关键词： 免疫治疗   调节性   细胞特性   机体免疫反应   免疫性疾病   应用   分泌细胞因子   调控作用  

摘要： 人体内存在一类对于机体免疫反应起负向调控作用的B细胞，这类B细胞被称为调节性B细胞（Bregs）。通过对不同免疫疾病模型的研究发现，人体内存在着多种类型、表型特点各异的Bregs，并可通过分泌细胞因子颗粒酶和细胞表面分子间的相互作用来介导对于机体免疫反应的负向调节。目前主要认为Bregs是由分化发育不同阶段的B细胞接受不同信号刺激转化而来的。在多种免疫性疾病中可以检测到Bregs的数量和功能缺陷；对于免疫进程的负向调控作用有望使Bregs成为免疫治疗的新靶点，为许多难治性慢性感染、肿瘤和免疫性疾病提供治疗思路。

关键词： 调节性B细胞   白细胞介素-10   移植耐受   慢性移植物抗宿主病   免疫调节  

摘要： 慢性移植物抗宿主病（chronic graft versus host disease,cGVHD）是异基因造血干细胞移植最重要的死亡原因。该病与供者免疫活性细胞引起的免疫平衡紊乱及移植免疫耐受异常有关[1]。cGVHD发生率高达40%-70%,近年来因临床造血干细胞移植治疗方案的不断完善以及治疗技术的不断提高,移植早期死亡率逐渐减低,患者长期存活率逐渐增高,cGVHD发病率也有所升高。cGVHD缺乏有效的预防手段,治疗疗程长,生活质量差,故探索有效、

关键词： IL-10   调节性B细胞   IL-10受体1   CD19单链抗体可变区  

摘要： 目的：CD19单链抗体可变区（single-chain fragment variable）sc Fv能特异性识别结合B细胞表面的CD19分子,白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）是调节性B细胞（Breg）的主要特征之一。旨在构建CD19sc Fv和IL-10受体1（IL-10R1）胞外段的重组融合蛋白,拟用该融合蛋白捕捉和封闭Breg细胞分泌的IL-10。方法：CD19sc Fv和IL-10R1胞外段克隆到p ET-28a原核质粒上,*** BL21（DE3）工程菌表达蛋白通过镍柱富集和纯化蛋白,SDS-PAGE和Western blot对表达蛋白进行鉴定,Pull down实验验证蛋白与CD19分子和IL-10细胞因子的结合。结果：成功表达CD19sc Fv-IL-10R1融合蛋白,该融合蛋白能在体外同时结合CD19和IL-10分子。结论：CD19sc Fv-IL-10R1融合蛋白在体外可以同时结合CD19分子和IL-10分子,具有潜在应用前景可作为特异性抑制Breg的生物小分子。

关键词： 艾滋病   艾滋病病毒-1   B细胞超活化   调节性B细胞  

摘要： 艾滋病（AIDS）是由艾滋病病毒-1（HIV-1）感染后引起的一种严重危害人类健康的重大传染病。除了进行性的CD4＋T淋巴细胞减少,HIV-1感染还造成多种免疫细胞的功能改变,这些功能改变极大地影响艾滋病的疾病进展。B细胞是人体免疫系统中重要的免疫细胞,其不但能介导体液免疫,还是重要的免疫调节细胞。然而HIV-1感染会在多个方面造成B细胞的功能缺陷。文章分析了HIV-1感染对B细胞免疫超活化、B细胞亚群组成以及调节性B细胞的影响及这些影响与艾滋病疾病进展的关系。

关键词： 脓毒症   B细胞   肠道免疫   调节性B细胞   IL-10  

摘要： 研究背景:脓毒症被定义为机体应对感染时的失控反应所导致的威胁生命的器官功能障碍。迄今为止其发病机制尚没有完全阐明,临床上暂时没有良好的治疗方案。脓毒症患者外周血的B细胞总数量减少,多种B细胞的群体数量或比例发生改变,B细胞缺陷小鼠脓毒症的死亡率升高。然而,B细胞影响脓毒症的机制尚未完全阐明,B细胞在脓毒症中的作用仍有待进一步深入研究。肠道是人体重要的免疫器官之一,肠道屏障被破坏后脓毒症持续并加重;脓毒症肠系膜淋巴液注射可造成正常动物急性肺损伤;脓毒症中肠集合淋巴管B220+B细胞凋亡增加。这提示肠道启动并参与到脓毒症中,并与器官损伤相关。调节性B细胞(Regulatory B cell,Breg)是指具有免疫抑制作用的B细胞群体。目前脓毒症中肠道Breg的变化及其与脓毒症的关系未有明确研究和报导。目的:研究脓毒症小鼠中B细胞基因表达和肠道Breg亚群的变化情况,探究脓毒症小鼠中B细胞以及肠道调节性B细胞在疾病的发生发展中的作用;从而更深入阐明脓毒症的发病机理,为临床上脓毒症的诊断治疗提供参考依据。方法:小鼠腹腔注射LPS构建脓毒症小鼠模型,记录死亡时间及体温变化;ELISA法检测外周血中IFN-γ的含量变化;q-PCR法检测脓毒症小鼠肺脏中炎症相关分子IL-6、IL-1β、IFN-γ的变化;HE染色法检测脓毒症小鼠中器官的炎症浸润程度;对脓毒症小鼠的脾脏CD19+B细胞进行转录组差异分析;流式细胞术检测肠系膜淋巴结CD5+CD1dhi及CD19+CD9+Breg亚群数量及其功能分子IL-10的表达变化情况。结果:1.脓毒症模型小鼠体内存在炎症反应,产生大量炎症介质。2.脓毒症模型小鼠CD19+B细胞转录组差异分析显示其表面分子CD40、CD80、CD86、PD-L1等上调,CD5、CD1d1、CD1d2等Breg相关分子下调;趋化因子CCL5、CXCL10等上调,趋化因子受体CXCR3等下调;细胞因子IL-3、IL-33、IL-6、TNF-α、INF-γ、IL-17A 等上调,TGF-β1、MFG-E8 下调;补体系统相关因子C3、C4a等上调,Cr2、C6等下调;脂质代谢相关分子Lif、LCN2上调。3.脓毒症模型小鼠肠系膜淋巴结中CD5+CD1dhi及CD19+CD9+ Breg亚群分泌的IL-10降低。结论:脓毒症模型小鼠死亡率高且体内存在强烈的炎症反应,B细胞的炎症、代谢等相关基因表达升高,Breg相关分子表达降低,这些改变可能参与疾病的发展;进一步研究发现脓毒症模型小鼠肠系膜淋巴结中CD5+CD1dhi及 CD19+CD9+Breg亚群分泌的IL-10降低,提示脓毒症肠道调节性B细胞的功能可能缺陷,并且加重疾病的炎症反应。

关键词： 调节性B细胞   白细胞介素10   白细胞介素10受体   系统性红斑狼疮   转化生长因子β1   系统性红斑狼疮   白细胞介素10   转化生长因子β1   骨坏死   骨质疏松   危险因素   骨坏死   红斑狼疮   meta分析  

摘要： 研究背景系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种自身免疫病,患者体内产生多种抗体,累及多个系统。如不早期发现并积极治疗,容易造成心、脑、肾、肺等重要脏器的严重并发症,严重危害患者生命及健康。而且SLE多发于年青育龄女性,影响患者的受孕及胎儿的发育和分娩。这些不仅给患者个人带来极大的痛苦,还给家庭和社会带来沉重的负担。由于目前SLE的病因及发病机制尚未完全清晰,因此治疗效果欠佳。进一步探索SLE的发病机制,积极寻找干预治疗的靶点一直是医学免疫学家和临床风湿免疫科医生面临的一项挑战性任务。目前一般认为在SLE的发病机制中,免疫细胞的活化和炎性因子的产生扮演着重要的角色。调节性B细胞(regulatory B cell,Bregs)的概念最初是在20世纪60年代由Morris等提出的,他们认为体内存在一群发挥免疫抑制功能的B淋巴细胞,可以分泌具有抑制作用的抗体。此后多种疾病模型中均观察到有可调节免疫反应的B细胞存在,这些B细胞的表型、来源、作用机制等差异较大。2006年,Mizoguchi等提出调节性B细胞这一概念,即一类不依赖于分泌免疫球蛋白且具有免疫调节功能的B细胞亚型。而Yanaba等在研究小鼠CHS模型时首次证实这种特殊细胞亚群的存在。这种调节性B细胞亚群又名B10细胞,在小鼠以CD19+CDldhighCD5+为表型特点,在人类以CD19+CD24highCD38high为表型特点。这些Bregs亚群可通过产生白细胞介素10(IL-10)或转化生长因子β1(TGF-β1)等抑制性细胞因子介导免疫耐受,抑制过度炎症反应。本研究拟通过流式细胞术及ELISA等技术检测SLE患者外周血CD19+CD24highCD38highBregs、IL-10 受体以及 IL-10、TGF-β1 等细胞因子的表达。将为深入、全面了解SLE发病机制,并通过Bregs信号通路干预治疗SLE等自身免疫病提供理论依据。目的本文目的旨在检测CD19+CD24highCD38high调节性B细胞(Bregs),血清白细胞介素(IL)-10,转化生长因子(TGF)-β,和IL-10受体(IL-10R)在SLE患者外周血的表达。方法1、本研究入组了 56例SLE患者和35例健康志愿者。根据SLE患者是否合并狼疮肾炎(lupus nephritis,LN),将56例SLE患者分为两组:合并LN组(LNgroup;N = 24),不合并 LN 组(nonLNgroup;N = 32)。2、收集了 SLEDAI等临床资料及实验室检查(血常规、尿常规、生化常规、红细胞沉降率、免疫球蛋白IgG\IgM\IgA补体C3\C4、间接荧光法抗核抗体\抗ds-DNA抗体半定量检测、免疫印迹法ANA谱12项定性检测)。流式细胞术检测了 CD19+CD24highCD38highBregs 和 IL-10R+细胞的比例。血清 IL-10 和 TGF-βl的检测采用了 ELISA方法。将上述检测指标与SLEDAI等临床资料及实验室检查指标作相关性分析。3、统计分析采用SPSS 18.0软件(GraphPad,La Jolla公司,CA,USA)。Kolmogorov-Smimov test检验数据是否正态分布。正态分布的计量资料,描述用均数±标准差(x±s)表示,两组间差异用two-tailed t-test检验。相关性检验(计算相关系数及P值)用two-tailed Pearson correlation检验。对于非正态分布的计量资料,描述用中位数[25th-75th百分位数]表示,两组间差异用Mann-Whitney U-test检验。相关性检验(计算相关系数及P值)用two-tailed Spearman's Rho correlation检验。P值<0.05视为有统计学意义。结果1、SLE患者组CD19+CD24highCD38high Bregs在外周血中表达的比例,即CD19+CD24highCD38high Bregs细胞数/CD19+细胞数,高于正常对照组(39.83 ±21.39%vs.8.74 ± 3.97%;P<0.001)。在狼疮合并肾炎组与不合并肾炎组之间对比,无统计学差异。CD19+CD24highCD38high Bregs的表达与临床指标的相关性:与SLEDAI无明显相关性(r =-0.111,= 0.416),与外周血血清补体C3负相关(r =-0.432,P=0.002),与外周血血清补体C4负相关(r =-0.497,P<0.0.01),与外周血血清间接胆红素表达水平负相关(r =-0.335,P = 0.035)。2、SLE患者组IL-10R+细胞的比例明显低于正常对照组(23.76 ± 0.6

关键词： CD40   调节性B细胞   结肠癌   IL-10   CD4+T   IFN-γ   CD4+CD25+Treg细胞   免疫抑制  

摘要： 第一部分外周血B细胞及调节性B细胞与结肠癌的关系目的:分析调节性B细胞量与结肠癌临床分期的关系及对结肠癌复发的风险预测作用。方法:采用流式细胞仪技术分析结肠癌患者外周血中CD19+B细胞、CD19+IL-10+B细胞的数量,并分析了 CD19+IL-10+B细胞的数量与结肠癌临床资料的关系。通过随访24个月结肠癌临床复发情况,结合患者外周血CD19+IL-10+B细胞的数量,应用Kaplan-Meier生存分析比较术后复发与CD19+IL-10+B细胞数量之间的关系,并应用Cox模型进行多因素分析,筛选复发的预测因子。结果:1.结肠癌患者与健康人外周血中CD19+B细胞占淋巴细胞百分比无显著性差异7.76%VS 6.92%(P=0.240)。***19+IL-10+B细胞占CD19+B细胞的百分比显著高于健康人4.28%VS 0.98%(P=0.004),且其数量与结肠癌分期呈正相关(P<0.05)。***比例风险模型因素分析,发现CD19+IL-10+B细胞数量是结肠癌患者复发的独立预测因子(风险系数OR为2.159,95%的可信区间0.272-17.130)。结论:结肠癌外周血中调节性B细胞百分比较正常人显著升高,并且与结肠癌的TNM分期有关,其水平对结肠癌的复发可能具有预测作用。第二部分结肠癌患者体内调节性B细胞与CD40L的关系目的:探讨CD40L与调节性B细胞在结肠癌患者体内的相关性。方法:通过ELISA试剂盒检测结肠癌患者血清sCD40L的水平,并与其CD19+IL-10+B细胞的数量进行相关性分析;通过免疫组化方法检测结肠癌组织中CD40L,流式细胞仪检测其癌旁组织中CD19+IL-10+B细胞的量,进行相关性分析。结果:1.结肠癌患者血清sCD40L为2.318±1.201ng/ml,正常健康人血清sCD40L为1.622±0.680ng/ml,两组间数据比较具有统计学差异(P=0.027)。结肠癌患者血清sCD40L的水平与其外周血CD19+IL-10+B细胞的数量有显著相关性,Spearman系数为0.763,P<0.01。***19+IL-10+B表达于癌旁组织中:结肠癌组织CD40L 阳性表达的患者,其癌旁组织中CD19+IL-10+B细胞的百分比为6.33%;CD40L阴性表达者,其癌旁组织中CD19+IL-10+B细胞的百分比为2.38%,两组具有统计学意义(P<0.01)。结论:结肠癌患者外周血中,可溶性CD40L的含量与调节性B细胞的比例呈正相关;结肠癌组织中CD40L表达阳性者其癌旁组织中调节性B细胞量较CD40L阴性者显著增多,提示CD40L与调节性B细胞在结肠癌微环境中的可能存在一定的关联。第三部分调节性B细胞的功能与CD40的关系目的:探讨CD40对调节性B细胞自身功能的影响以及调节性B细胞通过CD40信号途径对CD4+T细胞产生的影响。方法:流式细胞技术提取两种小鼠(野生型WT和CD40敲基因型CD40KO)的B 细胞及 CD19+CD5+CD1d+Bregs 与 CpG-ODN 及 CD40L+CpG-ODN 体外培养,检测培养前后B细胞中CD19+CD5+CD1d+Bregs的比例;CD19+CD5+CD1d+Bregs培养上清液中IL-10浓度;CD19+CD5+CD1d+Bregs(野生型和CD40敲基因型)分别于CD4+T细胞共培养,检测CD4+T细胞的增殖;CD4+CD25+Tregs 比例及上清液中IFN-γ的浓度。结果:***40L+CpG-ODN 的 WT B 细胞培养体系中,CD19+CD5+CD1d+Bregs比例显著升高(P<0.01),而CD40KO B细胞在培养前后CD19+CD5+CD1d+Bregs的含量无显著变化(P>0.05)。2.在加入CD40L+CpG-ODNCD40L的培养体系中,WTCD19+CD5+CD1d+Bregs 较 CD40KOCD19+CD5+CD1d+Bregs 增殖明显(P<0.01);上清液中IL-10的含量显著增高(P<0.01)。3.与CD40KOCD19+CD5+CD1d+Bregs组比较,WTCD19+CD5+CD1d+Bregs 能抑制 CD4+T 细胞增殖(P<0.01);并抑制了 IFN-γ分泌量(P<0.01);同时能诱导 CD4+CD25+Tregs 生成增多(P<0.01)。结论:CD40信号激活可以诱导调节性B细胞的产生与增殖,并以IL-10依赖的方式诱导CD4+CD25+Treg细胞的增多,抑制CD4+T细胞的增殖及IFN-γ的分泌。第四部分CD40调控调节性B细胞对结肠癌荷瘤小鼠肿瘤生长的影响及相关机制的初步研究目的:探讨CD40信号对调节性B细胞调控作用能否对结肠癌荷瘤小鼠的肿瘤生长产生

关键词： 结核病   调节性B细胞   IL-35亚基   mRNA   蛋白表达  

摘要： 调节性B细胞（regulatory B cell, Breg）是一类具有负向免疫调节作用的B细胞亚群，通过分泌负向免疫调节细胞因子（如IL-10、IL-35）参与机体免疫调节，产IL-35的B细胞（IL-35+B cell, B35）为一群新型调节性B细胞，已有研究证明其在肿瘤、感染性疾病和自身免疫性疾病中发挥重要作用。　　【目的】　　1. 建立BCG感染小鼠模型。　　2. 检测IL-35亚基（P35和EBI3）在小鼠结核菌感染模型中不同感染时间点外周血及免疫组织中mRNA与蛋白表达量变化，丰富完善IL-35+Breg的相关研究。　　3. 探究B35参与结核病的免疫调节机制，阐明其与小鼠结核菌感染疾病活动性及严重程度的相关性。　　【方法】　　1. 研究对象：无特定病原体（SPF 级）的C57BL/6J雌性小鼠，6-8周龄，体重14-16 g，小鼠处理过程和实验流程均遵循实验动物管理规范条例。　　2 . BCG增殖培养：将冻存的分枝杆菌减毒株BCG接种到7H9液体培养基，置CO2培养箱，37℃，培养4-6周，取出菌液，介入新的液体培养基充分研磨， 2.0麦氏比浊管比浊分装。　　3. BCG感染小鼠模型制备与验证：将BCG菌液经尾静脉注射C57BL/6J小鼠，生理盐水注射组作为对照组，小鼠感染后分别在2、4、8周摘眼球取血，无菌解剖分离获取小鼠肺组织、脾脏和骨髓冲洗液。肺组织计载菌量、制作石蜡包埋切片，进行小鼠肺组织病理学HE染色及抗酸染色，验证小鼠是否成功建模。　　4 . BCG感染小鼠B细胞IL-35mRNA与蛋白表达的检测:　　4.1.检测P35和EBI3mRNA相对表达：提取小鼠外周血及免疫组织总RNA，采用实时荧光定量PCR检测P35和EBI3 mRNA相对表达水平。　　4.2.检测B细胞及产IL-35B细胞比例：自小鼠肺组织和脾脏分离的单个核细胞以及裂解红细胞后的外周血和骨髓冲洗液，用 B220-PerCP ， CD19-PE ， EBI3-APC CY7，P35-FITC抗体进行细胞抗原染色，上流式细胞仪进行检测，分析B220+CD19+P35+EBI3+B细胞比例。　　4.3.产 IL-35B 细胞的分布情况：收集肺组织进行病理切片，采用免疫荧光结合激光共聚焦显微镜分析小鼠肺组织B细胞中P35和EBI3蛋白分布。　　【结果】　　1. 小鼠一般情况变化：小鼠感染BCG后反应迟钝，体型瘦小，脾脏明显重于对照组（P<0.001），实验组肺HE染色可见肺泡结构紊乱、炎症细胞聚集等病变，抗酸染色示肺泡周围呈散在细长略带弯曲的红色杆菌，肺部载菌量在感染4周明显下降，至8周增加显著（P<0.001）。　　2. 实时定量PCR检测结果显示：BCG感染小鼠外周血及免疫组织在不同感染时间点P35和EBI3 mRNA相对表达量显著高于对照组，各组织P35mRNA相对表达量高于EBI3，P35和EBI3 mRNA在外周血和肺组织的表达情况较一致。　　3. 流式细胞术检测结果显示：BCG感染小鼠外周血及免疫组织不同感染时间点B细胞及产IL-35B细胞比例明显高于对照组，各组织B细胞占淋巴细胞比例约在（20-30）%，外周血和肺组织产IL-35B细胞占总B细胞比例在感染4周时显著增加，到第8周又有所减少。　　4. 免疫荧光结合激光共聚焦显微镜检测结果显示：BCG感染小鼠肺组织B细胞高表达IL-35亚基（P35和EBI3）蛋白。　　5. 相关性分析显示：感染小鼠外周血产IL-35B细胞比例与肺部载菌量存在负相关关系（R=-0.5674, P=0.0003），感染小鼠肺组织产IL-35B细胞比例与肺部载菌量存在负相关关系（R=-0.3679, P=0.0076）。　　【结论】　　1. 建立BCG感染C57BL/6小鼠模型。　　2. BCG感染小鼠外周血及免疫组织中P35和EBI3 mRNA相对定量明显高于对照组，肺组织B细胞高表达IL-35亚基（P35和EBI3）蛋白。　　3. BCG感染小鼠外周血及免疫组织中B细胞及产IL-35B细胞比例明显高于对照组，外周血及肺组织产IL-35B细胞比例分别与肺部载菌量存在负相关关系。

关键词： 肝癌   miR-15a/16-1   基因敲除小鼠   调节性B细胞  

摘要： 目的和意义:原发性肝癌一般指的是肝细胞癌（hepatocellular carcinomaHCC）,是世界上最常见的恶性肿瘤之一,大多数情况下是由慢性肝脏疾病发展而来,如病毒感染（HBV,HCV）和慢性肝硬化,但是肝癌的具体发病机制仍不明确。目前常用的治疗方法主要包括手术切除、热消融、系统性化疗、动脉化疗和选择性内照射治疗等。然而,绝大多数的肝癌病人在确诊时已处于癌症晚期,且多伴有远处转移,所以此类患者往往预后不良。miRNA是由18-25个核苷酸组成的具有调控功能的非编码短单链RNA,通过碱基互补配对的方式与mRNA的3'端的非编码区结合导致mRNA的降解或翻译停止。miR-15a/16-1是miRNA15家族的成员,在人体细胞中是由位于染色体13q14区域的基因编码,miR-15a/16-1具有抑制细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤发生等多种功能。课题组应用miRNA芯片技术筛选出肝癌组织差异表达的miRNAs,结果显示miR-15a/16-1在肝癌组织中表达显著下调,且发现临床上肝癌病人的外周血调节性B细胞的频率高于健康组。课题组通过引进miR-15a/16基因敲除鼠,进一步证实miR-15a/16-/-小鼠随着年龄增长,脾脏中CD19+Tim-1+B细胞的频率逐渐增高,且该群细胞可分泌IL-10,而TGF-β无明显改变。然而,仍有以下问题尚待阐明:（1）miR-15a/16-1基因敲除小鼠体内增多的CD19+Tim-1+ B细胞功能如何?（2）CD19+Tim-1+ B细胞是否影响肝癌的生长?（3）CD19+Tim-1+ B细胞通过何种途径来发挥作用。因此,本研究在前期工作的基础上,以miR-15a/16-1敲除鼠为主要研究对象,探讨CD19+Tim-1+ B细胞的生物学功能以及对肝癌生长的影响。以期明确miR-15a/16-1在肝癌中的作用并揭示其机制,为阐明肝癌的发病机制及临床治疗提供实验基础。研究方法:1.检测miR-15a/16-1--小鼠脾脏中调节性B细胞频率变化及其作用1.1检测miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏中B细胞频率变化及其分泌的细胞因子IL-10的变化分别制备8-12周龄和15-18月龄miR-15a/16-1-/-小鼠和WT小鼠脾脏单细胞悬液,流式细胞术检测脾脏中B220+CD19+细胞亚群频率。用磁珠分选出CD19+细胞后经LPS刺激0h、24h、48h后收集培养上清,ELISA法检测上清中IL-10的浓度。流式细胞术检测15-18月龄miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏CD19+细胞内IL-10的表达。1.2 检测不同周龄 miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏中 CD19+Tim-1+、CD19+FcyRⅡbhi及CD19+CD5+CD1dhi 细胞频率取8-12周龄和15-18月龄miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏制备成单细胞悬液,流式细胞术分别检测脾脏CD19+Tim-1+,CD19+FcγRⅡbhi及CD19+CD5+CD1dhi细胞亚群频率,再用胞内染色法检测CD19+Tim-1+细胞内IL-10的表达。1.3检测荷瘤后的8-12周龄miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏中调节性B细胞亚群频率8-12周龄miR-15a/16-1-/-小鼠经H22小鼠肝癌细胞荷瘤,3周后检测脾脏中调节性B细胞亚群频率,并用胞内染色检测其分泌IL-10情况。1.4检测CD19+ Tim-1+细胞对CD4+ T细胞的作用将CD19+ Tim-1+细胞和CD4+ T细胞以1:1的比例进行混合培养,72小时后,流式细胞术检测CD4+T细胞CD69的表达和IFN-y分泌情况;在CD4+T细胞和CD19+Tim-1+细胞共培养体系中加入IL-10的中和性抗体观察CD4+T细胞表面CD69的表达和IFN-y分泌情况。***19+Tim-1+B细胞对肝癌生长的影响2.1.检测肝癌病人外周血调节性B细胞的频率人体内调节性B细胞主要为CD19+C24hiCD38hi细胞,收集临床肝癌病人治疗前的外周血,用Percoll梯度离心分离外周血淋巴细胞,用流式细胞仪检测CD19+24h4hi38hi调节性B细胞频率。2.2.观察CD19+ Tim-1+细胞对移植瘤小鼠肿瘤生长的影响分选15-18月龄的miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏中CD19+ Tim-1+细胞和CD19+ Tim-1-细胞,分别过继输入H22移植瘤小鼠（5×1O5细胞/200μl/只）。每3天过继输入一次,共三次。观察移植瘤小鼠的肿瘤生长情况,记录下肿瘤生长曲线。三周后处死小鼠,剥离肿瘤组织并记录肿瘤体积。3.探讨CD19+ Tim-1+B细胞发挥负向作用的机制***3信号通路的检测制备15-18月龄的野生型和miR-15a/1

关键词： 视神经脊髓炎   调节性B细胞   胶质纤维酸性蛋白   白介素10   转化生长因子-β   B细胞活化因子  

摘要： 目的:***患者外周血中CD19+CD24highCD38highBregs、BAFF、IL-10、TGF-β水平,探讨Bregs在NMOSD急性期发挥的作用,明确BAFF与Bregs、IL-10、TGF-β关系。2.检测NMOSD患者外周血GFAP水平,结合EDSS评分,探讨GFAP与疾病的严重程度的相关性。方法:选取2016年12月至2018年01月就诊于河北医科大学第二医院神经内科NMOSD急性期患者27例为实验组,性别、年龄相匹配的20例健康人为对照组。入组的NMOSD患者进行EDSS评分、流式细胞术检测外周血CD19+CD24highCD38highBregs数量,PCR法检测外周血BAFF、IL-10、TGF-β、GFAP水平,将其与健康人比较。结果:***组BAFF水平较对照组升高,两者差异无统计学意义;BAFF水平与EDSS评分无线性关系。***组CD19+CD24highigh CD38highBregs水平较对照组下降,两者差异有统计学意义。Bregs与EDSS评分及BAFF均无线性关系。***组IL-10、TGF-β水平较对照组下降,且差异有统计学意义。BAFF与IL-10有线性关系;BAFF与TGF-β无线性关系。***组GFAP水平较对照组升高,两者之间差异有统计学意义。GFAP与EDSS之间无线性关系。结论:1.血清BAFF在NMOSD发病机制中的作用有待进一步明确;***在NMOSD发病机制中在数量和功能上均受损;3.血清GFAP与NMOSD发病机制具有一定的相关性;***患者急性期血清GFAP水平对判断NMOSD患者病情严重程度及预后的价值尚不明确。