关键词： 浸润性乳腺癌   滤泡辅助性T细胞   调节性B细胞   浆细胞   相关性  

摘要： 第一部分乳腺肿瘤患者外周血中滤泡辅助性T细胞、调节性B细胞和浆细胞的分布及相关性目的:研究浸润性乳腺癌和乳腺纤维腺瘤患者外周血中Tfh、Bregs以及浆细胞的表达情况及意义。方法:本研究利用流式细胞计数分析Tfh、Bregs以及浆细胞在76例浸润性乳腺癌外周血中的表达情况以及三者之间的相互关系。结果:(1)浸润性乳腺癌患者外周血中Tfh的百分率明显高于健康人,其差异存在统计学意义(P=0.042)。(2)浸润性乳腺癌患者外周血中Bregs百分率明显高于乳腺纤维腺瘤患者,具有统计学差异(P=0.0365)。(3)浸润性乳腺癌患者外周血中浆细胞的表达最高,明显高于健康人组,且具有统计学意义(P=0.0355)。(4)随着TNM分级的上升,外周血中Tfh百分率也随之提高,ER、PR阳性的乳腺癌患者中Tfh百分率较阴性患者也有增加的趋势,Tfh的百分率与其他病理参数间均无明显统计学意义(P>0.05)。(5)组织学分级II级以上、淋巴结有转移、TNM分级高者以及ER、PR、HER2表达阴性患者外周血中Bregs的百分率均较高,其中,PR表达阴性患者的Bregs百分率高于表达阳性患者,具有统计学意义(P=0.049)。(6)ER阳性浸润性乳腺癌患者外周血中浆细胞百分率高于阴性患者,接近统计学意义(P=0.053),但与其他临床病理参数间均无统计学意义(P>0.05)。(7)浸润性乳腺癌患者外周血中Tfh与浆细胞之间为正相关(P=0.008,r=0.478),而Bregs与浆细胞之间为负相关(P=0.006,r=-0.369),Tfh与Bregs之间则接近负相关(P=0.054,r=-0.335)。结论:浸润性乳腺癌患者外周血表达高水平的Tfh、Bregs和浆细胞,且Tfh与Bregs存在负相关,与浆细胞存在正相关,三者之间的相互关系以及对肿瘤免疫的意义仍需进一步研究。第二部分滤泡辅助性T细胞对浸润性乳腺癌Bregs及浆细胞的影响及生物学意义目的:研究Tfh细胞或CD4+T细胞与乳腺肿瘤患者外周血中B细胞共育后,浆细胞、Bregs以及Tfh细胞的情况和相互间作用。方法:将分选获得Tfh细胞或CD4+T细胞分别与乳腺肿瘤患者外周血中分选的B细胞进行共育、培养,利用流式细胞计数分析浆细胞、Bregs、Tfh细胞的表达情况以及相互间的作用。结果:(1)乳腺纤维腺瘤患者与Tfh和No Tfh共育后,浆细胞的百分率分别为7.01±0.74%和4.36±1.01%(P=0.0258),浸润性乳腺癌患者与Tfh和No Tfh共育后,浆细胞的百分率分别为8.07±0.58%和3.40±0.44%(P=0.0004),均具有统计学意义。(2)对比No Tfh,与扁桃体Tfh细胞共育后,乳腺纤维瘤患者的Bregs的百分率明显提高,具有统计学意义(P=0.0046)。(3)CD4+T细胞与浸润性乳腺癌患者B细胞共育,测得Tfh细胞的百分率为3.635±0.16%,明显低于乳腺纤维腺瘤患者的百分率6.19±0.42%,经统计学分析,具有统计学意义(P=0.0151)。结论:相较于No Tfh,无论是乳腺纤维腺瘤还是浸润性乳腺癌患者的B细胞,Tfh可明显促进B细胞分化成浆细胞;浸润性乳腺癌中,Tfh有可能促进B细胞分化成Bregs,但需加大样本量进一步研究证实;浸润性乳腺癌来源的B细胞能减少Tfh细胞的表达,可能是乳腺癌患者外周血中高水平的Bregs对Tfh起到抑制作用。

关键词： 红斑狼疮   自身免疫病   Foxd3基因   转录因子   白细胞介素-10   调节性B细胞   分化发育  

摘要： IL-10+调节性B细胞（Breg）通过分泌白介素-10（IL-10）在抑制过度炎性反应方面起到重要作用。然而调节性B细胞因在体内含量少，没有特异性表面标记，没有特异性转录因子，和分化发育机制不清楚等限制其将来临床应用。为了进一步深入研究调节性B细胞的分化发育机制，本研究首先关注了一个关键的科学问题：哪些转录因子能有效地调控调节性B细胞关键的标志性分子—IL-10的表达？　　目的：分析IL-10启动子上转录因子结合位点，检测Foxd3（经预测是结合在IL-10启动子上得分最高和结合位点最多的一个转录因子）在调节性B细胞中与IL-10分泌的相关性，阐明“Foxd3在调节性B细胞分化、发育、扩增及功能中的作用及机制”，并为靶向Foxd3信号通路促使调节性B细胞扩增及其对自身免疫病治疗提供理论及实验依据。　　方法：　　（1）通过两个网站为基础的预测软件，对IL-10启动子上转录因子结合位点进行分析;（2）应用染色质免疫共沉淀-PCR技术验证Foxd3是否能够直接结合在IL-10启动子上;（3）应用基因突变技术进一步证实Foxd3与IL-10启动子结合的具体相互作用位点;（4）通过双荧光素酶报告系统分析Foxd3是否调节IL-10启动子的活性;（5）应用实时定量PCR和免疫印迹技术检测LPS活化的B细胞中Foxd3的mRNA水平和蛋白水平表达;（6）应用Foxd3特异性shRNA敲低B细胞中Foxd3的表达，检测Foxd3表达降低是否影响IL-10的表达;（7）通过流式细胞术、酶联免疫吸附实验和免疫印迹技术，检测系统性红斑狼疮小鼠B细胞中Foxd3和IL-10表达的相关性。　　结果：　　（1）对小鼠IL-10启动子上转录因子结合位点进行分析，发现Foxd3是与IL-10启动子结合最强（得分最高）和最多（结合位点最多）的转录因子;（2）染色质免疫共沉淀-PCR技术鉴定出Foxd3能结合在IL-10启动子上游-1400bp位置;（3）通过构建截短型IL-10启动子，证明Foxd3通过与IL-10启动子结合位点p4（-1413）结合;通过构建截短型Foxd3蛋白，证实Foxd3通过一个N末端结构域结合在IL-10启动子上;（4）双荧光素酶报告系统分析显示，Foxd3能有效地抑制IL-10启动子的功能;（5）实时定量PCR和免疫印迹技术证实LPS活化的B细胞高表达Foxd3 mRNA和蛋白，并且Foxd3的表达随着LPS的刺激呈时间依赖性增加;（6）实时定量PCR、免疫印迹技术、流式细胞术和酶联免疫吸附实验检测结果显示Foxd3低表达的IL-10+调节性B细胞中IL-10的表达升高;（7）流式细胞术、酶联免疫吸附实验和免疫印迹技术结果表明，系统性红斑狼疮小鼠B细胞中Foxd3表达量升高而IL-10+调节性B细胞降低。　　结论：本研究表明无论是在体内还是体外，活化的B细胞上调Foxd3的表达。Foxd3通过直接结合IL-10的启动子，限制IL-10启动子的激活，进而抑制IL-10+调节性B细胞的产生。自身免疫病小鼠B细胞高表达Foxd3进而降低调节性B细胞的产生。这样，转录因子Foxd3通过抑制B细胞中白介素-10的表达抑制调节性B细胞的产生。　　这项研究不仅阐明了Foxd3抑制调节性B细胞产生的机制，而且为以Foxd3为潜在靶点诱导调节性B细胞产生来治疗自身免疫病的新方法奠定前期基础。因此，这项研究既丰富了调节性B细胞分化发育的基本理论又为调节性B细胞的可能应用奠定了坚实基础。

关键词： 调节性B细胞   原发性干燥综合征   IL-10   TGF-β   Foxp3  

摘要： 原发性干燥综合征(p SS)是一种主要侵犯唾液腺和泪腺等外分泌腺,并累及多个系统的慢性自身免疫性疾病。B细胞异常改变是p SS的主要特征之一,其他特征还包括B细胞过表达、外周血产生大量异常的自身抗体、出现高丙种球蛋白血症、B细胞亚群异常,选择性浸润外分泌腺等组织、形成异位淋巴样组织。调节性B细胞是B淋巴细胞中具有负向免疫调节功能的亚群。调节性B细胞主要通过分泌细胞因子如:IL-10、TGF-β、Foxp3等及与T细胞直接接触等参与固有及适应性免疫应答,抑制炎症反应。调节性B细胞在原发性干燥综合征表达及功能异常可导致原发性干燥综合征的发病。

关键词： 急性胰腺炎   Bregs细胞   严重程度  

摘要： 目的:观察急性胰腺炎(AP)患者Bregs细胞表达的变化,并探讨了其相关的临床意义。方法:收集2014-11-2016-07我院诊治的AP患者78例,另选取我院体检中心健康体检者40例对照。流式细胞技术检测Bregs细胞比例变化,Elisa法检测IL-10表达。结果:AP患者Bregs细胞比例为(13.74±2.47)%,显著低于对照组的(21.16±4.35)%(P<0.01),AP患者IL-10表达为(16.62±3.54)ng/ml,显著低于对照组的(27.48±5.62)ng/ml(P<0.01)。患者入院后第1、5、7天急性重症胰腺炎(SAP)患者Bregs细胞和IL-10表达均显著低于急性轻型胰腺炎(MAP)患者(P<0.05或P<0.01),MAP患者Bregs细胞和IL-10表达入院后第1天到第3和第7天逐渐升高(P<0.05),而SAP患者Bregs细胞和IL-10表达入院后第1天到第3天和第7天逐渐减低(P<0.05)。Pearson线性相关分析显示AP患者Bregs细胞与APACHE评分呈显著负相关(r=-0.412,P<0.05),IL-10表达也与APACHE评分呈显著负相关(r=-0.424,P<0.05)。结论:AP患者Bregs细胞和IL-10低表达,Bregs细胞和IL-10检测在预测AP严重程度和病情发展方面具有一定的临床意义。

关键词： 子痫前期   B淋巴细胞   相关性   调节性   遗传学说   严重并发症   胰岛素抵抗   高死亡率  

摘要： 子痫前期（pre-eclampsia,PE）是发生在妊娠期的严重并发症，是导致孕产妇和围产儿高死亡率的主要原因之一[1]。PE的发病原因和机制目前仍不清楚。迄今为止，国内外学者提出了大量关于PE病因学的假说，如血管内皮受损学说[2]、遗传学说[3]、胰岛素抵抗学说[4]等，研究也发现，免疫平衡失调是导致PE的主要因素之一[5]。

关键词： 类风湿关节炎   外周血   调节性B细胞   干扰素   IL-10  

摘要： 目的检测类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血CD19^+CD24^(hi)CD38^(hi)调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)比例及功能的变化情况,初步探讨Bregs在RA发病中的作用。方法采用流式细胞染色方法检测健康对照组及RA患者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中CD19^+CD24^(hi)CD38^(hi)B细胞和CD4 T细胞比例变化情况;活细胞荧光染料CFSE染色方法检测CD19^+CD24^(hi)CD38^(hi)B细胞对Nave CD4 T细胞增殖能力的影响;同时检测CD19^+CD24^(hi)CD38^(hi)B细胞分泌IL-10的能力及对CD4 T细胞分泌IFN-γ能力的影响。结果与健康对照组相比,RA患者外周血CD19^+CD24^(hi)CD38^(hi)B细胞比例显著降低,而CD4 T细胞比例显著升高,且随着病情严重程度升高,差异有统计学意义(P<0.05)。功能研究显示,RA患者外周血CD19+CD24hi CD38hiB细胞分泌IL-10水平显著降低(P<0.01),且其抑制Nave CD4 T细胞增殖及分泌IFN-γ的能力均显著降低(P<0.01)。结论 RA患者外周血CD19^+CD24^(hi)CD38^(hi)B细胞分泌IL-10能力下降,导致免疫抑制功能降低,进而引起CD4 T细胞比例升高和IFN-γ水平升高,影响RA病情进展。

关键词： 调节性B细胞   白细胞介素10   转化生长因子β   艾滋病病毒  

摘要： B淋巴细胞主要通过产生各种抗体和呈递抗原发挥免疫调节作用。研究表明,B淋巴细胞中存在着一些能够调节免疫应答的新细胞亚群——调节性B细胞,其主要是通过产生白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)等抑制性细胞因子发挥免疫负向调节作用,在艾滋病病毒(HIV)感染中具有重要作用。对HIV感染者调节性B细胞表型和功能等的研究,将为深入了解艾滋病发病机制和治疗方法提供新的理论依据和研究方向。

关键词： 调节性B细胞   变态反应性疾病   免疫调节  

摘要： 近年来，对于免疫机制的研究越来越关注于负向调节方面。早些年更多关注于调节性T细胞，但最近也发现B细胞有亚群对免疫系统起负向调节作用，称之为调节性B细胞。变态反应性疾病存在机体的过度免疫且多迁延不愈，其重要的原因就是个体的负向调节机制发生变化。调节性B细胞作为一种重要的调节性细胞，可能在变态反应性疾病的发生和发展中起重要的抑制作用，并且在变态反应性疾病的治疗中可能存在广阔前景。

关键词： EB病毒   调节性T细胞   儿童   急性B淋巴细胞白血病  

摘要： 目的探讨EB病毒（EBV）和调节性T细胞（Treg）检测在诊断儿童急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）中的意义。方法2014年9月至2015年12月收治的45例B-ALL纳入B-ALL组,40例健康体检儿童纳入对照组,收集外周血标本,流式细胞仪测定Treg平均荧光强度（MFI）,ELISA检测血浆抗EBV VCA IgG、抗EBV核抗原（EBNA）IgG（潜伏感染）,抗EBV VCA IgM（急性感染）。分析B-ALL组EBV感染情况和Treg比例变化及意义。结果 B-ALL组Treg比例与FoxP3 MFI明显高于对照组,差异均有统计学意义（P=0.004,P=0.001）。B-ALL组中EBV急性感染、潜伏感染和血清学检查阴性者的年龄、性别、血红蛋白、血小板计数、白细胞计数和骨髓原始细胞比例比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。B-ALL组潜伏感染者Treg比例和FoxP3MFI均高于其他被试,差异有统计学意义（P〈0.05）;对照组血清反应阴性者Treg比例和FoxP3MFI均低于其他被试,差异均有统计学意义（P〈0.05）;其他类型被试Treg比例和FoxP3 MFI比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。Common-B-ALL者较pro-B-ALL和pre-B-ALL者Treg比例减少,差异有统计学意义（P=0.020）,而FoxP3 MFI和EBV感染情况比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。EBV潜伏感染评估对B-ALL发病风险的OR值为4.060,95%CI为1.21-13.64（P=0.020）,即EBV潜伏感染是B-ALL发病的危险因素。结论 EBV潜伏感染和Treg比例升高在儿童B-ALL的诊断中具有重要意义,潜伏感染是儿童B-ALL发病的危险因素。

关键词： 慢性特发性血小板减少性紫癜   辅助性T细胞17   调节性T细胞   辅助性T细胞22   调节性B细胞   白细胞介素17   白细胞介素10   白细胞介素22   转化生长因子β1  

摘要： 目的探讨调节性T细胞(Treg)、调节性B细胞(Breg)、辅助性T细胞17(Th17)、辅助性T细胞22(Th22)及其相关细胞因子的变化在慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)患者免疫功能紊乱中的作用。方法选择CITP患者40例、健康者40例,分离外周血单个核细胞,采用流式细胞术检测Treg、Breg、Th17、Th22细胞数量与比例,采用酶联免疫吸附法检测血浆中白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素17(IL-17)、白细胞介素(IL-22)水平,计算IL-17/IL-10、IL-22/TGF-β1比值。比较CITP患者、健康者各指标检测结果。结果 CITP患者Th17、Th22细胞及IL-17、IL-22水平高于健康者,Treg、Breg细胞及IL-10、TGF-β1水平低于健康者(P<0.05)。CITP患者Th17/Treg、Th22/Breg、IL-17/IL-10、IL-22/TGF-β1比值水平均高于健康者(P<0.05)。结论 Th17、Treg、Th22、Breg细胞水平异常及IL-17/IL-10、IL-22/TGF-β1比值变化可能与CITP患者免疫功能紊乱密切相关。