关键词： 乳腺导管癌   具有IQ基序的GTP激酶活化蛋白   Transwell迁移实验  

摘要： 目的探讨支架蛋白IQGAPl在乳腺浸润性导管癌中的表达及沉默IQGAPl表达对肿瘤细胞迁移能力的影响。方法利用免疫组织化学染色和Westernblotting技术检测IQGAPl蛋白在乳腺浸润性导管癌组织、癌旁组织以及良性乳腺病变组织中的表达；分析IQGAPI蛋白在乳腺浸润性导管癌组织中的表达与临床病理参数的关系。构建载有shRNA—IQGAPl的慢病毒表达载体，将其稳定转染高转移乳腺癌MDA—MB-435细胞，获得稳定抑制IQGAPl蛋白表达的细胞株（IQGAPl-shRNA组）及相应的空载细胞株（Vector组）、空白对照细胞株（Blank组）；运用基于Transwell系统的体外迁移实验观察沉默IQGAPl的表达对MDA—MB-435细胞迁移能力的影响。结果IQGAPl蛋白在乳腺浸润性导管癌组织中的阳性表达率为83．44％（136／163），与良性乳腺病变组织（32．14％，9／28）比较，差异具有统计学意义（P〈0．01）；IQGAPl蛋白在癌旁组织中的阳性表达率（77．78％，63／81）与乳腺浸润性导管癌组织比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。163例乳腺浸润性导管癌中WHO分级为3级者IQGAPl蛋白表达为阴性、胞质阳性和胞膜阳性的例数分别为1、3和22，2级者分别为21、40和61；1级者分别为5、9和l，差异具有统计学意义（P〈0．01）；IQGAPl蛋白的表达与肿瘤的大小有关（P〈0．01），与淋巴结是否转移无关（P〉0．05）。Blank组、Vector组和IQGAPl一shRNA组中穿过Transwell小室的平均细胞数分别为（294．3±16．3）、（287．7±16．9）和（93．5±7．6）个，IQGAPl-shRNA组显著低于其他两组（P〈0．01）。结论IQGAPl蛋白在乳腺浸润性导管癌组织中的表达明显高于良性乳腺病变组织；IQGAPI蛋白表达部位与肿瘤分化程度有关；IQGAPl蛋白在乳腺癌转移过程中起促进作用。

关键词： RhoC   IQGAP1   肝细胞性肝癌   免疫组化  

摘要： 背景与目的 肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一,因其早期诊断困难、易发生转移,并缺乏有效的治疗方法,预后极差,死亡率高。故探讨肝细胞性肝癌的发生及转移机制,寻找有效预防及治疗的手段,是目前迫切需要解决的问题。HCC的发生、发展是一个多阶段、多基因参与的连续性过程,机制十分复杂。Ras同源基因(Rho)家族蛋白是一类与ras同源的小GTP结合蛋白,包括Rho (RhoA, RhoB, RhoC),Rac,Cdc42等家族成员,它循环于活性GTP结合型与失活性GDP结合型之间,作为分子开关控制细胞信号转导途径,产生多种生物学效应。RhoC (Ras homologous C)属于小分子G蛋白超家族中的Rho亚家族,亦是Rho信号转导通路的重要分子。文献报道,RhoC在肝癌、胃癌、结肠癌等多种恶性肿瘤中呈高表达,并与肿瘤的浸润转移高度相关。IQGAP1(IQ motif containing GTPase activating protein1)是一种Ras鸟苷三磷酸酶活化蛋白,因其含有类似于Ras GAPs催化域的广泛序列和位于N端的4个可与钙调蛋白相互作用的IQ模体而被命名。研究表明,IQGAP1通过多种转导通路在肝癌、胃癌、结肠癌等多种肿瘤的发生及转移中发挥了显著的促进作用,被认为是一种致癌基因。目前已有在胃癌中的研究发现,RhoC蛋白和IQGAP1蛋白均呈高表达,且二者呈正相关关系。但有关二者在肝癌中的表达情况尚无人报道。为了解二者在HCC发生、发展中的作用及各种可能的机制,本文通过观察HCC组织、癌旁组织和正常肝组织中RhoC和IQGAP1的表达情况以及二者与HCC临床病理特征的关系,初步探讨RhoC和IQGAP1在HCC组织中的相关性。 方法 随机取郑州大学第一附属医院2010年3月-2011年3月手术切除的56例肝癌标本。肝癌患者中男48例,女8例,年龄34-65岁。术前均未接受化疗放疗及免疫治疗,病理学均确诊为原发性肝细胞癌,其中高分化癌14例,中分化癌22例,低分化癌20例；有门脉浸润14例,无浸润42例；TNM分期参照AJCC肝癌肿瘤分期标准,Ⅰ～Ⅱ期17例,Ⅲ～Ⅳ期39例；肿瘤大于或等于5cm者22例,小于5cm者34例。随机选25例性别与年龄构成与上述无显著差异并经病理学证实为肝硬化的癌旁组织做对照,另选15例同期肝血管瘤旁病理证实为正常肝组织的组织为正常对照。以上所有标本组织均经过甲醛溶液固定,石蜡包埋,4μm厚连续切片。载玻片经泡酸、高温灭菌及多聚赖氨酸涂片处理。采用免疫组化PV-9000二步法,具体步骤参照试剂盒说明。用PBS代替一抗做阴性对照。以已知的RhoC和IQGAP1阳性切片作为阳性对照。结果采用SPSS17.0软件分析数据,对HCC组织、癌旁组织及正常组织中RhoC和IQGAP1的差异性采用χ2检验和Fisher确切概率法,对HCC组织中二者的相关性行spearman相关分析,以α=0.05作为检验水准。 结果 1、RhoC表达与HCC临床病理因素的关系 RhoC阳性染色主要定位于细胞浆,呈弥漫性或灶性分布,以弥漫性为主。RhoC在HCC组织、癌旁组织及正常肝组织中的阳性表达率分别为66.1%、40.0%、20.0%,RhoC在HCC中的阳性表达高于癌旁组织(χ2=4.824,P=0.028)及正常肝组织(χ2=10.209,P=0.001),且三者比较具有显著性差异(χ2=12.040,P=0.002)。HCC组织中RhoC在高分化组、中分化组和低分化组中的阳性表达率分别为28.6%、63.6%和95.0%。RhoC在低分化组织中的阳性表达高于中分化组织(Fisher确切概率法,P=0.022)及高分化组(χ2=13.708,P=0.000),且三者比较具有显著性差异(χ2=16.307,P<0.001)。HCC组织中RhoC在临床分期Ⅰ～Ⅱ组与Ⅲ-Ⅳ组的阳性率分别为35.3%与79.5%,两者的差异性比较具有统计学意义(χ2=10.315,P=0.001)。HCC组织中有门脉浸润组RhoC的表达显著高于无门脉浸润组(92.9%vs57.1%),两组的差异具有统计学意义(χ2=4.487,P=0.034)。HCC组织中RhoC的表达与性别、年龄、肿瘤大小无关(均P>0.05) 2、IQGAP1表达与HCC临床病理因素的关系 IQGAP1的阳性染色主要定位于细胞浆或细胞膜,呈弥漫分布。IQGAP1在HCC组织、癌旁组织及正常肝组织中的阳性表达率分别为75.0%、44.0%、13.3%；IQGAP1在HCC组织中的阳性表达显著高于癌旁组织(χ2=7.343,P=0.007),而在癌旁组

关键词： IQ motif-containing GTPase-activating protein 1 (IQGAP1)   microbial pathogenesis   protein scaffold   Salmonella  

摘要： Salmonella enterica serotype Typhimurium invades eukaryotic cells by re-arranging the host-cell cytoskeleton. However, the precise mechanisms by which Salmonella induces cytoskeletal changes remain undefined. IQGAP1 (IQ motif-containing GTPase-activating protein 1) is a scaffold protein that binds multiple proteins including actin, the Rho GTPases Rac1 and Cdc42 (cell division cycle 42), and components of the MAPK (mitogen-activated protein kinase) pathway. We have shown previously that optimal invasion of Salmonella into HeLa cells requires IQGAP1. In the present paper, we use IQGAP1-null MEFs (mouse embryonic fibroblasts) and selected well-characterized IQGAP1 mutant constructs to dissect the molecular determinants of Salmonella invasion. Knockout of IQGAP1 expression reduced Salmonella invasion into MEFs by 75%. Reconstituting IQGAP1-null MEFs with wild-type IQGAP1 completely rescued invasion. By contrast, reconstituting IQGAP1-null cells with mutant

关键词： 肝细胞癌   RhoC   IQGAP1   免疫组织化学  

摘要： 目的:探讨RhoC和IQGAP1蛋白在原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其临床病理意义.方法:采用免疫组织化学法分别检测56例原发性肝细胞癌和15例正常肝组织中RhoC及IQGAP1蛋白的表达,并分析两者的相关性及与临床病理因素的关系.结果:RhoC和IQGAP1在原发性肝细胞癌组织中的表达明显高于正常组织(66%vs20%;75%vs13%,均P<0.05),且两者的表达呈正相关(r=0.631,P<0.05),并与肿瘤组织的分化程度及门脉浸润等均密切相关(均P<0.05).结论:RhoC及IQGAP1在原发性肝细胞癌的发生、发展中发挥重要的促进作用,可考虑作为HCC临床评价肿瘤生物学行为及评估预后的指标.

关键词： calcium   calmodulin   in vitro   IQ motif   IQGAP1  

摘要： IQ motif-containing GTPase-activating protein 1 (IQGAP1), which is a well-known calmodulin (CaM) binding protein, is involved in a wide range of cellular processes including cell proliferation, tumorigenesis, adhesion, and migration. Interaction of IQGAP1 with CaM is important for its cellular functions. Although each IQ domain of IQGAP1 for CaM binding has been characterized in a Ca(2+)-dependent or -independent manner, it was not clear which IQ motifs are physiologically relevant for CaM binding in the cells. In this study, we performed immunoprecipitation using 3xFLAGhCaM in mammalian cell lines to characterize the domains of IQGAP1 that are key for CaM binding under physiological conditions. Interestingly, using this method, we identified two novel domains, IQ(2.7-3) and IQ(3.5-4.4), within IQGAP1 that were involved in Ca(2+)-independent or -dependent CaM binding, respectively. Mutant analysis clearly showed that the hydrophobic regions within IQ(2.7-3) were mainly involved in apoCaM binding, while the basic amino acids and hydrophobic region of IQ(3.5-4.4) were required for Ca(2+)/CaM binding. Finally, we showed that IQ(2.7-3) was the main apoCaM binding domain and both IQ(2.7-3) and IQ(3.5-4.4) were required for Ca(2+)/CaM binding within IQ(1-2-3-4). Thus, we identified and characterized novel direct CaM binding motifs essential for IQGAP1. This finding indicates that IQGAP1 plays a dynamic role via direct interactions with CaM in a Ca(2+)-dependent or -independent manner.

关键词： Endothelial   Cell signaling   Angiogenesis   Inflammation  

关键词： Growth factors   Angiogenesis   Receptor-mediated signaling   Endothelium   Signal transduction  

关键词： Angiotensin II   Super oxide   Endothelial function   Free radicals/Free-radical scavengers