关键词： IL-35   调节性B细胞   甲状腺相关眼病  

摘要： 目的甲状腺相关性眼病（Thyroid Associated Ophthalmopathy,TAO）是一种与甲亢密切相关的器官特异性自身免疫性疾病,发病率居于成人眼眶病首位。TAO以进行性眼眶组织炎症浸润及病理性纤维化重塑为特征,能够造成毁容性面容改变及不可逆的视力损害,严重影响患者的生存质量。尽管目前研究提示自身免疫应答失衡在其发病中起核心作用,但调节性B细胞（Regulatory B Cells,Bregs）介导的免疫耐受机制尚未阐明。新近发现的IL-35+调节性B细胞（Interleukin 35 Regulatory B Cells,IL-35+Bregs）亚群在多种自身免疫性疾病中发挥着维持免疫平衡的关键作用,但其在TAO中的免疫调节网络及动态变化规律仍有待揭示。本研究旨在探究TAO患者与健康成年人外周血中IL-35+Bregs分布的差异,分析IL-35+Bregs数量差异与TAO临床活动性、严重性及甲状腺功能指标等临床参数之间的关联,探索富集IL-35+Bregs的B细胞亚群。为研发基于免疫调控的精准治疗策略提供理论依据。 方法本横断面研究共纳入了TAO患者（n=14）及与TAO患者性别年龄匹配的健康对照组（n=36）。通过Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells,PBMCs）,在含IL-35（100 ng/m L）和CpG（10μg/m L）的完全培养基中体外刺激培养48小时后,采用流式细胞术定量检测CD19+B细胞群中IL-35+Bregs亚群比例,探索富集IL-35+Bregs的B细胞亚群,并通过Spearman相关分析评估IL-35+Bregs亚群比例与疾病活动度、严重程度、甲状腺功能指标和治疗干预的关联模式。 结果TAO患者经CpG刺激后外周血IL-35+Bregs比例显著高于健康对照组（P<0.001）,且IL-35+Bregs比例与临床活动性评分（Clinical Activity Score,CAS）呈显著正相关（P=0.0307,R2=0.0332）。IL-35可显著升高健康对照组IL-35+Bregs的比例（1.24±1.17 vs 2.78±2.55,P<0.01）,但TAO患者的B细胞在IL-35刺激下向IL-35+Breg表型转变的潜力降低（1.12±0.74 vs 1.71±1.03,P=0.12）。最后,我们发现IL-35+Bregs主要富集于CD19+CD38+CD138+B细胞亚群。 结论本研究首次揭示TAO患者存在IL-35+Bregs代偿性扩增的免疫失衡特征,提示TLR9/IL-35轴可能通过负反馈调节机制参与TAO病理进程。这一发现不仅为阐释TAO的免疫发病机制提供了新的理论视角,也为开发基于IL-35信号通路调控的靶向治疗策略奠定了实验基础。但在本研究中,有关IL-35+Bregs的免疫调节功能及其具体作用机制尚未阐明,目前正在进行进一步研究。

关键词： TNF受体1   TNF受体2   调节性B细胞   移植排斥  

摘要： 目的:器官移植术后排斥是移植物失功的最主要原因。尽管抗TNFα治疗在移植免疫中广泛应用,但至少有50%的病人对于抗TNFα的治疗无效。有研究表明TNFα可通过TNFR2信号通路诱导Treg细胞的产生。申请人前期研究发现体外扩增的Breg细胞可高表达TGF-β、IL-10及TNFα,且依赖TGF-β、而非IL-10来诱导Treg细胞并提高小鼠胰岛移植模型的远期存活率。有关Breg细胞是否可通过TNFα发挥免疫抑制作用尚不得而知。因此,本研究将重点探讨TNFα/TNFR信号通路对Breg细胞诱导Treg细胞的影响及机制。 方法:本研究拟从TNFα视角切入,通过构建TNFα或TNFR2缺失的小鼠胰岛移植模型,探索TNFα/TNFR信号通路对于Breg细胞诱导Treg细胞的影响及机制,为器官移植术后抗TNFα联合Breg细胞的精准治疗提供新思路及研究方向。 结果:过继Bregs-TLR细胞和抑制TNFR1可以使体重增加减慢。随着时间推移,术后血糖超过11.1mmol/L的小鼠整体风险增加23.3%,在第15天超过正常值的小鼠比例增加到了55.7%（39/70）。阻断TNFR1后,胰岛移植小鼠的生存时间延长不明显（18.6d vs.16.2d,P=0.197）;相较之下,阻断TNFR2后胰岛移植小鼠的生存时间明显缩短（12.2d vs.16.4d,P=0.004）,抑制TNFα的生存时间延长（20.6d vs.14.4d,P=0.014）。通过进一步的流式分析结果显示,抑制TNFR2信号通路可以使CD120a和CD120b表达都减少;CD120a表达与CD120b表达呈现出一致性。在淋巴结中,CD120a的表达与Treg细胞和CD3+CD4+T细胞呈负相关,与Teff细胞呈正相关;CD120b的表达与CD3+CD4+T细胞呈负相关,与Treg细胞和记忆T细胞的表达呈正相关。在脾脏中,CD120a和CD120b的表达与记忆T细胞呈正相关。在Cox风险回归分析中CD120a和CD120b表达增加均提示生存时间延长,而CD120a+/CD120b+比值增加显示生存排斥时间缩短。另外,在生存排斥时间延长的结果中Ki-67表达更明显,Ki-67的表达与TNFR2信号通路密切相关。 结论:TNF在Bregs-TLR调控移植免疫的过程中发挥重要作用。Bregs-TLR通过TNF-CD120b信号通路诱导Treg细胞并有效促进移植物存活。同时移植物的存活时间与CD120a+/CD120b+的比例及Ki67的表达密切相关。通过监测CD120a+/CD120b+的比例变化及Ki-67的表达可能更有效简便地监测移植物功能。该研究为器官移植术后抗TNFα联合Breg细胞的精准治疗提供新思路及研究方向。

关键词： 免疫耐受   免疫调控   调节性B细胞   共刺激信号   程序性死亡配体1(PD-L1)  

摘要： 背景:移植免疫耐受的建立是防止同种异体移植物排斥反应、减少长期免疫抑制治疗需求的关键策略。调节性B细胞（Regulatory B cells,Bregs）作为具有免疫调控功能的重要细胞亚群,其在诱导免疫耐受中的作用已被逐步认识。本课题组前期研究表明,经TLR9与TLR4协同刺激体外扩增的Bregs（TLR-Bregs）具有显著的免疫耐受诱导能力。然而,TLR-Bregs介导免疫耐受的分子机制,特别是程序性死亡配体1（PD-L1）在其中的作用,尚未被全面阐明。 目的:本研究旨在探讨TLR-Bregs表面PD-L1在促进移植免疫耐受中的功能作用,并研究其分子机制,重点关注PD-L1对Bregs功能性表型、存活性、对效应CD4+T细胞的抑制能力以及诱导具有功能性表型的调节性T细胞（Tregs）能力的影响。 方法:本研究采用TLR9/TLR4协同刺激体外扩增来源于野生型（WT）和PD-L1基因敲除（KO）小鼠的B细胞,制备WT TLR-Bregs和PD-L1 KO TLR-Bregs,利用胰岛同种异体移植模型和皮肤移植模型分别对Bregs诱导免疫耐受的能力进行了验证。本研究进一步通过流式细胞术、ELISPOT和体内过继转移模型系统性分析TLR-Bregs的表型和功能特性,评估TLR-Bregs免疫调控分子及细胞因子的表达,并检测其在体外共培养体系和体内移植模型中对CD4+CD25-效应T细胞的抑制作用及其诱导CD4+Foxp3+Tregs的能力。此外,通过在Foxp3DTR小鼠中使用diphtheria toxin（DT）特异性清除Tregs,评估Tregs在TLR-Bregs介导免疫耐受中的必要性。 结果:WT TLR-Bregs的过继转移可显著延长受体小鼠同种异体移植物的存活,而PD-L1 KO TLR-Bregs未能提供类似的保护效果。表型分析显示,TLR-Bregs具有PD-L1hiPD-1+/loTIM1hiCD25hi的免疫抑制性特征,这一特征依赖于Bregs上PD-L1的存在。PD-L1缺失导致TLR-Bregs中TIM1和CD25表达下调,PD-1表达上调,抑制性细胞因子IL-10和TNF-α分泌减少。机制上,PD-L1表达对于维持TLR-Bregs的存活能力和IL-10分泌能力至关重要,特别是在炎症条件下。在体外共培养体系中,WT TLR-Bregs而非PD-L1 KO TLR-Bregs有效抑制CD4+CD25-效应T细胞的活化,表现为抑制IFN-γ分泌、下调激活标志物T-bet、LAG-3和Ki67的表达,并降低T细胞增殖。此外,WT TLR-Bregs能够以PD-L1依赖性方式上调CD4+CD25-效应T细胞的PD-1表达,且这种上调效应主要发生在未分裂T细胞中,对分裂T细胞则需更高剂量的TLR-Bregs方可实现。通过在Foxp3DTR小鼠中于免疫耐受诱导阶段特异性清除Tregs,本课题组发现Tregs缺失可阻断WT TLR-Bregs所诱导的移植免疫耐受,证实受体Tregs在TLR-Bregs介导的移植保护中的必要性。进一步研究显示,WT TLR-Bregs过继转移可显著提高受体淋巴组织中Breg诱导的CD4+Foxp3+Tregs（i Tregs）比例,尤其在移植物引流淋巴结中最为明显。在体内和体外,WT TLR-Bregs诱导的i Tregs均表现出较高的Foxp3表达以及CCR7、CTLA-4、IL-10、Ki67等关键功能标志物的高表达,提示其具有调节性表型。相比之下,PD-L1 KO TLR-Bregs诱导的i Tregs能力较弱,且i Tregs上述功能标志物表达显著减弱。综上所述,本研究表明TLR-Bregs的PD-L1的表达对于其直接抑制效应CD4+T细胞活化以及诱导受体Tregs的调节性表型均至关重要;PD-L1与其他TLR-Bregs分泌的抑制性细胞因子共同协同建立有效的免疫调控网络以促进移植耐受的实现。 结论:本研究系统阐明了PD-L1在TLR-Bregs介导移植免疫耐受中的关键作用。PD-L1不仅有助于维持TLR-Bregs的免疫调控表型与功能稳定性,还增强了其抑制效应CD4+T细胞活化与诱导受体中高表达功能性分子的CD4+Foxp3+Tregs的能力。这些发现为Breg介导的免疫调控分子机制提供了新的见解,并支持PD-L1高表达的TLR-Bregs作为潜在细胞治疗策略,以促进移植中的免疫耐受。

关键词： 调节性B细胞   肾移植   免疫   移植耐受  

摘要： 肾移植是终末期肾病患者长期高质量生存的首选治疗方法,该领域的重点研究目标之一是寻找在受体中诱导同种异体移植物耐受的可靠方法。长期以来,B细胞被认为通过分泌抗体在适应性免疫系统中发挥关键作用,对患有自身免疫性疾病的个体有害。然而,近年来多项研究表明,并非所有B细胞亚群均增加免疫反应。调节性B细胞(Bregs)可通过分泌白细胞介素10等抑制性细胞因子对自身免疫性疾病发挥保护作用,这可能有助于发现新的免疫治疗方法,以实现移植中的免疫耐受。本文总结了Bregs的起源、表型和免疫调节机制,着重阐述其在肾移植免疫中的重要作用及潜在治疗价值。

关键词： B淋巴细胞,调节性   多发性骨髓瘤   肿瘤逃逸   白细胞介素10   预后   肿瘤微环境  

摘要： 调节性B细胞(Breg)为B细胞亚群,其在促进肿瘤免疫、抗肿瘤方面发挥作用。多发性骨髓瘤(MM)是终末期分化的B细胞恶性肿瘤。Breg参与MM的免疫缺陷机制,在MM细胞免疫逃逸中发挥重要作用。笔者拟就MM中Breg表型,Breg与MM疾病状态的关系,Breg在MM中发挥免疫调节功能的机制,MM患者预后预测中的作用,以及作为MM潜在治疗靶点的研究进展进行综述,以期帮助MM的早期诊断和预后评估,以及探索靶向Breg的MM潜在治疗策略。

关键词： 调节性B细胞   IL-10   免疫调控   感染性疾病  

摘要： 调节性B细胞(Bregs)是B细胞的一个亚群,据报道其通过产生白细胞介素(IL)-10、IL-35和转化生长因子-β(TGF-β)发挥正向免疫调节功能。既往研究表明调节性B细胞通过抗原特异性和非特异性免疫调节机制在自身免疫和代谢性疾病中发挥重要作用。然而,目前关于Bregs在感染过程中的作用,尤其是其在细胞内感染中的作用研究较少。因此,本综述主要总结了Bregs在感染性疾病中的研究进展,并对Bregs使用的免疫调节机制进行了概述,为Bregs在感染性疾病免疫应答方面的调控作用提供参考。

关键词： 系统性红斑狼疮   中医证型   CD19^(+)CD24^(+)CD27^(+)调节性B细胞   白细胞介素-10   白细胞介素-34  

摘要： 目的:探讨CD19^(+)CD24^(+)CD27^(+)调节性B细胞(Bregs细胞)及白细胞介素(IL)-10、IL-34与系统性红斑狼疮(SLE)中医证型的关系。方法:选取2022年4月~2024年4月在本院接受治疗的117例SLE患者为研究组,并纳入同期进行体检的86名健康体检者为对照组,检测对比两组的CD19^(+)CD24^(+)CD27^(+)Bregs细胞中CD24^(high) CD27^(+)比例、CD24^(mid) CD27^(+)比例以及血清IL-10、IL-34水平。另将研究组根据中医辨证分型分为热毒炽盛证、肝肾阴虚证、脾肾阳虚证,检测对比不同中医证型患者间CD24^(high) CD27^(+)比例、CD24^(mid) CD27^(+)比例、IL-10、IL-34、肾功能及系统性红斑狼疮疾病活动指数(SLEDAI)的差异。结果:研究组的CD24^(high) CD27^(+)比例、CD24^(mid) CD27^(+)比例、IL-10、IL-34水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。117例SLE患者中热毒炽盛证有49例、肝肾阴虚证33例、脾肾阳虚证35例。CD24^(high) CD27^(+)比例、CD24^(mid) CD27^(+)比例、IL-10、IL-34水平及SLEDAI评分均在肝肾阴虚证、脾肾阳虚证、热毒炽盛证中依次上升,差异有统计学意义(P<0.05);脾肾阳虚证患者的血清肌酐、尿素氮、24h尿蛋白定量均高于热毒炽盛证及肝肾阴虚证患者(P<0.05)。结论:SLE患者血清CD19^(+)CD24^(+)CD27^(+)Bregs细胞、IL-10、IL-34水平均与中医证型有关,可作为中医辨证论治的辅助指标。

关键词： CD19^(+)CD24^(hi)CD27^(+)调节性B细胞   强直性脊柱炎   临床分期   疾病活动度  

摘要： 目的:探究CD19^(+)CD24^(hi)CD27^(+)调节性B细胞(Bregs)水平与强直性脊柱炎(AS)的关系。方法:将赣州市人民医院2019年1月至2021年12月间收治的80例AS患者纳为观察组,同期体检合格的健康志愿者60例纳为对照组。根据观察组患者疾病临床分期将其分为进展期及强直期,根据患者疾病活动度将其分为活动组、稳定组,检测并比较观察组及对照组、观察组不同分期患者外周血CD19^(+)CD24^(hi)CD27^(+)Breg占CD19^(+)细胞百分比。分析CD19^(+)CD24^(hi)CD27^(+)Bregs百分比与AS患者病程、晨僵时间、巴斯强直性脊柱炎疾病活动指数评分(BASDAI)、IL-10、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)及骶髂关节X线片分级等临床特点之间的关系。结果:观察组AS患者外周血CD19^(+)CD24^(hi)CD27^(+)Bregs占CD19^(+)B细胞百分比高于健康对照组,强直期AS患者CD19^(+)CD24^(hi)CD27^(+)Breg占CD19^(+)细胞百分比高于进展期患者,且骨性强直期患者外周血CD19^(+)CD24^(hi)CD27^(+)Breg百分比高于纤维性强直期患者,活动组AS患者外周血CD19^(+)CD24^(hi)CD27^(+)Breg占比高于稳定组,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组血清IL-10水平低于对照组,ESR及CRP水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。AS患者外周血CD19^(+)CD24^(hi)CD27^(+)Breg占CD19^(+)B细胞百分比与其BASDAI得分及血清IL-10水平呈正相关,与ESR及CRP水平呈负相关,与患者晨僵时间及髂关节X线分级无明显相关性。结论:AS患者外周血CD19^(+)CD24^(hi)CD27^(+)Breg占CD19^(+)B细胞百分比降低,且其水平与患者疾病分期、活动度及实验室指标IL-10、ESR及CRP间具有一定的相关性。

关键词： Foxp^(3+)调节性T细胞   CD19^(+)调节性B细胞   浸润性乳腺癌   临床病理参数   免疫功能指标  

摘要： 目的探讨Foxp^(3+)调节性T细胞(Treg)、CD19^(+)调节性B细胞(Breg)水平与浸润性乳腺癌(IBCA)患者临床病理参数、免疫功能指标的相关性,为临床治疗提供参考。方法选取2019年5月至2022年12月江苏盛泽医院收治的231例IBCA患者为IBCA组,另选取同期收治的116例乳腺纤维腺瘤、导管内乳头状瘤、导管上皮内瘤变患者为非IBCA组,进行回顾性分析。收集IBCA组患者临床资料,比较两组患者Foxp^(3+)Treg、CD19^(+)Breg、免疫功能指标水平,分析IBCA组患者Foxp^(3+)Treg、CD19^(+)Breg水平在不同病理参数乳腺癌中的表达情况,分析IBCA组患者Foxp^(3+)Treg、CD19^(+)Breg水平与临床病理参数、免疫功能指标的相关性。结果231例IBCA患者中,雌激素受体(ER)阳性181例,孕激素受体(PR)阳性130例,Ki67蛋白阳性率≥15%104例,Luminal A型97例,Luminal B型88例,HER2阳性15例,三阴乳腺癌(TNBC)31例。两组患者细胞毒性T(Tc)细胞、B细胞水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。IBCA组患者Foxp^(3+)Treg、CD19^(+)Breg、自然杀伤(NK)细胞水平均高于非IBCA组;辅助性T(Th)细胞水平、T细胞水平、CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值均低于非IBCA组(均P<0.05)。IBCA组患者Foxp^(3+)Treg在Ki-67蛋白阳性乳腺癌、Luminal B型乳腺癌、人表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌、TNBC中均差异表达(均P<0.05);CD19^(+)Breg在Luminal B型乳腺癌、HER2阳性乳腺癌、TNBC中均差异表达(均P<0.05)。IBCA组患者Foxp^(3+)Treg水平与Ki67蛋白阳性率、Luminal B型、HER2阳性、TNBC、NK细胞水平均呈正相关,与Th细胞水平、CD4^(+)/CD8^(+)比值均呈负相关;CD19^(+)Breg水平与Luminal B型、HER2阳性、TNBC、NK细胞水平均呈正相关,与Th细胞水平、CD4^(+)/CD8^(+)比值均呈负相关。结论IBCA患者外周血中Foxp^(3+)Treg、CD19^(+)Breg水平的升高与IBCA分子亚型相关,且存在免疫功能障碍,表现为NK细胞水平上升,Th细胞水平、CD4^(+)/CD8^(+)比值下降。在IBCA患者的综合治疗中,合理调节免疫功能,有助于延缓疾病进展,改善预后。

关键词： 肿瘤免疫   B细胞   调节性B细胞   肿瘤微环境  

摘要： B细胞是肿瘤微环境中的主要细胞成分,并且在肿瘤免疫中发挥重要作用。既往的研究更多认为B细胞及其产生的抗体能够分别通过分泌免疫抑制性细胞因子和激活补体系统等机制促进肿瘤进展。然而近来的研究显示,B细胞在促进抗肿瘤免疫应答中发挥了重要的作用。文章综述B细胞在肿瘤免疫中的多种作用,讨论其不同效应的内在机制及其对肿瘤患者预后的影响。