关键词： 宫颈癌   激活转录因子3   临床病理因素   预后  

摘要： 目的分析激活转录因子3(activating transcription factor 3,ATF3)表达与宫颈癌临床病理因素及预后的关系。方法收集180例在青岛市市立医院住院治疗的宫颈癌患者临床病理资料,进行激活转录因子3蛋白免疫组化分析,并对180例入组的宫颈癌患者进行5年跟踪随访,分析ATF3表达情况对宫颈癌患者5年总生存率及无进展生存率的影响。结果ATF3表达与宫颈癌的临床分期、淋巴结转移、脉管浸润、新辅助化疗相关(P<0.05),与患者年龄、肿瘤直径大小、组织学分级等临床病理因素无关(P>0.05)。ATF3阳性表达的患者5年总生存率是80.7%,无进展生存率是78.7%;ATF3阴性表达的患者5年总生存率是90.4%,无进展生存率是89.4%;相比ATF3阴性表达的患者,ATF3阳性表达患者的5年总生存率及无进展生存率更低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论ATF3表达与宫颈癌的浸润、转移有关,可能作为评价宫颈癌预后的重要指标之一。

关键词： apoptosis   cell cycle   endoplasmic reticulum   glioblastoma   unfolded protein response  

摘要： Objective Withaferin A (WA) is a bioactive compound with a remarkable anti-cancer effect derived from Withania somnifera, commonly known as ashwagandha. However, the anti-cancer mechanisms of WA in glioblastoma multiforme (GBM) are still unclear. Materials and Methods Cell viability assays and xenografted nude mice were used to evaluate the effects of WA, along with flow cytometry to detect apoptosis and cell cycle of GBM. RNA-seq analysis, Western blotting, immunofluorescence staining, qRT-PCR and siRNA gene silencing were carried out to determine the signalling pathways affected by WA. Results Withaferin A significantly inhibited the growth of GBM in vitro and in vivo and triggered the intrinsic apoptosis of GBM cells by up-regulating expression of Bim and Bad. WA arrested GBM cells at the G2/M phase of the cell cycle through dephosphorylating Thr(161) of CDK1 by activating p53-independent p21 up-regulation. Knockdown of p21 restored cell cycle progression and cell viability by down-regulating the expression of Bad rather than Bim. We demonstrated that endoplasmic reticulum (ER) stress induced by WA through the ATF4-ATF3-CHOP axis, initiated apoptosis and G2/M arrest in GBM cells. Conclusion We revealed a novel pathway that elucidated WA activation of apoptosis and G2/M arrest in GBM cells through the ATF4-ATF3-CHOP axis. This discovery is important for optimization of WA-based regimens for prevention and/or treatment of GBM.

关键词： apoptosis   ATF3/TP53 signaling   CHOP   PUMA   Cordyceps militaris   bidoactivity  

摘要： This study aimed to investigate the effect of Cordyceps militaris extract on the proliferation and apoptosis of carboplatin- resistant SKOV-3 and determine the underlying mechanisms for overcoming carboplatin resistance in human ovarian cancer. We cultured the carboplatin-resistant SKOV-3 cells in vitro until the exponential growth phase and then treated with different concentrations of C. militaris for 24, 48, and 72 hours. We performed cell proliferation assay, cell morphological change assessment using transmission electron microscopy, apoptosis assay, and immunoblotting to measure the protein expression of caspase-3 and -8, poly (ADP-ribose) polymerase (PARP)-1, B-cell lymphoma (Bcl)-2, and activating transcription factor 3 (ATF3)/TP53 signaling-related proteins. As a result, C. militaris reduced the viability of carboplatin-resistant SKOV-3 and induced morphological disruptions in a dose- and time-dependent manner. The gene expression profiles indicated a reprogramming pattern of the previously known and unknown genes and transcription factors associated with the action of TCTN3 on carboplatin-resistant SKOV-3 cells. We also confirmed the C. militaris-induced activation of the ATF3/TP53 pathway. Immunoblotting indicated that cotreatment of C. militaris and carboplatin-mediated ATF3/TP53 upregulation induced apoptosis in the carboplatin-resistant SKOV-3 cells, which are involved in the serial activation of pro-apoptotic proteins, including Bcl-2, Bax, caspases, and PARP-1. Further, when the ATF3 and TP53 expression increased, the CHOP and PUMA expressions were upregulated. Consequently, the upregulated CHOP/PUMA expression activated the positive regulation of the apoptotic signaling pathway. In addition, it decreased the Bcl-2 expression, leading to marked ovarian cancer cells sensitive to carboplatin by enhancing apoptosis. We then corroborated these results using in vivo experiments. Taken together, C. militaris inhibits carboplatin-resistant SKOV-3 cell proli

关键词： ZnO NPs   ATF3   凋亡   DNA损伤   p53  

摘要： 纳米氧化锌(Zn O nanoparticles,Zn O NPs)是一类新型高性能的多功能无机材料,被广泛应用于日用品、电子设备、橡胶、食品药品等领域,其对环境和职业暴露人群的潜在风险逐渐引起人们广泛关注。呼吸道是Zn O NPs主要暴露途径之一,Zn O NPs可引起呼吸道上皮细胞炎症、凋亡、DNA损伤等不良结局。Zn O NPs对细胞的毒效应主要取决于Zn O NPs的暴露程度(外因)和细胞的反应(内因),然而目前对Zn O NPs发挥毒效应过程中的关键响应基因及其功能的认识尚不全面。我们前期研究发现Zn O NPs显著诱导ATF3表达,本学位论文对ATF3蛋白在Zn O NPs致人支气管上皮细胞毒效应中的作用进行深入研究。本课题所采用的Zn O NPs平均粒径为34.0 nm,呈六方纤锌矿晶体结构,具有较好分散性。首先利用CCK-8检测Zn O NPs处理条件下人支气管上皮(HBE)细胞活力变化。结果显示,5μg/m L浓度Zn O NPs显著降低HBE细胞活力,随着浓度的增加,细胞活力进一步下降。进一步利用荧光探针检测HBE细胞在Zn O NPs处理下细胞内总活性氧(ROS)生成情况。结果显示,5μg/m L浓度Zn O NPs作用下HBE细胞内ROS含量显著升高。利用γH2AX染色观察HBE细胞在Zn O NPs处理下DNA损伤情况。结果显示,5μg/m L浓度Zn O NPs引起HBE细胞内DNA双链断裂。以上结果说明,Zn O NPs可引起HBE细胞的细胞毒性效应以及遗传毒性效应。实时荧光定量PCR以及蛋白质免疫印迹结果显示,Zn O NPs处理后细胞内ATF3表达显著上调。活性氧清除剂(NAC)预处理后,Zn O NPs引起ATF3升高的水平得到回复,说明ATF3受Zn O NPs诱导的氧化应激调控。Nrf2信号通路是Zn O NPs引起氧化应激反应的关键信号通路,于是我们探索Nrf2对ATF3表达的调控。抑制HBE细胞内源Nrf2表达后,ATF3 m RNA水平以及蛋白质水平均显著降低;荧光素酶报告基因实验结果显示,Nrf2调控ATF3启动子的转录活性。进一步,我们研究了ATF3在Zn O NPs毒效应中的作用。我们发现,敲低ATF3后,Zn O NPs刺激引起的γH2AX形成显著增加,而细胞活力显著升高、细胞凋亡受到抑制。以上结果提示ATF3抑制Zn O NPs引起的DNA损伤,并促进Zn O NPs引起的细胞凋亡。p53是调节DNA损伤修复的关键蛋白,免疫共沉淀(Co-IP)结果证实ATF3与p53存在相互作用。并且ATF3可抑制Zn O NPs引起的p53蛋白的降解,这说明ATF3通过稳定p53促进DNA损伤修复。综上,本论文发现:1)Zn O NPs通过Nrf2信号通路促进HBE细胞中ATF3表达;2)HBE细胞中敲低ATF3导致Zn O NPs引起的DNA损伤显著增加;3)HBE细胞中敲低ATF3抑制Zn O NPs引起的细胞凋亡。本论文证明ATF3是支气管上皮细胞响应Zn O NPs暴露的关键基因,可抑制Zn O NPs诱导的DNA损伤,这将有助于阐明Zn O NPs发挥毒效应的分子机制,并可能为Zn O NPs造成的健康风险提供防护依据和手段。

关键词： Semaphorin7A   内皮细胞   全转录组测序   内皮细胞间质化   Semaphorin7A   内皮细胞间质化   TGF-β2   TGF/Smad信号通路   Semaphorin7A   ATF3   TGF-β2   TGF-β/Smad信号通路   Semapharin7A   integrin-β1   ATF3   内皮细胞间质化   Sema7A基因敲除小鼠   PCL   扰动流   内皮细胞间质化  

摘要： 在胚胎发育和疾病的发生发展过程中,血管内皮细胞可以发生表型的转变,表现为内皮细胞丢失部分自身的特征,同时获得部分其它细胞特有的表型,例如内皮细胞向平滑肌细胞,成纤维细胞等间质细胞转化,称为内皮细胞间质化（endothelial to mesenchymal transition End MT）。在内皮细胞发生间质化转变的过程中,内皮细胞特异性的标记物例如:血小板内皮细胞粘附分子（platelet endothelial cell adhesion molecule-1 PECAM-1/CD31）,血管内皮钙黏蛋白（vascular endothelial cell cadherin VE-Cadherin）表达减弱,间质细胞的标记物例如:平滑肌细胞肌动蛋白-α（alpha-smooth muscle actinα-SMA）,成纤维细胞特异性蛋白（fibroblast-specific protein-1 FSP-1）表达增高。胚胎时期End MT参与组织的生长发育例如:在房室管,心脏瓣膜发育过程中,内皮细胞通过间质化转变形成心脏瓣膜组织。成年后End MT在慢性纤维化过程中发挥着重要的作用,例如心肌纤维化,肾纤维化以及系统性硬化。由内皮细胞间质化转变形成的细胞其生物学特性及功能与正常间质细胞亦有差异。间质化转变而来的细胞分泌细胞外基质功能较强,更容易引起组织纤维化。例如在肺纤维化和肾纤维化过程中间质化转变的内皮细胞分泌细胞外基质以及基质金属蛋白酶的平衡被打破,最终导致组织纤维化。在心血管疾病中,End MT参与了动脉粥样硬化的形成,同时与斑块的不稳定性有关。另外,End MT引起肺动脉管壁重塑导致肺动脉高压。由于End MT是多种疾病的病理基础,寻找引起内皮细胞间质化转变的关键分子对于相关疾病的诊断和治疗具有重要的意义。轴突导向因子家族（Semaphorin）包括一大类分泌性和膜相关性蛋白,最早在免疫细胞中被发现,通过与细胞膜表面受体（plexins以及neuropilins）结合参与神经信号传导。最近发现除了参与神经信号传导,轴突导向因子家族成员还与多种疾病的病理生理改变有关例如:动脉粥样硬化,血管炎症性疾病。Semaphorin7A（Sema7A）与牛痘病毒A39R在序列上有高度同源性,其主要通过与膜受体plexin以及整合素（integrin）结合发挥生物学功能。据报道,Sema7A参与调节嗅觉突触形成,肺纤维化,多发性硬化,T细胞介导的炎症反应以及乳腺癌的发生发展。我们实验室最近报道了Sema7A通过诱导白细胞浸润,单核巨噬细胞粘附,血小板激活以及血管新生而促进动脉粥样硬化斑块的形成。Sema7A可以通过诱导上皮细胞间质化转变促进口腔鳞状细胞癌转移,但是Sema7A在内皮细胞间质化转变中的作用及其机制尚未见报道。本课题提出假说:Sema7A通过TGF/Smad信号通路诱导内皮细胞间质化改变。本研究分为以下五部分:第一部分Semaphorin 7A对内皮细胞功能的影响及在表型转化中的作用目的:探讨Semaphorin 7A在内皮细胞中的功能,以及在细胞表型转化中的作用。方法:我们首先通过慢病毒将Sema7A过表达的质粒转染人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells HUVECs）,构建Sema7A-HUVECs细胞系。再通过高通量测序分析Sema7A过表达后,HUVECs基因表达的改变。结合KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes KEGG）数据库,分析Sema7A过表达后,哪些信号通路被激活。通过Gene ontology（GO）富集分析,了解Sema7A过表达后内皮细胞的功能改变。利用显微镜观察Sema7A过表达后细胞形态的变化。鉴于CD31是内皮细胞特异性标志物,我们通过流式细胞术检测Sema7A-HUVECs和转染空白载体的对照组Con335-HUVECs细胞膜表面CD31表达的变化。为了进一步验证Sema7A-HUVECs是否发生表型转变,我们通过实时定量聚合酶链锁反应（Quantitative real time polymerase chain reaction q-PCR）和免疫印迹试验（Western-blot）分别在RNA以及蛋白水平对细胞表面标记物进行检测。结果:正常HUVECs中Sema7A几乎不表达,Sema7A过表达质粒转染后Sema7A表达明显增高。与对照组Con335-HUVECs相比,Sema7A过表达引起1168个基因上调,886个基因下调。其中大多数与End MT以及间质细胞相关的基因在Sema7A-HUVECs中表达增高,内皮细胞相关基因表达降低。镜下:对照组Con335-HUVEC

关键词： 皮肤黑色素瘤   成纤维细胞   基质细胞   活化转录因子3   白介素6  

摘要： 背景与目的皮肤黑色素瘤是起于皮肤表皮基底层的黑色素细胞的皮肤恶性肿瘤。黑色素瘤极易发生转移,是皮肤三大恶性肿瘤中最致命的一种。临床上对于黑色素瘤,尤其是发生转移的皮肤黑色素瘤病例的治疗一直是一个很棘手的问题。黑色素瘤细胞通常是由被激活的细胞外信号调节激酶(ERK)途径进行调节,该信号由BRAF激活突变所诱导。BRAF是RAF家族的一种蛋白激酶,其功能位于RAS下游,通过磷酸化MEK激活ERK来帮助刺激细胞生长和存活。临床上用于治疗皮肤恶性黑色素瘤的BRAF抑制剂可短暂有效,但是大多数患者会产生耐药性。肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)指的是肿瘤在发生发展过程中所处的局部环境,构成这一局部环境的细胞成分复杂,包括但不限于免疫细胞、血细胞、内皮细胞、脂肪细胞和细胞基质。肿瘤基质是肿瘤微环境的重要组成部分,主要由成纤维细胞和细胞外基质构成。在过去的几十年里,越来越多的研究成果证实TME在决定疾病进展和治疗结果方面的作用变得越来越明显。肿瘤细胞与微环境之间的相互作用机制非常复杂,但可分为两大类:即接触式和非接触式途径。其中接触式途径涉及细胞-细胞和细胞外基质粘附分子的接触依赖性机制。而在非接触式途径中,诸多可溶性分子,如生长因子,趋化因子和细胞因子,以及可溶性的亚细胞器(包括微泡和外泌体)等在整个过程中起到至关重要的作用,最终,这些相互作用通过分泌和旁分泌机制,完成与恶性肿瘤细胞的相互作用。肿瘤微环境肿瘤基质细胞中最主要的细胞成分为成纤维细胞。最近,越来越多的相关研究成果显示,肿瘤基质组织与肿瘤抗药性的产生有很大关系,提示癌症治疗应该包括靶向基质细胞来抑制肿瘤的策略。ATF3(activating transcription factor 3,ATF3)为 ATF/CREB 家族重要成员之一。作为重要的转录因子,ATF3在不同组织中表现的功能可能存在差异。ATF3基因在肿瘤发展中可能会表现出促癌基因和抑癌基因正反两方面作用。本课题组前期研究结果显示在人表皮角质形成细胞中,上调ATF3表达水平会抑制p53基因依赖的细胞衰老,从而促进皮肤鳞状细胞癌的发生发展。人真皮成纤维细胞中亦有ATF3基因表达,但对其功能的研究甚为少见,目前为止只有一篇报道指出低表达ATF3的成纤维细胞可转化为癌症相关成纤维细胞表形,并最终促进了皮肤鳞状细胞癌的发展。但是人真皮成纤维细胞ATF3与皮肤黑色素瘤之间的关系尚未见报道。为填补这一空白,本研究首先拟通过对皮肤黑色素瘤临床病例标本进行检测,明确ATF3在临床黑色素瘤基质细胞中表达情况。随后利用ATF3过表达和敲除等手段,借助共培养体系和条件培养基等方法,通过体外体内实验检测原代人真皮成纤维细胞对皮肤黑色素瘤细胞生长与迁移等生物学行为的影响,并针对一系列指标进行检测以明确机制。最后本研究将尝试验证药物诱导ATF3增高表达的人真皮成纤维细胞对人皮肤黑色素瘤细胞的影响,以期将来为皮肤黑色素瘤的治疗提供新的思路和方案。方法1.对皮肤恶性黑色素瘤临床病例标本ATF3表达水平的检测首先收集病理诊断为皮肤黑色素瘤的临床病例肿瘤石蜡标本,利用免疫组织化学染色技术对石蜡切片进行染色,后利用RNAscope原位杂交染色技术,对免疫组织化学染色结果进行验证。随后利用免疫荧光双重染色技术,检测人正常真皮成纤维细胞、人皮肤良性黑色素痣以及人皮肤黑色素瘤肿瘤基质组织中成纤维细胞ATF3表达水平,并对结果进行统计学分析。2.人真皮成纤维细胞ATF3对恶性黑色素瘤细胞生长与迁移影响体外及体内实验检测首先分离原代人真皮成纤维细胞并培养。利用已有针对人ATF3基因过表达和CRISPR/Cas9基因敲除的慢病毒和逆病毒来制备相应的病毒,并用病毒感染人真皮成纤维细胞已达到ATF3过表达及敲除。利用qRT-PCR以及Western Blot等技术对ATF3表达效果进行验证。利用共培养体系,以及收集ATF3不同表达水平的成纤维细胞条件培养基来培养黑色素瘤细胞,然后利用CCK-8、细胞克隆形成实验、transwell以及细胞划痕实验等方法,检测ATF3过表达或敲除的人真皮成纤维细胞对皮肤黑色素瘤生长与迁移能力的影响。采用8周nude/nude裸鼠,随机分为二组,每组三只,将ATF3过表达的人真皮成纤维细胞与皮肤黑色素瘤细胞混合,利用裸鼠皮下成瘤实验检测其对黑色素瘤细胞体内成瘤能力的影响。3.人真皮成纤维细胞ATF3对恶性黑色素瘤细胞生长与迁移影响分子机制的检测利用qRT-PCR技术,对过表达或敲除ATF3基因的人真皮成纤维细胞相应炎性因子等基因变化进行检测,筛选备选下游基因。利用ELISA技术,对条件培养基中相应炎性因子分泌蛋白水平变化进行检测,以验证qRT-PCR结果。利用候选基因相应的重组蛋白或者抑制剂,结合ATF3基因

关键词： ATF3   砷   人支气管上皮细胞损伤   DR5   BCL-XL  

摘要： 背景:无机砷是一种自然界中广泛存在的毒物,职业性砷中毒是一种慢性砷中毒途径,从事采矿、冶炼、焙烧矿石、农药制备等行业的工人会长期通过呼吸道或皮肤接触砷,从而危害健康。近年来研究发现,转录激活因子3（Activating transcription factor3,ATF3）基因表达异常与肿瘤的发生发展相关,ATF3在不同癌症中的作用有明显差异,是一个既有促癌作用又有抑癌作用基因。目的:本文的目的在于探究ATF3在As3+导致的人支气管上皮细胞的损伤中的作用,并阐明其潜在机制,探究ATF3基因在肺癌的形成过程中可能存在的作用,为肺癌的发生发展提供潜在的治疗靶点。方法:首先利用细胞增殖毒性实验和流式细胞仪检测As3+对人支气管上皮细胞的损伤情况,再利用蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR检测As3+刺激下的人支气管上皮细胞中ATF3的蛋白以及m RNA的表达量,利用双荧光酶素报告基因实验检测As3+对ATF3启动子活性的影响。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建ATF3敲除的人支气管上皮细胞以便探究ATF3在As3+致人支气管上皮细胞损伤中的作用和机制,利用蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR分别在野生型和ATF3-/-的人支气管上皮细胞中检测ATF3可能的上下游基因和信号通路的表达,其中包括p38、JNK、DR5、BCL-XL,还利用了染色质免疫沉淀技术检测ATF3与DR5和BCL-XL的特异性结合位点,最后使用了蛋白免疫印迹反应检测了使细胞发生程序性凋亡的关键蛋白酶caspase家族。结果:我们发现了As3+能够在人支气管上皮细胞中通过p38和JNK信号通路上调ATF3的表达,并且ATF3能够通过内源性和外源性的两条途径诱导细胞的凋亡,其中外源性途径为ATF3能够上调DR5的表达引起caspase 8的激活而内源性的途径为ATF3抑制抑凋亡基因BCL-XL的表达,激活caspase 9。活化的caspase 8和caspase 9最终共同激活凋亡执行者caspase 3,导致细胞的凋亡。这一结果说明ATF3能够通过两种途径使As3+导致的受损的人支气管上皮细胞发生凋亡,在肺癌的发生过程中起到抑制的效果。

关键词： 木通苯乙醇苷B   ATF3   p53   细胞周期   凋亡  

摘要： 背景:肝细胞癌(HCC)是我国主要发病率和最具威胁生命的癌症之一,如何战胜肝癌是摆在患者面前的世界性难题。木通及其果实预知子是一种具有抗炎和抗肿瘤作用的中药,文献研究发现中药木通及其果实预知子对肝癌有抑制作用,但是否与其质量标志物木通苯乙醇苷B有关,其作用机制如何,尚未明确。 目的:研究木通苯乙醇苷B对肝癌细胞周期、凋亡的影响,并初步探究其作用机制。 方法:用木通苯乙醇苷B处理肝癌细胞。MTT法检测细胞存活率,流式细胞术和蛋白印迹法检测细胞凋亡与周期;转录组学观察木通苯乙醇苷B对肝癌细胞mRNA的影响,筛选可能机制;沉默ATF3 RNA,流式细胞术、qPCR和蛋白印迹法检测木通苯乙醇苷B处理细胞后,对细胞周期和凋亡的影响。 结果:木通苯乙醇苷B抑制了肝癌细胞的增殖,阻滞了细胞周期于S期并诱导了细胞凋亡。此外,转录组学证实了木通苯乙醇苷B处理肝癌细胞之后对周期和凋亡信号的影响。进一步的研究表明,木通苯乙醇苷B可增加ATF3、p53、以及细胞周期因子p21、凋亡因子Cleaved-PARP、Cleaved-caspase-3的表达,降低细胞周期因子CDK2、Cyclin A、Cyclin B1、Cyclin D1、Cyclin E的表达;并能减轻ATF3 siRNA对p53、ATF3信号及细胞周期、凋亡的影响。 结论:木通苯乙醇苷B通过激活ATF3/p53信号,从而阻滞了肝癌细胞的周期并诱导了凋亡。

关键词： TRPV1   福尔马林实验   足水肿   痛觉过敏   ATF3  

摘要： 研究背景和目的瞬时受体电位（TRP,Transient receptor potential）离子通道家族是一类在神经系统中广泛分布的非选择性阳离子通道,在感觉信号传导中起重要作用。瞬时受体电位香草酸亚型1（TRPV1,Transient receptor potential vanilloid 1）是最早克隆的、在伤害感受中起重要作用的TRP通道,与炎症密切相关。福尔马林致痛模型是一种常用的炎性痛模型,除急性自发痛外,还可引起局部水肿、长时程的机械痛和热痛敏。福尔马林导致持续性痛敏的机制还不明确;TRPV1在不同浓度福尔马林致痛小鼠行为学中的作用也不明确。为此,本研究使用TRPV1基因敲除小鼠和WT小鼠,研究了两组小鼠在足底福尔马林注射后的双相痛、足水肿、机械痛和热痛觉过敏以及福尔马林注射后第三天DRG中ATF3（一种应激蛋白,可作为神经损伤标志物）的表达差异,初步探索了TRPV1在不同浓度（0.5%、2.5%、5%）福尔马林致小鼠炎症和痛觉过敏中的作用及可能机制。研究方法1、福尔马林实验:小鼠足底注射福尔马林后录像45分钟,统计其舔脚和甩脚的自发痛行为持续时间。2、小鼠足肿胀测量:用电子游标卡尺测量小鼠脚掌厚度来评估小鼠足水肿的程度。3、Von Frey实验:用von Frey触觉测量套件测小鼠机械痛。根据Dixon的up-and-down方法计算小鼠50%缩脚阈值。4、Hargreaves实验:用热辐射仪测量小鼠的热痛阈值。5、ATF3免疫荧光成像:DRG冰冻切片进行免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜拍片。6、统计与分析:多个时间点的行为学实验结果采用双因素方差分析;多重比较采用Bonferroni法校正。P<0.05为有统计学差异。研究结果1、随着福尔马林浓度的上升,两组小鼠(WT小鼠和TRPV1-/-小鼠)的自发痛反应时间均增加,但两组小鼠之间没有统计学差异。2、0.5%（F=8.649,P=0.0115）和2.5%（F=6.237,P=0.0256）福尔马林注射后,TRPV1-/-小鼠足水肿程度比WT小鼠轻。3、0.5%福尔马林可导致两组小鼠均机械痛敏,而2.5%、5%福尔马林会导致两组小鼠机械痛丧失,且恢复时间随给药浓度上升而延长,但两组小鼠之间没有统计学差异。4、TRPV1-/-小鼠热痛基础值高于WT小鼠。WT小鼠注射2.5%福尔马林后6小时出现热痛敏,1天时恢复;而TRPV1-/-小鼠热痛阈值不变。5、两组小鼠DRG神经元中,ATF3阳性率均随福尔马林浓度的上升而增加,但两组小鼠之间没有统计学差异。研究结论敲除TRPV1可以减轻较低浓度福尔马林导致的小鼠足水肿,并使福尔马林导致的热痛敏消失,但不影响福尔马林引发的急性自发痛、机械痛敏以及DRG中ATF3的表达。上述结果提示,TRPV1可能在炎症导致的水肿和热痛敏中起促进作用,是有潜力的消肿止痛药开发靶点。