关键词：
下咽癌
PD-L1
调节性B细胞
免疫逃逸
摘要：
下咽癌在头颈部恶性肿瘤中恶性程度最高,以低分化鳞状细胞癌为主,不易早期诊断,具有早期经淋巴结转移及高侵袭性、预后差、易复发等特点。虽然手术为主、放化疗辅助的综合治疗技术不断提高,但下咽癌患者5年生存率仍仅在50%左右。由于难以早期确诊,下咽癌患者手术治疗时切除范围一般较大,生活质量严重受损。所以研究下咽癌发病机制,探寻利于早期诊断和更有效治疗的重要靶向因子具有重要意义。程序性死亡因子配体1（programmed death-ligand 1,PD-L1）和程序性死亡因子配体2（programmed death-ligand 2,PD-L2）是重要的免疫检查点配体,具有促进肿瘤免疫逃逸的能力,可以与其程序性死亡因子1（programmed death 1,PD-1）受体即免疫检查点结合后干扰效应T细胞活化过程并诱发效应性T细胞失能,从而降低机体抗肿瘤免疫能力,促进肿瘤免疫逃逸。低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）是PD-L1的上游调控因子,可影响肿瘤患者预后,而低氧诱导因子-2α（hypoxia inducible factor-2α,HIF-2α）与HIF-1α属于同一家族分子,可能具有相似功能。调节性B细胞（regulatory B cell,Breg）是重要的参与肿瘤免疫逃逸的细胞亚群,在一些肿瘤中可以在PD-L1的刺激下由B细胞分化而成,Breg主要通过分泌抑制性细胞因子IL-10负反馈抑制机体免疫效应水平,促进肿瘤进展。本研究通过免疫组化检测下咽癌组织及对应癌旁组织中PD-L1、PD-L2和IL-10的表达,通过免疫荧光双染检测IL-10和CD19在下咽癌组织中的共表达,并进一步通过下咽癌FaDu细胞与人外周血淋巴细胞的共培养对下咽癌进展的相关机制进行初步探讨。目的:1.探究下咽癌组织及对应癌旁组织中PD-L1、PD-L2及IL-10的表达情况及其与各临床参数的相关性;2.探究下咽癌组织中IL-10分别与PD-L1、PD-L2的表达相关性;3.探究下咽癌组织中IL-10和CD19的共表达水平;4.探究外周血淋巴细胞分别对下咽癌FaDu细胞中PD-L1、PD-L2、HIF-1α和HIF-2α在mRNA水平的影响;5.探究下咽癌FaDu细胞对调节性B细胞表达IL-10的影响;方法:1.选取33例下咽癌组织及对应癌旁组织制作石蜡切片,通过免疫组化方法检测PD-L1、PD-L2及IL-10的表达,通过免疫荧光双染检测下咽癌组织中IL-10和CD19的共表达;2.下咽癌FaDu细胞与人外周血淋巴细胞共培养后通过PCR技术检测下咽癌FaDu细胞中PD-L1、PD-L2、HIF-1α和HIF-2α在mRNA水平的表达;3.下咽癌FaDu细胞与人外周血淋巴细胞共培养后通过ELISA技术检测外周血淋巴细胞中IL-10的表达水平。结果:***-L1、PD-L2在正常鳞状上皮组织中无表达,在下咽癌组织中有表达,高、中、低表达均可见,主要表达在胞浆,PD-L1、PD-L2在下咽癌中的表达与各临床参数无显著相关性;***-10在正常鳞状上皮组织和下咽癌组织中均表达,高、中、低表达均可见,主要表达在胞浆,IL-10在下咽癌中的表达与下咽癌原发部位及分化程度密切相关;3.在60岁及以上年龄组、N分期N2组、临床分期IV期及低分化组,IL-10与PD-L2的表达显著相关;***19和IL-10在下咽癌组织中有较明显共表达;5.淋巴细胞与下咽癌FaDu细胞共培养后,淋巴细胞促进下咽癌FaDu细胞中PD-L1和PD-L2在mRNA水平的表达,对下咽癌FaDu细胞中HIF-1α和HIF-2α在mRNA水平的表达无促进作用;6.淋巴细胞与下咽癌FaDu细胞共培养后,下咽癌FaDu细胞促进淋巴细胞中IL-10的表达。结论:***-L1、PD-L2在下咽癌中高表达,有可能成为下咽癌早期诊断和更有效治疗的靶向因子;2.淋巴细胞在PD-L1、PD-L2水平对下咽癌免疫逃逸通路进行调节;3.下咽癌中的调节性B细胞以CD19+IL-10+Breg为主,通过高表达IL-10参与下咽癌的发生发展。
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