关键词： B淋巴细胞   调节性   白介素10   转化生长因子β1   多发性硬化  

摘要： 调节性B细胞(Bregs)主要来源于边缘区B细胞和B1细胞,炎症微环境是其分化/激活所必需的。Bregs通过产生白介素10(IL-10)、转化生长因子β1(TGF-β1)等抑制性细胞因子和通过与T细胞等其他免疫细胞的相互作用来介导免疫耐受。在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)/多发性硬化(MS)中,Bregs通过产生IL-10及抑制病理性Th1/Th17细胞的应答,增强Th2细胞的负性调节作用来控制疾病的启动和减轻疾病的严重性。

关键词： 吸烟   晚期肺癌   肿瘤标志物   诊断   预后   晚期肺癌   化疗   调节性T淋巴细胞   调节性B淋巴细胞   预后  

摘要： 第一部分：晚期肺癌患者的临床病理特征与预后分析目的为了更好地区分不同肺癌患者亚群,促进肺癌个体治疗的发展,本研究分析晚期肺癌患者的临床病理特征及影响晚期肺癌患者预后的因素。方法招募研究对象,包括接受一线化疗的晚期肺癌患者和健康志愿者对照、肺癌高危人群对照和AECOPD患者对照,采集肺癌患者的临床病理特征,记录血清肿瘤标志物变化,第1次疗效评估结果和定期电话随访肺癌患者生存信息。结果共招募到晚期肺癌患者36例,健康志愿者12例,肺癌高危人群和AECOPD患者各6例。男性肺癌患者50%以上有吸烟史,本研究中所有鳞癌和SCLC均为男性。本研究中7例女性肺癌患者均无主动吸烟史,且病理类型均为腺癌。晚期肺癌患者的首发症状无特征性,50%的患者以咳嗽为首发症状,4例患者体检发现肺癌；从出现首发症状到病理确诊为肺癌的中位间隔时间为1.8个月(0.5个月-60个月)。同时应用多种血清肿瘤标志物筛查比仅用一种血清肿瘤标志物检出的敏感性更高(88.6% vs 65.6%)。经过2个周期化疗后,第1次CT检查评估化疗疗效结果显示80.5%的肺癌患者(29/36)评估为有效(SD或PR)。化疗无效组(PD或死亡)的患者第1周期化疗后血清肿瘤标志均升高,而大部分化疗有效组的患者血清肿瘤标志物下降。接受一线化疗的晚期肺癌患者的中位生存时间为17个月。非吸烟患者、NSCLC患者以及第1次CT评估结果为SD或PR的晚期肺癌患者预后相对较好。结论吸烟仍是肺癌主要的危险因素。不同性别的肺癌患者存在差异。定期体检或可提高早期诊断。化疗前后血清肿瘤标志物变化可预测一线化疗疗效。非吸烟患者、NSCLC患者以及第1次CT评估结果为SD或PR的晚期肺癌患者预后相对较好。第二部分：晚期肺癌化疗前后调节性T、B淋巴细胞的动态变化目的分析晚期肺癌患者外周血CD4 (+) CD25 (+) CD127 (low) Tregs和CD 19 (+) IL-10 (+) Bregs特征和化疗前后Tregs和Bregs的动态变化及其与肺癌患者预后的关系,以为化疗联合免疫治疗提供依据。方法招募研究对象,包括接受一线化疗的晚期肺癌患者和健康志愿者对照、肺癌高危人群对照和AECOPD患者对照。分别采集晚期肺癌患者第1周期化疗前、第2周期化疗前和第3周期化疗前的外周血4m1,同时一次性抽取对照组外周血4ml；用红细胞裂解液分离获得PBMC;再用流式细胞仪检测Tregs和Bregs水平,分别以Tregs占CD4(+)T淋巴的百分比和Bregs占CD19(+)B淋巴细胞的百分比表示。晚期肺癌患者的临床资料同第一部分。结果共招募到晚期肺癌患者36例,健康志愿者12例,肺癌高危人群和AECOPD患者各6例。晚期肺癌患者外周血Tregs比例较肺癌高危组升高(3.37% vs 2.30%),晚期肺癌患者外周血Tregs比例与健康对照组及AECOPD组之间无明显差别。肺癌患者外周血Bregs比例显著高于健康对照组(1.22% vs 0.05%),但显著低于肺癌高危组(1.22% vs 3.46%)。经过第1周期化疗后,肺癌患者外周血Tregs比例显著下降(3.37% vs 2.42%)；再经过第2周期化疗后,外周血Tregs比例略有升高(2.82%),但仍低于化疗前水平。化疗前后Bregs动态变化不明显。生存时间长的肺癌患者组化疗前外周血Tregs和Bregs比例低于生存时间短的肺癌患者组。Kaplan-Meier生存分析结果显示第1周期化疗后外周血Tregs比例下降组比第1周期化疗后外周血Tregs比例升高组预后更好。结论晚期肺癌患者外周血Bregs升高。化疗后外周血Tregs较化疗前明显下降。化疗前后Tregs的动态变化与晚期肺癌化疗疗效存在一定关系。

关键词： 系统性红斑狼疮   调节性B细胞   Foxp3表达   TGF-β   免疫耐受   免疫调节功能   免疫抑制剂  

摘要： 目的：调节性B细胞在风湿性疾病中的免疫调节功能受到广泛关注。研究发现除B10以外还有两种调节性B细胞亚群-表达Foxp3及TGF-β的Breg，这两种B细胞与风湿性疾病是否有关至今尚未见研究报道。本研究拟通过检测系统性红斑狼疮患者CD19+Foxp3+及CD19+TGF-β+ Breg占外周血CD19+B细胞比例，探讨其与SLE发生及疾病活动度的关系。\n 方法：系统性红斑狼疮患者30例，均满足2009年ACR提出的系统性红斑狼疮诊断标准;健康对照者26例，排除自身免疫性疾病、肿瘤、现症感染及免疫抑制剂应用史。采集并提取入组患者及健康对照者外周血单个核细胞，用流式细胞仪检测系统性红斑狼疮患者及健康对照者外周血CD19+Foxp3+及CD19+TGF-β+两种调节性B细胞比例，分析其与疾病活动度及临床相关指标的关系。\n 结果：\n 1、CD19+Foxp3+及CD19+TGF-β+两种Breg在SLE患者组较健康对照组比例减少。\n 2、CD19+Foxp3+ Breg和CD19+TGF-β+ Breg比例在病情活动组较病情稳定组比例减少，且与SLEDAI疾病活动度评分呈负相关。\n 3、CD19十Foxp3+Breg调节性B细胞与SLE患者24h尿蛋白定量有关，与ds-DNA，ANA滴度，ESR，CRP及免疫球蛋白定量等指标无明显相关性。\n 结论：CD19+Foxp3+ Breg和CD19+TGF-β+ Breg比例在SLE患者组明显减少，表明两种调节性B细胞可能以某种机制参与了SLE的发病，并与疾病活动度密切相关。

关键词： 调节性T淋巴细胞   调节性B淋巴细胞   非小细胞肺癌   肿瘤微环境   炎症   趋化因子   核转录因子-κB  

摘要： 第一部分 晚期非小细胞肺癌患者外周血调节性T/B淋巴细胞相关表型表达的临床研究目的：探讨调节性T淋巴细胞(regulatory T cell,Treg)和调节性B淋巴细胞(regulatory B cell,Breg)相关表型在晚期非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer, NSCLC)患者外周血中的表达水平。方法：采集32例晚期非小细胞肺癌患者和20例健康人的外周血样,通过流式细胞仪分析其外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中Treg和Breg的比例,分别以CD4+CD25+ CD127-定义Treg、以CD45RA+CD4+CD25+CD127定义幼稚型Treg、以CD 19+CD24iCD27+和CD19+IL-1 0+定义Breg。结果：肺癌患者外周血CD4+T淋巴细胞占PBMC的比例较正常对照组明显下降(P<0.001),肺癌患者外周血Treg(CD4+CD25+CD127-)占CD4+T淋巴细胞的比例较正常对照组无明显差别,肺癌患者外周血幼稚型Treg(CD45RA+CD4+CD25+CD127-)占CD4+T淋巴细胞的比例较正常对照组明显下降(P<0.05)。肺癌患者外周血CD19+B淋巴细胞占PBMC的比例较正常对照组明显下降(P<0.001),肺癌患者外周血Breg(CD19+CD24hiCD27+)占CD19+B淋巴细胞的比例较正常对照组明显升高(P<0.001),肺癌患者外周血Breg(CD19+IL-10+)占CD19+B淋巴细胞的比例较正常对照组明显升高(P<0.05)。结论：晚期NSCLC患者外周血中幼稚型Treg的比例下降,Breg的比例显著上升,两者所参与的负性免疫调控可能协调促进肿瘤的发生、发展。第二部分 肿瘤微环境对调节性T/B淋巴细胞相关表型调控的体外研究目的：探讨肿瘤微环境对调节性T淋巴细胞(regulatory T cell, Treg)和调节性B淋巴细胞(regulatory B cell, Breg)相关表型表达水平的影响,以期明确肿瘤微环境在肿瘤免疫调控中的作用。方法：(1)肺癌细胞株A549以合适密度接种于24孔细胞培养板,24h后将健康人的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)与A549共培养,共培养48h后通过流式细胞仪分析PBMC中Treg和Breg的比例,分别以CD4+CD25+CD127定义Treg、以CD45RA+CD4+CD25+CD127定义幼稚型Treg、以CD19+CD24hiCD27+和CD19+IL-10+定义Breg。(2)A549以合适密度接种于24孔细胞培养板,以不同浓度内毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS) (10,100,10000ng/ml)或PBS刺激,在刺激24h后分别收集A549细胞和培养液上清,将健康人的PBMC分别与刺激后的A549细胞或培养液上清共培养,共培养48h后通过流式细胞仪分析PBMC中Treg和Breg的比例。(3)A549以合适密度接种于24孔细胞培养板,以不同浓度LPS (100,500ng/ml) 或 PBS刺激,刺激24h后利用Transwell系统将健康人的PBMC与A549共培养,共培养48h后通过流式细胞仪分析PBMC中Treg和Breg的比例。(4)A549以合适密度接种于24孔细胞培养板,以不同浓度LPS (100,500ng/ml)或PBS刺激,刺激24h后分别收集A549细胞和培养液上清,将晚期肺癌患者的PBMC分别与刺激后的A549细胞或培养液上清共培养,共培养48h后通过流式细胞仪分析PBMC中Treg和Breg的比例。结果：(1)健康人的PBMC与A549共培养后,CD4+ T淋巴细胞的比例上升,Treg占CD4+ T淋巴细胞的比例下降(P<0.01),幼稚型Treg占CD4+ T淋巴细胞的比例下降,CD19+ B淋巴细胞的比例下降(P<0.001), CD19+CD24hiCD27+和CD19+IL-10+ Breg占CD19+ B淋巴细胞的比例上升。(2)健康人的PBMC与LPS刺激A549后所得的培养液上清共培养后,CD4+ T淋巴细胞的比例上升,LPS 100ng/ml时明显上调Treg及幼稚型Treg的比例,CD19+ B淋巴细胞的比例上升,且呈浓度依赖性,而CD19+CD24hiCD27+和CD19+IL-10+ Breg的比例较对照组明显下降。健康人的PBMC与LPS刺激后的A549细胞共培养,CD4+ T淋巴细胞、CD19+ B淋巴细胞、Treg、幼稚型Treg及Breg的比例皆较PBS刺激的对照组上升。LPS

关键词： 调节性T细胞   Toll样受体4   NF-κB途径淋巴细胞   脂多糖   抑制功能  

摘要： 目的:天然调节性T细胞(nTregs,即CD4+CD25+Tregs)是具有显著免疫抑制功能的T细胞,不同种类的TLR活化后对其具有不同的作用。为此,体外研究nTregs上膜型TLR4与不同配体结合后分泌细胞因子的变化及其对该细胞抑制功能的影响,初步探讨在不同微环境中TLR4影响nTregs功能的机制。<br>　　方法:(1)采用磁珠分选出健康人外周血的CD4+CD25+Tregs,并用流式细胞术检测分选的纯度。(2)实验分为两组,正常CD4+CD25+Tregs(即Non anti-TLR4组)和经抗TLR4单抗封闭的CD4+CD25+Tregs(即anti-TLR4组),两组细胞分别加入高、中、低不同浓度的LPS(10、1、0.1μg/ml)、HMGB1(1、0.1、0.01μg/ml)刺激培养,同时分别设不加LPS或HMGB1作为对照。采用实时定量PCR检测各组中IL-1β、IL-10、IFN-γ、TGF-β四种细胞因子的RNA表达水平,同时用ELISA检测细胞培养上清中上述四种细胞因子的含量。(3)流式细胞术检测经过1μg/ml及10μg/ml LPS、0.1μg/ml及1μg/ml HMGB1不同处理的两组CD4+CD25+Tregs与CD4+T效应细胞混合培养后CD4+T细胞的增殖水平。(4)Western-blotting检测经过1μg/ml LPS及1μg/ml HMGB1刺激后两组CD4+CD25+Tregs的胞浆及胞核蛋白中NF-κB的表达水平。<br>　　结果:(1)流式细胞术检测分选得到的CD4+CD25+Tregs纯度>82％(84.52±2.10%)(2)HMGB1刺激的CD4+CD25+Tregs在Non anti-TLR4组中IL-1β、IL-10及TGF-β的RNA水平及蛋白含量均较无HMGB1刺激的对照组明显降低(P<0.05),而anti-TLR4组中较相应对照组显著增高(P<0.05);IFN-γ的RNA水平及蛋白含量变化趋势与之相反,在Non anti-TLR4组中较对照组增加(P<0.05),而在anti-TLR4组中明显低于相应对照组(P<0.05)。LPS刺激的CD4+CD25+Tregs在Non anti-TLR4组中IL-1β及IL-10的RNA表达水平和蛋白含量均较无LPS刺激的对照组显著增加(P<0.05),而在anti-TLR4组中明显低于相应对照组(P<0.05);IFN-γ及TGF-β在Non anti-TLR4组中RNA表达水平和蛋白含量均较对照组显著降低(P<0.05),而在anti-TLR4组中仅IFN-γ的RNA水平与TGF-β明显高于相应对照组(P<0.05),IFN-γ的蛋白含量仍低于对照组(P<0.05)。(3)CD4+CD25+Tregs显著抑制CD4+T细胞的增殖,与CD3/CD28抗体活化的阳性对照组相比有差异(P<0.05)。经HMGB1刺激的Non anti-TLR4组中,CD4+T细胞增殖指数较无HMGB1刺激的对照组略微增高(P<0.05);anti-TLR4组中,CD4+T细胞增殖指数较无HMGB1刺激的相应对照组明显降低(P<0.05)。然而,经LPS刺激的Non anti-TLR4组中,CD4+T细胞增殖指数较无LPS刺激的对照组明显降低(P<0.05);anti-TLR4组中,CD4+T细胞增殖指数较相应对照组显著增加(P<0.05),较阳性对照组亦明显增加(P<0.05)。(4)Western-blotting结果显示:用1μg/ml HMGB1和LPS分别刺激两组CD4+CD25+Tregs后,Non anti-TLR4组胞浆蛋白中NF-κBp65的含量较无刺激对照组降低,而胞核中则相应增加;anti-TLR4组则无明显改变。<br>　　结论:在不同微环境中,CD4+CD25+Tregs表面的膜型TLR4具有不同的作用,继而对CD4+CD25+Tregs的抑制功能进行调节。当经TLR4的内源性配体HMGB1活化时, CD4+CD25+Tregs以分泌促炎性细胞因子IFN-γ为主,其抑制功能减弱;当与外源性配体LPS相互作用时,IL-1β和IL-10的含量同时增多,其抑制功能增强;二者均与NF-κB信号分子的活化相关。综上诉述,TLR4通过活化NF-κB途径对调节性T细胞的抑制功能起作用。

关键词： 免疫性血小板减少症   CD19+CD24hiCD38hiB细胞   转移生长因子-β1   白介素-10  

摘要： 目的免疫性血小板减少症（ITP）是最常见的获得性自身免疫性出血性疾病，约占出血性疾病的30％，其发病受多种因素的影响。了解免疫性血小板减少症患者治疗前后外周血中调节性B细胞（Bregs）的表达率及相关细胞因子白介素-10（IL-10）、转移生长因子-β1（TGF-β1）的表达，探讨调节性B细胞在免疫性血小板减少症发病及临床的意义。 方法研究对象为35名安徽省立医院门诊及住院初次明确诊断的ITP患者，并且无明确的其他疾病。中位年龄为35岁，男15名，女20名，并将ITP患者分为治疗前和治疗后，治疗前血小板数目<30×109/L,治疗后血小板数目>50×109/L。治疗均应用大剂量地塞米松（40mg/d×4d）。对照组为从安徽省立医院预防保健中心随机抽取的与实验组年龄及性别相匹配的20名志愿者，既往无自身免疫性疾病或恶性疾病病史。应用流式细胞术分别检测ITP患者治疗前后及正常对照组外周血的CD19+CD24hiCD38hiB细胞的表达率及RT-PCR方法检测其IL-10mRNA、TGF-β1mRNA细胞因子的表达水平。 结果初诊ITP组外周血CD19+CD24hiCD38hiB细胞的表达率（1.844±0.385）明显低于健康对照组（2.850±0.784），两者差异有统计学意义（P=0.000<0.05）;而经治疗后血小板升高的ITP患者外周血CD19+CD24hiCD38hiB细胞的表达率（2.326±0.449）高于治疗前（1.844±0.385），两者相比有统计学差异（P=0.000<0.05）;但治疗后的ITP患者CD19+CD24hiCD38hiB细胞表达率仍低于健康对照组，且有统计学差异（P=0.004<0.05）;初诊ITP患者外周血IL-10mRNA表达（0.174±0.181）与健康对照组（0.320±0.279）相比明显下降，有统计学差异（P=0.023<0.05），ITP治疗后血小板升高患者外周血IL-10mRNA的表达（0.259±0.149）明显高于治疗前（0.174±0.181），有统计学差异(P=0.036<0.05)，与健康对照组相比，治疗后ITP患者外周血IL-10mRNA的表达仍明显降低，且有统计学差异(P=0.042<0.05);初诊ITP患者外周血TGF-β1mRNA的表达水平（2.026±1.031）明显高于健康对照组（0.948±0.907），有统计学差异（P=0.000<0.05），ITP患者经治疗后TGF-β1mRNA的表达（1.605±0.678）下降，有统计学差异(P=0.048<0.05)，与健康对照组相比治疗后的ITP患者外周血TGF-β1mRNA的表达明显升高，差异有统计学意义(P=0.004<0.05)。CD19+CD24hiCD38hiB细胞的数目与IL-10的表达在ITP患者中呈正性线性关系，有统计学意义(P=0.001<0.05)。 结论本次研究显示ITP患者外周血CD19+CD24hiCD38hiB细胞及相关细胞因子IL-10的表达明显下降，表明调节性B细胞与调节T细胞一样，在ITP发病中发挥负性调节作用，可能是通过体液免疫及反馈作用于T淋巴细胞亚群在ITP的发病中发挥重要作用的。

关键词： 拉喹莫德   实验性自身免疫性脑脊髓炎   Th细胞   调节性B细胞   细胞因子  

摘要： 目的：研究拉喹莫德（LQ）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的防治作用，探讨LQ对EAE防治作用的免疫学机制。方法：将75只雌性Wistar大鼠随机分成5组：正常对照组、EAE对照组、LQ低剂量组、LQ中剂量组、LQ高剂量组，每组动物均15只。在造模开始的前三天，即对LQ低、中、高剂量组进行干预，分别予以LQ0.03mg/kg·d、0.06mg/kg·d、0.12mg/kg·d灌胃，正常对照组及EAE对照组予以生理盐水2ml/d灌胃。后使用粗制髓鞘碱性蛋白（MBP）加完全弗式佐剂皮下注射制作EAE模型，正常对照组皮下注射等量完全福氏佐剂。在造模后继续对LQ各剂量组进行治疗，连续一周。每天对各组Wistar大鼠进行神经功能障碍评分及记录，以神经功能障碍评分连续三天无加重、四肢瘫痪或濒临死亡时作为发病高峰期。同时记录Wistar大鼠的发病潜伏期和进展期。在发病高峰期处死动物，未发病和正常对照组在造模4周后处死。留取大鼠脑脊髓组织、眶静脉血和脾脏组织。大鼠脑脊髓组织作HE染色后行光镜观察，通过酶联免疫吸附法（ELISA）测定外周血单个核细胞（PBMC）分泌白细胞介素-4（IL-4）、γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-17（IL-17）能力，通过流式细胞仪测定脾脏组织调节性B细胞（Bregs）的比例，通过ELISA测定脾脏细胞培养上清液中白细胞介素-10（IL-10）、转化生长因子-β（TGF-β）含量。结果：（1）各组实验大鼠发病情况：正常对照组均无大鼠发病;EAE对照组大鼠全部发病，发病率为100%;LQ低、中、高剂量防治组发病率分别为80%、66.67%、60%。EAE对照组发病的潜伏期为10.27±1.67天，LQ低、中、高剂量组大鼠的发病潜伏期均有不同程度的延长，分别为15.67±1.95天、17.27±1.49天、20.73±1.58天，与EAE对照组比较，差异具有统计学意义（P<0.01），且呈剂量依赖关系。EAE对照组发病进展期为6.47±1.19天，LQ低、中、高剂量组的发病进展期分别为5.40±1.12天、4.20±1.15天、3.00±0.93天，较EAE对照组时间缩短（P<0.01或P<0.05），呈剂量依赖关系。EAE对照组发病高峰期时神经功能障碍评分为3.73±1.39，LQ低、中、高剂量组发病高峰期时神经功能障碍评分较EAE对照组低，分别为2.40±1.72、1.60±1.60、1.07±1.22，LQ高、中剂量组与EAE对照组相比差异具有统计学意义（P<0.01），LQ低剂量组发病高峰期神经功能障碍评分较EAE对照组低，但差异不具有统计学意义（P>0.05）;高剂量组与低剂量组相比差异具有统计学意义（P<0.05），LQ高剂量组发病高峰期神经功能障碍评分与LQ中剂量组相比差异不具有统计学意义（P>0.05）;同时中剂量组与低剂量相比差异也不具有统计学意义（P>0.05）。（2）各组实验大鼠脑脊髓组织病理学变化：正常对照组大鼠脑脊髓组织无病理学改变;EAE对照组和LQ低、中、高剂量组大鼠脑脊髓组织都出现了不同程度的白质脱髓鞘改变，大量炎性细胞聚集在脑和脊髓实质内的血管周围，典型者形成“袖套”样改变，伴有血管充血。聚集细胞以淋巴细胞为主，伴少量单核细胞。LQ各剂量组的白质脱髓鞘和炎性细胞侵润程度较EAE对照组减轻，且高剂量组减轻效果更明显。（3）各组实验大鼠发病高峰期外周血PBMC分泌IL-4、IL-17、INF-γ能力和IL-4/INF-γ值：EAE对照组PBMC分泌IL-4能力、IL-4/INF-γ值较正常对照组明显减低（P<0.01），分泌IL-17、INF-γ能力较正常对照组升高（P<0.01）;LQ低、中、高剂量组PBMC分泌IL-4能力、IL-4/INF-γ值较EAE对照组升高（P<0.01），分泌IL-17、INF-γ能力较EAE对照组减低（P<0.01或P<0.05）;LQ高、中剂量组PBMC分泌IL-4能力、IL-4/INF-γ值较LQ低剂量组升高（P<0.01），分泌IL-17、INF-γ能力较LQ低剂量组减低（P<0.01或P<0.05）;LQ高剂量组PBMC分泌IL-4能力、IL-4/INF-γ值较LQ中剂量组升高（P<0.01），分泌IL-17、INF-γ能力较LQ中剂量组减低（P<0.01或P<0.05）。（4）各组实验大鼠发病高峰期脾脏组织中Bregs的比例及培养上清液中IL-10、TGF-β的含量：EAE对照组脾脏组织中的IL-10+Bregs、TGF-β+Bregs比例和脾脏培养上清液中IL-10、TGF-β含量较正常对照组减少（P<0.01）;LQ低、中、高剂量组脾脏组织中IL-10+Bregs、TGF-β+Bregs比例和脾脏培养上清液中IL-10、TGF-β含量较

关键词： 重症肌无力   胸腺切除术   胸腺瘤   长期疗效   完全稳定缓解   胸腺   调节性B细胞   调节性T细胞   外周血   CD5+CD1d+CD19+Breg细胞   CD4+CD25+CD127low/-Treg细胞  

摘要： 第一部分 重症肌无力患者胸腺切除术远期疗效及影响因素分析 目的 分析重症肌无力(MG)患者胸腺切除术的远期疗效及影响疗效的相关因素,并比较不同胸腺病理类型患者的临床特点和预后差别。 方法 回顾性分析1984年1月-2010年12月我院胸腺切除术后规律随访的306例MG患者,以完全稳定缓解(CSR)和广义临床缓解(CSR+PR+MM)为疗效指标,对疗效相关影响因素进行单因素Kaplan-Meier和多因素Cox比例风险回归分析;并对其中174例MG伴胸腺瘤(T-MG)和132例MG不伴胸腺瘤(NT-MG)患者的临床特点和预后进行方差分析或秩检验。 结果 306名患者中女性151名,男性155名,平均起病年龄为31.54岁,术前平均症状持续时间为33.43月,胸腺切除术时平均年龄为34.16岁,术前MGFA分级Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ分别为116(37.91%),117(38.24%),53(17.32%),3(0.98%),17(5.56%),其中274例采用正中劈胸扩大胸腺切除术,32例采用胸腔镜胸腺切除术(VATS)。围手术期死亡率为2.94%(9/306),余297例患者平均随访时间为103月,胸腺切除术总体有效率为81.14%,其中81例达到完全稳定缓解(CSR)(27.27%),172例达到广义临床缓解(CSR+PR+MM)(57.91%),69例症状显著缓解(Improved)(23.23%)。在单因素分析中,胸腺切除术时年龄<40岁(P=0.034),术前MGFA分型I型(P=0.001)和MG不伴胸腺瘤(P=0.019)与CSR正相关;同时术前MGFA分型I型(P=0.004),无伴发疾病(P=0.022)和MG不伴胸腺瘤(P=0.019)与广义临床缓解(CSR+PR+MM)正相关;多因素分析中,MGFA分型全身型(OR:2.088,95%CI:1.339-3.265,P=0.001)和有伴发疾病(OR:1.668,95%CI:1.072-2.549,P=0.023)是胸腺切除术后临床缓解的独立危险因素。NT-MG患者完全稳定缓解率和临床缓解率显著高于T-MG患者(CSR:33.33%vs22.42%,P=0.036;临床缓解率：64.39%vs52.72%,P=0.043),而且,与T-MG患者相比,更多的NT-MG患者从胸腺切除术中获益(86.36%vs76.97%,P=0.04)。此外,T-MG患者临床恶化率和死亡率明显高于NT-MG(临床恶化率：15.76%vs6.06%,P=0.009;死亡率：11.49%vs3.03%,P=0.004)。9例围手术期死亡患者均为T-MG,随访阶段9例T-MG(5.45%)死于MG危象,而NT-MG仅2例(1.52%)。 结论 胸腺切除术是治疗MG患者的有效手段,可获得较高的长期临床缓解率,术前MGFA分型全身型和有伴发疾病是术后临床缓解的独立危险因素。T-MG比NT-MG患者临床症状相对更严重,且长期预后不乐观,因此需要优化对T-MG患者的术前评估和围手术期准备以降低患者围手术期死亡率并提高术后长期生存率。即使患者术后较长时间内达到完全临床缓解,医生仍需严格把握停药指征以防复发。 第二部分 重症肌无力患者胸腺调节性B细胞和T细胞比例和相关分子表达的研究 目的 1.比较CD5+CD1d+CD19+Breg细胞和CD4+CD25+CD127low/Treg细胞在MG不 同胸腺病理类型间的比例差异。 2.比较MG胸腺组织中调节性B细胞和T细胞功能相关分子的表达差异。 方法 1.采用免疫组化法检测10例MG增生胸腺、14例MG伴胸腺瘤、4例MG萎缩胸腺和15例正常对照(7例儿童和8例成人)胸腺组织CD19、CD5、CD25、 Foxp3分子的分布及表达。 2.采用流式细胞术分析6例MG增生胸腺、12例MG伴胸腺瘤、5例MG萎缩胸腺和13例正常对照(7例儿童和6例成人)胸腺CD5+CD1d+CD19+Breg细胞和CD4+CD25+CD127low/-Treg细胞的比例变化。 3.采用Real time PCR法分析10例MG增生胸腺、16例MG伴胸腺瘤和17例正常对照胸腺组织中调节性B细胞和调节性T细胞功能相关分子转录水平的差异。 结果 1.成人萎缩胸腺CD19少量散在分布于胸腺髓质,而儿童正常胸腺可见大量CD19分布于胸腺髓质。MG增生胸腺内CD19分布范围广泛,表达显著增加,主要表达在淋巴滤泡内,尤其在生发中心和髓质胸腺小体周围呈簇状分布;正常对照胸腺组织中CD5分布范围广泛;MG增生胸腺内CD5分布范围也广泛,特征性出现生发中心明区的阳性表达,淋巴滤泡边缘带也可见CD5阳性表达;MG胸腺瘤组织内CD19和CD5的表达与胸腺瘤分型相关,伴有淋巴滤泡形成的B1型胸腺瘤患者,可见淋

关键词： 桥本甲状腺炎   调节性B细胞   抑制性T细胞   胰岛功能   胰岛素敏感性  

摘要： 目的：桥本甲状腺炎(HT)是最常见的器官特异性自身免疫性疾病之一,是亚临床甲减和临床甲减的最普遍原因,且伴随多种相关疾病,如胰岛素抵抗、代谢综合征等。目前关于HT胰岛功能及胰岛素敏感性的相关研究较少,且结果不一致。国内关于桥本甲状腺炎患者的胰岛功能及胰岛素敏感性研究鲜见文献报道。HT是一类自身免疫性疾病,免疫机制在其发病中有重要作用。我们研究HT患者外周血调节性B淋巴细胞(regulatory B cell, Bregs)、抑制性T细胞(suppressor T cell, Ts cell)的比例变化,及免疫亚群变化与胰岛功能及胰岛素敏感性的相关性。方法：入组18-60岁间桥本甲状腺炎Ⅰ型患者61例,性别年龄相匹配的健康组38例。收集研究对象一般资料、身高、体重、腰围、臀围、血压,所有研究对象行口服糖耐量试验(Oral Glucose Tolerance Test, OGTT)检测空腹、负荷30mim 120min的血糖、C肽、胰岛素。所有研究对象检测外周血CD19+CD24+CD27+B细胞、CD19+CD24hiCD38 hiB细胞CD19+IL-10+ B细胞及CD8+CD28T细胞比例变化。结果：HT组外周血CD8+T淋巴细胞在总淋巴细胞中比例显著降低,CD19+CD24+CD27+B细胞亚群显著升高。随着TPOE Ab的升高,CD19+CD24hiCD38hiB细胞显著降低；随着TGAb的升高CD8+CD28" T细胞显著降低。TT3和CD4+T细胞呈显著负相关,与CD19+CD24hiCD38hiB细胞则呈显著正相关,r值分别为-0.227和0.287; TT4与CD8+CD28"T细胞呈显著负相关,与CD19+CD24+CD27+B细胞则呈显著正相关,r值分别为-0.267和0.298。获取健康组淋巴细胞亚群的25%-75%的参考区间,并以此作为外周血淋巴细胞亚群的参考范围,根据该参考范围,将所有研究对象按淋巴细胞亚群是否降低或升高分组,将年龄、性别、TT3、TT4、FT3、FT4、TGAb和TPOAb纳入Logistic回归方程中发现,TGAb和FT4是CD8+CD28T细胞在淋巴细胞中比例降低的独立危险因素；TSH是CD19+CD24hiCD38hiB细胞比例降低的独立危险因素,FT4是CD19+CD24+CD27+B细胞比例升高的独立危险因素,说明甲状腺功能对免疫改变关系密切。与正常组相比,HT组研究对象腰围、2小时胰岛素分泌显著增加。早时相及总胰岛素分泌指标(InsAUC30/GluAUC30、InsAUC120/GluAUC120)显著升高,空腹胰岛分泌功能(HOMA-0)未见增加,处置指数(DI)显著降低(P=0.002)。根据TPOAb四分位组,2小时胰岛素分泌(2hINS)Q3组显著高于Q2和Q4组；空腹胰岛分泌功能(HOMA-β) Q4组显著低于Q1和Q3组,随着TPOAb的升高,HOAM-β显著降低,呈线性关系,r=-0.313;处置指数(DI)也随着TPOAb的升高而显著降低,说明随着TPOAb滴度逐渐升高,胰岛β细胞功能逐渐降低；根据TGAb的四分位组,2小时胰岛素分泌(2MNS)、总胰岛素分泌指数(DI120)和处置指数(DI)趋势值有显著意义,P值分别为0.03,0.048.<0.001。Q3组2hINS、DI120显著高于Q1和Q2组,Pearson相关分析提示TGAb与2hINS并非线性相关；而随着TGAb升高,处置指数(DI)显著降低,呈线性负相关(r=-0.321,P=0.013)说明随着TGAb滴度升高,胰岛β细胞功能逐渐降低。CD8+CD28T淋巴细胞降低组与对照组相比,空腹、早时相及总胰岛素分泌指标HOMA-β、 InsAUC3O/GluAUC3O、InsAUC120/GluAUC120显著升高,处置指数(DI)指标显著增加,而胰岛素敏感指数组间无差异,说明CD8+CD28" T细胞降低与胰岛素分泌关系密切。C D19+CD24hiCD38hiB淋巴细胞降低组与对照组相比,全身敏感指数Matsuda显著升高,CD19+CD24hiCD38hiB细胞与Matsuda指数呈显著负相关(r=-0.398,P=0.010),处置指数(DI), DI30. DI120则组间无显著差异,说明CD19+CD24hiCD38hiB淋巴细胞降低主要与胰岛素敏感性密切相关。CD19+CD24+CD27+B淋巴细胞升高组与对照组相比,H OMA-IR显著升高,空腹胰岛分泌功能(HOMA-p)显著升高,CD19+CD24+CD27+B细胞与HOMA-IR呈显著正相关(r=0.338, P=0.029), OGTT负荷后胰岛素分泌、胰岛功能及胰岛素敏感性指数组间无差异,说明CD19+CD24+CD

关键词： 慢性乙肝   调节性B细胞   调节性T细胞   免疫应答  

摘要： 目的：分析慢性乙肝患者外周血IL-10+CD19+调节性B细胞与CD4+CD25high调节性T细胞的表达及二者在乙肝免疫应答过程中的相互作用。方法：收集急性乙肝患者28例，慢性乙肝患者31例和正常对照25例。分离外周血单个核细胞，经CpG ODN2006和PMA体外作用后，流式细胞术分析Bregs、Tregs的表达及其相关性，ELISA分析培养上清IL-10水平。通过免疫磁珠剔除CD4+CD25highT细胞分析Bregs与Tregs之间的相互作用。结果：CpG ODN2006和PMA作用后CHB组Bregs和Tregs较AHB和HCs组均显著升高（Bregs:P值分别为0.003和0.001;Tregs:P值分别为＜0.001，0.005），AHB和HCs组间无显著变化（Bregs:P=0.796;Tregs.P=0.227）;Spearman相关性分析发现CHB组Bregs与Tregs存在正相关关系(r=0.50，P=0.004)，而AHB和HCs组无此相关性(r=-0.15，P=0.462;r=0.09，P=0.669)。CHB组IL-10表达高于AHB和HCs组(Z值分别为-6.596、-6.373，P＜0.001)。AHB和HCs组间差异无统计学意义（Z=-0.952，P=0.341）。Spearman相关性分析表明CHB组IL-10与Bregs存在正相关关系(R=3.303，P=0.005)。剔除CD4+CD25+T细胞前后CHB组患者Bregs和IL-10表达无显著差异。结论:调节性B细胞和调节性T细胞在慢性乙肝患者中表达升高，Bregs可能通过IL-10的分泌参与慢性乙肝的免疫调节，且该作用不依赖于Tregs。