关键词： Bla细胞   自身免疫性胆管炎   调节紊乱   调节性B细胞   腹腔  

摘要： 原发性胆汁性胆管炎(PBC)是一种自身免疫性肝脏疾病,它的典型特征是肝脏有大量淋巴细胞浸润在胆管周围,并且血清中有高滴度的由自身反应性B细胞分泌的抗线粒体抗体AMAs。有很多因素参与到PBC的发病过程中,包括免疫失调、遗传的易感性以及环境因素等。已有的研究指出B细胞在PBC的发病过程中的作用十分复杂,根据情况不同,可能发挥致病性作用或者免疫调节性功能。但是其具体机制尚不清楚,仍然需要进一步研究和探索。B细胞是一类重要的免疫细胞,主要分为2个亚群,即B1细胞(包含B1a细胞和Blb细胞)和B2细胞。这两个B细胞亚群在前体细胞来源、发育途径、组织分布、表型及功能等方面存在差异。在自身免疫性疾病发生过程中,一般认为B细胞通过分泌抗体发挥致病性作用。但最近的研究发现B细胞除了包含发挥致病性功能的亚群,同时还具有免疫调节性功能的亚群。调节性B细胞(Breg细胞)发挥功能的机制主要包括产生IL-10和TGF-β、参与次级抗原递呈、与致病性T细胞相互作用以及诱导调节性T细胞(Treg细胞)的产生等。B1细胞是一个特殊的B细胞亚群,大量存在于腹腔及胸腔中,主要通过分泌天然抗体、作为抗原递呈细胞以及分泌细胞因子来发挥免疫保护作用。B1细胞来源的天然抗体在细菌和病毒感染过程中发挥重要的保护作用。Bla细胞是腹腔B1细胞中的主要亚群,Bla细胞经典的功能包括产生血清中静息状态的IgM、分泌肠道IgA以及发挥免疫调节功能等。B1a细胞是抗炎性细胞因子IL-10的主要来源,并且在接触性超敏反应模型以及病理条件下能够发挥免疫调节性功能。为了更好的阐明B细胞亚群在PBC发病进程中的作用,我们以p40-/-IL-2Rα-/-小鼠以及被广泛研究的dnTGF-βRII小鼠作为PBC的模型鼠展开研究。本论文主要探究了p40-/-IL-2Rα-/-小鼠中腹腔B1a细胞的紊乱与自身免疫性胆管炎的关系,同时利用dnTGF-βRⅡ小鼠腹腔B细胞的共转输实验对模型鼠中腹腔B细胞的免疫调节性功能进行验证。目前取得的结果如下：1.p40-/-IL-2R α-/-模型鼠腹腔徽环境改变影响腹腔B细胞数目并与肝脏炎症具有相关性为了探究p40-/-IL-2Rα-/-模型鼠肝脏损伤时腹腔微环境的变化,通过检测腹腔中各细胞亚群数量,我们发现模型鼠中腹腔总细胞数目显著增多,且增多的主要是T细胞,尤其是致病性的CD8+T细胞,而B细胞数目显著减少。进一步研究表明模型鼠腹腔CD4+和CD8+T细胞分泌Thl型炎性细胞因子IFN-γ的能力显著增强。通过检测腹腔灌洗液中炎性细胞因子的水平,我们发现促炎性细胞因子TNF和MCP-1水平显著升高,这可能是导致腹腔各细胞亚群改变的原因。通过相关性分析,发现模型鼠中腹腔总细胞数与肝脏单个核细胞数呈正相关,腹腔中B1a细胞占B细胞的比例与腹腔及肝脏单个核细胞数呈负相关,且腹腔中Bla细胞占B细胞的比例与腹腔及肝脏中致病性的CD8T细胞的比例呈负相关。2. p40-/-IL-2Rα-/-模型鼠腹腔Bla细胞数目减少且功能性分子改变通过对PBC模型鼠发病过程中腹腔B细胞的详细检测,我们发现相比于对照鼠,模型鼠腹腔B1a及B1b细胞的比例和数目显著降低,而且模型鼠腹腔Bla细胞的比例随着年龄增长逐渐降低。进一步的机制研究表明模型鼠腹腔Bla细胞增殖能力显著降低且凋亡水平显著升高。模型鼠腹腔B1a细胞数目显著减少的同时,与Bla细胞免疫调节性功能相关分子,包括IL-10, CTLA-4和GITR的表达水平都显著下降；与B1a细胞活化及免疫共刺激相关分子CD44和CD80的表达水平明显降低。通过对另一种PBC模型鼠,即dnTGF-βRII小鼠的表型检测,我们发现与p40-/-IL-2Ra-/-模型鼠类似, dnTGF-βRII小鼠腹腔B1a细胞比例下降,且表达IL-10、CTLA-4、CD44和CD80的水平同样显著低于同窝对照鼠。3. p40-/-IL-2Rα-/-模型鼠腹腔Bla细胞转录组学分析为了全面探究p40-/-IL-2Ra-/-模型鼠腹腔B1a细胞转录组变化及其内在机制,利用基因芯片技术并配合荧光定量PCR验证,我们发现与对照鼠相比,模型鼠腹腔Bla细胞有381个基因发生了显著变化(2倍以上差异),其中包含大量细胞因子及其受体相互作用相关、转录因子活化相关及细胞周期相关基因的变化。且多个与B细胞功能相关的基因都发生了显著改变,其中具有免疫抑制性基序(ITIM)的分子CD72 (Cd72)、CD22 (Cd22)等表达显著上升,与流式结果一致的Cd44、Ctla4等表达显著下降,以及IL-10的上游抑制分子AHR (Ahr)等表达显著上升。这些发现详细地展示了模型鼠与对照鼠腹腔Bla细胞存在的差异,揭示了B1a细胞异常在PBC发病过程中的重要作用机制,并提示了

关键词： 过敏性紫癜   调节性B细胞   Th2细胞   IL-10   IL-4  

摘要： 第一部分过敏性紫癜患儿外周血调节性B细胞、Th2细胞及其相关细胞因子变化的研究目的:运用流式细胞术检测过敏性紫癜患儿外周血调节性B细胞(Bregs)、Th2细胞的表达情况,采用Luminex多功能液相芯片法检测过敏性紫癜患儿血清中与调节性B细胞、Th2细胞相关细胞因子IL-10和IL-4的水平变化,以便探索调节性B细胞、Th2细胞及其相关细胞因子在过敏性紫癜发病中的作用机制。方法:收集资料完整的过敏性紫癜患儿血清共50例,其中男性患儿31例,女性患儿19例,单纯皮疹型8例,关节型23例,胃肠型12例,肾炎型16例,运用流式细胞术检测过敏性紫癜患儿和19例正常健康儿童外周血中调节性B细胞、Th2细胞的表达情况;应用Luminex多功能液相芯片(Millipore公司)技术检测IL-10以及Th2相关细胞因子在过敏性紫癜患儿血清中的变化情况;并分析它们之间及其与过敏性紫癜临床病理参数之间的相关性。结果:(1)过敏性紫癜患儿外周血CD19+IL-10+B细胞显著低于正常健康儿童,(P=0.0004);(2)过敏性紫癜患儿外周血CD4+IL-4+T细胞显著高于正常健康儿童,(P<0.0001);(3)50例过敏性紫癜患儿血清中IL-10水平明显低于正常健康儿童,(P<0.0001);但IL-10的水平变化在过敏性紫癜患儿皮疹有无、关节病变、胃肠道反应、肾脏病变、感染、过敏源、血小板高低、年龄以及性别等临床各参数间并无明显统计学差异(P>0.05);(4)过敏性紫癜患儿血清中IL-4水平明显高于正常健康儿童(P=0.047);同时,IL-4的水平变化在过敏性紫癜患儿的关节病变、性别等临床参数间亦有明显的差异(P=0.0279,P=0.0324)。结论:(1)过敏性紫癜患儿外周血调节性B细胞的表达显著低于正常健康儿童。(2)Th2细胞在过敏性紫癜患儿中高表达。(3)过敏性紫癜患儿血清中细胞因子IL-10的水平低于健康儿童,而细胞因子IL-4的水平则高于健康儿童。(4)过敏性紫癜患儿血清中调节性B细胞、Th2细胞分泌的相应细胞因子IL-10、IL-4的水平与外周血调节性B细胞、Th2细胞的水平相关。第二部分过敏性紫癜患儿外周血调节性B细胞与Th2细胞相互关系及其生物学意义目的:利用T细胞、B细胞共培养体系,运用流式细胞仪检测技术研究Bregs与Th2之间的相互作用,为寻找过敏性紫癜新的治疗靶点提供理论依据。方法:收集健康儿童及过敏性紫癜患儿的外周单个核细胞,应用磁珠分选的方法分别收集CD19+B细胞、CD4+T细胞,分别使用LPS、激发型CD3和CD28抗体进行活化,将活化的B细胞与活化的T细胞进行共育后,应用流式细胞仪检测技术检测Bregs、Th2细胞的表达情况,研究Bregs与Th2之间的相关关系。结果:(1)T细胞、B细胞共培养体系中,过敏性紫癜患儿的B细胞组中CD19+IL-10+B细胞的数量明显低于来自健康儿童的B细胞组(P<0.05)。(P<0.05)。(2)T细胞、B细胞共培养体系中,来自过敏性紫癜患儿的T细胞组中,CD4+IL-4+T细胞的数量明显高于来自健康儿童的T细胞组(P<0.05)。结论:过敏性紫癜患儿中CD19+IL-10+Bregs在共培养后的活化比率低于正常儿童,或许与其数量及分泌IL-10的功能受限有关,从而不能抑制Th2细胞的分化。

关键词： 系统性红斑狼疮   调节性B淋巴细胞   体液免疫  

摘要： 目的:检测CD1d^(high)CD5^+CD19^+调节性B淋巴细胞数量的变化,讨论其对免疫功能的影响及其与SLE活动性指数的关系。方法:以10例健康人群和10例SLE为研究对象,检测CD1d^(high)CD5^+CD19^+B细胞的含量。同时,检测各受试者的IgG和IgM水平。结果:正常对照组CD1d^(high)CD5^+CD19^+B细胞占B淋巴细胞百分比平均为0.20%±0.21%,SLE组CD1d^(high)CD5^+CD19^+B细胞为0.83%±0.28%,前者明显低于后者(P<0.01)。对照组和SLE患者的IgG含量分别为13.27±2.31和10.31±4.79,两者差异无统计学意义(P>0.05)。对照组和SLE患者的IgM含量分别为1.79±0.50和0.80±0.40,两者差异有统计学意义(P<0.05)。进行相关性分析,SLE组患者CD1d^(high)CD5^+CD19^+B细胞数与IgG水平呈负相关(r=-0.634 4,P<0.05),与IgM水平无相关性(r=-0.188 6,P>0.05),与活动性指数无相关性(r=0.242 3,P>0.05)。结论:SLE患者体内表达的CD1d^(high)CD5^+CD19^+B细胞显著高于正常对照组,且其细胞数与其IgG水平呈负相关,提示调节性B淋巴细胞在SLE病程过程中对机体的体液免疫调节可能起到一定作用。

关键词： 系统性红斑狼疮患者   调节性T细胞   B细胞表达   外周血单个核细胞   CD19^+   TGFβ   免疫系统异常   类风湿性关节炎  

摘要： 系统性红斑狼疮（SLE）的致病原因尚未完全阐明，可能与遗传、环境因素及免疫系统异常等相关。抗原提呈细胞、T细胞、B细胞、调节性T细胞、调节性B细胞的免疫细胞功能异常也与SLE的发病密切相关。调节性B细胞减少或功能障碍可能导致SLE、类风湿性关节炎及ANCA相关性血管炎等风湿性疾病。

关键词： 系统性红斑狼疮   调节性T细胞   CD45RA   Foxp3   白细胞介素17  

摘要： 目的:采用体外实验观察系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者分泌白细胞介素17(interleukin,IL-17)的调节性T细胞在促进B细胞的存活及抗体分泌中的作用。方法 :采用流式细胞仪分选20例活动期SLE患者及20名健康对照者外周血调节性T细胞的3个功能亚群和B细胞,并分组、分条件共培养,分时段进行细胞功能实验。结果:在活动期SLE患者中,CD45RA-Foxp3low CD25+非抑制性调节性T细胞亚群分泌IL-17明显增加,能够增强CD19+B细胞存活并促进其抗体产生;而加入抗IL-17抗体阻断后,该群细胞的正向促进功能减退(P<0.05)。结论 :SLE患者中增多的不具抑制功能的CD45RA-Foxp3low CD25+调节性T细胞,可能通过分泌大量的IL-17,促进B细胞的存活、增殖,并向浆细胞分化,分泌大量的自身抗体,参与疾病的发生、发展。

关键词： 日本血吸虫   B淋巴细胞   调节性B细胞   白介素10   生长趋化因子β   干扰素γ  

摘要： 目的研究细菌脂多糖诱导BALB／c小鼠B淋巴细胞对日本血吸虫发育的影响。方法取T细胞缺陷的BALB／cnude小鼠18只．以及T／B细胞联合缺陷的BALB／cSCID小鼠23只．每鼠感染日本血吸虫尾蚴（30±1）条。用细菌脂多糖（LPS）腹腔注射诱导（100μg／ml．0．2ml／只，2周1次，共2--3次）nude小鼠（NL组，9只）和SCID小鼠（SL组，12只）。同时设置对照组，即以PBS处理nude小鼠（N组．9只）和SCID小鼠（S组，11只）。感染后28d、36d，分别解剖N、NL、S和SL各组小鼠（n=4／5，4／5，5／6，6／6）．肝门静脉灌注法收集血吸虫成虫，计算成虫检获率，测量体长，记录雌雄合抱数。取肝组织经5％KOH溶液消化后．计数虫卵，计算每克肝组织虫卵数。摘除眼球取血，检测外周血中转化生长因子（TGF—β）、γ干扰素（IFN-γ）和白介素10（IL-10）水平。取脾组织制备脾细胞悬液，检测脾淋巴细胞中调节性B细胞（regulatoryBcells，Bregs）所占比例。结果感染后28d，NL、N组雄虫体长分别为（7．66±2．85）mm和（5．28±1．64）mm（P〈0．01）．雌虫体长分别为（9．64±1．99）mm和（7．49±1．63）mm（P〈0．01）。感染后36d，NL组每克肝组织虫卵数（1088±297）明显高于N组（715±404）（P〈0．05），sL组的（217±33）明显低于S组（573±160）（P〈O．01）。感染后28d、36d，N组脾淋巴细胞中CDld CD5＋CDl9＋Bregs所占比例分别为（12．73±0．96）％和（37．15±3．04）％（P〈0．05），与NL组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。感染后28d，N、NL组血清中TGF—β水平分别为（101．75±46．72）pg／ml和（260．90±45．34）pg／ml，IFN-γ水平分别为（7．91±1．62）pg／ml和（14．11±3．72）pg／ml，两组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。感染后36d，S、N组血清中IL-10分别为（41．85±3．14）pg／ml、（66．25±4．16）pg／m]，SL、NL组分别为（44．48±3．87）pg／ml、（72．22±17．76）pg／ml，两种小鼠比较差异具有统计学意义（P〈0．01），但LPS处理组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论LPS可诱导日本血吸虫感染BALB／c小鼠B细胞释放TGF-β等细胞因子．促进日本血吸虫雌雄成虫的早期发育。

关键词： 系统性红斑狼疮   B细胞   发病机制   特异性自身抗体   调节性   自身免疫疾病   免疫调节作用   分泌细胞因子  

摘要： B细胞通过产生特异性自身抗体在自身免疫疾病发生发展中有着重要作用。近年来研究证实,B细胞在免疫反应中同时具有正向调节和负向调节作用。B细胞通过产生抗体、诱导T细胞活化产生正向调节作用,同时B细胞也可以分泌细胞因子发挥负向免疫调节作用。

关键词： 调节性B细胞   流式细胞术   食管癌   B10   Br3   Breg  

摘要： 目的检测食管癌患者围手术期外周血调节性B细胞的表达水平,分析其与手术疗效的关系。方法收集食管癌患者和体检健康者的外周血标本,用Ficoll试剂提取单个核细胞(PBMC),用流式细胞术(FCM)检测术前、术后1 d、术后7 d的食管癌患者及体检健康者调节性B细胞(包括B10、Br3及Breg)的表达水平。结果食管癌患者CD5+CD19+细胞、B10细胞和Breg细胞表达水平分别为(3.20±0.35)%、(2.52±0.37)%和(8.39±0.92)%,均高于健康人对照组(1.77±0.25)%、(1.57±0.28)%和(2.96±0.23)%,差异有统计学意义(P均<0.05),而Br3细胞(6.07±0.46)%与健康人对照组(5.93±0.28)%比较差异无统计学意义(P>0.05);与术前比较,食管癌患者B10、Br3细胞术后1 d表达水平明显升高,Breg细胞表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P均<0.05),而术后7 d与术前比较,CD5+CD19+细胞、B10和Breg细胞差异均有统计学意义(P均<0.05);与术后1 d与术后7 d比较,仅CD5+CD19+、B10、Br3细胞表达水平差异有统计学意义(P均<0.05)。结论食管癌患者围手术期外周血调节性B细胞的表达水平呈现动态变化,可用于手术疗效监测。

关键词： 急性胰腺炎   调节性B细胞   流式细胞术   白细胞介素10   共刺激分子  

摘要： 目的：探讨调节性B细胞（ regulatory B cells ， Bregs ）在急性胰腺炎发病机制中的作用。方法流式细胞仪检测急性胰腺炎患者（其中轻型胰腺炎36例，重症胰腺炎15例）外周血CD19^＋IL-10^＋、CD19^＋CD24^hiCD27^hi Bregs 比例及CD19^＋CD24^hi CD27^hi Bregs 表面共刺激分子CD80和CD86，并与淋巴细胞数、C反应蛋白（CRP）作相关性分析。结果重症胰腺炎、轻型胰腺炎患者外周血中淋巴细胞数、CD19^＋淋巴细胞数、CD19^＋IL-10^＋、CD19^＋CD24^hi CD27^hi Bregs及CD19^＋CD24^hi CD27^hi Bregs细胞表面CD80、CD86平均荧光强度均明显低于正常对照组，重症胰腺炎组淋巴细胞数、CD19^＋淋巴细胞数、CD19^＋IL-10^＋绝对数、CD19^＋CD24^hiCD27^hi Bregs绝对数及CD19^＋CD24^hiCD27^hi Bregs细胞表面CD80和CD86平均荧光强度低于轻型胰腺炎组。动态观察结果显示，随着疾病的进展，轻型胰腺炎组CD19^＋IL-10^＋、CD19^＋CD24^hiCD27^hi Bregs均先降低后明显升高；而重症胰腺炎组CD19^＋IL-10^＋、CD19^＋CD24^hiCD27^hi Bregs却持续降低。相关性分析显示，CD19^＋IL-10^＋与CD19^＋CD24^hiCD27^hi Bregs， CD19^＋淋巴细胞数成明显正相关，而与CRP 成明显负相关。结论 CD19^＋IL-10^＋与 CD19^＋CD24 hi CD27^hi Bregs细胞数量及功能异常可能是导致急性胰腺炎患者免疫功能紊乱的重要原因之一。