行统计学分析及论证、探讨。 结果 1、CD19和IL-10的荧光强度在变应性鼻炎组和对照组存在明显差异(P<0.05),变应性鼻炎组中两者的荧光强度比对照组低. 2、变应性鼻炎组中CD19和IL-10(两者的荧光强度)存在正相关的关系(P<0.05)。 结论 1、变应性鼻炎患者鼻粘膜CD19和IL-10较正常人鼻粘膜中减少,即变应性鼻炎的患者存在调节性B细胞数量的不足和(或)功能的降低,调节性B细胞的数量的减少和(或)功能的降低可能与变应性鼻炎的发生密切相关。 2、在变应性鼻炎患者鼻粘膜中,调节性B细胞与IL-10密切相关,或许可以通过增加两者的数量为变应性鼻炎的治疗的提供一个新的靶点.

关键词： T淋巴细胞   B淋巴细胞   调节性B细胞   间充质干细胞   重症急性胰腺炎   免疫治疗  

摘要： 随着重症医学的发展，近十年来重症急性胰腺炎（sever acute pancreatitis,SAP）患者在早期呼吸、循环和肾功衰竭支持治疗效果显著提高，但是死亡率并没有明显下降[1-3]。大多数人认为，重症急性胰腺炎免疫炎性细胞产生的众多炎性因子使远处器官损伤，出现循环、呼吸、泌尿和神经系统的严重损害。然而大多数急性胰腺炎患者可以阻止过度炎症反应的发生发展，使其表现为轻症胰腺炎具有自愈倾向[4,5]。但是为什么有20%的患者会发展为重症急性胰腺炎？虽然有多种假说试图解释这一现象，但其机制一直未明。目前越来越多的学者认为抗炎-抑炎平衡紊乱致使机体不足以拮抗过度的炎症反应是SAP发生的核心问题。 淋巴细胞是重要的机体免疫应答细胞，分别介导体液免疫和细胞免疫。对维持机体抗炎-抑炎平衡状态起着重要的作用。然而淋巴细胞在急性胰腺炎的作用仍不十分清楚。因此进一步研究淋巴细胞在急性胰腺炎中的免疫调节功能可以更好地理解SAP发生发展。 重症急性胰腺炎的治疗手段多是对症治疗，目前没有良好的治疗方法抑制过强的免疫反应，恢复免疫平衡，其疗效不尽如人意[2,6]。反应近年来间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)在免疫调节领域所取得的巨大进展，研究发现可以抑制过强的免疫[7]，为重症急性胰腺炎的免疫治疗提供了新的视角[8]。是否间充质干细胞可以作为免疫调节细胞，调节免疫平衡，抑制炎症级联反应，为重症急性胰腺炎治疗提供新的免疫治疗策略。 【实验目的】 1．研究T、B淋巴细胞对急性胰腺炎的作用；2．检测B细胞的亚群调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)在急性胰腺炎的功能；3．探讨脐带间充质干细胞（umbilicalcord mesenchymal stem cells,UCMSCs）通过免疫调节作用对重症急性胰腺炎大鼠模型的治疗效果及其机制。 【材料方法】 1．通过雨蛙素腹腔诱导不同淋巴细胞缺陷小鼠及其同系野生型急性胰腺炎小鼠模型；2．检测血清淀粉酶、干湿重和胰腺、肺组织病理变化评价胰腺炎损伤程度；3．利用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)技术检测血清中TNF-α和IFN-γ炎症因子表达水平；4．使用流式细胞技术比较轻重胰腺炎患者中Bregs的含量；5．分析急性胰腺炎小鼠模型和正常小鼠Bregs的含量和炎症水平变化关系；6．使用逆行胰胆管注射牛磺胆酸钠造重症急性胰腺炎大鼠模型；分别在诱导模型后0h，1h，6h，12h四个时间点经尾静脉注射UCMSCs的细胞悬液，以及造模1小时后给予20ml/kg，10ml/kg，1ml/kg，0.1ml/kg不同剂量的UCMSCs；7．通过检测死亡率，血清淀粉酶，腹水量，胰腺干湿重，及胰腺、肺组织病理变化观察评价UCMSCs注射时间和剂量与治疗效果之间关系。 【结果】 1．T、B细胞在小鼠急性胰腺炎的作用 T细胞缺陷组和T、B细胞联合缺陷组与同系对照组相比血清淀粉酶、胰腺水肿、病理评分显著降低，血清炎症因子TNF-α和IFN-γ显著减少（P＜0.05）。B淋巴缺陷组与同系对照组相比血清淀粉酶、胰腺水肿、病理评分显著增高，血清炎症因子TNF-α和IFN-γ反而增加（P＜0.05）。T细胞缺陷组和T、B细胞联合缺陷组腺外器官肺组织损伤明显减轻，B细胞缺陷组与同系对照组肺组织损伤无明显差异（P＞0.05） ***在重症急性胰腺炎的变化 重症急性胰腺炎患者Bregs含量显著低于轻症胰腺炎患者（P＜0.05）；胰腺炎小鼠模型Bregs的含量也显著低于正常小鼠模型并且Bregs的变化与血清促炎症因子负相关。 3．脐带间充质干细胞治疗重症急性胰腺炎的治疗作用 0h UCMSCs治疗组与SAP组相比：死亡率从58%降至10%，腹水量明显减少，血淀粉酶,炎症因子和干湿重也显著性降低。胰和肺组织病理损伤显著减轻（P＜0.05）；2、在诱导大鼠胰腺炎后不同时间点0h、1h、6h给予脐带间充质干细胞治疗均有明显的治疗作用，但效果逐渐减弱；3、20ml/kg，10ml/kg，1ml/kg给予脐带间充质干治疗，均有明显的治疗作用，但效果逐渐减弱（P＜0.05）。 【结论】 本研究证实了淋巴细胞是重要的参与急性胰腺炎促炎抗炎平衡紊乱，T细胞的主要作用是促进炎症反应。B淋巴细胞在急性胰腺炎炎症反应中有抑制作用，其机制可能是B淋巴细胞的亚型Bregs抑制过强的炎症反应。使用脐带间充质干细胞免疫治疗可明显降低SAP的损伤程度并且治疗效果具有时间依赖性和剂量依赖性。

关键词： 天疱疮   B淋巴细胞   抗体  

摘要： 目的探讨调节性B细胞（Breg）在天疱疮发病中的免疫介导机制。方法以CD19^＋CD24^hiCD38^hi作为Breg标记，流式细胞仪检测48例天疱疮患者及20例健康人外周血中Breg占CD19^＋B细胞的比例，观察不同严重程度患者的Breg比例变化趋势。采用ELISA法检测患者血清中特异性抗Dsg1、Dsg3抗体滴度、亚型，分析其与Breg比例的相关性。结果天疱疮患者外周血Breg占CDf19＋B细胞的比例（11．54％±0．97％）与健康对照组（8．19％±0．85％）相比差异有统计学意义（P=0．04），且急性期轻度患者该比例（5．17％±2．14％）与中度患者（11．38％±5．30％，P=0．042）、重度患者（11．17％±5．31％，P=0．046）相比，差异均有统计学意义；Breg比例与抗Dsgl抗体亚型IgG4以及IgG4／IgG1的比值均呈正相关（r值分别为0．527，0．565，P值均〈0．01）。结论Breg主要和抗体产生以及疾病活动相关，但其具体的作用机制尚待研究。

关键词： B细胞   调节性   接触性过敏性皮炎   转化生长因子β1   IL-10   抗原特异性抗体   类风湿性关节炎   调节免疫反应  

摘要： B细胞主要通过产生抗原特异性抗体、辅助诱导CD4＋T细胞活化发挥正向免疫调节作用[1].然而近年动物试验研究表明B细胞可以负向调节免疫反应[2,3],这类B细胞被称为调节性B细胞,并发现缺乏调节性B细胞会导致自身免疫性脑脊髓膜炎、慢性结肠炎、接触性过敏性皮炎、类风湿性关节炎、非肥胖型小鼠糖尿病等疾病的症状恶化.调节性B细胞主要通过产生白细胞介素10（IL-10）或转化生长因子β1（TGF-β1）等细胞因子调节免疫系统.其中产生IL-10的B细胞被称为B10细胞,而占成年小鼠脾脏B细胞1%-3%的CD19hiCD1dhiCD5＋B细胞产生的IL-10占B细胞产生IL-10的大部分[4].

关键词： 调节性B细胞   IL-10   转化生长因子β   自身免疫性疾病  

摘要： 以往认为，B细胞通过产生特异性抗体提呈抗原产生共刺激分子活化T细胞、并通过细胞因子发挥免疫作用。但是近年来研究发现，B细胞对免疫应答和炎性反应有调节作用，这种B细胞被命名为调节性B细胞（Br）。Br通过分泌调节性的细胞因子IL-10和TGF—β影响B细胞和致病性T细胞之间的相互作用而抑制病理性免疫反应。因而了解Br的生物学功能、活化机制以及在自身免疫性疾病中的作用具有重要意义。

关键词： 高迁移率族蛋白质类   T淋巴细胞,调节性   免疫  

摘要： 目的观察高迁移率族蛋白B1（high mobility group box-1 protein，HMGBl）对分泌IL-10树突状细胞（dendritic cell，DC）亚群CD11c^low CD45RB^high DC功能的影响。方法采用磁珠分选技术获得Bab／c小鼠脾脏CD11c^low CD45RB^high DC和CD4＋T淋巴细胞，加不同浓度HMGB1处理（20，100，500ng／ml，以不加HMGBI的细胞作为对照）CD11c^low CD45RB^high DC细胞；流式细胞术检测CD11c^low CD45RB^high DC表面分子CD40、CD80、CD86、I—a／e及Toll样受体（TLR）4的表达强度；应用ELISA检测CD11c^low CD45RB^high DC培养液中IL-10的含量。将CD4＋T淋巴细胞分为正常对照组（未作任何处理）、未刺激组（加入未经HMGB1处理的CD11c^low CD45RB^high DC与CD4＋T淋巴细胞混合培养）、高浓度HMGB1刺激组（加入经500ng／ml HMGB1处理后的CD11c^low CD45RB^high DC与CD4＋T淋巴细胞混合培养）、高浓度HMGB1刺激＋抗体1组（加入经500ng／ml HMGB1处理后的CD11c^low CD45RB^high DC、抗IL-10抗体与CD4＋T淋巴细胞混合培养）和高浓度HMGBI刺激＋抗体2组（加入经500ng／ml HMGB1处理后的CD11c^low CD45RB^high DC、IL-10的同型对照抗体与CD4＋T淋巴细胞混合培养）。流式细胞术检测CD4＋T淋巴细胞培养液中IL-4和干扰素-γ（IFN-γ）的含量。结果与未加HMGB1刺激相比，HMGB1能显著增强CD11c^low CD45RB^high DC表面分子CD86、TLR4的表达及IL-10的分泌，其中IL-10分泌呈HMGB1浓度依赖性。高浓度HMGB1刺激组IFN-γ水平为（279±17）pg／ml，显著低于未刺激组（963±11）pg／ml（P〈0．05）；高浓度HMGBl刺激组IL-4水平为（3724-14）pg／ml，明显高于未刺激组（213±10）pg／ml（P〈0．05）。结论HMGB1可促进CD11c^low CD45RB^high DC IL-10的分泌，诱导CD4＋T淋巴细胞向Th2型反应分化，通过激活CD11c^low CD45RB^high DC介导机体免疫抑制活性。

关键词： 变应性鼻炎   调节性B细胞   IL-10   CD19  

摘要： 变应性鼻炎是耳鼻喉科的常见疾病之一,是发生在鼻黏膜的变态反应性疾病,发病机制尚未完全清楚。新近有研究表明:一种新的B细胞亚群-调节性B细胞,通过刺激其表面、诱导释放调节性细胞因子如IL-10及CD19等发挥调节作用,可能在变应性鼻炎的发生发展的复杂的免疫调节网络中起着重要的调节作用。

关键词： 调节性B细胞   自身免疫性糖尿病   白细胞介素-10   转化生长因子-β1  

摘要： 调节性B细胞在自身免疫性糖尿病的发生、发展、转归过程中起重要调节作用。通过产生白细胞介素-10（IL-10）和转化生长因子-β1（TGF-β1）等抑制性细胞因子介导免疫耐受。体外诱导分泌TGF-β1的调节性B细胞可以为自身免疫性糖尿病的治疗提供新的方法。抗CD20单克隆抗体治疗自身免疫性糖尿病可使调节性B细胞数量增加。

关键词： 调节性免疫细胞   调节性B细胞   炎症免疫相关疾病   toll样受体   信号转导   天然免疫   适应性免疫  

摘要： 调节性免疫细胞具有广义和狭义概念,狭义上,调节性免疫细胞是指具有负性调节作用的免疫细胞。调节性B细胞(regulatory B cell,Breg)在控制炎症免疫相关疾病免疫应答、介导免疫耐受中可能发挥重要作用。Breg通过分泌抑制性细胞因子IL-10和TGF-β负性调控炎症免疫相关疾病的病理过程。TLRs/MyD88信号转导通路在介导Breg功能中起到关键作用。TLRs/MyD88信号转导活化促进Breg细胞产生IL-10,抑制T细胞活化及IFN-γ分泌。不同TLR控制着炎症免疫相关疾病的启动和恢复。运用优先触发Breg细胞调节功能的TLR激动剂,分离TLRs的相反作用,对控制免疫反应,制定合理的炎症免疫相关疾病治疗策略具有重要的意义。