关键词： 强直性脊柱炎   白细胞介素-35   调节性T细胞   调节性B细胞   白细胞介素-10  

摘要： 目的:观察强直性脊柱炎（AS）患者外周血中调节性T细胞（Treg）、调节性B细胞（Breg）、IL-10和IL-35水平变化,探讨IL-35对AS患者Treg、Breg细胞水平及功能变化的影响。方法:1.选取AS患者42例,根据Bath AS疾病活动指数（BASDAI）评分将AS患者分为AS低活动组（n=26）和AS高活动组（n=16）;另选取同期健康体检者30例作为正常对照组。流式细胞术（FCM）检测外周血中CD4+CD25hiCD127loTreg细胞、CD19+CD24hiCD38hiBreg细胞和CD19+CD24hiCD27+Breg细胞的百分比;流式细胞微球捕获技术（CBA）检测血清中IL-10的水平;酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中IL-35的水平;实时荧光定量PCR法（RT-PCR）检测外周血单个核细胞（PBMCs）中EB病毒诱导基因3（EBI3）、p35的m RNA表达水平。比较各指标在组别间的表达差异,并分析各指标之间的联系。2.另选取AS患者35例,提取PBMCs,利用重组白细胞介素-35（r IL-35）体外干预PBMCs,并收集上清液和细胞。ELISA法检测上清液中IL-10的水平;FCM检测CD4+T、CD19+B细胞表面IL-35受体（IL-35R）IL-12Rβ2、gp130和IL-27Rα的表达;FCM检测CD4+CD25hiCD127loTreg、CD19+CD24hiCD38hiBreg和CD19+CD24hiCD27+Breg细胞的百分比;FCM检测CD4+T、CD19+B细胞内p-STAT1、p-STAT3、p-STAT4和IL-10的表达。结果:1.（1）AS患者外周血CD4+CD25hiCD127loTreg细胞比例低于正常对照组,且AS高活动组低于AS低活动组及正常对照组（P<0.01）。（2）AS患者外周血CD19+CD24hiCD38hiBreg、CD19+CD24hiCD27+Breg细胞比例均低于正常对照组,且AS高活动组低于AS低活动组及正常对照组（P<0.05）;AS低活动组患者外周血CD19+CD24hiCD27+Breg细胞比例低于正常对照组（P<0.01）。（3）与正常对照组相比较,AS组、AS低活动组及AS高活动组患者外周血IL-10、IL-35、EBI3 m RNA和p35 m RNA表达水平均显著降低（P<0.05）。（4）AS患者外周血CD4+CD25hiCD127loTreg、CD19+CD24hiCD38hiBreg、CD19+CD24hiCD27+Breg细胞比例、IL-10和IL-35水平与BASDAI评分呈负相关,IL-10水平与CD4+CD25hiCD127loTreg和CD19+CD24hiCD27+Breg细胞比例呈正相关,IL-35水平与CD4+CD25hiCD127loTreg、CD19+CD24hiCD38hiBreg、CD19+CD24hiCD27+Breg细胞比例和IL-10水平亦呈正相关（P<0.05）。2.（1）CD4+T细胞表面表达IL-12Rβ2、gp130和IL-27Rα,CD19+B细胞表面表达IL-12Rβ2和IL-27Rα,不表达gp130。（2）与未加入r IL-35组相比,加入r IL-35组CD4+T细胞表面IL-12Rβ2和gp130表达明显上调,CD19+B细胞表面IL-12Rβ2和IL-27Rα表达亦明显上调（P<0.01）。（3）与未加入r IL-35组相比,加入r IL-35组CD4+CD25hiCD127loTreg和CD19+CD24hiCD38hiBreg比例增加（P<0.05）。（4）与未加入r IL-35组相比,加入r IL-35组CD4+T细胞内p-STAT1、p-STAT4、IL-10以及CD19+B细胞内p-STAT1、p-STAT3、IL-10表达上调,上清液中IL-10表达水平也显著增加（P<0.05）。结论:（1）随着疾病活动度的增加,AS患者外周血CD4+CD25hiCD127loTreg、CD19+CD24hiCD38hiBreg、CD19+CD24hiCD27+Breg细胞比例和IL-10、IL-35、EBI3m RNA、p35m RNA水平明显降低。（2）AS患者外周血Treg细胞、Breg细胞和IL-10水平下降与IL-35水平降低密切相关。（3）外源性IL-35能促进AS患者CD4+T细胞和CD19+B细胞分泌IL-10,提高CD4+CD25hiCD127loTreg、CD19+CD24hiCD38hiBreg、CD4+IL-10+T和CD19+IL-10+B细胞比例,为AS的治疗提供了新的靶点。

关键词： 肾脏移植   调节性B细胞   抗体介导排斥反应   动态变化  

摘要： 目的探究调节性B细胞(Breg)各亚群与肾移植受者免疫稳态的相关性,进一步检测肾移植受者免疫稳态下Breg各亚群的变化规律及其临床价值。方法1.收集郑州大学第一附属医院收治的25名肾移植术后肾功能稳定(ST)患者和18名抗体介导排斥反应(AMR)患者外周血和移植肾穿刺标本,以健康供体(HD)作为对照进行巢式病例对照研究,了解记忆性Breg(mBreg)、过渡态Breg(tBreg)、IL-10+mBreg和IL-10+tBreg 4种Breg亚群在维持免疫稳态中的作用。2.收集HD组供体术前外周血和部分移植前供肾穿刺活检组织的解离细胞、ST组患者术后90天外周血和部分移植肾穿刺活检组织的解离细胞、AMR组患者抗排斥治疗前外周血和部分移植肾穿刺活检组织的解离细胞,运用流式细胞术检测不同免疫状态下4种Breg亚群的表达,分析4种Breg亚群与肾移植受者免疫稳态的相关性。3.收集HD组供体术前,术后1天,7天,14天的外周血以及ST组患者术前,术后1天,7天,14天,30天,90天外周血,流式细胞术检测4种Breg亚群的动态变化,分析4种Breg亚群在ST组患者外周血中变化规律及其临床价值。结果***组C4d活检阳性率、DSA水平(尤其是抗Ⅱ类DSA)以及肾小管炎、间质炎症、肾小管周围毛细血管炎、微血管炎症的评分均高于ST组(所有 P<0.05)。***组供体术前、ST组患者术后90天、AMR组患者抗排斥治疗前外周血单个核细胞(PBMCs)流式检测结果显示,B细胞占PBMCs的百分比、mBreg和tBreg占B细胞的百分比差异均无统计学意义(所有P>0.05)。然而,ST组和HD组IL-10+mBreg和IL-10+tBreg占B细胞的百分比都明显高于AMR组(所有 P<0.05)。3.运用受试者操作特性(ROC)曲线方法对ST组患者术后90天、AMR组患者抗排斥治疗前外周血Breg占B细胞的百分比进行分析,我们发现,相对于mBreg和tBreg占B细胞的百分比指标,IL-10+mBreg和IL-10+tBreg占B细胞的百分比指标对区分移植肾功能稳定和AMR发生具有更好的鉴别能力。***组供体术前、ST组患者术后90天、AMR组患者抗排斥治疗前移植肾组织解离细胞流式分析结果显示,AMR组IL-10+mBreg和IL-10+tBreg占白细胞的比例明显高于ST组和HD组(所有P<0.05)。***组患者术前,术后1、7、14、30和90天以及HD组供体术前,术后1、7和14天外周血PBMCs流式检测的动态结果显示,一方面,HD组与ST组mBreg或tBreg占B细胞百分比在术前、术后1天、7天和14天均没有统计学差异(所有P>0.05);然而,HD组IL-10+mBreg或IL-10+tBreg占B细胞百分比在术后1天、7天和14天均显著低于ST组(所有P<0.05)。另一方面,在ST组中,mBreg和tBreg占B细胞百分比仅在术后7天、14天、30天和90天高于术前(所有P<0.05),但是IL-10+mBreg或IL-10+tBreg占B细胞百分比在术后1天、7天、14天、30天和90天均显著高于术前(所有P<0.05)。结论***组移植肾损害程度高于ST组可能与高C4d 阳性率和抗Ⅱ类DSA水平有关。2.外周血IL-10+mBreg和IL-10+tBreg的减少与肾移植AMR发生密切相关,移植肾稳定状态与外周血IL-10+mBreg和IL-10+tBreg的增加密切相关。3.检测外周血IL-10+mBreg和IL-10+tBreg占B细胞的比例有助于区分移植肾稳定状态与AMR,具有良好的诊断与鉴别价值。***组患者移植肾组织解离细胞中IL-10+mBreg和IL-10+tBreg均少于AMR组,提示检测外周血IL-10+mBreg和IL-10+tBreg相较于移植肾中IL-10+mBreg和IL-10+tBreg更适合用于评估移植稳态。***组患者在术后90天内外周血IL-10+mBreg和IL-10+tBreg占B细胞的比例一直高于术前,进一步表明外周血IL-10+mBreg和IL-10+tBreg在移植肾稳态中发挥重要作用,是评估肾移植术后稳定状态的潜在指标。

关键词： 自身免疫性溶血性贫血   CD5分子   B淋巴细胞   调节性B细胞   调控  

摘要： 自身免疫性溶血性贫血（autoimmune hemolytic anemia,AIHA）/Evans综合征是一种由免疫系统对抗自身红细胞和/或血小板,导致红细胞和/或血小板寿命明显缩短、破坏增多的免疫性血细胞减少症,B淋巴细胞在AIHA/Evans综合征中具有重要作用,目前公认B细胞是异质性群体,除主要分泌抗体为主的B细胞群,还具有分泌细胞因子、发挥免疫调节作用的B细胞,这类B细胞被称为调节性B细胞（Bregs）[1]。B淋巴细胞据其细胞表面CD5的表达情况,可分为CD5+（B1）和CD5-（B2）B淋巴细胞两个亚群,CD5+B淋巴细胞亚群具有重要功能[2]。CD5+B细胞在许多研究中被认为具有调节性,因此被纳入Breg细胞家族。既往研究发现CD5+B淋巴细胞在AIHA/Evans综合征患者中数量增高,且与疾病的严重程度相关[3];主要分泌IL-10[4],推测其在AIHA/Evans综合征患者体内发挥免疫调节作用。CD5+B细胞是否通过CD5发挥免疫调控作用?是否还存在如Foxp3、PD-L1等调控细胞群?本论文拟检测AIHA/Evans综合征患者外周血B、T淋巴细胞表面CD5分子表达和血清CD5分子水平及临床意义,同时检测CD5+B淋巴细胞表面Foxp3、PD-L1、PD-L2及Fas L的表达,并分析以上检测指标与临床指标的相关性,研究AIHA/Evans综合征患者CD5+B淋巴细胞发挥调控作用可能的环节。第一部分AIHA/Evans患者外周血CD5分子水平及临床意义目的:了解AIHA/Evans综合征患者外周血CD5分子水平及临床意义方法:应用流式细胞术（FCM）检测18例溶血发作AIHA/Evans综合征患者,12例缓解AIHA/Evans综合征患者外周B、T淋巴细胞CD5表达的平均荧光强度（MFI）;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测血清CD5浓度,以13名健康对照者为阴性对照,6例CLL患者为阳性对照,并分析上述指标与临床指标的相关性。结果:1、AIHA/Evans综合征患者溶血发作组CD19+B淋巴细胞CD5MFI[（41.67±14.44）%]高于缓解组[（20.50±9.75）%,P=0.0005]及健康对照组[（18.43±15.80）%,P=0.018]。AIHA/Evans综合征患者CD19+B淋巴细胞CD5 MFI与RBC（R=-0.624,P=0.002）、HB（R=-0.668,P=0.0005）呈负相关,与RET%（R=0.97,P<0.0001）呈正相关。2、AIHA/Evans综合征患者溶血发作组CD4+T淋巴细胞CD5平均荧光强度[（16029±4892）%]低于缓解组[（22895±4892）%,P<0.01]及健康对照组[（22967±5372）%,P<0.01],高于CLL组[（8834±6043）%,P<0.05],差异均具有统计学意义。3、AIHA/Evans综合征患者溶血发作组CD8+T淋巴细胞CD5 MFI[（10876±3765）%]低于缓解组[（14779±4165）%,P<0.05]及健康对照组[（5096±4271）%,P<0.05],高于CLL组[（5096±4271）%,P<0.05]。4、AIHA/Evans综合征患者血清CD5浓度[（4.08±5.80）ng/ml]高于健康对照组[（1.44±1.77）ng/ml,（P<0.05）]。AIHA/Evans综合征患者溶血发作组血清CD5浓度[（5.87±7.74）ng/ml]高于缓解组[（2.30±1.72）ng/ml,P=0.097]及健康对照组[（1.44±1.77）ng/ml,（P<0.01）],溶血发作组与健康对照组差异有统计学意义。AIHA/Evans综合征患者血清CD5浓度与Ret绝对计数（R=0.415,P=0.023）,补体C4（R=0.430,P=0.036）,CRP（R=0.896;P<0.0001）呈正相关。结论:CD5在AIHA/Evans综合征患者在不同淋巴细胞上的表达强度不同,B淋巴细胞上增强,T淋巴细胞表面下降;血清游离CD5浓度增高。第二部分AIHA/Evans患者CD5+B淋巴细胞调节功能研究目的:了解AIHA/Evans综合征患者外周血CD5+B淋巴细胞免疫调控作用方法:应用流式细胞术（FCM）检测19例溶血AIHA/Evans综合征患者,12例缓解AIHA/Evans综合征患者以及健康对照者外周血CD19+CD5+和CD19+CD5-B淋巴细胞Foxp3、PD-L1、PD-L2及Fas L的表达,RT-PCR方法测CD19+B淋巴细胞Foxp3、PD-L1、PD-L2及Fas L m RNA水平,并分析其与临床指标的相关性。结果:1、AIHA/Evans综合征患者溶血发

关键词： 调节性B细胞   吉兰-巴雷综合征   细胞因子   白介素  

摘要： 目的:探讨调节性B细胞及相关细胞因子在吉兰-巴雷综合征（GBS）患者中的表达及意义。方法:纳入新疆医科大学第一附属医院自2018年10月至2019年8月收治的44例GBS患者进行研究,设为GBS组。同时选择同期该院健康体检者44例进行研究,设为对照组。应用流式细胞术检测GBS组和健康对照组外周血中CD19+CD24hiCD38hi、CD19+CD24hiCD27+调节性B细胞在CD19+淋巴B细胞中所占比例。应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测两组被试血清中IL-10、IL-35和TGF-β1含量。结果:（1）GBS组外周血CD19+CD24hiCD38hi调节性B细胞表达为3.98±1.18%,健康对照组为6.88±2.20%,而GBS组外周血CD19+CD24hiCD27+调节性B细胞表达为13.67±3.79%,健康对照组为23.97±4.84%,与健康对照组相比,GBS组患者外周血CD19+CD24hiCD38hi及CD19+CD24hiCD27+调节性B细胞在CD19+B淋巴细胞中的占比均明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）;（2）GBS组血清中IL-10含量为41.6±7.3pg/mL,健康对照组为54.7±12.4pg/mL,而GBS组血清中IL-35含量为184.1±42.6pg/mL,健康对照组为249.7±60.5pg/mL,与健康对照组相比,GBS组患者血清中IL-10及IL-35含量明显下降,差异均有统计学意义（P<0.05）;（3）GBS组血清中TGF-β1含量为9.7±5.0ng/mL,健康对照组为9.1±6.7ng/mL,与健康对照组相比,GBS组患者血清中TGF-β1含量有所上升,但差异无统计学意义（P>0.05）。结论:GBS患者外周血CD19+CD24hiCD38hiBreg、CD19+CD24hiCD27+Breg细胞减少,可能参与GBS发病。IL-10和IL-35的变化可能参与了GBS发病,TGF-β1可能未参与GBS发病。

关键词： 过敏性哮喘   调节性B细胞   调节性T细胞   特异性免疫治疗  

摘要： 目的：探讨CD19+CD24highCD27+调节性B淋巴细胞(Regulatory B Lympho-cyte，Breg)及相关细胞因子在儿童哮喘过敏原特异性免疫治疗过程中的早期变化及机制。　　方法：纳入41例过敏性哮喘非急性发作期患儿，同年龄20例健康儿童为对照组，41例中20例行AIT并完成初始治疗。所有患儿于入组时取血备检，AIT治疗患儿于初始治疗完成后再次取血。(1)采用流式细胞术检测外周血CD24highCD27+Breg、Th1、Th2、Th17、Treg细胞比例及Breg相关细胞因子CD80、CD86、CD1d表达;(2)通过实时荧光定量PCR检测IL-10、TGF-β、IFNG、T-bet、IL-4、GATA3、IL-17A、RORγt、FOXP3mRNA水平;(3)采用ELISA检测外周血浆IL-10、TGF-β浓度。　　结果：　　(1)哮喘非急性发作期患儿的外周血中CD19+CD24highCD27+Breg比例降低(14.12±2.98vs7.96±4.11)，其表面细胞因子CD86、CD1d表达下降(P＜0.05)，CD80表达升高(P＜0.05)。AIT初始阶段完成后Breg比例增加(7.53±4.37vs11.46±3.95，P＜0.05);但其表面共刺激分子CD80、CD86、CD1d与治疗前相比无统计学差异(P＞0.05);CD19+B细胞中IL-10mRNA的表达水平升高[(0.87±1.07)×10-1vs(1.50±0.78)×10-1，P＜0.05];TGF-β的表达水平有升高趋势[(4.33±4.15)×10-1vs(6.33±10.47)×10-1，P＞0.05]。　　(2)哮喘非急性发作期患儿的外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg(7.03±4.63vs2.32±2.01)、Th1(21.43±8.04vs13.24±11.41)比例下降(P＜0.05)，Th2(1.56±0.64vs4.58±3.75)、Th17(0.88±0.60vs2.71±2.28)比例升高(P＜0.05)。AIT初始治疗阶段完成后，Th1、Th2、Th17和Treg比例均无明显改变(P＞0.05);AIT治疗后T-bet[(6.30±5.55)×10-2vs(3.43±1.63)×10-2]、GATA3[(16.56±11.69)×10-2vs(8.18±6.15)×10-2]、RORrt[(19.89±24.22)×10-2vs(2.90±5.44)×10-2]表达水平均下降(P＜0.05)，IFNG、IL-4、IL-17A和FOXP3mRNA差异不大(P＞0.05)。　　(3)哮喘非急性发作期患儿的外周血中IL-10与对照组无差异，AIT治疗初始完成后患儿外周血浆中IL-10(4.87±2.42vs7.07±2.55)pg/ml、TGF-β(469.18±182.14vs560.16±163.98)pg/ml含量明显升高(P＜0.05)。　　结论：CD19+CD24highCD27+Breg在哮喘非急性发作期明显降低，进行AIT的哮喘患儿在初始治疗完成后即有Breg比例的升高及其分泌IL-10功能的恢复，而CD4+T细胞Th1、Th2、Th17和Treg差异无统计学意义，提示儿童哮喘的AIT早期可能主要通过对Breg的数量及分泌功能的调节发挥作用。

关键词： 转化生长因子β   人羊膜间充质干细胞   外周异种神经移植   免疫耐受   调节性T细胞   调节性B细胞  

摘要： 研究背景:外周神经缺损是临床上比较常见的疾病,异种神经移植是其中的一种手术治疗方法,而外周神经异种移植最主要障碍是急性免疫排斥。hAMSCs移植已在角膜修复、脊髓损伤等临床治疗取得较好的结果,且具有调节免疫炎症的功能,可能是治疗异种神经移植的潜在方法。同时hAMSCs表达TGF-β1,而TGF-β1是重要的免疫调节因子,在早期免疫炎症反应中发挥不可替代的作用,可能是hAMSCs发挥免疫炎症调节的关键分子。目的:为了干预外周神经异种移植后急性免疫排斥反应,本研究对hAMSCs的治疗潜力进行摸索,并探讨TGF-β1在hAMSCs干预异种移植产生的急性免疫排斥反应的作用,从而为促进临床应用异种神经移植提供理论依据。方法:将SD大鼠的坐骨神经移植到成年雄性C57 BL/6小鼠的坐骨神经中完成异种神经移植造模。在第一个实验中,将hAMSCs(实验组)或用磷酸盐缓冲盐水(PBS;对照组)尾静脉注射到异种神经移植小鼠体内。在治疗后的第7天、第14天和第28天通过CatWalk步态行为学分析评估小鼠的坐骨神经功能情况。在第二个实验中,构建稳定高表达和低表达TGF-β1的hAMSC细胞,将稳定表达高或低水平TGF-β1的hAMSCs(实验组)或未经修饰的hAMSCs(对照组)尾静脉注射到异种神经移植小鼠体内。在移植治疗后的第14天,评估各实验小鼠组的坐骨神经功能指数(SFI)、Treg细胞和Breg细胞的比例变化、血清中TGF-β1和IL-10的含量变化和神经移植物组织中TGF-β1和IL-10 mRNA的表达情况。最后评估坐骨神经功能指数的改善情况与免疫细胞比例和血清中细胞因子之间的相关性。结果:1.相对于PBS治疗组,hAMSC移植治疗改善了异种神经移植小鼠的坐骨神经功能指数。2.与低表达和正常表达TGF-β1治疗组小鼠相比,高表达TGF-β1的hAMSCs治疗组能更进一步改善异种神经移植小鼠的坐骨神经功能指数,同时增加了 Treg细胞和Breg细胞的比例,提高了血清中TGF-β1和IL-10的含量。3.在hAMSCs治疗后的第14天,SFI与Treg细胞、Breg细胞、外周血清中的TGF-β1、IL-10呈正相关关系。结论:***尾静脉移植能够改善异种神经移植小鼠的坐骨神经功能,可能成为一种新的治疗策略。***可能通过TGF-β1介导Treg和Breg和外周血清中的TGF-β和IL-10调节免疫排斥反应,促进外周神经异种移植后的功能恢复。3.在异种神经移植小鼠中,hAMSC细胞中的TGF-β1可能是Treg细胞和Breg细胞发挥免疫耐受作用的关键调节因子。

关键词： 非小细胞肺癌   免疫微环境   BTK阳性间质细胞   M2型巨噬细胞   调节性B细胞  

摘要： 本文从以下几个部分展开论述：　　第一部分 BTK在非细胞肺癌中的表达以及临床意义　　实验目的：　　检测BTK在肺癌细胞及肺癌微环境中的表达（包括临床标本及公共数据库中的表达数据）与对患者预后的影响来了解BTK在非小细胞肺癌中的意义。　　实验方法：　　1. 我们收集了曾于 2018 年 4 月-2018 年 9 月以及 2009 -2014 年之间在广州医科大学附属第一医院胸外科/胸部肿瘤接受了胸部肿瘤切除术或者活检术并且术后病理提示非小细胞肺癌的患者，分别为1212名及681名，其中2018年的1212名患者组成队列一和2009-2014年间的681名患者组成队列二。通过病理学中免疫组化染色的方式评估肺癌组织及肿瘤间质中BTK的表达情况。另外，两个队列全部患者的相关临床资料被记录下来。　　2. 对所有的样本进行 BTK，PDL1 免疫组织化学染色，对肿瘤细胞及间质细胞BTK，PDL1的表达做出评分。　　实验结果：　　1. 队列一共有 1212 名患者（632 名男性（52.1%）和 580 名女性（47.9%）符合分析条件。受试者的中位年龄为58.8岁（24-88岁），包括106例鳞癌、1033例腺癌和73例其他类型的非小细胞肺癌。队列二共681例，其中男性398例（58.4%），女性283例（41.6%）。中位年龄为59.6岁（19-85岁），大部分患者为非吸烟者（n=405，59.5%）。腺癌479例，占所有组织学类型的70.3%，其次是鳞状细胞癌150例，其他类型非小细胞肺癌50例。队列二还纳入了吸烟状况、无疾病进展时间（DFS）和TNM分期状况。　　2. 队列一中肺癌组织有 BTK 表达的比例为 14.69%（178/1212），间质组织有BTK表达的比例为98.60%（1195/1212）;队列二中肺癌组织有BTK表达的比例为9.99%（68/681），间质组织有BTK表达的比例为14.10%（96/681）。　　实验结论：　　在非小细胞肺癌中，特别是肺癌间质细胞中，存在表达BTK的细胞的广泛浸润，但在非小细胞肺癌细胞系中BTK普遍呈现为低表达状态。在间质有BTK表达的患者中，术后预后较差，术后容易复发。　　第二部分 表达 BTK的间质细胞类型的鉴定　　实验目的：　　探究NSCLC间质中主要表达BTK蛋白的细胞类型，来探究NSCLC肿瘤微环境的特点。　　实验方法：　　1. BioGPS 数据库（）中的数据子集提供了表达BTK的正常组织及正常细胞信息。　　2. 根据 BioGPS 的提示，进行多重免疫组化实验检测所指向的目的细胞的存在。　　实验结果：　　1. 数据库提供了 BTK 的相对表达量， 经过对比后，我们发现 BTK 蛋白主要表达在CD19+的 B细胞（GeneAtlas U133a, gcrma 子集）及肺泡巨噬细胞（Barcode on normal tissues 子集）。　　2. BioGPS 提示的 B 细胞和巨噬细胞中，查阅文献后我们把目标细胞锁定在BTK阳性的免疫抑制细胞，包括BTK+的调节性B细胞及M2型巨噬细胞，并据此选择了CD19，CD5，CD68，CD163来标记这两种细胞。随机选择6例患者的病理标本进行多重免疫组化，其中 4 例为腺癌，2 例为鳞癌。在 BTK+细胞中， CD19+与 CD68+的细胞占 BTK+间质细胞数的 32%，其中BTK+CD19+CD5+免疫细胞比例为1%，BTK+CD68+CD163-免疫细胞比例为3%。　　实验结论：　　非小细胞肺癌间质中BTK阳性细胞主要来源于B细胞群与髓系细胞中的巨噬细胞群，虽然BTK阳性细胞占据比例较少。　　第三部分 髓系细胞群 BTK表达强化 M2 型巨噬细胞免疫抑制功能　　实验目的：　　探究肺癌间质中巨噬细胞与 BTK 的关系以及 BTK+巨噬细胞在免疫抑制中的作用。　　实验方法：　　1. 在ArrayExpress database数据库中检索以非小细胞肺癌为样本的单细胞RNA 测序数据，得到符合条件且能够获取的数据集 E-MTAB-6149 和E-MTAB-6653。　　2. 使用 CellRanger（版本 2.0.0）将每个样品产生的原始基因表达矩阵组合在R（版本 3.3.2）中进行分析，并使用 Seurat R 包（版本 3.1.4）转化为 Seurat对象。　　实验结果：　　1. 单细胞 RNA 测序将细胞分为 T 细胞群、B 细胞群、髓系细胞群、内皮细胞群、上皮细胞群、肺泡细胞群、肿瘤细胞群及成纤维细胞群8个细胞群。其中T细胞占比最高，其次为髓系细胞及肿瘤细胞及B细胞。　　2. 髓系细胞及 B 细胞群显示出高水平的 BTK 表达。在髓系细胞群中 BTK阳性细胞数占比22.61%，平均相对表达量=0.23。B细胞群中BT

关键词： Th17细胞   调节性B细胞   分化   调控  

摘要： 目的:探讨Th17细胞对体外调节性B(Breg)细胞分化的调控作用。方法:分离小鼠脾脏单个核细胞,进一步分选初始T细胞,利用转化生长因子(TGF)-β和白细胞介素(IL)-6诱导其向Th17细胞分化后,与初始B细胞共培养,体外利用脂多糖(LPS)或抗-IgM抗体诱导初始B细胞向Breg分化。检测Th17细胞对CD19^+CD5^+CD1d^+和CD19^+CD11b^+Breg细胞分化的影响,以及对其分泌IL-10等细胞因子和免疫球蛋白的影响。结果:Th17细胞可抑制CD19^+CD5^+CD1d^+Breg细胞分化,并抑制IL-10的分泌,对TGF-β、免疫球蛋白IgG、IgM和IgA分泌并无明显影响。结论:Th17细胞体外可抑制Breg细胞分化和IL-10的分泌。

关键词： 器官移植   免疫耐受   颗粒酶B   调节性B细胞   调节性T细胞   免疫调节   围手术期管理   免疫抑制剂   病毒   肿瘤  

摘要： 器官移植术后的排斥反应以及长期使用免疫抑制所致的代谢性疾病、肾功能不全、感染、肿瘤复发等并发症,严重影响着受者的长期生存和生活质量。因此,诱导器官移植术后免疫耐受是移植科医师所追求的最终目标。目前研究发现,调节性B细胞(Breg)在移植术后免疫耐受的形成中发挥了重要作用。本文主要从分泌颗粒酶B(GrB)的Breg(GrB^+Breg)的发现和特点、GrB发挥免疫调节作用的方式、GrB^+Breg在器官移植术后的免疫调节作用以及常用免疫抑制剂对GrB^+Breg的作用进行文献综述。

关键词： 关节炎,类风湿   调节性B细胞   白细胞介素-10   免疫抑制   治疗   综述  

摘要： 调节性B细胞(Bregs)的主要免疫抑制作用是经分泌白细胞介素-10产生的。人类Bergs的表型主要是CD19+CD24hiCD38hi和CD19+CD24hiCD27+。目前,研究Bregs的调控主要经过Toll样受体、BAFF/APRIL这两条信号通路。Bregs在类风湿关节炎中数量减少,功能受损,与疾病活动性相关。Bregs有可能帮助判断类风湿关节炎预后和生物制剂选择,并可能成为治疗的新靶点。