关键词： 肿瘤细胞释放的自噬小体(TRAP)   调节性B细胞   IL-10   HMGB1   TLR2-MyD88-NF-κB信号通路  

摘要： 我们前期实验发现,肿瘤细胞释放的自噬小体(Tumor-released autophagosomes, TRAP)可被B细胞所摄取,诱导B细胞活化并促进B细胞分泌抗体和细胞因子,特别是分泌高水平的IL-10。而可分泌高水平的IL-10,是Bregs的重要特征。但是肿瘤细胞释放的自噬小体是否可诱导B细胞进一步分化为IL-10+B细胞或者Bregs,目前尚不清楚。目的：研究肿瘤细胞释放的自噬小体(TRAP)能否进一步诱导B细胞分化为IL-10+B细胞；探讨TRAP诱导产生的IL-10+B细胞是否有免疫抑制功能；探讨TRAP诱导IL-10+B细胞的物质基础及机制：研究肿瘤患者体内是否含有自噬小体以及是否可诱导几-10+B细胞的产生。方法：1.采用]TRAP体外刺激野生型小鼠脾细胞,同时用LPS刺激脾细胞作为对照,72h后收获细胞及细胞培养上清,流式细胞术检测IL-10+B细胞的比例变化；ELISA法检测细胞培养上清中IL-10的含量。磁珠分选小鼠B细胞,与不用浓度的TRAP 37℃共孵育72h；或与E.G7-OVA细胞来源的TRAP, E.G7-OVA细胞裂解液或LPS共孵育72h；或分别与肿瘤培养上清,等体积去除TRAP的肿瘤培养上清,以及等体积培养上清所获TRAP共孵育72h,收集培养上清,ELISA法测检测培养上清中IL-10的分泌水平。分选小鼠B细胞,在体外与TRAP共孵育72h,流式细胞术检测IL-10+B及IL-10-B细胞表面分子表达的差异(CD5、CD1d、CD21、CD23、CD43、CD86、MHC Ⅱ)。TRAP经尾静脉注射小鼠(同时用PBS注射组作为对照),第7天取脾脏细胞,通过计数并结合流式细胞术检测TRAP体内诱导产生IL-10+B细胞的比例及其表面CD5、CD1d的表达。2.分选出WT C57BL/6小鼠的CD4+T和CD8+T细胞并用CFSE标记,放入有抗CD3抗体预包被的孔板中并加入抗CD28抗体以刺激T细胞增殖。同时,在抗CD3抗体/CD28诱导的T细胞增殖体系中加入TRAP诱导的WTB细胞或IL-10-/-B细胞共培养或用Transwell小室隔开培养,流式细胞术检测T细胞增殖情况。分离OT-1小鼠脾细胞并用OVA257-264肽刺激其增殖,同时与E.G7-OVA(OVA+)或EL4(OVA)细胞来源的TRAP诱导的B细胞共孵育,96h后流式细胞术检测T细胞增殖情况。WT C57BL/6小鼠于第0天皮下接种E.G7-OVA肿瘤细胞,小鼠荷瘤成功后,于第4、7、10天DC/OVA疫苗皮下免疫荷瘤小鼠,并于第5、8天过继转移OVA+TRAP或OVA-TRAP诱导的B细胞、并以单独B细胞作为对照,定期测量实体瘤大小及观察荷瘤小鼠的存活情况；末次免疫后第七天,取各组小鼠的脾脏细胞并用OVA蛋白再刺激24h,流式细胞术检测脾脏细胞中IFN-γ+CD4+T细胞和IFN-γ+CD8+T细胞的比例；72小时后收获细胞培养上清,ELISA检测细胞培养上清中IFN-y的水平。3.分选WT、TLR2-/-、TLR4-/-和MyD88-、-小鼠B细胞,并用TRAP刺激不同时间(0h,1h),流式细胞术检测INF-κB通路中p65蛋白磷酸化情况；TRAP刺激上述B细胞72h后,收集细胞并检测IL-10+B细胞的比例。CFSE标记的WT C57BL/6小鼠CD4+T和CD8+T细胞分别与与TRAP诱导的WT、TLR2-/-、TLR4-/-和MyD88-/-小鼠B细胞共同放入有抗CD3抗体预包被的孔板培养,流式细胞术检测T细胞增殖情况。同时,在抗CD3抗体/CD28诱导的T细胞增殖体系中加入TRAP诱导的B细胞,共孵育72-96h后流式细胞术检测T细胞增殖情况。WT小鼠B细胞用不同浓度的NF-κB活化抑制剂预处理后,与TRAP共孵育72h,流式细胞术检测IL-10+B细胞的比例变化；ELISA法检测细胞培养上清中IL-10的含量。4.采用HMGB1抗体封闭TRAP中的HMGB1抗原表位,随后与磁珠分选的小鼠B细胞共孵育,流式细胞术检测B细胞IL-10的表达,探讨HMGB1对TRAP诱导B细胞分化为IL-10+B细胞的影响。建立稳定表达HMGB1-shRNA的细胞株,提取TRAP并与分选的B细胞共孵育。72h后收获细胞培养上清,ELISA法检测上清中IL-10的分泌量。分选的B细胞与未破碎的TRAP或等量超声破碎后的TRAP共孵育72h,ELISA法检测上清中IL-10的分泌量。5.收集14例肿瘤患者胸腹水,通过高速离心的方法获取提取物；并通过流式细胞术、Western blots、电镜等方法鉴定提取物是否含自噬小体以及其表面HMGB1的表达量。分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),并与14例肿瘤患者胸腹水来源自噬小体共孵育

关键词： 夏氏疟原虫感染   调节性B细胞   表型特征   免疫应答  

摘要： 疟疾是由疟原虫通过媒介昆虫传播感染引起的严重威胁人类生命的感染性疾病，已成为全球最严重的三大公共卫生问题之一。目前尚未有应用于临床的有效疟疾疫苗。因此，抗疟疾疫苗的研制成为了当今的重点课题，而疟原虫感染宿主机体应答的免疫学、分子生物学等综合研究是其重要前提。　　疟疾与其他大多数感染性疾病一样，需要通过免疫效应机制对其控制和消除。在感染早期，以IFN-γ为主导的Th1型细胞免疫应答遏制原虫的爆发性增殖。随之，有Th2型细胞辅助B细胞产生特异性抗体，能够有效清除疟原虫，防止复发和再燃。适时适度的的Th1/Th2应答具有保护作用，而过度或不恰当的应答可能导致病理性损伤。　　调节性B(Bregs)是能够分泌Th2型细胞因子IL-10的B细胞，有研究发现伯氏疟原虫感染能够诱导小鼠脾脏产生Bregs，能够有效抑制病理性免疫应答导致的脑疟从而延长小鼠存活时间。但调节性B细胞在抗疟疾保护性免疫应答中的作用和地位并不清楚。研究显示，疟疾保护性免疫应答中Th1应答向Th2型应答的转换需要B细胞参与，在重症疟疾贫血患儿体内B细胞数量和表型存在异常。由此推测，疟原虫感染可诱导Bregs活化，在保护性和病理性应答的平衡中发挥重要而独特作用。　　目的：　　C57BL/6小鼠可以产生较强烈的Th1型应答，而BALB/c小鼠则偏向Th2型应答，因此我们建立了不同P.c chabadui AS感染鼠疟模型。本研究利用夏氏疟原虫感染的C57BL/6和BALB/c小鼠模型，通过检测Bregs在不同初次和再次感染中的应答模式、与Th1/Th2极化的关系，以及表型变化，揭示Bregs在疟疾免疫应答中的作用。　　方法：　　1、实验动物和疟原虫　　6～8周雌性C57BL/6与BALB/c小鼠，SPF级，由中国医学科学院实验动物研究所提供（许可证编号:SCXK京200420001）。致死型夏氏疟原虫(Plasmodium chabadudi chabadui AS，P.c chabadui AS)液氮冻存，由BALB/c小鼠周期复苏传代。　　2、实验动物感染　　疟疾感染:C57BL/6与BALB/c每只小鼠经腹腔感染1×106P.c chabadui AS寄生红细胞(pRBC)。***感染后第3天开始，尾静脉采血，制备薄血膜，Giemsa染色，动态监测疟原虫血症水平、生存率。　　3、流式细胞术　　FACS检测小鼠脾细胞中产生IL-10的CD11b、CD19及CD3的水平，并检测分泌IL-10的CD19细胞中CD1d、CD5、IgM、IgD、IgG、B220及CD138等的表达量。　　4、Realtime PCR检测细胞因子　　TRIzo1匀浆提取脾脏组织mRNA，反转录为eDNA后，保存于-20℃作为Realtime PCR的模板，将RPS17作为内参基因，检测IL-I0基因表达水平。　　5、统计学处理　　使用SPSS19.0统计软件对数据进行处理，标本采用独立样本t检验对数据做统计分析。P＜0.05代表差异具有统计学意义。　　结果：　　1、P.c chabadui AS感染小鼠原虫血症水平和生存率　　C57BL/6与BALB/c小鼠经腹腔感染1×106 P.c chabaudi AS寄生的红细胞(pRBC)后，于感染后第4天在外周血可见疟原虫感染的红细胞，随后红细胞感染率迅速上升。在感染后第8天红细胞感染率达到峰值(36％)。随后C57BL/6小鼠的感染率开始迅速下降，并在感染后第13天被基本清除，而BALB/c小鼠的感染率下降缓慢，在感染后第9天开始出现死亡，感染后第11左右基本全部死亡。　　2、P.c chabadui AS感染小鼠脾细胞IL-10的分泌水平及来源　　C57BL/6小鼠脾组织中IL-10 mRNA水平及分泌IL-10细胞的数量在感染后第8天达到峰值，BALB/c小鼠在感染后第5天达到峰值。分泌IL-10细胞的数量约占小鼠脾细胞总数的5％，并随小鼠的原虫血症的升高而升高。　　C57BL/6和BALB/c小鼠脾淋巴细胞中分泌IL-I0的细胞主要为CD3+T细胞和CD19+B细胞。C57BL/6小鼠在感染后第8天CD19+IL-10+B细胞数量达到峰值，占脾淋巴细胞总数的1.9％，在分泌IL-10细胞中的比重为40％。CD3+IL-10+T细胞数量的峰值出现在感染后第5天，占脾淋巴胞总数3％。BALB/c小鼠CD19+IL-10+B细胞和CD3+IL-10+细胞的峰值出现在感染后第5天，分别占脾淋巴细胞总数的3.4％和2.6％，其中CD19+B细胞占分泌IL-10细胞的50％，且在感染初期CD19+IL-10+B细胞数量多于CD3+IL-10+细胞数量。　　3、在P.c chabadui AS感染模型中B10细胞亚群的变化　　B10细胞表型为CD19+

关键词： 慢加急性肝衰竭   调节性B细胞   骨髓间充质干细胞   免疫调节   IL-10  

摘要： 【背景】肝功能衰竭(Liver failure)是多种因素导致的肝脏解毒、合成、排泄、生物转化等功能障碍,病死率在60%以上。亚太地区以慢加急性肝衰竭(Acute on chronic liver failure,ACLF)多见。肝衰竭目前最有效的治疗方法为肝移植,但肝移植受限于供肝缺乏、排斥反应、巨大经济负担等多方面因素,难以广泛应用,而间充质干细胞(Marrow mesenchymal stem cell,MSC)移植治疗作为一种新型治疗方法具有较好应用前景。前期大量研究证实,MSC同时具有多向分化、免疫调节等功能,但MSC在体内的免疫调节作用机制研究较少,尤其是MSC移植术治疗ACLF的免疫调节作用机制少有报道。调节性B细胞(Regulatory B cell,Breg)作为免疫调节网络的重要组成部分,是一群具有调节免疫应答、抑制炎症反应等功能的细胞亚群,其在MSC治疗ACLF时免疫调节作用相关研究较少。因此,本研究旨在对Breg细胞在ACLF免疫失衡中的作用及Breg细胞在MSC治疗ACLF时如何参与免疫调节进行初步探讨。【目的】1.研究Breg细胞在慢加急性肝衰竭的小鼠免疫失衡的作用。2.探讨MSC移植治疗ACLF小鼠过程中,Breg细胞是否参与MSC免疫调节功能。【材料与方法】1.连续8周腹腔注射四氯化碳的方法诱导慢性肝纤维化模型,此后给予单次亚致死量四氯化碳造成急性肝脏损伤,构建ACLF的小鼠疾病模型,观察对比疾病组与对照组的Breg细胞的表达和功能。2.分离、培养MSCs,经尾静脉注射MSCs细胞悬液治疗ACLF小鼠,观察24h累计生存率。3.分别采集对照组、ACLF组、MSC治疗组小鼠的肝脏、脾脏、外周血,分离提取其中的淋巴细胞,加入PMA+Ionomycin+Monensin+LPS(PIM+L)刺激5h,流式细胞术检测CD19+IL-10+B细胞比例,并采用ELISA检测淋巴细胞培养液中IL-10表达水平。【结果】***组小鼠的24h累积生存率较对照组小鼠降低(20%VS 100%,P<0.001)。***小鼠肝脏、脾脏、外周血的CD19+IL-10+B细胞表达频率高于对照组,分别为(2.97±0.33)%Vs(0.75±0.11)%,(4.13±0.67)%Vs(0.79±0.11)%,(5.87±1.00)%Vs(0.68±0.09)%,P值均小于0.001。***小鼠肝脏、脾脏、外周血IL-10的分泌水平高于对照组,分别为(16.76±1.73)Vs(6.29±0.70)pg/ml,(21.21±1.62)Vs(8.23±1.52)pg/ml,(31.32±2.95)***(7.49±1.22)pg/ml,P值均小于0.001。***治疗组小鼠24h累计生存率高于ACLF组小鼠(60%VS 10%,P<0.05)。***治疗组小鼠肝脏、脾脏、外周血的CD19+IL-10+B细胞表达频率低于ACLF组,分别为(2.27±0.17)%Vs(3.67±0.21)%,P<0.001,(2.57±0.25)%Vs(5.14±0.59)%,P<0.05,(3.00±0.24)%Vs(5.93±0.99)%,P<0.05。***治疗小鼠肝脏、脾脏、外周血IL-10的分泌水平低于ACLF组小鼠,分别为(14.08±2.04)Vs(19.97±1.06)pg/ml,(16.30±2.22)Vs(23.41±1.41)pg/ml,(18.05±2.39)Vs(33.21±3.31)pg/ml,差异有统计学意义(t=2.458,P<0.05;t=2.77,P<0.05;t=3.53,P<0.01)。【结论】1.慢加急性肝衰竭小鼠的24h累计存活率降低,其肝脏、脾脏、外周血的Breg细胞表达频率及IL-10的表达高于对照组,Breg在慢加急性肝衰竭小鼠疾病进展中起重要作用。***移植治疗可提高ACLF小鼠生存率,可能与MSC下调Breg数量以及IL-10分泌有关。

关键词： 白芍总苷   肝细胞肝癌   二乙基亚硝胺   调节性B细胞   B细胞激活因子  

摘要： 肝细胞肝癌(HCC)是最常见的恶性肿瘤之一,在全世界癌症死亡中排第三位。大约占所有原发性肝癌病例的70%-80%。肝癌的放射治疗、外科手术治疗、化学治疗和肝脏移植等方法是目前治疗HCC常用的,但大多数患者确诊时已发展至癌症晚期,且患者体质较差,故大部分患者只适合保守疗法,治疗肝癌仍具有很大的挑战性。现在的一些研究开始关注HCC的免疫治疗。在大多数情况下,自身免疫调节有助于肿瘤的缓解,这说明免疫系统在控制肝癌的发生发展中占有重要作用。调节性B细胞(Bregs)主要是通过生成抑制性细胞因子来协调免疫系统和维持B细胞的抑制作用。Bregs已被证明可通过对自身反应性T细胞抑制自身免疫,也可以直接抑制细胞毒性T淋巴细胞活性减弱抗肿瘤免疫。越来越多的证据表明Bregs在肿瘤的发生发展中起着至关重要的作用。虽然Bregs已被证明在肿瘤的发生发展中具有至关重要的作用,但在肿瘤发生发展过程中诱导Bregs生成的肿瘤微环境因素或细胞因子仍然不明了。B淋巴细胞刺激因子(BAFF)是TNF家族细胞因子的一员,对调节B淋巴细胞的成熟和功能至关重要。早期文献表明,BAFF被普遍认为是炎症促进因子,BAFF可诱导边缘带B细胞(MZ B细胞)分化成可分泌IL-10的调节性B细胞。文献表明BAFF在调节B淋巴细胞的成熟和功能中扮演着双重角色。在本课题中我们将探讨Bregs及其分化增殖密切相关的细胞因子在HCC发生发展中重要作用。白芍总苷(TGP)是从传统中药芍药根部提取出的有效部位,没有明显的毒性或副作用。TGP中包含芍药苷、芍药花苷、苯甲酰芍药苷和芍药内酯苷,芍药苷是其主要活性物质。TGP具有抗炎镇痛免疫调节等作用,治疗肝脏疾病和类风湿关节炎效果明显。其对SMMC-7721和HepG2细胞增殖的抑制作用早已被我们实验室证实。这些发现为TGP能否抑制肝癌的免疫逃逸从理论上提供了有价值的线索。在本课题中我们将研究Bregs及其相关细胞因子在肝癌的发生发展中的动态变化,TGP能否通过影响Bregs及其相关细胞因子治疗DEN诱导的实验性肝癌。目的：1.部分阐明HCC发生发展中Bregs及其相关细胞因子的动态变化;2.明确TGP对大鼠HCC的治疗作用及部分机制。方法：1建立DEN诱导大鼠HCC模型,SD大鼠随机分为正常组、模型组和TGP组(30、60、120 mg·kg-1),共5组。模型组、TGP组大鼠灌胃给予DEN造模,于每天上午灌胃(0.1% DEN 8 mg/kg/次,每周6天,每天1次),同时给予正常组相同量的生理盐水,共16周。在第12周开始,分别灌胃TGP(30、60、120mg·kg-1),每天1次,连续4周,正常组和模型组给予等量的5%CMC-Na。分别于造模的第4周,第12周和第16周称重后采用股动脉取血的方法处死大鼠。无菌操作取出各组大鼠脾脏和肝脏,分别称重,并记录大鼠肝脏和脾脏的重量计算肝脾指数。量取并记录肝脏表面的肿瘤体积以及结节的数量;采用检测试剂盒检测各实验组大鼠血清中ALT、AST、ALP、AFP、BAFF、IL-4、IL-7和IL-10的水平变化;各组大鼠肝脏的组织病理学检查使用HE染色法进行观察;流式细胞术检测大鼠外周血中Bregs表达比例。Western-blot法检测大鼠脾脏中B细胞成熟抗原(BCMA)、穿膜蛋白活化物(TACI)和B细胞活化因子受体(BAFF-R)表达水平的变化。2体外培养正常大鼠脾脏淋巴细胞,加入不同浓度的BAFF刺激,并观察Pae作用。采用流式细胞术法检测Bregs的比例,使用ELISA检测上清中IL-10的水平。结果：***对DEN诱导大鼠HCC的治疗作用1.1 TGP对HCC大鼠肝脾指数、肿瘤体积、肿瘤结节数以及死亡率的作用与正常组对比,模型组大鼠死亡率明显升高,肝脏和脾脏指数也有显著上升、肝脏肿瘤结节体积明显变大结节数明显上升。与模型组比较,iTGP(60、120 mg·kg-1)能显著降低HCC大鼠升高的肝脾指数,减少肝表面结节数和减小肿瘤结节体积。且大鼠死亡率也明显降低。1.2 TGP对DEN诱导HCC大鼠的肝脏组织病理学影响正常组大鼠有着完整清晰的肝小叶构造肝且表面光滑有光泽,肝索排列很整齐,细胞核清晰。经过DEN诱导16周后,肝脏表面粗糙不平,出现大小不等的结节,癌肿形成,出现结构紊乱的肝小叶,发生炎性细胞浸润,同时大量假小叶出现,HCC细胞呈现低分化,癌细胞浸润,细胞排列紊乱,异型性明显,细胞核增大,胞质减少。TGP(60、120 mg·kg-1)剂量组明显减轻炎性细胞发生浸润,减少肝脏上假小叶形成和出现,同时癌细胞的异型性明显降低。1.3 TGP对DEN诱导HCC大鼠血清ALT、AST和ALP活性的作用与正常组对比,模型组大鼠血清中ALT、AST和ALP的活性明显上升。与模型组比较,T

关键词： 胃癌(gastric cancer,GC)   Breg细胞   白介素10(IL-10)   Treg细胞   Th细胞   Tc细胞   叉头状转录因子(Foxp3)   转化生长因子(TGF-β)   免疫逃逸  

摘要： 目的免疫调节在胃癌发生发展及转移中发挥重要作用。近来,研究发现一群具有调节作用的B淋巴亚群——称为调节性B淋巴细胞(regulatory B cells,Breg)。Breg在自身免疫性疾病中的研究已经取得了初步研究结果,但是Breg在胃癌中的作用并不清楚。本研究以原发性胃癌(gastric cancer,GC)为研究对象,检测调节性B淋巴细胞(Breg)在胃癌中的百分比变化,探讨其在胃癌中的表面标志特性,研究Breg细胞在胃癌中可能的作用及相关机制,为调节性B淋巴细胞在胃癌及人类肿瘤甚至其在其他疾病中的研究提供研究基础。方法(1)用流式细胞仪分析的方法测定40例健康对照组(Healthy control,HC)和107例原发性胃癌患者(gastric cancer,GC)外周血中CD19B淋巴的百分比的状况,研究胃癌患者外周血B淋巴百分比与其肿瘤TNM分期的关系。免疫组织化学染色的方法检测不同TNM分期胃癌患者肿瘤组织局部CD19B淋巴细胞的分布情况。通过流式细胞术的方法检测和分析胃癌患者正常组织、癌旁组织及肿瘤组织中CD19B淋巴细胞(CD45CD19)在淋巴细胞中的百分比。(2)ELISA方法检测胃癌患者血清中分泌的细胞因子IL-10的水平。流式细胞术分析胃癌患者外周血PBMC及癌旁组织及肿瘤组织B淋巴细胞中CD19IL-10B淋巴细胞的百分比。(3)采用多色流式细胞术检测表面标志CD5、CD1d、CD24、CD38、Ig M、CD25、CD10、CD21、CD20各指标在IL-10B淋巴细胞和IL-10-B淋巴细胞表面平均荧光强度(MFI)表达的不同,确定Breg细胞合适的表面标志为CD19CD24 CD38。(4)流式细胞术分析胃癌患者外周血PBMC及肿瘤组织淋巴细胞中CD19CD24 CD38在CD19B淋巴细胞的百分比变化,分析Breg细胞百分比与肿瘤TNM分期的可能关系。(5)通过流式细胞术分析胃癌患者体内中CD3T淋巴细胞、CD3CD4Th淋巴细胞、CD3CD8Tc淋巴细胞、CD3-CD19B淋巴细胞、CD3-(CD1656)NK淋巴细胞、CD3(CD1656)NKT淋巴细胞的百分比,详细分析胃癌患者中各功能细胞亚群如CD4IFN-γTh1细胞、CD4IL-4Th2细胞和CD4Fox P3Treg细胞的百分比变化。(6)进一步分析胃癌患者中CD19CD24 CD38 Breg细胞与各细胞亚群的相关关系。(7)采用流式细胞分选技术、CFSE染色、细胞共培养、流式细胞检测等方法研究CD19CD24 CD38 Breg细胞对CD3T淋巴细胞、CD3CD4Th淋巴细胞、CD3CD8Tc淋巴细胞亚群增殖的影响,检测Breg细胞对Th淋巴细胞、Tc淋巴细胞分泌细胞因子的影响,检测Breg细胞对Treg细胞转化生成的影响。(8)通过功能抗体中和阻断实验评估IL-10及TGF-β在Treg细胞转化过程中是否起到作用。研究中统计分析采用Graph Pad Prism 5.0软件分析。结果(1)40例健康对照和107例胃癌患者外周血标本中B淋巴细胞的百分比无明显差异(14.03%±4.39%vs 15.06%±7.47%,P>0.05)。(2)胃癌患者不同TNM分期(Ⅰ期18例、Ⅱ期40例、Ⅲ期46例和Ⅳ期3例),分析其外周血中B淋巴细胞百分比与TNM分期的关系,发现不同TNM分期其外周血中B淋巴细胞百分比不同,Ⅰ期>Ⅱ期>Ⅲ期,但Ⅳ期例外:TNM III期胃癌患者外周血CD19B淋巴细胞的百分比显著低于TNM I期患者(P<0.001),而且低于TNM II期患者(P<0.05),而TNM IV患者外周血B淋巴细胞百分比增高,高于TNM III期患者,两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)流式细胞术及免疫组织化学染色都检测到大量B淋巴细胞在肿瘤组织局部的聚集。(4)ELISA检测发现胃癌患者外周血中细胞因子IL-10明显高于健康对照组(P<0.001)。流式细胞术的检测发现胃癌患者外周血中CD19IL-10B细胞百分比显著高于健康对照组(P<0.001)。采用流式细胞术的检测方法,检测胃癌患者外周血PBMC及癌旁组织、肿瘤组织B淋巴细胞中CD19IL-10B淋巴细胞的百分比,发现胃癌患者肿瘤组织中CD19IL-10B细胞百分比高于癌旁组织(P<0.05),显著高于外周血PBMC(P<0.01)。(5)多色流式细胞术分析IL-10B淋巴细胞表面的特征发现,IL-10B淋巴细胞上CD5、CD38、CD24和CD25的荧光强度明显高于IL-10-B淋巴细胞(P<0.001),IL-10B淋巴细胞上CD1d、Ig M和CD10的荧光强度高于IL-10-B淋巴细胞(P<0.01),IL-10B淋巴细胞上CD21的荧光强度高于I

关键词： 蠕虫感染   过敏性疾病   自身免疫性疾病   调节性T细胞   调节性B细胞  

摘要： 许多研究发现蠕虫感染后虫源性分子诱导免疫细胞形成免疫调节网络,介导免疫抑制,从而抑制过敏性和自身免疫性疾病。寄生虫可以通过诱导免疫调节细胞活化和产生细胞因子发挥抑制效应,从而影响其他免疫相关疾病。然而,蠕虫感染与免疫相关疾病之间的调节机制尚无明确的结论。一些蠕虫感染可以保护和控制过敏性疾病,而另一些蠕虫却加剧疾病的免疫病理损害。

关键词： 慢性乙型肝炎患者   B细胞   调节性   DNA定量   乙肝病毒   相关性   外周血   细胞免疫应答  

摘要： 细胞免疫应答在乙型肝炎病毒（HBV）感染后的清除过程中发挥了重要的作用．但是研究发现,慢性乙型肝炎患者体内特异性T细胞对HBV呈现了免疫低反应性，其确切机制仍不清楚。传统观点认为B细胞主要发挥体液免疫应答和抗原提呈作用。实际上．B细胞也具有免疫负调节作用。最近的研究证实，调节性B细胞（Bregs）自身免疫性疾病、炎症性疾病和癌症中具有致病作用。

关键词： 西罗莫司   他克莫司   调节性T细胞   调节性B细胞   酶联斑点免疫试验   免疫状态  

摘要： 目的通过比较两种不同免疫抑制方案对肾移植术后受者免疫状态的影响,以寻找有利于移植物长期存活的免疫抑制方案。方法研究纳入亲属活体肾移植受者18例,肾功能稳定。根据应用免疫抑制方案的不同分为两组:西罗莫司(SRL)组8例,方案为SRL+吗替麦考酚酯(MMF)+泼尼松(Pred);他克莫司(TAC)组10例,方案为TAC+MMF+Pred;两组用药时间均超过1年。相应的亲属活体肾移植供者作为空白对照。采用流式细胞技术检测3组外周血调节性T细胞(Treg)(CD4+CD25+Foxp3+)、调节性B细胞(Breg)(CD19+CD5+CD1d+)占外周血淋巴细胞的比例,采用酶联斑点免疫试验(ELISPOT)检测SRL组、TAC组肾移植受者外周血淋巴细胞经其相应供者外周血淋巴细胞特异刺激后,分泌特异性细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)的单个细胞频数。结果 SRL组肾移植受者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg占总CD4+T细胞的比例为(6.68±0.42)%,TAC组为(3.59±0.47)%,空白对照组为(6.59±0.36)%,SRL组和空白对照组显著高于TAC组(均P<0.05),SRL组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。SRL组外周血Breg(CD19+CD5+CD1d+)占CD19+B细胞的比例为(16.43±3.56)%,TAC组为(13.09±1.64)%,空白对照组为(16.58±1.31)%,3组之间两两比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。ELISPOT检测SRL组分泌IFN-γ的细胞频数为(117.00±21.54)/500 000,TAC组为(126.00±24.08)/500 000;分泌IL-10的细胞频数SRL组为(347.00±55.29)/500 000,TAC组为(249.00±58.97)/500 000,两组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论长期应用以SRL为基础的免疫抑制方案并不影响Treg占外周血淋巴细胞的比例,而应用以TAC为基础的免疫抑制方案会降低外周血Treg的数量;两种方案都不影响Breg占外周血CD19+B细胞的比例,而且也不影响受者对供者的特异性反应性。

关键词： 自身免疫病   B细胞   调节性   自身反应性T细胞   机体免疫功能紊乱   自身抗体   免疫应答   自身抗原  

摘要： 自身免疫病是由于机体免疫功能紊乱,产生针对自身抗原的病理性免疫应答,从而导致器官或系统损伤的一类疾病,通常伴有自身反应性T细胞、B细胞的活化和自身抗体、炎性因子的产生等.B细胞针对自身抗原成分产生的自身抗体在自身免疫病的发生发展中起重要作用.近年来研究表明,B细胞和T细胞一样,不仅存在“效应性亚群”,也存在“调节性亚群”,调节性B细胞的概念也随之产生[1].在包括肿瘤、感染、移植及自身免疫病等多个领域,调节性B细胞均引起了学者们广泛的兴趣.现就调节性B细胞及其在自身免疫病中的研究进展综述如下.

关键词： 淋巴瘤,非霍奇金   CD4+   CD25highCD127low调节性T细胞  

摘要： 目的 探讨外周血CD4＋ CD25high CD127low调节性T细胞（Treg细胞）在B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）患者外周血中表达水平及其临床意义.方法 采用流式细胞术检测100例初诊B-NHL患者及50名健康对照者外周血CD4＋ CD25high CD127low Treg细胞表达水平,进行统计学分析.结果 健康对照者外周血CD4＋ CD25high CD127low Treg细胞中位表达水平为5.00％,初诊B-NHL患者为7.20％,两者之间差异具有统计学意义（P＜ 0.001）.男性患者外周血CD4＋ CD25high CD 127low Treg细胞水平高于女性患者（P＜0.01）,乳酸脱氢酶（LDH）增高患者外周血CD4＋ CD25high CD127low Treg细胞水平高于LDH正常患者（P＜0.01）,Ⅲ～Ⅳ期患者外周血CD4＋C D25high CD 127low Treg细胞水平较Ⅰ～Ⅱ期患者增高（P＜0.01）,有B症状患者外周血CD4＋ CD25high CD127low Treg细胞水平高于无B症状患者（P＜0.01）.而不同年龄、国际预后指数评分、有无大包块患者之间外周血CD4＋ CD25high CD 127low Treg细胞水平差异均无统计学意义（均P＞0.05）.结论 B-NHL患者体内存在免疫抑制,在男性、LDH增高、有B症状及晚期患者中CD4＋ CD25high CD127low Treg细胞水平明显增高.检测其水平对于判断B-NHL的预后有一定价值.