关键词： 免疫性血小板减少症   调节性B细胞   调节性T细胞   白细胞介素10   肿瘤坏死因子α  

摘要： 目的研究免疫性血小板减少症(ITP)患者治疗前后外周血中调节性B细胞(Breg细胞)、调节性T细胞(Treg细胞)的表达及与白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的相关性,探讨以上指标在ITP患者发病中的免疫调节机制。方法选取2017年3月至2019年12月该院血液病科收治的初诊患有ITP的住院患者35例,治疗前PLT<30×109/L(ITP治疗前组),治疗后PLT>50×109/L(ITP治疗后组);选取同期该院体检中心体检健康者40例作为健康对照组。使用流式细胞术检测ITP患者治疗前后及健康对照组外周血Breg和Treg细胞的表达,采取流式Aimplex法检测外周血IL-10、TNF-α水平。分析ITP患者治疗前后Breg、Treg表达与IL-10、TNF-α水平的相关性。结果与健康对照组比较,Breg细胞占CD19+细胞的百分比及Treg细胞占CD4+细胞的百分比在ITP治疗前组均显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);ITP治疗后组较健康对照组仍降低,差异有统计学意义(P<0.05);但ITP治疗后组较ITP治疗前组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。Breg细胞占CD19+细胞百分比与Treg细胞占CD4+细胞百分比呈正相关(r=0.6917,P<0.01),Breg细胞占CD19+细胞百分比与IL-10水平呈正相关(r=0.7632,P<0.01)。与健康对照组比较,ITP治疗前组外周血IL-10水平显著降低;与ITP治疗前组比较,ITP治疗后组外周血IL-10水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。此外,Breg细胞占CD19+细胞百分比与TNF-α水平呈负相关(r=-0.6471,P<0.01)。与健康对照组比较,ITP治疗前组外周血TNF-α水平显著升高;与ITP治疗前组比较,ITP治疗后组外周血TNF-α水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论外周血Breg细胞可通过分泌IL-10对Treg细胞的表达进行调节,Breg、Treg细胞能够通过分泌细胞因子影响ITP的免疫调节与疾病进展。

关键词： 系统性红斑狼疮   调节性B细胞   白细胞介素-10   预后   相关性  

摘要： 目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血调节性B细胞表达与预后的相关性。方法2012年1月—2018年6月选择在本院诊治的SLE患者82例作为病例组,同期选择在本院体检的健康人群82例作为对照组。记录2组的常规血液学指标,检测外周血调节性B细胞表达情况,随访预后并进行相关性分析。结果病例组的红细胞计数、血小板计数、白细胞计数和血红蛋白都显著低于对照组(P<0.05)。病例组的血清白细胞介素(IL)-10含量低于对照组(P<0.05)。病例组的外周血CD19+Tim-1+IL-10+调节性B细胞比例显著低于对照组(P<0.05)。病例组患者随访调查至今(2019年12月),82例患者中死亡15例,死亡率为18.3%,其中死亡患者的CD19+Tim-1+IL-10+调节性B细胞水平(1.52±0.14)pg/mL,显著低于存活患者的CD19(+)、Tim-1(+)、IL-10(+)和调节性B细胞水平(1.82±0.11)pg/mL,对比差异有统计学意义(P<0.05)。直线相关分析患者的预后死亡与CD19(+)、Tim-1(+)、IL-10(+)和调节性B细胞比例、IL-10含量、红细胞计数、血小板计数都存在相关性(P<0.05)。结论SLE患者伴随有外周血CD19(+)、Tim-1(+)、IL-10(+)和调节性B细胞比例与血清IL-10表达降低,与患者的预后显著相关。

关键词： 原因不明复发性流产   调节性B细胞   细胞因子  

摘要： 目的探讨原因不明复发性流产患者(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)外周血中CD19+CD24high CD27+调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)及细胞因子与复发性流产关系。方法采用流式细胞术(FCM)分析原因不明复发性流产患者组(URSA)、正常孕妇组(NP)、正常非孕组(NNP)外周血中CD19^(+)CD24^(high)CD27^(+)Bregs表达比例及酶联免疫双抗体夹心法(ELISA)检测外周血中细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10、TGF-β水平。结果外周血CD19^(+)CD24^(high)CD27^(+)Bregs表达比例URSA组明显低于NP组(P<0.01),与NNP组比较差异无统计学意义(P>0.05)。外周血中细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α水平URSA组明显高于NP组、NNP组(P<0.05);外周血中细胞因子IL-4、IL-6、IL-10、TGF-β水平URSA组明显低于NP组(P<0.01)、NNP组(P<0.05)。相关性分析显示,URSA组外周血CD19^(+)CD24^(high)CD27^(+)Bregs细胞比例与IL-10水平呈正相关(r=0.56,P<0.01),而与TGF-β水平无明显相关性(r=0.24,P>0.05)。结论外周血中CD19^(+)CD24^(high)CD27^(+)Bregs细胞数量及功能异常可能是导致复发性流产免疫功能紊乱的重要原因之一。

关键词： 强直性脊柱炎   调节性B细胞   血沉   疾病活动度  

摘要： 目的拟对AS患者外周血中的调节性B细胞进行检测,并对其临床意义进行分析。探讨B细胞是否具有免疫抑制功能及其发生机制。方法采集22例HLA-B-27阳性AS患者和22例非AS健康对照者的外周血标本,用CD3、CD4、CD19、CD24和CD27抗体对外周血进行染色,红细胞溶解液进行红细胞破碎,并用流式细胞仪对CD19^(+)CD24^(high)CD27^(+)调节性B细胞检测,对AS患者外周血清进行IL-10浓度检测。与AS患者血沉和疾病活动度作相关性分析。结果与22例非AS对照组相比,22例AS患者CD19^(+)CD24^(high)CD27^(+)调节性B细胞在AS患者中显著上升,与血沉、疾病活动度及外周血清IL-10浓度正相关。结论 AS患者外周血CD19^(+)CD24^(high)CD27^(+)调节性B细胞显著上升,且上升频率与疾病活动度显著相关。

关键词： 调节性B细胞   慢性乙型肝炎   获得性免疫缺陷综合征   慢性丙型肝炎  

摘要： 调节性B细胞(regulatory B cells,Breg)是一类具有负向免疫调节作用的B淋巴细胞亚群,其对免疫应答的调控已被认为是小鼠和人类免疫系统的一个新的重要组成部分。以往对Breg的研究主要集中于肿瘤和自身免疫性疾病中,但近年来Breg在慢性感染性疾病中的作用引起关注。本文归纳了Breg的表型、作用方式及其在慢性感染性疾病进程中所发挥的作用,以期为慢性感染性疾病的免疫治疗提供新的方向。

关键词： CD19^(+)CD24^(high)CD27^(+)调节性B细胞   TH1/TH2/TH17细胞因子   手足口病  

摘要： 目的探讨调节性B细胞(Breg)和TH1/TH2/TH17细胞因子在儿童手足口病(HFMD)中的作用。方法应用流式细胞术检测93例HFMD外周血CTL细胞、NK细胞、Breg细胞和Treg细胞的表达情况,CBA方法分析血清TH1/TH2/TH17细胞因子表达水平。以41例健康儿童为对照。结果 HFMD轻重症组Breg细胞和Treg细胞的表达均显著低于照组(P <0.01),重症组显著低于轻症组(P <0.01);CTL细胞和NK细胞及其颗粒酶B和穿孔素表达水平显著高于对照组(P <0.01),重症组显著高于轻症组(P <0.01)。HFMD血清IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-17A表达水平显著高于对照组(P <0.01),重症组IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A表达水平均显著高于轻症组,上述差异均有统计学意义(P <0.01)。相关性分析显示,Breg与Treg的表达呈正相关(r=0.55,P <0.01);轻症组Breg、Treg与IL-10表达水平呈正相关(r值分别为0.73、0.83,P <0.01)。结论 HFMD Breg细胞表达水平显著减低,TH1/TH2/TH17细胞因子表达水平明显改变,这些变化可能参与HFMD病情进展。

关键词： 调节性B细胞   免疫性血小板减少症   发病机制  

摘要： 目的探讨调节性B细胞(regulatory B cells,Breg细胞)在免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)中的变化及意义。方法选取2017年1月至2020年1月新疆维吾尔自治区人民医院门诊就诊或住院初次明确诊断为ITP的31例患者纳入观察组;另选择同期于该院门诊健康体检者20例纳入对照组。ITP患者均采用大剂量地塞米松治疗。采集ITP患者治疗前后和对照组研究对象体检当日外周血2 ml,采用流式细胞仪测定CD19^(+)CD24^(^(hi))CD38^(^(hi))Breg细胞、调节性T细胞(regulatory T cells,Treg细胞)、CD19^(+)CD23^(+)B细胞和CD4^(+)CD25^(+)T细胞变化;采用酶联免疫吸附测定检测血清白介素-10(interleukin-10,IL-10)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平。比较观察组和对照组研究对象、观察组患者治疗前和治疗后、观察组中缓解患者和无效患者外周血CD19^(+)CD24^(^(hi))CD38^(^(hi))Breg细胞表达率、Treg细胞水平、CD19^(+)CD23^(+)B细胞和CD4^(+)CD25^(+)T细胞表达率、血清IL-10和TNF-α水平。结果观察组患者外周血CD19^(+)CD24^(hi)CD38^(hi)Breg细胞表达率、CD4^(+)CD25^(+)T细胞表达率、Treg细胞水平和血清IL-10水平均显著低于对照组(均P<0.001),CD19^(+)CD23^(+)B细胞表达率和血清TNF-α水平均显著高于对照组(均P<0.001)。观察组患者治疗后外周血CD19^(+)CD24^(^(hi))CD38^(^(hi))Breg细胞表达率、CD4^(+)CD25^(+)T细胞表达率、Treg细胞水平和血清IL-10水平均显著高于本组治疗前(均P<0.001),CD19^(+)CD23^(+)B细胞表达率和血清TNF-α水平均显著低于本组治疗前(均P<0.001)。观察组中无效患者外周血CD19^(+)CD24^(hi)CD38^(hi)Breg细胞表达率、CD4^(+)CD25^(+)T细胞表达率、Treg细胞水平和血清IL-10水平均显著低于缓解患者(均P<0.001),CD19^(+)CD23^(+)B细胞表达率和血清TNF-α水平均显著高于对照组(均P<0.001)。结论ITP患者存在Breg细胞比例失衡,其变化程度与病情有关联,故而Breg细胞在ITP发病机制中具有重要意义。

关键词： 多发性硬化   调节性B细胞   白细胞介素-10   白细胞介素-35   转化生长因子-β  

摘要： 自身免疫性疾病(autoimmune disease,AID)是遗传易感个体的多因素疾病,调节性B细胞(regulatory B cell,Bregs)通过产生白细胞介素(interleukin,IL)-10、IL-35、转化生长因子-β(tumor necrosis factor-β,TGF-β)在AID中发挥重要作用。多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一类重要的神经系统免疫性疾病,在MS实验性自身免疫性脑脊髓炎模型(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)中,缺乏Bregs会导致更严重和更急性的EAE,这表明Bregs在抑制早期阶段疾病的启动和发展中尤为重要。文章就Bregs通过分泌细胞因子IL-10、IL-35、TGF-β抑制MS炎症反应的机制进行综述。

关键词： 滤泡状细胞毒性T细胞   调节性B细胞   白介素10   非小细胞肺癌  

摘要： 现有研究发现,滤泡状细胞毒性T细胞(Follicular cytotoxic T cell,Tfc)是一种在慢性病毒感染中产生关键性作用的T细胞亚群。Tfc细胞具有细胞毒活性;并且像滤泡状辅助性T细胞(Follicular helper T cell,Tfh)一样,Tfc细胞表达CXCR5并可以响应CXCL13从而定位于B细胞滤泡。越来越多的证据表明,Tfc细胞具有促炎功能,并在多种炎性疾病中具有治疗潜力。但Tfc细胞是否在人类癌症中发挥作用,及其可能的调控机制,目前尚不完全明确。本课题研究了 Tfc细胞在非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)外周血和肿瘤组织中的分布,及其在抗肿瘤免疫应答中的作用。并进一步探究了调节性B细胞(Regulatory B cell,Breg)对其的调控作用和可能的途径,为将来Tfc细胞在非小细胞肺癌的临床治疗应用提供理论依据。第一部分Tfc细胞在非小细胞肺癌患者体内的分布目的:本部分旨在确定非小细胞肺癌患者体内Tfc细胞的表型,并阐明Tfc细胞在外周血和肿瘤组织中的分布,为后续研究奠定基础。方法:采用流式细胞术确定非小细胞肺癌患者体内Tfc细胞的表型,并检测外周血和肿瘤微环境中Tfc细胞,确定其在外周血和肿瘤微环境中的分布。结果:非小细胞肺癌患者体内的Tfc细胞占总肿瘤浸润淋巴细胞和肿瘤浸润CD8+T细胞的比例均高于外周血中Tfc的比例。结论:与外周血相比,Tfc细胞在肿瘤组织中浸润富集,提示Tfc细胞可能参与了机体的抗肿瘤免疫应答。第二部分Tfc细胞在非小细胞肺癌患者体内的功能目的:探究Tfc细胞在非小细胞肺癌患者体内肿瘤组织中的作用,以及Tfc细胞参与抗肿瘤免疫应答可能的机制。方法:通过流式细胞术,检测外周血和肿瘤组织中Tfc细胞的脱颗粒能力。同时采用多重检测的方法,检测外周血和肿瘤组织中Tfc细胞促炎性细胞因子以及颗粒酶B和穿孔素的分泌能力。结果:在非小细胞肺癌患者的肿瘤微环境及外周循环中,Tfc细胞表达更高水平的CD107a。同时,肿瘤微环境及外周循环中的Tfc细胞分泌更高水平的促炎性细胞因子;但是颗粒酶B以及穿孔素的分泌水平明显降低。结论:在非小细胞肺癌患者体内,肿瘤微环境及外周循环中的Tfc细胞具有更强的去颗粒能力和促炎性细胞因子分泌,但细胞毒活性明显下降。说明,Tfc细胞可能不是通过直接杀伤癌细胞的方式参与机体的抗肿瘤免疫应答。第三部分Breg细胞在非小细胞肺癌患者体内对Tfc细胞的调控目的:研究Breg细胞在非小细胞肺癌患者体内对Tfc细胞的调控,为肿瘤的临床治疗提供新的思路。方法:明确NSCLC患者体内Breg细胞表型,检测外周血和肿瘤微环境中Tfc与Breg细胞的相关性。同时,将从患者体内分离得到的Tfc细胞与Breg细胞进行离体共培养,检测Tfc细胞的细胞因子分泌水平。同时探究白介素10(Interleukin 10,IL-10)在Breg细胞对Tfc的调控中的作用。结果:非小细胞肺癌患者体内,Breg细胞与Tfc细胞在外周血和肿瘤浸润淋巴细胞中的数量未发现明显相关性。与Breg细胞离体共培养并不影响Tfc细胞分泌颗粒酶B和穿孔素,但可显著抑制Tfc细胞促炎性细胞因子的分泌。而运用IL-10阻断后,Tfc的细胞因子分泌水平显著降低。结论:Breg细胞对NSCLC患者体内的Tfc细胞向肿瘤组织的浸润性以及细胞毒活性没有明显作用,但可以显著抑制Tfc细胞促炎性细胞因子的分泌水平,这种抑制的作用途径可能是通过IL-10来实现的。第四部分Tfc细胞促进抗肿瘤免疫反应及其可能的调控机制目的:在小鼠模型中进一步证实Tfc在体内抗肿瘤免疫中的作用,及其调控机制。方法:在小鼠体表建立LLC-OVA皮下移植肿瘤模型,然后分别转输Tfc和CXCR5-CD8+T细胞,观察肿瘤生长情况,采用流式细胞术检测在肿瘤微环境中浸润的CD8+T细胞。然后将Breg细胞与Tfc细胞一起共转输到接种了 LLC-OVA的小鼠体内,观察肿瘤生长情况。最后,对Breg和Tfc共转输小鼠进行IL-10的封闭,并随后阻断IL-10,进一步观察肿瘤生长情况。结果:Tfc细胞转输可以显著抑制小鼠肺肿瘤生长,而且可以有效促进肿瘤组织中CD8+T细胞浸润。Breg细胞与Tfc细胞共转输,小鼠肺肿瘤生长没有得到明显抑制,但是IL-10封闭可以部分抑制肿瘤生长。结论:在LLC小鼠肿瘤模型中,Tfc细胞可以显著抑制肿瘤生长,具有较强的抗肿瘤免疫能力,Breg细胞可以抑制Tfc细胞在抗肿瘤免疫应答中的作用,而且这种抑制作用可能是依赖IL-10得以实现的。

关键词： BTLA   调节性T细胞   Treg   B淋巴细胞   BCR  

摘要： 第一部分BTLA对调节性T细胞发育及功能的研究目的:研究B和T淋巴细胞弱化因子（BTLA）对调节性T细胞（Treg）发育和功能的直接影响。方法:通过构建在Treg中特异性敲除BTLA基因的小鼠模型进行研究。比较免疫缺陷小鼠中枢及外周各淋巴器官中T细胞外周环境稳态、T细胞的活化及细胞因子的产生、Treg的发育及其功能相关分子的表达,并通过流式分选Treg及Naive细胞体外培养,探究Treg细胞在体外的抑制作用。结果:相比于野生型小鼠,Treg中选择性敲除BTLA的小鼠中枢及外周各淋巴器官中T细胞外周环境稳态、T细胞的活化水平及细胞因子的产生、Treg的发育及其功能相关分子的表达均未发现明显差异;体外的Treg细胞抑制功能试验发现Treg的抑制功能较野生型亦无明显差异。结论:BTLA对于Treg的发育和功能表达并无直接影响。第二部分BTLA对B淋巴细胞发育及BCR信号的影响研究目的:研究B和T淋巴细胞弱化因子（BTLA）对B淋巴细胞发育和及对BCR信号转导通路的影响。方法:构建在B淋巴细胞中特异性敲除BTLA基因的小鼠模型,比较免疫缺陷小鼠骨髓、脾脏等淋巴器官中B细胞外周环境稳态及功能分子表达,研究B细胞体外刺激增殖差异,分析sAg刺激后的B细胞中pY,pBtk向BCR簇募集与B细胞激活后磷酸化分子pY,pBTK,pCD19,pPI3K,pAKT,pS6的表达的影响。结果:相比于野生型小鼠,B淋巴细胞中选择性敲除BTLA的小鼠骨髓,脾脏,腹膜腔B细胞外周环境稳态及功能分子表达未发现明显差异;而BTLA基因在B淋巴细胞中的缺失增强了B淋巴细胞在体外刺激下的增殖,且BTLA基因的缺失使BCR活化及pY,pBTK磷酸化水平增强,其下游分子pCD19,pPI3K,pAKT,pS6磷酸化水平增强。结论:BTLA基因的表达被证实对BCR活化有抑制作用,在BCR信号转导通路中扮演重要角色。