关键词： 调节性B细胞   免疫调节   IL-10   自身免疫性疾病  

摘要： B细胞除了能通过产生抗体,提呈抗原来发挥免疫作用外,还有免疫抑制功能。机体内存在少量的调节性B细胞(Breg),能通过分泌抑制性细胞因子(如IL-10、肿瘤坏死因子等)或直接的细胞接触诱导免疫耐受、抑制过度炎症反应等,从而发挥免疫调节功能。B细胞在自身免疫性疾病、肿瘤免疫、抗感染免疫、移植耐受的维持等方面都发挥着重要作用。本文主要对Breg细胞的功能相关分子、作用机制以及与疾病的相关性等方面进行综述。

关键词： 调节性B细胞   B10细胞   自身免疫性疾病   肿瘤   免疫调节  

摘要： B淋巴细胞通过分泌抗体和抗原递呈等在机体免疫应答中一直发挥着重要作用。近来研究发现了一群具有调节功能的B淋巴细胞亚群——调节性B细胞（Breg）。根据Breg分泌细胞因子不同，Breg分为3种不同亚型：分泌IL-10的BIO，分泌TGF—β的Br3和表达FoxP3的FoxP3＋Breg。Breg在多种自身免疫性疾病、寄生虫感染和肿瘤等疾病中发挥着重要的免疫抑制作用。研究Breg的分类、起源与分化发育、分化发育相关的信号通路、表型特征及其在不同种类疾病中的作用可以全面深入地了解Breg的特征和相互作用的机制，因而具有重要意义。

关键词： 调节性B细胞   来源   分化   自身免疫病  

摘要： B细胞的主要功能是分泌抗体和呈递抗原,并以此起始和活化免疫系统发挥正性调节作用。新近研究表明,一类具有负性免疫调节功能的B细胞亚群——调节性B细胞(Gregs)可通过细胞间直接接触和分泌白细胞介素10等方式下调免疫应答。Bregs在许多疾病中发挥着重要的调节作用。Bregs的发现、起源、分化将为全面、深入了解自身免疫病免疫耐受的机制,及寻找更合理的自身免疫病治疗方法提供理论依据和新的研究方向。

关键词： 原发性胆汁性肝硬化   胸腺B细胞   调节性T细胞发育   致病机制   动物模型  

摘要： 第一部分胸腺B细胞在Treg发育中的作用及机制研究\n 调节性T细胞(Treg)是一群对于维持机体免疫耐受和免疫稳态至关重要的CD4+T细胞，特异性表达转录因子FoxP3。Treg参与多种疾病的发病，并在其中发挥重要作用，如自身免疫性疾病、感染、过敏和肿瘤等。因为Treg细胞在免疫调节中扮演了重要角色，将Treg细胞作为疾病治疗的靶点极具临床应用前景，而探究Treg细胞的发育机制无疑为Treg细胞用于临床疾病治疗提供重要的基础理论参考。\n 外周免疫系统中的FoxP3+Treg细胞根据其来源的不同可以分为外周诱导产生的Treg细胞(p-Treg)和胸腺来源的Treg细胞(t-Treg)，p-Treg细胞是在外周由经典的非Treg的CD4+T细胞在特定免疫微环境中诱导产生，而t-Treg细胞是在胸腺中由CD4单阳性胸腺细胞发育而来，t-Treg是构成外周FoxP3+Treg细胞的主要成分。\n t-Treg在胸腺中的发育主要分为两个阶段:第一个阶段是从CD4单阳性T细胞在经过TCRβ-MHCⅡ和CD28-CD80/86选择和刺激后生成CD25+ FoxP3-Treg前体细胞;第二个阶段是从Treg前体细胞向成熟Foxp3+Treg细胞的转化，这个过程是细胞因子IL-2所依赖的。在t-Treg的发育过程中，多种抗原递呈细胞，如:树突状细胞，胸腺髓质区上皮细胞促进了t-Treg的发育和分化。胸腺B细胞也是正常存在于胸腺组织的一种抗原递呈细胞，但其在胸腺发育中的作用，特别是在t-Treg发育中的作用仍然不清楚，因此，我们将探究胸腺B细胞在t-Treg发育过程中所行使的功能，从而深刻认识Treg细胞的发育机理。我们已取得的实验结果如下:\n 1.胸腺B细胞参与胸腺Treg的发育\n 通过免疫组化染色我们发现，胸腺B细胞和胸腺Treg细胞均定位于胸腺的髓质区;流式分析B细胞敲除的FoxP3-GFP小鼠胸腺细胞时，发现胸腺中B细胞的缺失不影响CD4单阳性和CD8单阳性胸腺细胞，但胸腺Treg细胞的比例和数目均显著的下降;同时，我们利用体外胸腺B细胞和胸腺CD4单阳性细胞共培养的实验直接证实了胸腺B细胞能够诱导Treg细胞的产生。\n 2.胸腺B细胞通过细胞-细胞间的接触的方式促进胸腺Treg细胞发育\n 通过体外培养实验，我们发现胸腺B细胞促进胸腺Treg细胞的发育是细胞-细胞间的接触所依赖的，而与胸腺B细胞所分泌的细胞因子无关;进一步的实验分析，我们发现胸腺B细胞促进胸腺Treg细胞发育所依赖的细胞-细胞间接触是由胸腺B细胞表面的MHCⅡ分子和CD40，CD80和CD86这些共刺激分子所介导的。\n 3.胸腺B细胞促进CD4单阳性胸腺细胞生成Treg前体细胞\n 在体外胸腺B细胞和胸腺Treg前体细胞共培养的实验中，我们发现胸腺B细胞不具备诱导胸腺Treg前体细胞向成熟Foxp3+Treg细胞转化的能力;相反，在胸腺B细胞和胸腺CD4单阳性细胞共培养的实验中，我们发现胸腺B细胞显著的促进了胸腺CD4单阳性细胞生成Treg前体细胞。\n 4.胸腺B细胞的参与促进胸腺Treg细胞增殖\n 在分析B细胞敲除的FoxP3-GFP小鼠胸腺中Treg细胞时，我们发现胸腺B细胞的缺失导致了处在增殖状态的胸腺Treg细胞比例显著下降;另外在胸腺Treg细胞体外增殖的培养实验中，我们发现胸腺B细胞的加入能够显著的促进胸腺Treg细胞的增殖。\n 5.胸腺B细胞表面的MHCⅡ分子和CD40/CD80/86分子在促进胸腺Treg细胞增殖中扮演不同的角色\n 在胸腺B细胞和胸腺Treg细胞共培养的实验中加入表面分子的特异性阻断抗体，阻断由这些分子所介导的信号传递，我们发现胸腺B细胞所提供的MHCⅡ分子参与到促进胸腺Treg细胞增殖中，但胸腺B细胞来源的CD40、CD80和CD86这些共刺激分子并不参与其中。\n 综上所述，我们发现胸腺B细胞在胸腺Treg细胞发育过程中的作用及其作用机制，阐明了胸腺B细胞主要是通过两种机制来维持胸腺Treg细胞的正常数目，第一个机制是促进胸腺Treg细胞的发育，第二个机制是促进成熟胸腺Treg细胞的增殖，这些发现加深了我们对t-Treg发育的认识。\n 第二部分NK细胞在原发性胆汁性肝硬化致病机制中作用及机制的研究\n 原发性胆汁性肝硬化(PBC)是由于自身免疫系统攻击肝内胆管上皮细胞而引起的慢性胆汁淤积性肝脏疾病，该自身免疫疾病的病理学特征为:肝内中小胆管的破坏，汇管区炎症细胞的浸润。PBC病人肝脏汇管区浸润的淋巴细胞有B细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、树突状细胞和巨噬细胞，同时还包含有NK细胞。至今我们都在密切关注适应性免疫细

关键词： 调节性B细胞   B10细胞   风湿免疫性疾病   系统性红斑狼疮   非肥胖性糖尿病   类风湿性关节炎  

摘要： 人类B淋巴细胞主要通过分泌特异性抗体及细胞因子发挥免疫调节功能。调节性B细胞拥有正向和负向免疫调节作用,通过分泌不同的细胞因子或细胞接触等机制,完成下调免疫反应的作用。调节性B细胞在风湿免疫性疾病发生、发展中起着重要的免疫抑制作用,可能为风湿免疫病的治疗带来新希望。

关键词： 癌症   调节性B细胞   肿瘤免疫  

摘要： B淋巴细胞是人体特异性免疫的重要组成部分,其主要功能是抗原呈递以及分泌抗体。新近研究发现,调节性B细胞(Bregs)通过分泌白细胞介素10和转化生长因子β1等细胞因子作用于免疫系统,在炎症、自身免疫性疾病以及癌症进展、转归和预后中发挥作用。了解Bregs在癌症中的作用机制对临床治疗癌症具有重要意义。该文就Bregs与癌症的关系及其研究进展予以综述。

关键词： 非节段型进展期白癜风   单个核细胞   B细胞   调节性B细胞  

摘要： 目的:检测非节段型进展期白癜风患者外周血及PBMC培养刺激后B细胞、调节性B细胞的数量,及其表面特异分子表型的表达,探讨调节性B细胞是否参与白癜风的发病机制。方法:非节段型进展期白癜风患者10例,正常人10例,采用流式细胞术,检测外周血CD19+B细胞、CD19+IL-10+B细胞、CD19+CD5highCD1dhighB细胞、CD19+CD24highCD38highB细胞的表达;提取外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC)培养刺激后,检测CD19+B细胞、CD19+IL-10+B细胞、CD19+CD5highCD1dhighB细胞、CD19+CD24highCD38highB细胞的表达。结果:1.B细胞及调节性B细胞数量检测1.1外周血B细胞数量检测应用流式细胞术检测非节段型进展期白癜风患者外周血CD19+B细胞百分比为(3.68±2.85)%,正常对照组CD19+B细胞百分比为(4.46±3.95)%,两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。1.2外周血调节性B细胞数量检测应用流式细胞术检测白癜风患者外周血CD19+IL-10+B细胞百分比为(0.30±0.16)%,正常对照组CD19+IL-10+B细胞百分比为(0.40±0.35)%,两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。1.3 PBMC培养刺激后B细胞数量检测提取PBMC,经过培养刺激后,白癜风患者CD19+B细胞百分比为(4.00±0.96)%,正常对照组CD19+B细胞百分比为(4.48±3.09)%,两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。1.4 PBMC培养刺激后调节性B细胞数量检测提取PBMC,经过培养刺激后,白癜风患者CD19+IL-10+B细胞百分比为(3.23±0.79)%,正常对照组CD19+IL-10+B细胞百分比为(1.16±0.88)%,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。2.B细胞表面特征性分子的检测2.1外周血CD19+CD5highCD1dhighB细胞的检测应用流式细胞术检测白癜风患者外周血CD19+CD5highCD1dhighB细胞百分比为(0.48±0.52)%,正常对照组CD19+CD5highCD1dhighB细胞百分比为(0.66±0.30)%,两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.2外周血CD19+CD24highCD38highB细胞的检测流式细胞术检测白癜风患者外周血CD19+CD24highCD38highB细胞百分比为(1.02±0.44)%,正常对照组CD19+CD24highCD38highB细胞百分比(1.60±1.54)%,两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.3 PBMC培养刺激后CD19+CD5highCD1dhighB细胞的检测提取PBMC,经过培养刺激后,结果显示白癜风患者CD19+CD5highCD1dhighB细胞百分比为(0.56±0.22)%,正常对照组CD19+CD5highCD1dhighB细胞百分比为(0.70±0.79)%,两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.4 PBMC培养刺激后CD19+CD24highCD38highB细胞的检测提取PBMC,经过培养刺激后,白癜风患者CD19+CD24highCD38highB细胞百分比为(3.88±1.16)%,正常对照组CD19+CD24highCD38highB细胞百分比为(1.15±0.64)%,两组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。3.外周血B细胞数量与疾病严重程度的相关性为了进一步研究CD19+B细胞及CD19+IL-10+B细胞的数量与白癜风皮损面积是否相关,本研究检测了CD19+B细胞、CD19+IL-10+B细胞的数量与VASI评分的相关性。CD19+B细胞与白癜风患者VASI评分无相关性,r=-0.42,p=0.23。CD19+IL-10+B细胞与白癜风患者VASI评分无相关性,r=0.25,p=0.50。结论:1、非节段型进展期白癜风患者外周血中B细胞及调节性B细胞数量与对照1.3 PBMC培养刺激后B细胞数量检测组相比无明显差异,PBMC经体外培养刺激后,白癜风患者CD19+B细胞表达与对照组比较无明显差异,但CD19+IL-10+B细胞的表达明显升高,提示白癜风患者外周血中可能存在调节性B细胞的前体细胞增多。2、PBMC经体外培养刺激后,白癜风调节性B细胞主要表型为CD19+CD24highCD38high。

关键词： 原发性肝癌   调节性B细胞   免疫抑制  

摘要： 背景：调节性B细胞(Breg)是一群具有调节作用的B细胞,在自身免疫性疾病和炎症性疾病中具有重要的保护作用。Breg主要通过分泌IL-10发挥负调节功能,但这种负调节作用在肝癌等肿瘤性疾病中作用机制尚不清楚。因此,阐明肝癌进展中Breg的免疫学特征及其作用机制有利于深刻理解肝癌的发生机理。设计和方法：收集乙型病毒(HBV)相关性肝细胞癌患者61例(年龄28-74岁,巴塞罗那分期：早期20例、中期14例、进展期27例),乙型肝炎肝硬化11例,健康对照28例。采用流式细胞仪及免疫组化染色检测患者及健康对照外周血Breg表达的百分比,分析Breg与肿瘤进展的关系。其中34例早、中期患者进行了手术切除治疗,根据术前Breg表达中位值分为早、中期低表达组、早、中期高表达组,采用Kaplan-Meier法计算各组的无疾病进展时间(DFS)。27例进展期无法手术治疗患者根据其Breg表达中位值分为晚期低表达组和晚期高表达组,观察其总体生存时间(OS)。结果：肝细胞癌患者外周血Breg表达频率明显高于健康对照,并且随着疾病进展Breg频率逐渐升高。肝癌患者肝组织中Breg分布主要集中在癌与癌旁的交界部位。生存分析发现肝癌患者外周血以及肝脏浸润的Breg数量与患者肿瘤复发时间呈正相关,并且是患者生存和肿瘤复发的独立预测因素。结论Breg与肝癌的疾病进展密切相关,提示Breg表达水平可以做为判断肝癌患者生存期及肿瘤复发的重要免疫学指标。

关键词： 免疫性血小板减少症   调节性B细胞   白细胞介素10  

摘要： 目的免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)是一种自身免疫介导的血小板过度破坏所致的出血性疾病。B淋巴细胞产生血小板相关抗体破坏血小板,导致血小板数量减少是ITP的主要发病机制[1]。调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)是一类具有负向免疫调控作用的B淋巴细胞亚群,主要通过分泌抑制性细胞因子白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)发挥免疫调节作用[2-4]。Bregs的数量异常和或功能变化可导致多种自身免疫性疾病的发生和恶化[5]。Bregs在ITP患者中的研究数据尚少,我们通过检测ITP患者不同疾病状态及正常对照者外周血Bregs及其功能分子IL-10的变化,并将其与ITP患者相关临床指标进行相关分析,探讨Bregs在ITP发病机制中的作用。方法选取2013年11月至2014年10月于天津医科大学总医院血液科住院的ITP患者67名,其中初诊ITP患者35例,完全缓解ITP患者32例,健康志愿者30名。第一部分采用流式细胞术检测ITP患者及健康对照者外周静脉血Bregs数量(CD19+CD24hiCD38hi/CD19+)第二部分采用流式细胞术检测ITP患者及健康对照者外周静脉血Bregs细胞内功能分子IL-10表达水平。第三部分采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent assay,ELISA)法检测ITP患者及健康对照者外周静脉血上清液中IL-10水平。第四部分ITP患者外周血Bregs水平与T淋巴细胞亚群(CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD4+/CD3+CD8+)、CD16+CD56+自然杀伤细胞(Natural Killer Cell,NK)、HLA-DR+Lin-CD123+浆细胞样树突细胞(plasmacytoid dendritic cells,pDC)、HLA-DR+Lin-CD11c+髓样树突细胞(myeloid dendritic cells,mDC)、血小板抗体(CD41a+IgG、CD41a+IgM)水平、血小板计数、血清免疫球蛋白G、血清免疫球蛋白M、血清免疫球蛋白A、血清免疫球蛋白E等临床指标进行相关性分析。结果①流式细胞术检测ITP患者及健康对照者外周血Bregs水平:ITP初诊组(3.09%±2.57%)显著低于完全缓解组(7.78%±6.59%,p=0.002)和健康对照组(5.42%±3.31%,p=0.003)。②流式细胞术检测ITP患者及健康对照者外周血Bregs中IL-10+细胞比例:初诊组比例(32.30%±12.71%)低于完全缓解组(71.73%±18.08%,P=0.000)和健康对照组(51.01%±17.08%,P=0.026),完全缓解组高于健康对照组(p=0.026)。③初诊组ITP患者Bregs数量分析:初诊组ITP患者经免疫治疗后分析其初诊时Bregs水平,完全缓解组初诊时Bregs水平(4.24%±2.68%)高于难治性ITP组初诊时Bregs水平(1.88%±1.16%,p=0.007);初诊组ITP患者中甲状腺功能正常组Bregs水平(4.80%±3.72%)高于甲状腺功能减低组(1.30%±0.88%,p=0.006)。④ELISA法检测ITP患者及健康对照者外周静脉血上清液IL-10水平:初诊组[(0.943±0.027)pg/ml]低于完全缓解组[(0.987±0.039)pg/ml,P=0.002]和对照组[(1.125±0.221)pg/ml,P=0.045]。⑤统计临床资料与ITP患者外周静脉血Bregs数量进行相关性分析:Bregs与ITP患者外周血T淋巴细胞亚群(CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD4+/CD3+CD8+)、NK细胞、pDC、血小板抗体(CD41a+IgG、CD41a+IgM)水平、血清IgG、血清IgM、血清IgA、血清Ig E均无明显的相关性,与mDC成正相关(r=0.644,P=0.003,n=19),与血小板计数成正相关(r=0.327,P=0.006,n=67)(图3)。结论初诊组ITP患者Bregs数量及其产生IL-10的能力均低于完全缓解组及健康对照组,但经治疗缓解后均得以显著提升。Bregs与外周血mDC及血小板计数成正相关,提示Bregs参与了ITP发病过程且与疾病严重程度相关,通过检测其表达水平有助于判断ITP病情并为进一步了解ITP的发病机制提供新思路,为其未来免疫靶向治疗提供新靶点。

关键词： 类风湿关节炎   调节性B细胞   病情活动性   实验室检查   分类诊断  

摘要： 目的：探讨调节性B细胞（Breg）及其相关细胞因子与RA临床表现、实验室检查和病情活动性及Th17/Treg细胞相关性。<br>　　方法：1.选取2014年10月至2014年12月期间就诊于内蒙古医科大学附属医院风湿免疫科的初诊的RA患者36例，均符合美国风湿病学会（ACR）1987年分类诊断标准和/或2010年ACR/欧洲风湿病防治联盟（EULAR）RA分类诊断标准；选取30名年龄性别相匹配的健康志愿者作为对照组。2.用流式细胞术(FCM)检测外周血单个核细胞(PBMC)中CD19+CD24hiCD38hi Breg细胞、TH17/Treg细胞的百分比；用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Breg细胞相关细胞因子（IL-10和TGF-β）、Th17及Treg细胞相关细胞因子（IL-1β、IL-6、IL-17a、IL-23和TNF-α）等。3.分别于基线、第2周、第4周和第12周观察并记临床表现、实验室检查结果，进行健康评价问卷(HAQ)和健康调查简表（SF-36）问卷调查及12关节超声评分[3]，分析Breg细胞及相关细胞因子与之的相关性。<br>　　结果：1.基线期RA患者CD19+CD24hiCD38hi Breg细胞及细胞因子IL-10、TGF-β表达明显低于正常对照组（P<0.05）。2.随着治疗时间的延长，RA患者关节压痛、肿胀等临床症状、实验室指标及影像学检查均改善（P<0.05），RA患者CD19+CD24hiCD38hi Breg的表达率逐渐增多（P<0.05），RA患者CD19+CD24hiCD38hi Breg的表达率与RA的活动度呈负相关（基线期与DAS28、CDAI、SDAI之间的相关系数r值分别为-0.62，-0.56，-0.57，P<0.05）。3.治疗3月后，RA缓解组患者外周血中CD19+CD24hiCD38hi Breg比率（8.39±0.53％）显著高于未缓解组（6.78±1.01%）。4.随着Breg细胞表达增多，Th17及其相关因子IL-1β、IL-6、IL-17a、IL-23和TNFα的表达均逐渐下降，Treg的表达逐渐增多，Th17/Treg比值下降，IL-10表达水平增多，Breg细胞比率与血清IL-10水平正相关。<br>　　结论：1.基线期，RA患者外周血中CD19+CD24hiCD38hi Breg细胞、TGF-β、IL-10的表达水平均明显低于健康人。随着治疗时间的延长，RA患者临床表现、实验室指标及影像学指标均逐渐改善，CD19+CD24hiCD38hiBreg的表达率逐渐增多，且CD19+CD24hiCD38hiBreg的表达率与病情活动性评分呈负相关，推测 CD19+CD24hiCD38hiBreg细胞负向调控作用的缺失可能参与了RA发病机制。2. RA患者CD19+CD24hiCD38hiBreg的表达率逐渐增多，Th17及其相关因子IL-1β、IL-6、IL-17a、IL-23、TNFα及Th17/Treg比值均逐渐下降，Treg的表达率逐渐增多，但未发现CD19+CD24hiCD38hi Breg细胞与Treg之间表达水平相关性，提示Breg和Th17/Treg细胞二者可能在RA发病中存在不同调控途径。