关键词： PD-L1/PD-1   急性髓系白血病   调节性B细胞   T细胞  

摘要： 目的:调节性B细胞（regulatory B cell,Breg）是重要的免疫负调节细胞,在维持机体的免疫平衡状态,调节T细胞功能等方面发挥着重要作用。我们前期实验发现Breg细胞在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者中表达比例升高,且与不良预后相关。继往有文献报道Breg细胞通过白细胞介素（interleukin,IL）-10参与机体免疫调控,也有文献报道Breg细胞可能通过非IL-10途径比如程序性死亡配体-1（Programmed death-ligand 1,PD-L1）途径发挥免疫调节作用。PD-L1作为免疫检查点在多种实体肿瘤中表达升高,Breg细胞可能通过高表达PD-L1与T细胞上程序性细胞死亡蛋白-1（programmed cell death protein 1,PD-1）结合,抑制T细胞功能,使肿瘤发生免疫逃逸,但PD-L1在AML患者Breg细胞上的表达与作用尚不清楚。基于以上背景,本实验旨在研究AML患者的Breg细胞是否存在PD-L1高表达,并探究其与AML患者的不良预后是否存在相关性。方法:1、用酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测10名AML患者及10名健康对照者血浆上清中IL-10、PD-1及PD-L1的表达情况;2、采用流式细胞术检测21名初诊AML患者不同阶段（初诊患者化疗前的骨髓及外周血、化疗后7天的骨髓及外周血,化疗后14天的外周血）和38例健康对照者（28例骨髓,10例外周血）的Breg细胞比例、Breg细胞PD-L1表达量及T细胞PD-1的表达情况,对各检测结果进行统计学分析;3、随访患者化疗后缓解及生存情况,评估高表达PD-L1的Breg细胞与AML患者预后的关系。结果:1、AML患者血浆中PD-1及PD-L1与健康对照者相比表达增高（P=0.0437,P=0.0009）,而IL-10的表达两者无明显差异（P=0.97）;2、Breg细胞在AML患者中骨髓及外周血中比例较健康对照者增高（均有P<0.0001）;3、AML患者的骨髓及外周血的Breg细胞PD-L1表达量及CD3+CD4+T细胞PD-1表达量均高于健康对照者（分别为P<0.0001,P=0.0011,P<0.0001,P=0.0249）,在经过诱导化疗后两者表达均有显著下降;4、Breg细胞PD-L1高表达组诱导化疗后完全缓解率明显降低,总生存期（overall survival,OS）降低但无统计学差异（P=0.17）,无进展生存期（progression free survival,PFS）明显降低且具有显著性差异（P=0.035）。结论:AML患者的Breg细胞表达PD-L1,且表达量较健康对照显著升高;高表达PD-L1的Breg细胞与AML患者完全缓解率降低、PFS显著下降相关。

关键词： B10细胞   哮喘   细胞靶向治疗   叉头盒蛋白O1  

摘要： 哮喘是一种全球年发病人数超3亿的呼吸系统变态反应疾病。在免疫学发病机制方面,哮喘主要由Th2反应介导,现有的临床免疫治疗手段也由此衍生。B细胞是适应性免疫系统的重要细胞亚群之一,可通过产生致病性免疫球蛋白IgE来介导哮喘疾病进展。然而,B细胞中的一个新亚群:分泌IL-10的调节性B细胞(B10细胞)可在多种免疫相关疾病中发挥抑制炎症的作用。有报道指出,PI3K-Akt信号通路对B10细胞的分化有调控作用,而FoxO1作为该通路下游的关键因子在其中的作用尚未有报道。基于以上背景,本研究重点关注了FoxO1对于B10细胞分化发育的影响,进一步将B细胞中的FoxO1作为哮喘疾病免疫抑制治疗中的潜在靶点的可能性进行阐述。本研究取得的主要结果如下:1.哮喘疾病中B细胞上调FoxO1表达在哮喘发作期患者外周血中,我们发现B细胞FoxO1活性上调,B10细胞比例降低。同时,我们在哮喘小鼠模型的肺脏组织中也发现了类似的现象。***1可以抑制B10细胞分化体外实验中,我们发现FoxO1缺失的B细胞在体外有更强的IL-10合成、分泌能力。体内实验中,我们发现野生型小鼠B10细胞FoxO1活性降低,B细胞FoxO1特异性缺失小鼠的B10细胞比例增加。***1是FoxO1调控B10分化过程中的关键转录因子单细胞RNA测序数据提示FoxO1在小鼠脾脏、肺脏和人肺脏B细胞中通过调节prdm1来抑制IL-10的表达。进一步,我们通过体外实验证实了FoxO1通过抑制prdm1的表达来抑制B10细胞的分化。***1通过IL-10依赖或非依赖的方式影响IgE的分泌IgE是哮喘疾病中关键的致病性免疫球蛋白。在体外实验中,我们发现B细胞缺失FoxO1可直接抑制IgE的分泌。同时,IL-10在体外也可以直接抑制B细胞IgE的分泌。5.B细胞特异性敲除FoxO1的小鼠哮喘模型疾病缓解在治疗实验中,我们发现B细胞特异性FoxO1缺失可以缓解小鼠哮喘模型症状。B细胞特异性FoxO1缺失小鼠肺脏中的嗜酸性粒细胞、肺泡巨噬细胞明显下降,B细胞比例明显上升,同时伴随B10细胞比例的上升及Th2反应减弱。这一系列结果提示B10细胞抑制了哮喘Th2炎性反应。6.野生型小鼠可通过转输特异性敲除FoxO1的B细胞缓解哮喘在转输实验中,我们发现FoxO1敲除的B细胞可以在激发阶段直接抑制哮喘疾病,进一步证明了通过靶向FoxO1从而促进B细胞向B10分化,可以不依赖于IgE独立的缓解哮喘疾病,为临床的细胞靶向治疗提供了新的思路。

关键词： 非肥胖糖尿病   调节性B细胞   1型糖尿病  

摘要： 目的探讨非肥胖糖尿病(NOD)小鼠调节性B细胞(Breg细胞)与其他免疫细胞的关系。方法45只NOD小鼠均分为A组(4周龄)、B组(8周龄)和C组(1型糖尿病小鼠)三组。HE染色观察小鼠胰腺组织形态。流式细胞术检测三组小鼠脾脏调节性T细胞(Treg细胞)(CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+))、Th1细胞(CD4^(+)IFN-γ^(+))、Th17细胞(CD4^(+)IL-17^(+)),B10细胞(CD19^(+)CD5^(+)CD1d^(hi)B)和IL-10^(+)B细胞(CD19^(+)IL-10^(+))数量。结果与A组比较,B组Th1细胞、Th17细胞、B10细胞和IL-10^(+)B细胞增多,而C组Treg细胞减少,Th1细胞、Th17细胞、B10细胞IL-10^(+)B细胞、Th1/B10比例和Th17/B10比例增多(P<0.05);与B组比较,C组Th1细胞、Th17细胞、Th1/B10比例和Th17/B10比例增多,而Treg细胞、B10细胞和IL-10^(+)B细胞减少(P<0.05)。C组小鼠B10细胞数量与Th1细胞和Th17细胞数量呈负相关(r=-0.394.-0.472,P<0.05),而与Treg细胞和IL-10^(+)B细胞数量呈正相关(r=0.459、0.786,P<0.05)。结论NOD小鼠存在Breg细胞与其他免疫细胞的免疫失衡,参与1型糖尿病的发生。

关键词： 类风湿关节炎   调节性B细胞   髓系树突状细胞   辅助性T细胞   病情程度   关节活动度  

摘要： 类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是临床常见的自身免疫性疾病,多发于中老年人群,主要临床表现为慢性关节滑膜炎症[1]。目前临床上以药物治疗和手术治疗为主,可一定程度缓解炎症反应和改善关节功能,但RA病情反复,治愈难度较大,早诊断、早治疗可有效提高治疗效果、缓解疼痛、提高生活质量[2-3]。T、B细胞等免疫细胞的水平、功能异常在RA的病理生理机制中发挥重要作用,调节性B细胞(regulatory B cells,Breg)通过产生白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子而负性调节免疫功能.

关键词： 调节性B细胞   儿童哮喘急性发作   硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂   吸入用布地奈德混悬液   生长发育  

摘要： 目的探讨吸入布地奈德混悬液用于儿童哮喘治疗中的效果及其用药后1~2年对生长发育的影响。方法选择于2016年10月至2017年1月收诊的68例儿童哮喘患者,均为急性发作并持续用药,分为两组:34例应用硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂治疗的患者为对照组,34例应用吸入布地奈德混悬液联合硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂治疗的患者为观察组。比较两组儿童哮喘急性发作期患者的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏-C反应蛋白(hs-CRP)、最大呼吸流量、IS最大呼气量、调节性B细胞比例、喘憋消失时间、气促缓解时间、湿啰音消失时间、咳嗽消失时间,并对比随访2年后的生长发育指标。结果用药结束,观察组的IL-6、TNF-α、hs-CRP、调节性B细胞比例、喘憋消失时间、气促缓解时间、湿啰音消失时间、咳嗽消失时间均低于对照组(P<0.05);观察组的最大呼吸流量、IS最大呼气量高于对照组(P<0.05)。观察组患儿随访结束后的生长激素水平、身高和体重均低于对照组(P<0.05)。结论吸入用布地奈德混悬液联合硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂雾化吸入疗法可缓解患儿的炎症反应,改善患儿的肺功能及免疫功能,加快临床症状的消失,但一定程度上会影响患儿的生长发育。

关键词： 调节性B细胞   肿瘤治疗   免疫抑制   癌症   白细胞介素-10   白细胞介素-35   转化生长因子-β  

摘要： 调节性B细胞(Breg)是近年来新发现的B细胞功能型亚群,其通过分泌白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-35(IL-35)和转化生长因子-β(TGF-β)等负向调节因子抑制机体免疫应答,在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用,影响肿瘤的发展、侵袭和转移。在肝癌、胃癌、乳腺癌、黑色素瘤、卵巢癌、肺癌等多种常见癌中均发现存在具有促癌效应的Breg。Breg和肿瘤的临床分期、治疗、预后存在一定的相关性。靶向Breg可能成为未来肿瘤免疫治疗的一个新方向。

关键词： 艾拉莫德   调节性B细胞   细胞因子  

摘要： 目的观察胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠经艾拉莫德治疗后调节性B细胞及相关细胞因子的变化趋势,了解艾拉莫德的作用机制。方法将6~8周龄Wistar雌性大鼠随机分为空白组、CIA模型组、艾拉莫德组,每组20只。观察CIA大鼠体质量变化、关节滑膜病理改变,ELISA法检测血清中IL-10、TGF-β含量,实时荧光定量PCR法检测关节滑膜中IL-10mRNA、TGF-βmRNA及脾脏中Bcl-6mRNA的表达水平。结果治疗第57天,艾拉莫德组大鼠体质量大于治疗前和CIA模型组,但低于空白组(P<0.05)。空白组大鼠关节滑膜有4层细胞层且未见炎性细胞浸润;CIA模型组关节滑膜有10层细胞层,可见大量炎性细胞浸润;艾拉莫德组有4层细胞层,未见明显炎性细胞浸润。与空白组比较,CIA模型组和艾拉莫德组血清中IL-10、TGF-β的表达、关节滑膜中IL-10mRNA、TGF-βmRNA及脾脏中Bcl-6mRNA的表达下降(P<0.05);与模型组比较,艾拉莫德组血清中IL-10、TGF-β的表达、关节滑膜中IL-10mRNA、TGF-βmRNA及脾脏中Bcl-6mRNA的表达均无明显变化(P> 0.05)。结论艾拉莫德可减轻胶原诱导性关节炎肿胀,但对血清及关节滑膜中的细胞因子IL-10、TGF-β及脾脏中Bcl-6的表达未见明显影响。

关键词： 免疫性血小板减少症   B淋巴细胞,调节性   淋巴细胞亚群   儿童  

摘要： 目的探讨原发性免疫性血小板减少症(ITP)患儿的调节性B细胞(Bregs)及淋巴细胞亚群的改变,并分析其与ITP持续时间和缓解时间的关系。方法流式细胞术检测88例ITP患儿治疗前和其中84例治疗1个月后和45例正常对照者外周血淋巴细胞亚群及Bregs的比例。采用包括糖皮质激素和静脉注射IgG作为一线药物治疗ITP患儿。对比治疗后不同缓解时间ITP患儿淋巴细胞亚群的改变。结果与对照组相比,所有ITP患儿的Th、NK、Breg细胞计数和Th/Tc比值均明显降低(P<0.05),而Tc以及CD19+B细胞增高(P<0.05)。持续性和慢性ITP组Breg细胞计数较新诊断ITP组明显降低(P<0.05)。共84例ITP患儿治疗后缓解,58例(69.1%)获得长期缓解,26例(30.9%)短期缓解,短期缓解组治疗后Breg和淋巴细胞亚群与治疗前无明显差异(P>0.05),而与对照组仍有明显差异(P<0.05);长期缓解ITP组治疗后Breg和淋巴细胞亚群与对照组无明显差异(P>0.05),而与治疗前比较,除Tc之外,其他细胞亚群均明显增高(P<0.05);长期缓解ITP组NK细胞和Breg细胞明显高于短期缓解ITP组(P<0.05)。结论长病程ITP患儿外周血Bregs明显降低,治疗后获得长期缓解ITP患儿的外周血Bregs显著增加,表明恢复Bregs的免疫机制可能与儿童ITP的长期缓解有关。

关键词： 调节性B细胞   自身免疫性皮肤病   应用  

摘要： 临床常见的参与免疫调节的免疫细胞有T淋巴细胞、B淋巴细胞,不仅具有正向免疫功能,同时又有负向免疫功能。而调节性T细胞的负向调节功能是临床研究热点,对于调节性B细胞的相关研究较少。本文则对调节性B细胞在系统性红斑狼疮、银屑病、天疱疮、系统性硬化症、类风湿性关节炎中的应用现状及进展进行简要综述,以望对后期的相关研究提供参考借鉴。

关键词： 急性脑梗死   调节性B细胞   预后  

摘要： 目的:探讨急性脑梗死患者外周血中调节性B细胞(Breg)的变化及其与预后的关系。方法:收集128例急性脑梗死患者及100例健康对照的临床资料与实验室数据。急性脑梗死患者随访90 d用modified Rankin Scale评分评价预后,并分析Breg与预后之间的关系。结果:急性脑梗死患者外周血中Breg,血清IL-10、TGF-β及IL-35水平均较健康对照组上调(P<0.001)且患者外周血Breg与IL-10水平呈正相关。急性脑梗死患者外周血Breg是预后的独立影响因素(OR:3.382;95%CI:1.978~5.782)。Breg预测患者获得较好预后的ROC曲线下面积是0.818(0.735~0.900),截断值是7.95%,敏感度和特异度分别为83.3%和74.0%。结论:Breg在急性脑卒中患者外周血中增加,并与患者的预后相关。