关键词： 肝炎,丙型,慢性   调节性B细胞   调节性T细胞  

摘要： 目的：探讨慢性丙型肝炎患者外周血IL-10＋CD1＋9调节性B细胞（regulatory B cells，Breg）和CD ＋4 CD ＋25 high 调节性 T 细胞（regulatory T cells，Treg）的表达及其相互关系。方法选取慢性丙肝患者45例，健康对照者25例。流式细胞术分析外周血 Breg 和 Treg 的表达情况，并进行相关性分析，ELISA 测定血清IL-10和 TGF-β水平。结果慢性丙肝组 Breg 较健康对照组显著升高，差异有统计学意义[3．55％（2．40％～4．14％）比1．66％（1．24％～2．02％），t ＝6．78，P ＜0．01]，同时慢性丙肝组 Treg 也显著高于对照组，差异有统计学意义[4．55％（3．35％～5．88％）比2．05％（1．39％～2．61％），t ＝7．17，P ＜0．01]。丙肝组 Breg 与 Treg存在正相关关系（r ＝0．374，P ＝0．019），对照组则无此相关性。慢性丙肝组血清 IL-10表达水平显著高于对照组，差异有统计学意义[（78．65±17．21）pg／mL 比（53．21±11．47）pg／mL，t ＝7．51，P ＜0．001]。结论Breg 和 Treg 可能在 HCV 慢性感染过程中通过分泌 IL-10发挥免疫抑制作用，促进 HCV 的持续感染和特异性T 细胞的功能缺失。

关键词： B淋巴细胞   调节性B细胞   肿瘤   肿瘤免疫  

摘要： B淋巴细胞作为体液和细胞免疫的重要组成部分,能够通过多种调控方式发挥正性免疫调节作用。然而,越来越多的研究表明,B淋巴细胞亦可通过多种途径参与机体的免疫抑制调节,其中在肿瘤中以免疫抑制作用为主。目前研究多关注于B淋巴细胞特殊亚型-调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)在肿瘤中发挥的免疫抑制性作用,并通过分泌多种细胞因子、调控T细胞的作用以及直接作用于恶性肿瘤细胞等多途径影响肿瘤的发生发展进程。本文就B淋巴细胞在肿瘤免疫抑制机制研究的最新进展作一综述,为B淋巴细胞作为抗肿瘤潜在治疗靶点及治疗策略提供新的思路。

关键词： 系统性红斑狼疮   白介素35   调节性B细胞   发病机制  

摘要： 研究背景：\n 系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种表现有多系统损害慢性自身免疫疾病，其临床特征是产生大量自身抗体和多系统、器官受累。该病女性发病率高于男性，比例约为9:1，且多见于育龄期妇女，对患者的健康和生活质量造成了重大危害，但SLE的发病机制尚不明确，遗传、环境、雌激素、免疫等因素都可能与之相关，免疫失衡贯穿整个发病过程，B细胞和T细胞是SLE发病的重要参与者。既往认为B细胞主要通过分泌大量自身抗体，形成免疫复合物，参与体液免疫或直接对机体造成损害。但最近几年发现在实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)小鼠模型中，缺乏B细胞和CDl9-/-的小鼠病情更加严重，提示B细胞可以缓解病情，推测B细胞有负性调节作用。2006年，Mizoguchi等提出通过分泌IL-10、TGF-β、IL-35等负性调节因子，发挥负性免疫调节作用的B细胞群体称为调节性B细胞（Bregs）。Bregs可以通过调节Thl/Th2平衡抑制有害免疫应答，或可以直接减缓免疫细胞介导的炎症反应。Bregs已成为近几年研究热点，在多种疾病（如多发性硬化、类风湿关节炎、炎性肠病、肿瘤、移植、感染、慢性肝炎等）中参与免疫调节，与疾病的发生、发展、转归密切相关。\n 近年的研究发现，调节性B细胞还有一种新的亚群—白介素35阳性调节性B细胞（IL-35+Bregs）,一些研究证明IL-35和IL-35+Bregs在多种动物实验模型中参与发病，如在缺乏表达IL-35+Bregs的实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠模型中调节性B细胞丧失功能，出现神经系统的脱髓鞘病变[5]。动物实验提示IL-35+Bregs主要通过分泌IL-35发挥免疫作用，IL-35是IL-12家族中的新成员，由EB病毒诱导基因3（Epstein-Barr virus-induced gene3，EBI3）蛋白和IL-12p35（IL-12A）亚基组成的异源二聚体， IL-35可反复诱导IL-35+Bregs细胞及IL-35的再分泌，形成正反馈机制。IL-35也可由调节性T细胞（Tregs）分泌，与Bregs可能有协同作用。IL-35+Bregs作为一种新的负性免疫调节的关键细胞，在体内发挥强有力的抗炎作用。事实上，IL-35可以抑制Th17细胞，在小鼠胶原性关节炎（CIA）、实验性自身免疫性脑炎(EAE)、实验性自身免疫性心肌炎(EAM)中缓解病情，提示IL-35在自身免疫性疾病中起着重要免疫调节的作用，另在MRL/PrA鼠模拟的系统性红斑狼疮模型研究经IL-35治疗的鼠肾炎指标可以得到改善。在SLE患者中血浆IL-35表达下调，与病情活动程度呈负相关，提示IL-35可能参与SLE的发病，而IL-35+Bregs通过分泌IL-35发挥重要的免疫调节作用。\n 因此，我们初步推测IL-35+Bregs可能参与SLE的发生、发展。本研究采用流式细胞术检测SLE患者和健康对照者外周血中CD19+IL-35+Bregs细胞及D4+CD25+F OXP3+Tregs细胞的比例，同时应用ELISA技术检测细胞培养上清中IL-35水平，分析其与疾病活动的关系，探讨IL-35+Bregs细胞及其效应细胞因子在SLE发病机制中的作用。\n 研究目的：\n 检测系统性红斑狼疮患者外周血中IL-35+CD19+Bregs细胞的表达，探讨IL-35+CD19+Bregs细胞在SLE发病机制的作用。\n 研究方法：\n 选择50例SLE患者（其中活动期30例，稳定期20例）和20例健康对照者为研究对象，分离外周血单个核细胞(PBMCs)，以LPS和hINF-γ刺激 PBMCs并进行培养，用流式细胞术分析外周血IL-35+CD19+Breg细胞CD4+CD25+FOXP3+Tregs细胞的表达；ELISA方法检测培养上清中白细胞介素（IL）-35的水平。\n 研究结果：\n 一、外周血IL-35+CD19+Bregs细胞检测结果：\n 1、外周血IL-35+CD19+Bregs细胞的表达：\n 外周血IL-35+CD19+Bregs细胞的表达(IL-35+CD19+Bregs／CD19+B细胞)：活动期SLE患者外周血中IL-35+CD19+Bregs细胞的表达为(1.43±0.67)％，稳定期SLE患者组为(2.27±0.68)％，两组比较P＜0.01；活动期SLE组和正常对照组[(4.24±1.11)％]比较P＜0.01；稳定期SLE患者组与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。\n 2、外周血IL-35+CD19+Bregs细胞的表达与疾病活动程度的相关性：\n SLE患者外周血C

关键词： 调节性B细胞   视神经脊髓炎谱系疾病   体液免疫   流式细胞术  

摘要： 目的:本研究旨在分析比较NMOSDs患者与正常对照组外周血单个核细胞中不同Bregs表型的数量及临床意义,并探讨不同Bregs表型与NMOSDs疾病严重程度的相关性,进一步揭示Bregs在NMOSDs发病过程中起到的重要作用,为今后NMOSDs的治疗提供新的方法。对象与方法:选取2015年5月至2016年3月之间就诊于吉林大学第一医院神经内科住院部的NMOSDs患者22例,同期选取年龄性别匹配的健康志愿者20例。所有患者按2015年最新NMOSDs诊断标准经2位神经免疫专业医生诊断。本实验征得研究对象或家属的同意后签署知情同意书,并收集NMOSDs患者的临床资料,对NMOSDs组患者进行EDSS评分评估疾病的严重程度。1.流式细胞术检测NMOSDs组和对照组外周血单个核细胞中Bregs三种不同表型CD19+CD24hiCD27+、CD19+CD5+CD1dhi、CD19+CD24hiCD38hi的百分数,并分析其比例变化;2.分析Bregs不同表型与NMOSDs患者EDSS评分和年复发率(ARR)的相关性。结果:***组外周血CD19+CD24hiCD38hiBregs的数量(4.07±0.03)水平较对照组相比明显降低(5.65±0.02),两者差异有统计学意义(P<0.05);***组外周血CD19+CD24hiCD27+Bregs的数量(34.74±0.10)水平较对照组相比明显升高(26.23±0.11),两者差异有统计学意义(P<0.05);***组外周血CD19+CD5+CD1dhiBregs的数量(2.78±0.02)水平较对照组相比明显降低(5.73±0.03),两者差异有统计学意义(P<0.001);4.不同Bregs表型与NMOSDs患者EDSS和年复发率ARR无明显的相关性(P>0.05)。结论:***患者外周血CD19+CD5+CD1dhi、CD19+CD24hiCD38hiBregs表型占CD19+B细胞的比例较对照组明显降低;***患者外周血CD19+CD24hiCD27+Bregs表型占CD19+B细胞的比例较对照组明显增高;3.不同Bregs表型与NMOSDs患者EDSS和年复发率ARR均无明显的相关性。

关键词： 肾细胞癌   TIM-3   多态性   肿瘤浸润淋巴细胞   调节性B细胞  

摘要： 研究目的近年肾细胞癌发病率在男性恶性肿瘤中位居第7,作为泌尿系统常见肿瘤之一发病率以每年2-4%的幅度递增。外科手术对于大多数肾细胞癌患者而言是最主要的治疗方式,它在早期肾癌患者中已取得很好的疗效,但对多数肾癌患者而言,切除肾脏原发灶后,影响患者生存率和死亡率的主要因素仍然是肿瘤的复发和转移。而且肾癌对放化疗敏感性较差,5年生存率在发生转移后降至5-10%。因此,进一步探索新的抗肾癌手段,增强机体抗肿瘤的能力,具有极为重要的意义。T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子3(TIM-3)作为免疫球蛋白超族成员,在完全分化的Th1淋巴细胞上高表达,同时也是Th1 CD4+细胞的特异性细胞标志物。已有研究表明TIM-3可以抑制IL-2和γ-IFN的产生,从而加速肿瘤细胞的扩散;同时在部分肿瘤(胃癌、大肠癌等)患者及动物的CD4+、CD8+T淋巴细胞上大量表达的TIM-3还能发挥负向调节T细胞免疫应答的作用,诱导T淋巴细胞的功能减弱及凋亡,进而削弱机体抗肿瘤免疫能力。但是TIM-3在肾癌患者中起到何种作用,其对肿瘤患者的哪些免疫细胞有调节作用,其具体机制如何,目前尚未见报道。一个生物群体中同时和经常存在两种或两种以上的不连续的变异型或基因型或等位基因被称为多态性,单核苷酸多态性是最常见的多态性类型之一。基因多态性在临床工作中的重要意义在于被用于分析人体对疾病、毒物等的易感性和耐受性、疾病临床表现多样性及对药物治疗反应性等。目前关于TIM-3的多态性表现已有文献报道,但是关于其与肾癌易感性之间的相关性如何未见报道。本课题基于上述原因拟研究TIM-3多态性与肾癌易感性之间的关系,同时探讨不同肾癌分期患者体内TIM-3的分布情况、TIM-3与不同分期肾癌患者Th1、CD4+、CD8+Treg、Breg等免疫细胞功能的关系,探讨TIM-3参与细胞免疫调节的作用及机制,进一步明确不同分期的肾癌患者体内TIM-3所起的作用是否不同,为探索新的治疗肾癌的方法充实理论基础。研究方法第一部分:本实验首先收集322名肾癌患者和402名健康人的血液,主要运用聚合酶链式反应-限制片段长度多态性分析技术,对TIM-3基因多态性中最常见的三种类型(即-1516G/T,-574G/T和+4259T/G)进行基因分型,据此评估在中国人群中,TIM-3多态性是否和肾癌的易感性存在有关性。第二部分:在实验的第二部分,我们收集了30名肾癌患者的肿瘤组织标本及外周血,同时采集来自10名健康体检人群的外周血标本作为实验对照,使用流式细胞术、实时定量PCR等技术,研究TIM-3在TIL CD4+T细胞和TIL CD8+T细胞上的表达及功能情况,用于明确TIM-3在肾癌中对肿瘤浸润淋巴细胞发挥的作用。第三部分:我们收集了8名I、II期肾癌患者与7名III、IV期肾癌患者的肿瘤组织标本及外周血,统计肿瘤大小及有无远处转移等情况,通过细胞分离、ELISAs及T细胞增殖和促炎性细胞因子检测等方法,分别研究外周血及肿瘤组织的各类细胞中,IL-10+细胞的分布情况、肿瘤浸润淋巴细胞中IL-10分泌型B细胞的表型、肿瘤浸润型B细胞中抗体的分泌情况、肿瘤组织中IL-10分泌型B细胞的免疫抑制功能及其与TIM-3和肾癌临床进展的相关性。结果1.第一部分(1)-574G/T和+4259T/G单核苷酸多态性在肾癌患者中的发生率明显高于对照组,而-1516G/T SNP单核苷酸多态性的发生率没有统计学差异。同时,-574G/T和+4259T/G等位基因在肾癌患者中也明显增加。(2)TIM-3-574G/T和+4259T/G SNPs互相之间具有较强的LD,而-1516G/T和-574G/T,或者-1516G/T和+4259T/G之间没有LD,肾癌患者中TTG的单体型的发生率明显高于对照组。(3)与未发生转移的患者相比,转移患者中+4259T/G等位基因的发生率明显增加,然而这些多态性在糖尿病和肿瘤组织学类型中并没有显示出任何差别。2.第二部分(1)TIM-3在肾癌患者的TIL CD4+和TIL CD8+细胞上的表达显著升高了,而且与肿瘤分期具有一定的相关性;(2)在TIL TIM-3(+)细胞上,GATA-3和IFN-γ表达下调了,而T-bet的表达上调了。此外,研究结果显示TIM-3阳性CD8+T细胞的STAT5的磷酸化水平较TIM-3阴性对照组降低了60.5%,同样的,与TIM-3(-)相比,p38在TIL TIM-3(+)CD8+T细胞中的磷酸化水平下降了30.6%,这些结果提示在肾细胞癌中TIM-3阳性肿瘤浸润性T细胞的Stat5和p38信号通路受损;(3)使用s TIM-3处理过TIL CD4+T和CD8+T细胞后,其中的CFSE细胞的百分比显著提高,这一结果表明阻断TIM-3通路可以强化TIL增殖。此外

关键词： 过敏性紫癜   调节性B细胞   Th2细胞   IL-10   IL-4  

摘要： 第一部分过敏性紫癜患儿外周血调节性B细胞、Th2细胞及其相关细胞因子变化的研究目的:运用流式细胞术检测过敏性紫癜患儿外周血调节性B细胞(Bregs)、Th2细胞的表达情况,采用Luminex多功能液相芯片法检测过敏性紫癜患儿血清中与调节性B细胞、Th2细胞相关细胞因子IL-10和IL-4的水平变化,以便探索调节性B细胞、Th2细胞及其相关细胞因子在过敏性紫癜发病中的作用机制。方法:收集资料完整的过敏性紫癜患儿血清共50例,其中男性患儿31例,女性患儿19例,单纯皮疹型8例,关节型23例,胃肠型12例,肾炎型16例,运用流式细胞术检测过敏性紫癜患儿和19例正常健康儿童外周血中调节性B细胞、Th2细胞的表达情况;应用Luminex多功能液相芯片(Millipore公司)技术检测IL-10以及Th2相关细胞因子在过敏性紫癜患儿血清中的变化情况;并分析它们之间及其与过敏性紫癜临床病理参数之间的相关性。结果:(1)过敏性紫癜患儿外周血CD19+IL-10+B细胞显著低于正常健康儿童,(P=0.0004);(2)过敏性紫癜患儿外周血CD4+IL-4+T细胞显著高于正常健康儿童,(P<0.0001);(3)50例过敏性紫癜患儿血清中IL-10水平明显低于正常健康儿童,(P<0.0001);但IL-10的水平变化在过敏性紫癜患儿皮疹有无、关节病变、胃肠道反应、肾脏病变、感染、过敏源、血小板高低、年龄以及性别等临床各参数间并无明显统计学差异(P>0.05);(4)过敏性紫癜患儿血清中IL-4水平明显高于正常健康儿童(P=0.047);同时,IL-4的水平变化在过敏性紫癜患儿的关节病变、性别等临床参数间亦有明显的差异(P=0.0279,P=0.0324)。结论:(1)过敏性紫癜患儿外周血调节性B细胞的表达显著低于正常健康儿童。(2)Th2细胞在过敏性紫癜患儿中高表达。(3)过敏性紫癜患儿血清中细胞因子IL-10的水平低于健康儿童,而细胞因子IL-4的水平则高于健康儿童。(4)过敏性紫癜患儿血清中调节性B细胞、Th2细胞分泌的相应细胞因子IL-10、IL-4的水平与外周血调节性B细胞、Th2细胞的水平相关。第二部分过敏性紫癜患儿外周血调节性B细胞与Th2细胞相互关系及其生物学意义目的:利用T细胞、B细胞共培养体系,运用流式细胞仪检测技术研究Bregs与Th2之间的相互作用,为寻找过敏性紫癜新的治疗靶点提供理论依据。方法:收集健康儿童及过敏性紫癜患儿的外周单个核细胞,应用磁珠分选的方法分别收集CD19+B细胞、CD4+T细胞,分别使用LPS、激发型CD3和CD28抗体进行活化,将活化的B细胞与活化的T细胞进行共育后,应用流式细胞仪检测技术检测Bregs、Th2细胞的表达情况,研究Bregs与Th2之间的相关关系。结果:(1)T细胞、B细胞共培养体系中,过敏性紫癜患儿的B细胞组中CD19+IL-10+B细胞的数量明显低于来自健康儿童的B细胞组(P<0.05)。(P<0.05)。(2)T细胞、B细胞共培养体系中,来自过敏性紫癜患儿的T细胞组中,CD4+IL-4+T细胞的数量明显高于来自健康儿童的T细胞组(P<0.05)。结论:过敏性紫癜患儿中CD19+IL-10+Bregs在共培养后的活化比率低于正常儿童,或许与其数量及分泌IL-10的功能受限有关,从而不能抑制Th2细胞的分化。

关键词： 胆汁性肝硬化   免疫机制   调节性B细胞   辅助性T细胞1   细胞分化  

摘要： 原发性胆汁性肝硬化(Primary Biliary Cirrhosis，PBC)是一类进展缓慢的肝脏自身免疫性疾病。临床常见抗线粒体抗体(Antimitochondrial antibody，AMA)阳性、高水平的碱性磷酸酶等异常实验室指标;并伴有慢性胆汁淤积、非化脓性肝内胆管破坏等主要病理表现。中、晚期PBC患者的内科治疗没有满意的效果，且治疗手段比较单一。因此，对PBC的早期诊断治疗是非常必要的。目前，寻求新的治疗靶点是PBC研究的热点。<br>　　B淋巴细胞的异常活化，自身抗体的产生是诱导PBC发病的主要因素。B细胞不仅具备产生抗体、提呈抗原等作用，而且还可以负向调节机体的免疫应答。早在20世纪90年代就有研究者在自身免疫性实验性脑脊髓炎的小鼠模型实验中发现B细胞剔除后的小鼠病情恶化程度增高，并首次在小鼠体内发现调节性B细胞(regulatoryB cells，Bregs)。随后系列研究进一步证实Bregs的存在，并指出其在免疫调节作用的重要性。近年来，已有研究者分别在系统性红斑狼疮(Systemic LupusErythematosus，SLE)、天疱疮、血管炎等不同的自身免疫性疾病中研究CD19+CD24hiCD38hiBreg的生物特性及相关作用。然而，有关CD19+CD24hCD38hiBreg在PBC的研究目前尚未见任何阐述。<br>　　目的：<br>　　观察CD19+CD24hiCD38hiBreg在PBC患者外周血中的表达情况。分析该群细胞与疾病的相关性，并初步探讨PBC外周血中CD19+CD24hiCD38hiBreg对辅助性T细胞1(Thelper cell1，Th1)、辅助性T细胞17(T helper cell17，Th17)细胞分化的影响，为PBC免疫机制的研究及未来治疗策略的开发提供新的实验依据。<br>　　方法：<br>　　1.采集PBC患者组与健康对照组(HC)的EDTA抗凝血，密度梯度离心法提取外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)，流式细胞仪检测CD19+B细胞以及CD19+CD24hiCD38hiBreg在CD19+B细胞的表达频率。比较上述两者在PBC患者与正常人中的变化情况。<br>　　2.采集PBC患者组血清，用Modular PPT生化分析仪检测患者的ADA、ALT、AST、GGT、ALP、TBIL、DBIL、IBIL、TBA等肝功相关指标，分析其与CD19+CD24hiCD38hiBreg的相关性。<br>　　3.流式细胞仪检测HC组中Th1、Th17细胞的频率，分别与HC组的CD19+CD24hiCD38hiBreg进行相关性分析，初步分析HC组中Th1、Th17细胞的频率与CD19+CD24hiCD38hiBreg的潜在关系。<br>　　4.流式细胞仪检测PBC组中Th1、Th17细胞的频率，分别与PBC组的CD19+CD24hiCD38hiBreg进行相关性分析，初步分析PBC组中Th1、Th17细胞的频率与CD19+CD24hiCD38hiBreg的潜在关系。<br>　　4..流式分选正常人的CD4+T细胞与CD19+CD24hiCD38hiBreg、PBC的CD19+CD24hiCD38hiBreg。正常人CD4+T细胞单独培养作为对照;将正常人CD4+T细胞分别与正常人CD19+CD24hiCD38hiBreg、PBC患者的CD19+CD24hiCD38hiBreg共培养。流式检测Th1细胞的分化情况。<br>　　结果：<br>　　1.外周血中CD19+B细胞所占比例情况:PBC组为(12.210±6.204)％， HC组为(8.469±3.399)％;且具有显著差异(P=0.009)。此外，PBC组中CD19+CD24hiCD38hiBreg/CD19+B细胞的比例(12.379±6.417)％较HC组(4.225±3.318)％的比例增高，且具有统计学意义(p=0.000)。<br>　　***中CD19+CD24hiCD38hiBreg与TBIL(P=0.049, r=0.535)、DBIL(P=0.035,r=0.566)、IBIL(P=0.046，r=0.521)、TBA(P=0.014，r=0.619)呈正相关性。<br>　　3..HC组中Th1、Th17频率为(11.807±5.144)％、(0.846±0.904)％。其中HC组中CD19+CD24hiCD38hiBreg与

关键词： 肾病综合征   调节性B细胞   免疫平衡   细胞病理学   儿童患者  

摘要： 本文对调节性B细胞在儿童原发性肾病综合征Th17/Treg免疫失衡中的作用及机制进行了研究。本研究分为两个部分：　　第一部分：调节性B细胞（B10）功能紊乱可通过影响Th17/Treg免疫平衡，参与儿童原发性肾病综合征（PNS）发生、发展及转归。　　目的：探讨调节性B细胞（B10）及其不同亚群在儿童原发肾病综合征（PNS）外周血中的水平及功能，及其对Th17/Treg免疫平衡的影响。　　方法：收集2013年9月到2015年12月重庆医科大学附属儿童医院肾内科住院及门诊随访的PNS患儿共60例，其中急性期单纯性肾病综合征（SNS）25例，肾炎型肾病综合征（NNS）15例，恢复期单纯性肾病综合征（RM-SNS）12例，恢复期肾炎型肾病综合征（RM-SNS）8例;正常体检儿童外周血20例（Control）。分离的外周血单个核细胞（PBMC），一管中加入LPS（终浓度10μg/ml）培养7h，过程中加入PMA（终浓度50ng/ml），离子霉素（终浓度500ng/ml）2h后，BFA（1×）混匀，置于37℃、5％CO2孵箱中，用于Th17、B10以及 B10两个亚类（CD19+CD24hiCD38hiB细胞和CD19+CD24hiCD27+B细胞）IL-10分泌水平的检测;一管中只加入LPS（终浓度10μg/ml），置于37℃、5%CO2孵箱中培养7h，用于Treg细胞的检测。采用流式细胞术检测PBMC中 B10细胞（CD19+IL-10+B细胞）、CD19+CD24 hi CD38 hi B细胞、CD19+CD24hi CD27+B细胞， Th17细胞和 Treg细胞的百分比，以及 CD19+B细胞、CD19+CD24 hi CD38hiB细胞和CD19+CD24hi CD27+B细胞IL-10的表达水平，进一步分析B10及其亚群与Th17细胞和Treg细胞水平的相关性。　　结果：SNS、NNS组血浆 IgG水平显著降低（P＜0.001），而恢复期SNS、NNS组血浆IgG可恢复至正常。与正常组相比，Th17细胞的比例在SNS、NNS组中逐渐升高（P＜0.05）;而Treg细胞的比例则逐渐降低（P＜0.05）;与正常组相比，SNS、NNS组 Th17/Treg的比值显著增高（P＜0.05），而与SNS比较，NNS组Th17/Treg比值进一步增高（P＜0.05）。与正常组比较，急性期 SNS组、NNS组外周血 B10细胞、CD19+CD24hiCD38hiB细胞、CD19+CD24hiCD27+B细胞、CD19+CD24hiCD38hiIL-10+B细胞及 CD19+CD24hiCD27+ IL-10+B细胞水平均明显降低（P＜0.05）;相比急性期SNS组，急性期NNS组外周血B10细胞、CD19+CD24hiCD38hiB细胞、CD19+CD24hiCD27+ B细胞、CD19+CD24hiCD38hiIL-10+B细胞及CD19+CD24hi CD27+IL-10+B细胞水平均进一步降低（P＜0.05）;而分别与急性期 SNS组、NNS比较，恢复期 SNS组、NNS组 B10细胞、CD19+CD24hiCD38hiB细胞、CD19+CD24hiCD27+B细胞及CD19+CD24hiCD38hiIL-10+B细胞水平均明显增高（ P＜0.05）;但恢复期 SNS组、NNS组外周血CD19+CD24hiCD27+IL-10+B细胞水平分别与急性期SNS组、NNS组比较，有增高趋势，但无明显统计学差异（P＞0.05）。与正常组比较，恢复期 SNS组、NNS组 B10细胞、CD19+CD24hiCD38hiB细胞、CD19+CD24hiCD27+B细胞、 CD19+CD24hiCD38hiIL-10+B细胞及CD19+CD24hiCD27+IL-10+B细胞水平均无统计学意义（P＞0.05）。进一步发现儿童PNS（包括SNS组、NNS组）外周血B10细胞、CD19+CD24hiCD38hiB细胞、 CD19+CD24hiCD27+B细胞、CD19+CD24hiCD38hiIL-10+B细胞水平及CD19+CD24hi CD27+IL-10+B细胞与Th17细胞水平、Th17/Treg比值呈明显负相关（P＜0.05），而与Treg水平呈正相关关系（P＜0.05）。儿童PNS24小时尿蛋白定量与Th17细胞水平、Th17/Treg比值呈正相关关系（P＜0.05），而与B10细胞、CD19+CD24hiCD38hiB细胞、CD19+CD24hiCD27+ B细胞水平均呈负相关关系（P＜0.05）。　　结论：B10细胞及CD19+CD24hiCD38hiIL-10+B细胞、CD19+CD24hi CD27+IL-10+B细胞都可能参与了儿童P

关键词： 弥漫大B细胞淋巴瘤   调节性B细胞   白介素-10   利妥昔单抗  

摘要： 目的:本研究的目的是检测初治DLBCL患者接受利妥昔单抗联合化疗前后调节性B细胞比例及IL-10的分泌水平。研究DLBCL患者与健康对照组调节性B细胞比例、IL-10水平差异;DLBCL不同临床分期调节性B细胞比例、IL-10水平差异,利妥昔单抗联合化疗对Breg、IL-10的影响,探讨Breg在DLBCL发病机制中的作用和意义,及其作为判断疗效及预后指标的意义。方法:收集2013年12月-2016年1月在兰州大学第二医院血液科住院部确诊的初治DLBCL的患者20例,患者均应用利妥昔单抗(375mg/m2)联合化疗(经典R-CHOP方案)进行化疗。15例健康对照组。应用流式细胞术分别检测DLBCL患者化疗前、经1周期含利妥昔单抗联合化疗后和健康对照组Breg的比例(即CD19+CD24hiCD38hiB细胞占CD19+B淋巴细胞的比例);应用酶联免疫吸附法检测IL-10分泌水平变化。结果:***组化疗前Breg的比例明显高于正常健康对照组(2.88±0.58vs 0.98±0.42)%,差异有统计学意义(P<0.01);DLBCL组化疗后Breg的比例较化疗前(0.66±0.43 vs 2.88±0.58)%明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);DLBCL组化疗后与健康对照组(0.66±0.43 vs 0.98±0.42)%无统计学差异(P>0.05)。在不同分期阶段,DLBCL组临床晚期Breg的比例高于临床早期(3.38±0.45 vs 2.47±0.26)%,差异有统计学意义(P<0.01)。***组化疗前IL-10的分泌水平明显高于健康对照组(9.81±2.07 vs 4.99±1.36),差异有统计学意义(P<0.01);DLBCL组化疗后IL-10的分泌水平(3.94±0.87 vs9.81±2.07)较化疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);DLBCL组化疗后与健康对照组(3.94±0.87 vs 4.99±1.36)无统计学差异(P>0.05)。在不同分期阶段,DLBCL组临床晚期IL-10的分泌水平明显高于临床早期(11.56±1.13 vs2.47±0.26),差异有统计学意义(P<0.01)。***组化疗前后,Breg比例和I L-10分泌水平均呈正相关,差异有统计学意义(P<0.01);DLBCL组临床早期,Breg比例和I L-10分泌水平差异无统计学意义(P>0.05),两者无相关性;DLBCL组临床晚期,Breg比例和I L-10分泌水平均呈正相关,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:***患者存在Breg比例和IL-10分泌水平的变化,与健康对照组相比,Breg比例升高,IL-10分泌水平增加,提示Breg、IL-10参与DLBCL发病、发展过程;2.利妥昔单抗治疗可下调DLBCL患者外周血Breg的表达,抑制IL-10产生,两者呈正相关;***患者经利妥昔单抗治疗后,外周血Breg细胞的比例较治疗前减低,IL-10水平较治疗前降低,两者呈正相关。

关键词： 原发性干燥综合征   调节性B细胞   滤泡辅助T细胞   ESSDAI评分   原发性干燥综合征   转录组测序   microRNA   差异基因表达   干扰素   原发性干燥综合征   B细胞受体库   B细胞克隆  

摘要： 第一部分 原发性干燥综合征B细胞亚群特点及其调节功能研究背景和目的原发性干燥综合征(primary Sjogren's syndrome, pSS)是泪腺、唾液腺受累为主的慢性自身免疫性疾病,亦可出现多系统损害。pSS患者B细胞过度活化,导致高免疫球蛋白血症和多种自身抗体产生,唇腺组织大量B细胞及浆细胞浸润。调节性B细胞(regulatory B cells, Breg)是一类具有免疫抑制功能的B细胞亚群,主要通过分泌IL-10等发挥免疫调节功能。pSS患者Breg细胞在外周血和组织中表达异常或功能受损,可能导致了B细胞的异常活化。我们通过分析pSS患者B细胞亚群的主要变化及活化情况,Breg细胞对效应T细胞分化的调控影响,在唇腺组织中的表达情况,滤泡辅助T细胞(T follicular helper,Tfh)能否促进Breg细胞活化,以及Breg细胞与pSS患者临床特点的相关性,以期能够对Breg细胞在pSS发病机制中的作用做以初步阐释。方法共收集84例pSS患者和69例年龄性别匹配的健康对照者(healthy control, HC)外周血以及唇腺组织各8例,用于后续研究。分离pSS患者和HC外周血单个核细胞,流式细胞表面染色分析B细胞亚群比例变化,分析pSS患者B细胞亚群相关活化因子表达差异,利用流式细胞仪分选B细胞亚群进行形态学观察。观察pSS患者Breg细胞IL-10表达情况,流式细胞仪分选pSS患者和HC的Breg细胞,磁珠分选CD4+CD25-效应T细胞,体外进行混合淋巴细胞培养和交叉培养,收集培养上清,利用CBA技术检测培养上清中相关炎性细胞因子水平。利用免疫组化和免疫荧光方法,对pSS患者和HC中CD20、IL-10表达情况进行定性、半定量及共定位分析。流式细胞仪检测pSS患者和HC中Tfh、Tfh-IL-21和Breg-IL-21R表达情况,初步阐释IL-21对Breg细胞的调控作用。最后结合pSS患者临床资料,分析Breg细胞比例和临床特点之间的相关性。结果***患者外周血Breg细胞占CD19+B细胞比例(9.23±0.45%),较HC(2.55±0.16%)显著升高(p<0.001)；成熟B细胞比例(63.72±1.08%),较HC(56.50±1.14%)显著升高(p<0.001)；记忆性B细胞比例(6.34±0.46%),较HC(19.36±1.03%)显著降低(p<0.001)；CD19+CD24hiCD27+细胞比例(6.05±0.53%),较HC(16.39±1.15%)显著降低(p<0.001)。B细胞三个主要亚群在形态学上无显著性差异。***患者Breg细胞表面分子CD50、CD44、CD95、TACI表达水平较记忆性B细胞显著下降(p<0.05)；***患者CD19+B细胞表达IL-10水平为(8.23±1.91%),较HC(25.55±0.63%)显著降低(p<0.001)；Breg细胞IL-10表达水平为(28.43±5.49%),较HC(53.13±7.93%)显著降低(p=0.030)。4.进行混合淋巴细胞培养和交叉培养,培养上清检测结果提示：相较与HC,pSS患者的Breg细胞不能有效抑制其本身或HC的效应T细胞分泌的炎性细胞因子,IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17、IL-21以及IL-9(p<0.05)。5.在pSS患者的唇腺组织中可见大量CD20+B细胞浸润,而IL-10表达较少,且与HC的IL-10+细胞在唇腺组织中的分布部位存在差异,免疫荧光染色提示pSS患者唇腺组织中仅见少量散在CD20+IL-10+细胞表达。***患者外周血Tfh细胞比例(占CD4+T细胞)为(21.88±0.82%),较HC(17.91±0.88%)显著升高(p=0.002)；且CD4+CXCR5+PD-1+细胞(占CD4+T细胞)(7.42±0.80%)及CD4+CXCR5+ICOS+细胞水平(19.41±0.91%)亦较HC(1.71±0.12%,16.29±0.84%)显著增多(p<0.001,p=0.016)。pSS患者Tfh细胞IL-21表达水平(27.43±2.94%),较HC(9.97±1.91%)显著升高(p=0.018)。pSS患者Breg细胞IL-21R的表达(62.27±2.43%),较HC(75.25±2.18%)显著降低(p<0.001)。7.分离pSS患者和HC的CD19+B细胞进行体外培养,在加入CD40L和CpG基础上,增加/不增加rh IL-21刺激,观察Breg细胞IL-10表达。体外培养过程中rh IL-21可以显著提高pSS患者和HC的Breg细胞IL-10表达(p<0.05),提示在体内可能有其他因素影响IL-21对Breg细胞