摘要： Cardiac resident MerTK+ macrophages exert multiple protective roles after ischemic injury;however, the mechanisms regulating their fate are not fully understood. In the present study, we show that the GAS6-inducible transcription factor, activating transcription factor 3 (ATF3), prevents apoptosis of MerTK+ macrophages after ischemia-reperfusion (IR) injury by repressing the transcription of multiple genes involved in type I interferon expression (Ifih1 and Ifnb1) and apoptosis (Apaf1). Mice lacking ATF3 in cardiac macrophages or myeloid cells showed excessive loss of MerTK+ cardiac macrophages, poor angiogenesis and worse heart dysfunction after IR, which were rescued by the transfer of MerTK+ cardiac macrophages. GAS6 administration improved cardiac repair in an ATF3-dependent manner. Finally, we showed a negative association of GAS6 and ATF3 expression with the risk of major adverse cardiac events in patients with ischemic heart disease. These results indicate that the GAS6-ATF3 axis has a protective role against IR injury by regulating MerTK+ cardiac macrophage survival and/or proliferation. Shao, Li, Liu et al. identify the GAS6-ATF3 axis as a central regulator of survival and proliferation of protective resident MerTK+ cardiac macrophages and show that GAS6 administration improves cardiac repair after ischemic-reperfusion injury in mice in an ATF3-dependent manner.

摘要： Pro-reparative cardiac-resident macrophages have emerged as major players in salvaging the ischemic myocardium of a diseased heart. New research now highlights ATF3 as a key transcription factor that governs macrophage survival and proliferation and myocardial repair.

关键词： Qiliqiangxin capsule   miR-382-5p   ATF3   Cardiac hypertrophy   Cardiac dysfunction  

摘要： Objective: Qiliqiangxin Capsule (QL) was investigated for its possible role in cardiac hypertrophy in this study. Methods: QL (0.5 mg/mL) was pre-treated in Neonatal Mouse Ventricular Cardiomyocytes (NMVCs) before induction of cardiomyocyte hypertrophy by Angiotensin II (Ang-II). Immunofluorescence staining for alpha-actinin was conducted to determine cell surface area. Atrial Natriuretic Peptide (ANP) and Brain Natriuretic Peptide (BNP) of hypertrophy markers were examined. Ang-II infusion was given to stimulate cardiac hypertrophy in mice. The cardiac function of mice was detected by echocardiography, and the pathological status of myocardial tissue was observed. Results: The surface of cardiomyocytes was enlarged by Ang-II, and ANP and BNP levels were increased. QL processing could save these changes. miR-382-5p was upregulated in Ang-II-treated NMVCs, and reducing miR-3825p could further enhance the therapeutic effect of QL while elevating miR-382-5p weakened the protective effect of QL. QL could inhibit miR-382-5p expression to negatively regulate Activated Transcription Factor 3 (ATF3) expression. Enhancing ATF3 expression rescued miR-382-5p upregulation-mediated role in NMVCs. In addition, QL alleviated Ang-II-stimulated cardiac hypertrophy and cardiac dysfunction in mice. Conclusion: QL may alleviate cardiac hypertrophy and cardiac dysfunction via the miR-382-5p/ATF3 axis.

关键词： Carfilzomib   ATF3   LDHA   Metabolic reprogramming   Esophageal squamous cell carcinoma  

摘要： Carfilzomib, a second-generation proteasome inhibitor, has been approved as a treatment for relapsed and/or refractory multiple myeloma. Nevertheless, the molecular mechanism by which Carfilzomib inhibits esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) progression largely remains to be determined. In the present study, we found that Carfilzomib demonstrated potent anti-tumor activity against esophageal squamous cell carcinoma both in vitro and in vivo. Mechanistically, carfilzomib triggers mitochondrial apoptosis and reprograms cellular metabolism in ESCC cells. Moreover, it has been identified that activating transcription factor 3 (ATF3) plays a crucial cellular target role in ESCC cells treated with Carfilzomib. Overexpression of ATF3 effectively antagonized the effects of carfilzomib on ESCC cell proliferation, apoptosis, and metabolic reprogramming. Furthermore, the ATF3 protein is specifically bound to lactate dehydrogenase A (LDHA) to effectively suppress LDHA-mediated metabolic reprogramming in response to carfilzomib treatment. Research conducted in xenograft models demonstrates that ATF3 mediates the anti-tumor activity of Carfilzomib. The examination of human esophageal squamous cell carcinoma indicated that ATF3 and LDHA have the potential to function as innovative targets for therapeutic intervention in the treatment of ESCC. Our findings demonstrate the novel function of Carfilzomib in modulating ESCC metabolism and progression, highlighting the potential of Carfilzomib as a promising therapeutic agent for the treatment of ESCC.

关键词： MicroRNA-124   SAH   AK4   Neuroprotective effect  

摘要： Spontaneous subarachnoid hemorrhage (SAH) accounts for approximately 5% of all cases of stroke. SAH is correlated with elevated rates of mortality and disability. Despite significant advancements in comprehending the pathogenesis and surgical management, efficacious clinical interventions remain restricted, and the prognosis is yet to be enhanced. MicroRNAs play a crucial role in various pathological processes in organisms. Revealing these regulatory processes is conducive to the development of new treatment methods. MicroRNA-124 is highly expressed in the nervous system and has significant research value for SAH. This study aims to explore the role of miR-124 in the early post-SAH period on neural function and verify whether it is involved in the pathological and physiological processes of SAH. In this study, we used methods such as comparing the expression levels of miR-124 in cerebrospinal fluid, establishing a rat SAH model, and a mouse embryonic primary neuron hemoglobin stimulation model to verify the downstream proteins of miR-124 in SAH. Through transfection techniques, we adjusted the expression of this small RNA in Vitro and in Vivo models using miR-124 inhibitor and mimic in the primary neuron hemoglobin stimulation model and rat SAH model, and observed the phenotype. Finally, by consulting the literature and verifying in Vivo and in Vitro methods, AK4 and downstream molecule ATF3 were identified as downstream targets of miR-124.

关键词： 铁死亡   SIRT1   NAD+   胶质瘤   ATF3  

摘要： 背景: 铁死亡是一种铁依赖性脂质过氧化物积累引起的细胞程序性死亡方式,铁死亡主要的生物学特征是细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)在铁离子存在下氧化细胞膜上的多不饱和脂肪酸形成有毒性的过氧化脂质,破坏细胞膜引起细胞死亡。通过诱导铁死亡来杀死肿瘤细胞是一种新型的肿瘤治疗方案。转录激活因子3(Activating transcription factor 3,ATF3)作为ATF/CREB转录因子家族的一员,可以抑制溶质载体家族7成员11(Solute carrier family 7member 11,SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione peroxidase 4,GPX4)的转录进而参与铁死亡的发生。内质网应激途径可以激活ATF3,但目前尚不清楚是否有其他因素参与ATF3的激活。 沉默信息调节因子1(Silent information regulator 1,SIRT1)是一种去乙酰化酶,它通过消耗烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide Adenine Dinucleotide,NAD+)从例如肿瘤抑制蛋白P53(Cellular tumor antigen P53,P53)、多聚ADP核糖聚合酶1(Poly(ADP-ribose)polymerase 1,PARP1)等靶蛋白中去除乙酰化氨基酸残基,在细胞生物学中发挥着多种重要作用,如炎症、代谢、氧化应激和细胞凋亡等。激活的SIRT1保护非肿瘤细胞免受由各种有害因素引起的铁死亡,例如SIRT1抑制由热应激引起的肺上皮细胞铁死亡,由缺血、缺氧导致的神经元细胞铁死亡以及由阿霉素诱导的心肌细胞铁死亡。从机制而言,SIRT1主要通过两种途径抑制铁死亡:一种是去乙酰化P53来抑制P53依赖性的SLC7A11下调,另一种则是去乙酰化核因子E2相关因子2(Nuclear factor erythroid2-related factor2,NRF2)来驱动NRF2介导的GPX4上调。但是激活的SIRT1通过多种途径对肿瘤细胞产生有害影响。文献报道,SIRT1通过加重核因子-κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)的核转位,促进了二甲双胍引起的乳腺癌细胞焦亡;SIRT1通过激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)来加重槲皮素诱导的肺癌细胞自噬性死亡;SIRT1也通过上调乙酰基转移酶10(N-Acetyltransferase 10,NAT10)来促进脱氧鬼臼毒素(Deoxypodophyllotoxin,DPT)诱导的胶质瘤细胞PARP1依赖性死亡。所以,SIRT1在胶质瘤细胞铁死亡中的作用和机制值得进一步研究。 作为经典的铁死亡诱导剂,RAS选择性致死化合物3(RAS-selective lethal compounds 3,RSL3)可以通过靶向抑制GPX4引发铁死亡。RSL3作为一种能够特异性诱导细胞发生铁死亡的化合物,在研究和开发新的肿瘤治疗药物中具有潜在价值。本课题组的前期研究中发现RSL3可以通过激活致死性自噬引起胶质瘤细胞死亡,在体内或体外均对胶质瘤细胞有一定的杀伤作用。所以,进一步探索RSL3诱导胶质瘤细胞铁死亡的机制,不仅能为铁死亡的分子机制研究提供参考,还可以为RSL3的临床应用提供理论依据。 目的: 采用U87,U251和U118人胶质瘤细胞系以及裸鼠皮下异位移植瘤模型,探究SIRT1在RSL3诱导胶质瘤细胞铁死亡过程中的作用和机制。 方法: ***-Orange荧光探针检测RSL3诱导胶质瘤细胞亚铁离子水平变化和使用DFO,FAC,SRT2183,EX527等抑制剂对RSL3诱导胶质瘤细胞亚铁离子水平变化的影响; 2.使用丙二醛含量检测试剂盒测定RSL3诱导胶质瘤细胞脂质过氧化水平变化和使用各抑制剂对RSL3诱导胶质瘤细胞脂质过氧化水平变化的影响; 3.乳酸脱氢酶释放实验检测RSL3诱导胶质瘤细胞死亡程度以及使用Fer-1,NAD+,SRT2183等抑制剂对RSL3诱导胶质瘤细胞死亡程度的影响; 4.蛋白印迹法(Western Blotting)检测RSL3处理胶质瘤细胞后SLC7A11,GPX4,转铁蛋白(transferrin,TF),转铁蛋白受体(transferrin receptor,TFR),SIRT1,ATF3,SIRT1活性调节因子(Active regulator of SIRT1,AROS)等蛋白水平的变化以及各抑制剂对上述变化的影响; 5.使用siRNA敲低SIRT1、ATF3和AROS的表达水平,研究它们对RSL3诱导胶质瘤细胞铁死亡相关指标变化的影响; 6.免疫荧光染色后,激光共聚焦显微镜下观

关键词： 噪声性耳聋   氧化应激   ATF3   NRF2   衣康酸二甲酯   噪声性耳聋   氧化应激   ROS   ATF3   ATF3   NRF2   抗氧化应激   噪声性耳聋   抗氧化应激   ATF3   NRF2   DI  

摘要： 目的:明确在噪声性耳聋(Noise induced hearing loss,NIHL)的小鼠模型中转录激活因子 3(Activated transcriptional factor 3,ATF3)的表达及定位,研究 ATF3 在NIHL的小鼠耳蜗中发挥的效应,并探究通过药物干预调节耳蜗ATF3的表达能否改善小鼠的听力水平。 方法:本研究通过听性脑干反应(Auditory brainstem response,ABR)检测了各组实验小鼠的ABR阈值以明确小鼠听力水平;通过电生理平台检测小鼠内淋巴电位(Endolymphatic potential,EP);通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot,WB)、组织及细胞免疫荧光等实验检测耳蜗或小鼠耳蜗毛细胞株HEI-OC1细胞中ATF3、核因子红系 2 相关因子 2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,NRF2)、血红素氧合酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)和喹啉酮氧化酶 1(NAD(P)H quinone oxidoreductase 1,NQO1)等分子的表达水平;通过细胞慢病毒转染构建沉默或过表达ATF3的细胞系进而验证ATF3在细胞模型中发挥的效应;通过H2O2刺激细胞构建细胞的氧化应激损伤模型;通过细胞活性检测试剂盒Cell Counting Kit-8(CCK8)检测各组细胞活性;通过流式细胞术检测细胞内活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)的水平和细胞凋亡的水平;通过核酸酶靶向切割和释放(Cleavage under target and release using nuclease,CUT&RUN)等一系列实验方法验证ATF3能否结合于NRF2的启动子区域;通过腹腔注射衣康酸二甲酯(Dimethyl itaconate,DI)构建DI预处理的小鼠模型。 结果:ATF3及抗氧化应激通路相关分子NRF2及其下游分子的表达在噪声暴露后的耳蜗和H2O2刺激的HEI-OC1细胞模型中均显著升高。沉默HEI-OC1细胞中ATF3的表达后增加了细胞对氧化性损伤的敏感性,细胞受刺激后胞内ROS水平显著升高而NRF2及其下游分子的表达显著降低。过表达细胞中ATF3的基因后改善细胞受到H2O2刺激的细胞活性,细胞中NRF2及其下游分子表达水平显著升高。细胞受H2O2刺激后结合于NRF2启动子区域的ATF3蛋白增加。DI可以上调小鼠耳蜗ATF3的表达,显著改善噪声暴露后小鼠的ABR阈值和维持小鼠耳蜗EP。细胞实验中,DI显著改善HEI-OC1细胞受H2O2刺激后的细胞活性,而在沉默ATF3表达的细胞中DI的保护作用消失。 结论:ATF3在噪声性耳聋中发挥耳保护作用,且这种保护效应可能是通过其入核结合于NRF2启动子区域在转录水平调控NRF2的表达实现。DI可以在体上调ATF3及NRF2/HO-1/NQO1等分子的表达并可能通过调节ATF3的表达改善NIHL小鼠的听觉生理功能。 第一部分:噪声性耳聋中ATF3的耳保护作用 目的:明确噪声暴露后小鼠耳蜗中ATF3的表达、分布以及其可能发挥的功能效应。 方法:本研究通过110dB的宽频噪声对小鼠进行2小时的噪声暴露构建NIHL小鼠模型;通过ABR检测了各组实验小鼠的ABR阈值以明确小鼠听力水平;通过RT-PCR、WB、组织及细胞免疫荧光等实验检测耳蜗或细胞中ATF3的表达水平及分布;通过ROS反应产物4-羟基巯基-2-壬烯酸(4-Hydroxynonenal,4-HNE)的免疫荧光染色检测耳蜗氧化应激水平;通过细胞活性检测试剂盒CCK8检测各组细胞活性;通过细胞慢病毒转染短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)构建沉默ATF3表达(shATF3)的细胞系进而验证ATF3在细胞模型中发挥的效应;通过二氢乙啶染色和流式细胞术检测细胞内活性氧簇ROS的水平和细胞凋亡的水平;通过ROS抑制剂NAC验证抑制ROS后shATF3细胞受H2O2刺激后的活性变化。 结果:110dB噪声暴露2小时后小鼠ABR阈值显著升高且小鼠获得永久性听力阈移,小鼠耳蜗中ATF3的mRNA水平和蛋白表达水平也均有显著升高,耳蜗冰冻切片的免疫荧光结果显示小鼠经噪声暴露后ATF3在外侧壁和螺旋神经节的表达均有升高,而升高最为显著的部位是基底膜。HEI-OC1细胞受H2O2刺激后细胞中ATF3的mRNA水平和蛋白表达水平也有显著升高,且细胞免疫荧光结果显示ATF3在细胞质和细胞核中的含量均显著升高,提示ATF3

关键词： 激素性股骨头坏死   铁死亡   MLKL   ATF3  

摘要： 【目的】 激素性股骨头坏死具体发病机制尚不清楚,目前缺乏有效的治疗方法。本研究拟通过收集激素性股骨头坏死患者股骨头组织进行转录组测序筛选关键基因、构建小鼠激素性股骨头坏死模型和Mlkl基因敲除的激素性股骨头坏死小鼠模型,探讨MLKL通过ATF3调控铁死亡在激素性股骨头坏死中的作用及机制,以期为激素性股骨头坏死的治疗提供新的靶点。 【方法】 1.转录组测序及验证 （1）首先,对患有激素性股骨头坏死（Steroid induced necrosis of femoral head,SONFH）和股骨颈或股骨头骨折患者的软骨和软骨下骨进行转录组测序,通过筛选差异表达的基因,从中挑选出与激素性股骨头坏死相关度较高的基因。 （2）运用Western Blot和QPCR等技术检测关键基因的表达,然后,进一步分析人体激素性股骨头坏死的关键因子和炎症指标以及SONFH分期之间的相关性。用PCR assay（炎症因子芯片）检测炎症因子的表达情况。 2.体内、体外实验分析Mlkl基因敲除对成骨细胞、破骨细胞及微血管内皮细胞的影响 （1）体内实验,本研究采用6周龄雄性C57小鼠和Mlkl基因敲除C57小鼠作为实验对象,利用泼尼松龙混悬液诱导小鼠激素性股骨头坏死模型。实验分为WT组（A）、SONFH组（B）和SONFH(Mlkl-/-)组（C）。通过HE染色和Mic ro-CT观察股骨头组织结构的变化,并利用茜素红染色和免疫组织化学（Immun ohistochemical,IHC）评估成骨细胞的活性。利用TRAc P染色和IHC评估破骨细胞情况。利用IHC检测对微血管内皮的影响。 （2）体外实验,分离WT组、SONFH组和SONFH(Mlkl-/-)组小鼠的骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC）和骨髓源巨噬细胞（Bone marrow-derived macrophage,BMMD）。利用流式细胞术鉴定BMSC。采用茜素红染色、QPCR和ELISA评估成骨细胞的骨形成能力。使用TRAc P染色、QPCR、免疫荧光和Western blot检测破骨细胞活性和骨吸收情况的相关指标。对人微血管内皮细胞（Human microvascular endothelial cell,HMEC）进行培养,用地塞米松（Dexamethasone,DEX）诱导,然后使用MLKL抑制剂进行干预,应用CCK8、Transwell、平板克隆、成管实验检测人微血管内皮细胞增值、转移以及成血管能力。 3.转录组测序及体内实验分析Mlkl基因敲除后对SONFH影响的具体机制 （1）对A组、B组和C组股骨头骨组织进行转录组测序,筛选差异表达关键基因,应用Western Blot、QPCR检测关键基因在SONFH中的表达。对临床患者血浆样本ATF3表达量与MLKL、血沉、C反应蛋白等做相关性分析。 （2）尾静脉注射ATF3特异的RNA干扰腺病毒对SONFH(Mlkl-/-)小鼠的A TF3的基因进行下调,用WB检测ATF3的表达、HE染色及Micro-CT观察对股骨头组织结构的影响。尾静脉注射ATF3过表达腺病毒对SONFH小鼠进行ATF3基因过表达;用铁死亡抑制剂Fer-1对SONFH(Mlkl-/-)小鼠进行铁死亡通路阻断;用HE染色及Micro-CT观察股骨头组织结构变化;用WB及ELISA检测铁死亡相关因子含量的变化、普鲁士蓝染色观察Fe2+蓄积、IF检测NOX1和HO-1表达;用IHC检测CD31、VEGF、VWF评价人微血管内皮细胞功能改善情况。 （3）采用CHIP实验分析ATF3和SLC7A11结合位点。 【结果】 1.人激素性股骨头坏死转录组测序结果及相关验证 （1）转录组测序结果:SONFH组与正常对照组（Normal组）比较,一共筛选出4131个显著差异表达基因,其中1802个上调基因,2329个下调基因。将4131个显著差异基因与铁死亡、焦亡和坏死性凋亡数据集交集分别得到69个、13个和24个共有基因。将上述三部分共有差异表达基因合集使用KOBAS（KEGG Orthology Based Annotation System）进行KEGG富集分析,结果表明有59条差异富集通路（p<0.05）,其中包括坏死性凋亡通路。上述24个差异共有基因与坏死性凋亡有关的基因进行PPI网络分析,关联节点较多的差异基因有 CASP1、RIPK3、BIRC3、MLKL、FAS、IFNGR1。 （2）应用股骨头组织进行QPCR验证6个关联点较多的差异基因中MLKL差异最大,并且MLKL在激素性股骨头坏死领域机制研究尚为空白,因此选择MLKL作为关键调节基因。WB和QPCR明确MLKL在人激素性

关键词： 砷   氧化应激   FTO   m6A修饰   ATF3  

摘要： 目的:砷是一种广泛分布在岩石、土壤、水和空气等自然环境中具有神经毒性的物质,通常以化合物形式存在。本课题组之前的研究发现砷可以调控FTO从而改变m6A修饰,并影响砷所致神经细胞氧化应激。本研究将继续探索FTO调节砷所致神经细胞氧化应激的详细机制。 方法:（1）将构建好的SH-SY5Y细胞分为对照组、砷处理组、FTO过表达（OE）组、FTOOE砷处理组,四个组用于转录组测序,根据转录组测序结果筛选出氧化应激相关基因ATF3,并采用Western blot、RT-q PCR、IF实验方法验证ATF3受砷和FTO的调控。（2）用构建FTOOE体外模型相同的方法构建FTO突变体（mut）模型（去除m6A去甲基化酶FTO的活性）,并用Western blot实验方法检测在FTO基因上进行m6A位点突变对ATF3蛋白表达和氧化应激指标HO-1、GCLM和γ-H2AX的影响。（3）用构建FTOOE体外模型相同的方法构建ATF3OE模型并用Western blot验证模型。使用si RNA（已通过RT-q PCR验证其敲低效果）敲低ATF3。随后采用Western blot检测ATF3的过表达和敲低对细胞氧化应激指标HO-1、GCLM和γ-H2AX的影响。（4）使用si RNA敲低YTHDC1、YTHDC2、YTHDF1、YTHDF2、YTHDF3、IGFBP1、IGFBP2和IGFBP3后检测ATF3的m RNA表达,筛选出参与砷调控ATF3的m6A修饰阅读蛋白YTHDC1,随后用Western blot实验方法检测敲低YTHDC1对ATF3蛋白表达和氧化应激指标HO-1、GCLM和γ-H2AX的影响。（5）用构建FTOmut模型相同的方法构建YTHDC1突变体模型（使YTHDC1失去与m6A结合的能力）和YTHDC1敲除（KO）模型,并用Western blot实验方法验证模型。随后用Western blot实验方法检测FTOKO细胞中敲低YTHDC1、FTOKO和YTHDC1KO细胞中转染YTHDC1突变体和野生型质粒后对ATF3蛋白表达的影响。（6）将7周龄,体重20-24g 10只雄性C57BL/6野生型小鼠随机分为对照组、砷处理组,每组5只。对照组饮用灭菌水,砷处理组小鼠饮用灭菌水配置的10mg/L砷溶液,持续3个月后杀鼠取脑皮层送代谢组测序,从差异代谢物中筛选出具有抗氧化效应的肌醇（MI）。根据细胞活力检测（MTS）结果选择MI合适的处理时间和浓度,随后用流式细胞术和Western blot实验方法检测MI对活性氧（ROS）和氧化应激指标HO-1和GCLM的影响。（7）构建MI染毒体内模型,将20只7周龄,体重20-24g 20只雄性C57BL/6野生型小鼠随机分为对照组、砷处理组、MI处理组和砷+MI处理组,每组5只。对照组饮用灭菌水;砷处理组小鼠饮用灭菌水配置的10mg/L砷溶液;MI组小鼠每日一次灌胃0.8mg/g MI;MI组和砷+MI组小鼠饮用灭菌水配置的10mg/L砷溶液并每日一次灌胃0.8mg/g MI,3个月的染毒结束后采用Y迷宫试验和Morris水迷宫试验以分别评估短期工作记忆和空间学习记忆。 结果:（1）筛选FTO参与砷所致神经细胞氧化应激的潜在下游基因:将对照组与砷处理组、砷处理组与FTOOE砷处理组的差异基因（DEGs）进行交集,得到17个基因,选择了其中与氧化应激相关的ATF3。Western blot、IF、RT-q PCR结果显示,ATF3的蛋白表达、荧光强度、m RNA在亚砷酸盐处理24h后呈剂量依赖性显著降低。（2）FTO参与了砷对氧化应激相关基因ATF3的调控:Western Blot、IF实验表明,敲除/过表达FTO显著增强/减轻了砷引起的ATF3蛋白表达降低和荧光强度减弱。在SH-SY5Y细胞中表达FTO突变体后发现,FTO在其m6A位点(FTOmut)的突变会导致ATF3蛋白表达显著降低,而HO-1蛋白表达显著升高。将FTO突变体质粒转染到FTOKO细胞中,发现ATF3蛋白表达无显著变化,而将FTO野生型质粒转染到FTOKO细胞中,发现ATF3蛋白表达显著升高。Me RIP-q PCR实验表明,砷处理增加了ATF3上的m6A修饰。（3）ATF3参与砷致神经细胞氧化应激过程:Western Blot实验表明,用si ATF3转染细胞会显著提高砷暴露下HO-1、GCLM和γ-H2AX的蛋白表达,而ATF3的过表达则会显著降低砷暴露下HO-1、GCLM和γ-H2AX的蛋白表达。（4）m6A阅读蛋白YTHDC1通过调节砷暴露后ATF3的表达介导氧化应激:si RNAs敲除YTHDC1、YTHDC2、YTHDF1、YTHDF2、YTHDF3、IGFBP1、IGFBP2和IGFBP3后发现,当敲