关键词： 自身免疫性葡萄膜炎   间充质干细胞   辅助性T细胞17   调节性B细胞   疗效评价  

摘要： 目的:　　葡萄膜炎是一种常见的自身免疫性眼病.实验性自身免疫性葡萄膜炎(recurrent experimental autoimmune uveitis,EAU)主要致炎因子为Th17,目前发现调节性B细胞(Regulatory Bcells,Breg)可抑制Th17的分化及活性.间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一种具有免疫调节功能的成体干细胞,可调节多种免疫细胞的增殖和功能.本研究通过建立动物模型研究Th17及Breg细胞在诱导大鼠自身免疫性葡萄膜炎过程中的作用,并观察MSCs对EAU的治疗效果.　　方法:　　***培养:将SD大鼠骨髓间充质干细胞分离出来,并进行培养鉴定.　　2.动物模型建立:Lewis大鼠36只,各12只.MSCs干预组:光感受器间维生素A类结合蛋白(Interphotoreceptorbinding protein,IRBP)与弗氏完全佐剂(CFA)等体积混合并充分乳化后,尾静脉(1ml)+双侧大腿肌肉(各0.5ml)注射建立EAU动物模型,同时腹腔注射2mlMSCs悬液进行干预.模型对照组:相同方法建立EAU动物模型,同时腹腔注射2mlPBS进行干预.正常对照组;同部位同体积注射PBS建立模型,同时腹腔注射2mlPBS进行干预.　　3.临床观察:动物模型建立后,从第3天起每日在裂隙灯显微镜下观察大鼠眼部,并按照Caspi临床分级进行评分.　　4.组织病理学观察:正常对照组、MSCs干预组及模型对照组各4只,在动物模型建立后第7、14、21天分别处死,摘除眼球制备视网膜组织切片,并用HE染色后观察,按照Caspi组织学分级法进行评分.　　5.细胞因子检测:将大鼠麻醉后,取外周血,离心取上清,ELISA法检测血清中IL-17、IL-10、TGF-β的表达.　　***17细胞和Breg细胞检测:大鼠过量麻醉后,取外周血裂解后制成细胞悬液,摘除脾脏,研磨后分离细胞,流式细胞仪检测Th17细胞和Breg细胞的比例.　　结果:　　1.成功分离MSCs并用流式细胞仪鉴定.　　2.成功建立EAU动物模型.　　3.与模型对照组相比,MSCs干预组各个时间点大鼠眼部炎症表现均减轻(P<0.05);视网膜组织病理学炎症反应均减轻.(P<0.05).　　4.与模型对照组相比,MSCs干预组在各个时间点血清ELISA检测IL-17含量均降低(P<0.05),IL-10、TGF-β含量均升高(P<0.05).　　5.与模型对照组相比,MSCs干预组在各个时间点流式细胞仪检测Thl7细胞比例均降低(P<0.05),Breg细胞比例均升高(P<0.05).　　结论：　　Th17和Breg细胞的比例与EAU的发生、发展密切相关.MSCs治疗能够降低Th17、升高Breg在淋巴细胞中的比例,从而抑制EAU大鼠体内IL-17的分化及活性,提高IL-10、TGF-β的增殖与活性,抑制EAU炎症反应.

关键词： 红斑狼疮   自身免疫病   Foxd3基因   转录因子   白细胞介素-10   调节性B细胞   分化发育  

摘要： IL-10+调节性B细胞（Breg）通过分泌白介素-10（IL-10）在抑制过度炎性反应方面起到重要作用。然而调节性B细胞因在体内含量少，没有特异性表面标记，没有特异性转录因子，和分化发育机制不清楚等限制其将来临床应用。为了进一步深入研究调节性B细胞的分化发育机制，本研究首先关注了一个关键的科学问题：哪些转录因子能有效地调控调节性B细胞关键的标志性分子—IL-10的表达？　　目的：分析IL-10启动子上转录因子结合位点，检测Foxd3（经预测是结合在IL-10启动子上得分最高和结合位点最多的一个转录因子）在调节性B细胞中与IL-10分泌的相关性，阐明“Foxd3在调节性B细胞分化、发育、扩增及功能中的作用及机制”，并为靶向Foxd3信号通路促使调节性B细胞扩增及其对自身免疫病治疗提供理论及实验依据。　　方法：　　（1）通过两个网站为基础的预测软件，对IL-10启动子上转录因子结合位点进行分析;（2）应用染色质免疫共沉淀-PCR技术验证Foxd3是否能够直接结合在IL-10启动子上;（3）应用基因突变技术进一步证实Foxd3与IL-10启动子结合的具体相互作用位点;（4）通过双荧光素酶报告系统分析Foxd3是否调节IL-10启动子的活性;（5）应用实时定量PCR和免疫印迹技术检测LPS活化的B细胞中Foxd3的mRNA水平和蛋白水平表达;（6）应用Foxd3特异性shRNA敲低B细胞中Foxd3的表达，检测Foxd3表达降低是否影响IL-10的表达;（7）通过流式细胞术、酶联免疫吸附实验和免疫印迹技术，检测系统性红斑狼疮小鼠B细胞中Foxd3和IL-10表达的相关性。　　结果：　　（1）对小鼠IL-10启动子上转录因子结合位点进行分析，发现Foxd3是与IL-10启动子结合最强（得分最高）和最多（结合位点最多）的转录因子;（2）染色质免疫共沉淀-PCR技术鉴定出Foxd3能结合在IL-10启动子上游-1400bp位置;（3）通过构建截短型IL-10启动子，证明Foxd3通过与IL-10启动子结合位点p4（-1413）结合;通过构建截短型Foxd3蛋白，证实Foxd3通过一个N末端结构域结合在IL-10启动子上;（4）双荧光素酶报告系统分析显示，Foxd3能有效地抑制IL-10启动子的功能;（5）实时定量PCR和免疫印迹技术证实LPS活化的B细胞高表达Foxd3 mRNA和蛋白，并且Foxd3的表达随着LPS的刺激呈时间依赖性增加;（6）实时定量PCR、免疫印迹技术、流式细胞术和酶联免疫吸附实验检测结果显示Foxd3低表达的IL-10+调节性B细胞中IL-10的表达升高;（7）流式细胞术、酶联免疫吸附实验和免疫印迹技术结果表明，系统性红斑狼疮小鼠B细胞中Foxd3表达量升高而IL-10+调节性B细胞降低。　　结论：本研究表明无论是在体内还是体外，活化的B细胞上调Foxd3的表达。Foxd3通过直接结合IL-10的启动子，限制IL-10启动子的激活，进而抑制IL-10+调节性B细胞的产生。自身免疫病小鼠B细胞高表达Foxd3进而降低调节性B细胞的产生。这样，转录因子Foxd3通过抑制B细胞中白介素-10的表达抑制调节性B细胞的产生。　　这项研究不仅阐明了Foxd3抑制调节性B细胞产生的机制，而且为以Foxd3为潜在靶点诱导调节性B细胞产生来治疗自身免疫病的新方法奠定前期基础。因此，这项研究既丰富了调节性B细胞分化发育的基本理论又为调节性B细胞的可能应用奠定了坚实基础。

关键词： 原发性干燥综合征   调节性B细胞   白介素-17   抗SSA抗体   抗SSB抗体   疾病活动指数  

摘要： 目的:原发性干燥综合征（primary sj?gren’s syndrome,pSS）是一种以唾液腺高度淋巴细胞浸润,并具有高球蛋白血症为特征的弥漫性结缔组织病。临床表现主要包括口干燥症,干燥性角、结膜炎等外分泌腺受损的症状,同时也常伴有系统损伤,如肺间质纤维化、神经系统病变、肾小管酸中毒等。pSS病因及发病机制未明,其发病可能与感染、环境、遗传及免疫功能紊乱等因素有关。目前B淋巴细胞在自身免疫性疾病发病中的作用日渐受到重视。有研究显示调节性B细胞（regulatory B cell,Breg）及白介素-17（interleukin 17,IL-17）与pSS的发生发展密切相关。本研究通过检测调节性B淋巴细胞(CD19+CD24hiCD38hiBregs)及白介素-17在pSS患者外周血中的表达水平,分析两者与临床、系统受累情况、相关实验室指标、唇腺病理分级及疾病活动度的相关性,来探讨CD19+CD24hiCD38hiBregs及IL-17在pSS发生发展中的作用。方法:1病例选择:选取自2016年3月至2016年11月期间河北省人民医院风湿免疫科初治pSS患者30例作为实验组,均符合欧美共识小组（AECG）2002年修订版干燥综合征国际分类标准,并且排除Ig G4相关疾病（Ig G4 related disease,Ig G4-RD）等其他自身免疫性疾病、恶性肿瘤、获得性免疫缺陷综合征（Acquired Immune Deficiency Syndrome,AIDS）、移植物抗宿主病、病毒性肝炎、抗乙酰胆碱药物、糖皮质激素及免疫抑制剂应用者。选取健康志愿者20例为对照组,性别、年龄与实验组均匹配。2收集入选对象基本信息及临床资料:记录基本信息如性别、年龄、病程,临床症状及体征,实验室指标如白细胞计数（WBC）、红细胞计数（RBC）、血小板计数（PLT）、血红蛋白计数（Hb）、C反应蛋白（CRP）、血沉（ESR）、类风湿因子（RF）、抗核抗体（ANA）、ENA抗体谱、免疫球蛋白（Ig）、补体C3、C4。3实验方法:采用流式细胞术（FCM）检测实验组及对照组表型为CD19+CD24hi CD38hi的Bregs占CD19+细胞的百分比;酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测两组外周血清中IL-17的表达水平。4唇腺病理分级:无菌条件下取下唇腺活组织并应用福尔马林固定,经石蜡包埋,切片,HE染色。根据Chisholm标准分为0Ⅳ级。5 pSS疾病活动评估:根据2009年欧洲抗风湿病联盟（EULAR）制定的干燥综合征疾病活动度指数（ESSDAI）评估实验组疾病活动度。6数据处理:应用SPSS 21.0.0统计软件处理。计量资料符合正态分布的结果以均数±标准差（Xˉ±SD）表示,具有方差齐性的两组间比较应用独立样本t检验,多组样本间均数比较应用单因素ANOVA方差分析,相关分析应用Spearman相关分析;计量资料非正态分布的结果以中位数（四分位间距）[M（P25,P75）]表示,两组资料比较应用非参数Mann-Whitney U检验,多组间比较应用Kruskal-Wallace检验,相关分析应用Spearman相关系数检验。所有的统计检验均应用双侧检验,P值小于或等于0.05将被认为有统计学意义。结果:1 pSS组及健康对照组外周血CD19+CD24hiCD38hiBregs及血清IL-17表达水平:pSS组外周血中CD19+CD24hiCD38hiBregs占CD19+B淋巴细胞百分比为（4.18±1.98%）,较健康对照组（1.10±0.63%）显著升高（P<0.001）。血清IL-17的表达水平（17.99±9.88pg/ml）显著高于健康对照组（13.32±5.29pg/ml,P<0.05）;2 pSS患者外周血CD19+CD24hiCD38hiBregs及血清IL-17的表达水平与系统损伤的关系:根据患者有无系统损伤,将pSS患者分为系统损伤组（20例,66.7%）、非系统损伤组（10例,33.3%）;系统损伤组定义为在pSS诊断基础上,排除其他因素,如药物、感染等,而出现呼吸、消化、血液、神经、泌尿系统等任一系统受累者,非系统损伤组定义为单纯表现为口干和（或）眼干症状的pSS患者。上述分组中pSS患者外周血中CD19+CD24hiCD38hiBregs占CD19+B淋巴细胞百分比分别为4.29±2.27%和3.96±1.33%,血清IL-17的表达分别为19.04±9.93pg/ml及15.50±9.47pg/ml,两组差异均无统计学意义（P>0.05）;3 pSS患者外周血CD19+CD24hiCD38hiBregs及血清IL-17表达与相关实验室指标的关

关键词： 调节性T细胞   急性髓系白血病   调节性B细胞   肿瘤免疫白血病   淋巴细胞   急性   费城染色体   伊马替尼   治疗结果  

摘要： 目的:研究AML患者Tregs的数量、趋化及其对免疫细胞的抑制功能,并探讨导致AML患者Tregs异常可能的上游因素,阐明其在AML免疫逃逸机制中的作用,为提高AML临床疗效寻找新的治疗方向。方法:①流式细胞术检测初诊AML患者和正常对照骨髓液单个核细胞中Tregs比例及Tregs表面PD1、CTLA4、GITR的表达;②transwell实验检测Tregs迁移至骨髓的趋化功能;③流式细胞术检测Tregs细胞表面CXCR4、CXCR7表达,ELISA方法检测骨髓和血浆中SDF-1α水平;④Tregs分别与CD4+T细胞和CD8+T细胞共培养、交叉共培养比较AML与正常Tregs对免疫细胞的抑制能力;⑤Bregs与CD4+CD25-T细胞共培养、交叉共培养比较AML与正常Bregs诱导CD4+CD25-T细胞向Tregs转化的能力。结果:①初诊急性髓系白血病患者外周血和骨髓液中Tregs比例增多;②AML患者外周血Tregs趋化至骨髓的能力增强;③AML患者外周血Tregs趋化至骨髓的能力增强源于CXCR4表达升高;④AML患者Tregs抑制CD4+ T细胞增殖促进CD4+ T细胞凋亡的能力增强并影响其INF-γ分泌;⑤AML患者Bregs诱导CD4+CD25-T细胞向 CD4+CD25+Foxp3+Tregs 转化。结论:AML患者Tregs数量增多,迁移至骨髓能力增强,并影响CD4+T细胞增殖、凋亡、细胞因子分泌等功能,而AML患者Bregs促进CD4+ CD25-T细胞向CD4+CD25+Foxp3+ Tregs的转化,从而放大Tregs的免疫抑制效应,为AML基于Tregs的免疫抑制治疗提供理论依据。目的:探讨真实世界中伊马替尼(IM)联合化疗治疗BCR-ABL阳性急性淋巴细胞白血病(ALL)的疗效及相关预后因素。方法:2003年4月至2015年8月中国医学科学院血液病医院收治的209例治疗中包含IM的BCR-ABL阳性ALL患者纳入研究,106例患者接受造血干细胞移植(HSCT)。对患者的疗效和预后影响因素进行分析。结果:初诊患者诱导完全缓解(CR)率为97.9%。初诊时WBC≥100×109/L是总生存(OS)的不良预后因素(P=0.043)。未接受HSCT、诱导治疗4周内未达CR和治疗过程中未达到分子生物学完全缓解(CMR)是OS(P值分别为<0.001、0.009和<0.001)和无复发生存(RFS)(P值均<0.001)的不良预后因素。接受异基因HSCT和自体HSCT的患者,其OS和RFS的差异无统计学意义。首次诱导治疗时联用IM与否对OS无明显影响,但是联用IM的患者较未联用IM的患者显示出更高的5年RFS率(37.0%对24.0%,P =0.005)。在治疗过程中持续规律服用酪氨酸激酶抑制剂(TKI,40例患者由于复发/转录本水平下降不理想/出现突变换用其他TKI)的患者生存情况最佳,其次为骨髓抑制期间断停用TKI的患者,不规律服用TKI的患者生存情况最差,三组5年OS率分别为46.0%、28.0%、17.0%(P=0.004),5年RFS率分别为 38.0%、28.0%、17.0%(P<0.001)。结论:TKI联合化疗获得CMR,序贯以HSCT可改善BCR-ABL阳性ALL患者预后,持续规律地联用TKI有助于BCR-ABL阳性ALL患者疗效的提高。

关键词： 调节性B细胞   原发性干燥综合征   IL-10   TGF-β   Foxp3  

摘要： 原发性干燥综合征(p SS)是一种主要侵犯唾液腺和泪腺等外分泌腺,并累及多个系统的慢性自身免疫性疾病。B细胞异常改变是p SS的主要特征之一,其他特征还包括B细胞过表达、外周血产生大量异常的自身抗体、出现高丙种球蛋白血症、B细胞亚群异常,选择性浸润外分泌腺等组织、形成异位淋巴样组织。调节性B细胞是B淋巴细胞中具有负向免疫调节功能的亚群。调节性B细胞主要通过分泌细胞因子如:IL-10、TGF-β、Foxp3等及与T细胞直接接触等参与固有及适应性免疫应答,抑制炎症反应。调节性B细胞在原发性干燥综合征表达及功能异常可导致原发性干燥综合征的发病。

关键词： 急性胰腺炎   Bregs细胞   严重程度  

摘要： 目的:观察急性胰腺炎(AP)患者Bregs细胞表达的变化,并探讨了其相关的临床意义。方法:收集2014-11-2016-07我院诊治的AP患者78例,另选取我院体检中心健康体检者40例对照。流式细胞技术检测Bregs细胞比例变化,Elisa法检测IL-10表达。结果:AP患者Bregs细胞比例为(13.74±2.47)%,显著低于对照组的(21.16±4.35)%(P<0.01),AP患者IL-10表达为(16.62±3.54)ng/ml,显著低于对照组的(27.48±5.62)ng/ml(P<0.01)。患者入院后第1、5、7天急性重症胰腺炎(SAP)患者Bregs细胞和IL-10表达均显著低于急性轻型胰腺炎(MAP)患者(P<0.05或P<0.01),MAP患者Bregs细胞和IL-10表达入院后第1天到第3和第7天逐渐升高(P<0.05),而SAP患者Bregs细胞和IL-10表达入院后第1天到第3天和第7天逐渐减低(P<0.05)。Pearson线性相关分析显示AP患者Bregs细胞与APACHE评分呈显著负相关(r=-0.412,P<0.05),IL-10表达也与APACHE评分呈显著负相关(r=-0.424,P<0.05)。结论:AP患者Bregs细胞和IL-10低表达,Bregs细胞和IL-10检测在预测AP严重程度和病情发展方面具有一定的临床意义。

关键词： 子痫前期   B淋巴细胞   相关性   调节性   遗传学说   严重并发症   胰岛素抵抗   高死亡率  

摘要： 子痫前期（pre-eclampsia,PE）是发生在妊娠期的严重并发症，是导致孕产妇和围产儿高死亡率的主要原因之一[1]。PE的发病原因和机制目前仍不清楚。迄今为止，国内外学者提出了大量关于PE病因学的假说，如血管内皮受损学说[2]、遗传学说[3]、胰岛素抵抗学说[4]等，研究也发现，免疫平衡失调是导致PE的主要因素之一[5]。

关键词： 类风湿关节炎   外周血   调节性B细胞   干扰素   IL-10  

摘要： 目的检测类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血CD19^+CD24^(hi)CD38^(hi)调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)比例及功能的变化情况,初步探讨Bregs在RA发病中的作用。方法采用流式细胞染色方法检测健康对照组及RA患者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中CD19^+CD24^(hi)CD38^(hi)B细胞和CD4 T细胞比例变化情况;活细胞荧光染料CFSE染色方法检测CD19^+CD24^(hi)CD38^(hi)B细胞对Nave CD4 T细胞增殖能力的影响;同时检测CD19^+CD24^(hi)CD38^(hi)B细胞分泌IL-10的能力及对CD4 T细胞分泌IFN-γ能力的影响。结果与健康对照组相比,RA患者外周血CD19^+CD24^(hi)CD38^(hi)B细胞比例显著降低,而CD4 T细胞比例显著升高,且随着病情严重程度升高,差异有统计学意义(P<0.05)。功能研究显示,RA患者外周血CD19+CD24hi CD38hiB细胞分泌IL-10水平显著降低(P<0.01),且其抑制Nave CD4 T细胞增殖及分泌IFN-γ的能力均显著降低(P<0.01)。结论 RA患者外周血CD19^+CD24^(hi)CD38^(hi)B细胞分泌IL-10能力下降,导致免疫抑制功能降低,进而引起CD4 T细胞比例升高和IFN-γ水平升高,影响RA病情进展。

关键词： 调节性B细胞   白细胞介素10   转化生长因子β   艾滋病病毒  

摘要： B淋巴细胞主要通过产生各种抗体和呈递抗原发挥免疫调节作用。研究表明,B淋巴细胞中存在着一些能够调节免疫应答的新细胞亚群——调节性B细胞,其主要是通过产生白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)等抑制性细胞因子发挥免疫负向调节作用,在艾滋病病毒(HIV)感染中具有重要作用。对HIV感染者调节性B细胞表型和功能等的研究,将为深入了解艾滋病发病机制和治疗方法提供新的理论依据和研究方向。

关键词： 调节性B细胞   变态反应性疾病   免疫调节  

摘要： 近年来，对于免疫机制的研究越来越关注于负向调节方面。早些年更多关注于调节性T细胞，但最近也发现B细胞有亚群对免疫系统起负向调节作用，称之为调节性B细胞。变态反应性疾病存在机体的过度免疫且多迁延不愈，其重要的原因就是个体的负向调节机制发生变化。调节性B细胞作为一种重要的调节性细胞，可能在变态反应性疾病的发生和发展中起重要的抑制作用，并且在变态反应性疾病的治疗中可能存在广阔前景。