关键词： 甲胎蛋白   角蛋白19   PEG10   IQGAP1   原发性肝癌   肿瘤标志物  

摘要： 背景：肝细胞癌(HCC)是常见的肿瘤，目前发病率居世界第5位，死亡率居第3位，肝癌的发病率随着年龄的增长而增加。但在肝癌发病率高的国家，被诊断为肝癌的甚至在20岁以下，且男性的发病率更频繁。肝癌起病隐匿、发展迅速、死亡率较高、严重威胁人们的生命健康。肝癌的发生是多因素、多途径、多阶段、长时间作用的结果。导致肝癌发生的危险因素主要是肝硬化，还包括病毒感染（如：HBV、HCV）、过量饮酒、吸烟、摄入黄曲霉毒素B1、氯乙烯、糖尿病和遗传疾病（如血色素沉着症和α1-抗胰蛋白酶缺陷病），研究发现重叠的因素显著提升肝癌的风险。 目前亚临床型肝癌是肝癌治疗的最佳阶段。亚临床型的肝癌是指无临床症状和体征的肝癌，多为高危人群在体检时发现。人类根治肝癌寄希望于肝癌的早期诊断和治疗，目前治疗肝癌的首选方法为外科手术切除，也可以使用综合性治疗的方法包括微波消融、TACE、射频消融、放疗、肝移植及生物疗法等。假如肝癌能早期诊断，则可早期治疗并取得较好的效果，提高肝癌患者的5年生存率。如今诊断HCC的主要方法包括影像学检查、实验室和病理学检查。目前病理学检查是诊断肝癌最准确的方法，但必须经过手术或是穿刺获得病变组织，这个方法往往不能被大部分的患者所接受。血清中肿瘤标志物的检测，因为其具有特异性高、敏感性高、痛苦少等特点，越来越受到人们的关注，AFP是特异性的肝癌细胞高表达蛋白质，是第一个检测和临床跟踪肝癌患者的血清肿瘤标志物。由于AFP在肝炎、肝硬化等疾病中也有升高，且有一定的假阳性率，目前尚无任何肿瘤标志物可完全诊断肝癌，所以可通过联合检测以提高肝癌的早期诊断率，因此发现新的血清肿瘤标志物意义重大。 目的：检测血清肿瘤标志物AFP(a-FetoProtein)、PEG10(Paternally expressed gene10)、IQGAP1（IQ motif containing GTPase activating proteins1）、CK19（cytokeratin19）在肝癌、肝硬化和健康人血清中的水平，探讨上述四项肿瘤标志物的单独血清检验及联合检验对HCC患者的临床诊断价值，分析CK19、PEG10、IQGAP1对AFP阴性的肝癌的诊断价值。希望能够提高HCC诊断率及发现新的理想的血清肿瘤标志物。 材料与方法：采集来自河南省人民医院2012年12月至2013年11月期间住院患者的血清标本156例，作为研究对象，年龄为32-81岁，平均58±11.5岁。包括肝癌组96例，健康人组30例，肝硬化组30例，所有研究对象的血清离心后储存于-100℃的冰箱内，统一进行检测，用ELISA法（酶联免疫吸附法)检测各组AFP、CK19、PEG10、IQGAP1的表达情况，应用方差检验的方法对数据进行分组比较分析。AFP、CK19、PEG10、IQGAP1诊断肝癌的最佳临界值，用受试者工作特征曲线（ROC）。分析过程使用SPSS17.0软件。 结果： 1、三组患者血清中AFP、CK19、PEG10、IQGAP1在肝癌组的表达显著高于肝硬化组和健康组，差异有统计意义（p<0.05）。 2、血清肿瘤标志物AFP、CK19、PEG10、IQGAP1诊断肝癌的敏感度分别为85.4%、42.9%、72.7%、78.6%。特异度分别为80.0%、87.2%、86.9%、83.3%。 3、采用AFP与CK19、PEG10、IQGAP1分别行平行联合检测方法，可以明显提高诊断HCC的敏感度，采用AFP与CK19、PEG10、IQGAP1分别行系列联合检测方法，可以提高了诊断HCC的特异度。 4、血清肿瘤标志物CK19、PEG10、IQGAP1在AFP阴性的肝癌的水平经方差比较分析，CK19在AFP阴性的肝癌组中的水平明显高于肝硬化组，差异有统计意义（p<0.05）；PEG10、IQGAP1在AFP阴性的肝癌组与肝硬化组的水平，差异无统计意义（p>0.05）。 5、CK19对AFP阴性的肝癌诊断的准确度最高，敏感度为50%，特异度为90.9%。 结论： 1、原发性肝细胞癌组的血清AFP、CK19、PEG10、IQGAP1水平均高于肝硬化组及健康对照组。 2、PEG10、IQGAP1可成为诊断肝癌的血清标志物，CK19的敏感度较低，尚不能单独用于诊断肝癌。CK19、PEG10、IQGAP1与AFP的联合检测增加了诊断肝癌的敏感度及特异度。 3、CK19对AFP阴性的肝癌诊断的准确度最高，在肝癌的早期诊断中可能作为AFP有价值的补充。

关键词： IQGAP1   非小细胞肺癌   PC14/B   增殖   转移  

摘要： 肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率在男性中排第一位，在女性中也仅次于乳腺癌居第二位[1]。随着生活方式的改变、人口老龄化、环境污染的加重，肺癌的发病率仍有增高的趋势，且这一趋势在发展中国家表现尤为突出。肺癌常见的远处转移有肝、脑、骨等器官组织，是导致患者生活质量降低、预后差的主要原因。 研究表明IQGAP1是一种进化保守的多结构域蛋白[2]，可以与多种信号分子及蛋白相互结合参与信号通路的整合和细胞功能的调节，如钙离子/钙调蛋白[3]、E-cadherin[4]、S100B[5]、 Cdc42/Rac1[6]等。已有大量文献报道IQGAP1在多种肿瘤组织和细胞株中高表达，然而关于IQGAP1在非小细胞肺癌中的作用和机制如何，国内外相关文献报道甚少。本实验通过检测不同非小细胞肺癌细胞株中IQGAP1的表达，质粒下调细胞株中IQGAP1的表达，观察其对非小细胞肺癌细胞株增殖和转移的影响，并初步探讨其分子机制。 目的： （1）检测IQGAP1在不同非小细胞肺癌细胞株中的表达情况;（2）通过下调内源性IQGAP1的表达水平，研究IQGAP1对非小细胞肺癌增殖和转移的作用，初步探讨IQGAP1在非小细胞肺癌细胞株中作用的分子机制。 方法： （1） Real time-PCR和Western blot检测IQGAP1在A549、PC14、PC14/B表达差异;（2）通过携带IQGAP1的shRNA载体，抑制非小细胞肺癌细胞株PC14/B中IQGAP1表达，得到稳定沉默IQGAP1蛋白的细胞及对照细胞（PC14/B、NC-PC14/B、IQGAP1RNAi-PC14/B），通过MTT法、平板克隆形成实验、划痕、Transwell等检测不同IQGAP1表达的PC14/B细胞株增殖和转移能力的改变;（3） Western Blot和细胞免疫荧光法检测E-cadherin在PC14/B、IQG-AP1RNAi-PC14/B的表达差异。 结果: （1）三株不同非小细胞肺癌细胞株中PC14/B中IQGAP1表达最高;（2）下调IQGAP1的细胞株构建成功;抑制内源性IQGAP1的IQGAP1RNAi-PC14/B细胞株增殖、转移能力减弱;（3）抑制内源性IQGAP1的IQGAP1RNAi-PC14/B细胞株E-cadherin表达增加。 结论 IQGAP1是一个具有多功能的癌基因，广泛参与细胞黏附、细胞迁移、细胞信号外转导等多种功能。在不同的非小细胞肺癌细胞株中IQGAP1表达量具有差异，与不发生脑转移细胞株A549、PC14相比，IQGAP1在特异性脑转移细胞株PC14/B中高表达，并能增强PC14/B细胞增殖、转移能力，抑制E-钙粘蛋白的表达。

关键词： 食管鳞癌   KIAA1522   失巢凋亡   粘附连接   IQGAP1  

摘要： 食管癌是我国常见的恶性肿瘤之一,其死亡率在我国恶性肿瘤中居第四位。中国食管癌以鳞状细胞癌为主。肿瘤转移是食管癌治疗失败和患者死亡的主要原因,而肿瘤细胞的抗失巢凋亡能力是导致肿瘤转移的重要机制之一。 食管癌中癌蛋白CTTN能通过活化AKT信号通路保护细胞免受失巢凋亡,本实验前期工作曾利用GST-pulldown技术以CTTN的PRD和SH3结构域捕获到食管癌细胞中与CTTN相互作用蛋白KIAA1522(?)IQGAP1。KIAA1522是一个功能未知的新蛋白。结构域分析表明KIAA1522可能通过其富含脯氨酸的FH1结构域与众多粘附蛋白及细胞骨架蛋白结合,在细胞粘附、运动、增殖、凋亡等多个过程中发挥功能。Gene Expression Atlas和EMBL-EBI数据库中显示多种肿瘤组织中KIAA1522mRNA表达上调,提示KIAA1522在肿瘤发生发展中发挥作用。 本研究采用免疫组化技术检测KIAA1522蛋白在食管癌及癌旁组织中表达,在136例食管鳞癌中KIAA1522P日性表达率为61.75%,而在127例手术切端组织中的阴性表达率为98.42%。通过Realtime PCR分析发现,食管癌、手术切端组织、以及食管癌细胞系中KIAA1522基因均以转录本1表达为主,Western结果表明KIAA1522蛋白的分子量为170KD。功能研究表明,KIAA1522通过转录水平正调控IQGAP1蛋白表达,进而激活S6K信号通路,促进细胞的增殖。在细胞悬浮状态下,KIAA1522蛋白敲降可降低粘附连接中Cadherin/Catenin复合物分子(β-catenin、α-catenin、 y-cateni、p120ctn)、Actin多聚化分子(IQGAP1、Arp3、N-WASp、VASP和CTTN). Actin重排分子(Paxillin和Fasin),粘附相关激酶FAK的表达和Src. ERK的活化,从而抑制细胞间粘附形成,促进细胞失巢凋亡。而且,在悬浮状态TKIAA1522介导的粘附及失巢凋亡调控中,IQGAP1蛋白发挥部分作用。通过免疫荧光及免疫共沉淀实验,观察到KIAA1522蛋白与粘附相关分子IQGAP1、CTTN、β-catenin-在细胞连接处共定位和相互作用。IQGAP1和CTTN均正反馈调控KIAA1522蛋白表达。提不KIAA1522、IQGAP1、CTTN三蛋白相互作用而彼此调控,从而促进细胞骨架多聚化及粘附连接形成过程,保护细胞免受失巢凋亡。 IQGAP1在结直肠癌也存在过表达,并且与淋巴结转移和临床分期正相关。功能研究表明,结直肠癌细胞中IQGAP1也能通过正向调控细胞粘附连接分子E-cadherin、β-catenin、α-catenin的表达、ERK/MAPK、S6K/S6信号通路活化而促进细胞间粘附形成,从而抑制细胞失巢凋亡。在结直肠癌、肺癌细胞悬浮状态下,IQGAP1也反馈正调控KIAA1522蛋白表达,并且均能活化ERK,进而保护细胞免受失巢凋亡。 综上所述,KIAA1522及相互调控蛋白IQGAP1在食管癌细胞增殖及抗失巢凋亡中都发挥重要作用。细胞贴壁状态下,KIAA1522通过转录水平正向调控IQGAP1表达,进而活化S6K信号通路,促进食管癌细胞增殖。细胞悬浮状态下,KIAA1522通过促进Actin多聚化而促进细胞间粘附形成,保护食管癌细胞免受失巢凋亡。KIAA1522可能通过促进细胞增殖而促进肿瘤生长,并通过抵抗细胞凋亡而促进食管癌转移,是一种新的介导细胞间粘附的肌动蛋白相关的癌蛋白。在结直肠癌和肺癌中KIAA1522和I IQGAP1也发挥重要作用。

关键词： 甲状腺乳头状癌   IQGAP1   RNA干扰   肿瘤增殖   肿瘤发生   肿瘤侵袭转移  

摘要： 研究背景： 甲状腺乳头状癌为甲状腺恶性肿瘤最常见的一种类型,约占全部甲状腺癌的80%。分化型甲状腺癌,包括甲状腺乳头状癌恶性程度低,治愈率高,预后较好。与肿瘤预后相关的临床病理特征包括：老龄,男性,肿瘤直径较大,肿瘤腺外侵润,淋巴结转移,远处转移,肿瘤分级高。尽管甲状腺乳头状癌患者接受手术治疗及放射性碘131治疗后可获得较好的效果,但仍面临一定的复发率。同时对不适合手术治疗及对碘131耐药的患者,目前尚无理想治疗方案。对甲状腺乳头状癌患者进行预后风险评估是术后管理的重要手段,这将有利于降低复发率,提高总生存率。 细胞骨架IQGAP1分子量为189-kDa,包含多个重要的蛋白结构域,参与多个细胞过程中相关的分子相互作用参与调整这些细胞过程,从而影响细胞功能。越来越多的证据表明IQGAP1为原癌基因。如肝癌,乳腺癌,结肠癌,肺癌,胃癌,黑色素瘤中均检测到IQGAP1高表达。目前已有研究证实IQGAP1在甲状腺乳头状癌中高表达,但其在甲状腺乳头状癌转移灶中的表达情况及其对甲状腺乳头状癌侵袭转移的作用尚不清楚。利用IQGAP1可能早期诊断PTC恶性程度,用于预后判断,同时也可能为PTC设计靶向药物治疗位点提供依据。 研究IQGAP1在PTC及转移灶,正常甲状腺组织中的表达情况。判断IQGAP1与PTC进展的关系。通过RNA interference (RNAi)技术沉默PTC细胞株IQGAP1表达后,研究其对PTC细胞生长增殖,侵袭转移的影响。 方法： (1)收集湘雅医院2013年3月至7月行甲状腺手术患者的新鲜组织标本。这些组织标本分为有淋巴结转移组,无淋巴结转移组,正常甲状腺组织。新鲜组织标本使用PCR. Western blotting免疫组化检测IQGAP1mRNA及蛋白表达情况。 (2)培养PTC细胞株K1, TPC-1, BCPAP及正常甲状腺细胞株Nthy-ori3-1。PCR、Western blotting筛选IQGAP1高表达细胞株用于基因沉默实验。 (3)构建IQGAP1-siRNA沉默IQGAP1,免疫荧光技术判断转染效率。Western blotting检测沉默效果。 (4)沉默IQGAP1表达后,MTT法用于绘制生长曲线,流式细胞仪分析肿瘤细胞增殖,凋亡情况,平板克隆形成实验分析细胞增殖。Transwell实验,划痕实验用于判断肿瘤细胞侵袭转移能力。 结果： (1) IQGAP1在肿瘤中表达明显增高,癌组织IQGAP1明显高于癌旁组织及正常甲状腺组织,差别有统计学意义(p<0.05)。一二组甲状腺癌组织间比较,IQGAP1表达无明显差异。转移淋巴结具有最高IQGAP1表达量,均高于一二组中癌组织(P<0.05),癌旁组织及正常甲状腺组织中表达差别无统计学意义。IQGAP1阳性颗粒主要在细胞质中出现。 (2)siIQ2在浓度为2μmol/1时沉默K1和TPC-1细胞IQGAP1效率最高。IQGAP1蛋白表达量均减少超过70%,沉默效果佳。 (3)沉默IQGAP1抑制肿瘤细胞生长。沉默K1和TPC-1细胞IQGAP1蛋白表达后,连96h发现细胞增殖能力明显受到抑制,处于静置期细胞增多,分裂期细胞减少,细胞增殖指数降低,细胞凋亡增多。 (4) IQGAP1有促进乳头状癌细胞侵袭转移的能力。IQGAP1沉默后肿瘤细胞迁移过matrigel的能力减弱,在划痕内迁移的能力减弱。 结论： (1)甲状腺乳头状癌中IQGAP1在mRNA和蛋白表达水平明显升高,尤其在淋巴结转移灶中升高更为明显。IQGAP1可能参与甲状腺癌的肿瘤形成,侵袭转移过程。 (2)下调IQGAP1表达可以明显抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖能力、促进凋亡和抑制细胞迁徙转移能力,提示IQGAP1可作为治疗甲状腺乳头状癌的潜在靶基因。

关键词： Lung and intrathoracic tumors   Metastasis   Cloning   Squamous cell carcinoma   RNA interference   Secondary lung tumors   Cell proliferation   Transfection  

摘要： IQGAP1 is a scaffolding protein that can regulate several distinct signaling pathways. The accumulating evidence has demonstrated that IQGAP1 plays an important role in tumorigenesis and tumor progression. However, the function of IQGAP1 in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) has not been thoroughly investigated. In the present study, we showed that IQGAP1 was overexpressed in ESCC tumor tissues, and its overexpression was correlated with the invasion depth of ESCC. Importantly, by using RNA interference (RNAi) technology we successfully silenced IQGAP1 gene in two ESCC cell lines, EC9706 and KYSE150, and for the first time found that suppressing IQGAP1 expression not only obviously reduced the tumor cell growth, migration and invasion in vitro but also markedly inhibited the tumor growth, invasion, lymph node and lung metastasis in xenograft mice. Furthermore, Knockdown of IQGAP1 expression in ESCC cell lines led to a reversion of epithelial to mesenchymal transition (EMT) progress. These results suggest that IQGAP1 plays crucial roles in regulating ESCC occurrence and progression. IQGAP1 silencing may therefore develop into a promising novel anticancer therapy. © 2014 Wang et al.

关键词： Beta-Catenin   Nuclear Translocation   Nuclear Transport   Signal Transduction   Wnt Pathway   Wnt Signaling   Dvl   IQGAP   Ran   Importin  

摘要： Background: The molecular mechanisms underlying the -catenin nuclear localization remain unclear. Results: IQGAP1 is a regulator of -catenin nuclear localization. Conclusion: Importin-5 and Ran contribute to the nuclear localization of -catenin. Significance: Novel molecular mechanisms were found in Wnt signaling. In the canonical Wnt signaling pathway, the translocation of -catenin is important for the activation of target genes in the nucleus. However, the molecular mechanisms underlying its nuclear localization remain unclear. In the present study, we found IQGAP1 to be a regulator of -catenin function via importin-5. In Xenopus embryos, depletion of IQGAP1 reduced Wnt-induced nuclear accumulation of -catenin and expression of Wnt target genes during early embryogenesis. Depletion of endogenous importin-5 associated with IQGAP1 also reduced expression of Wnt target genes and the nuclear localization of IQGAP1 and -catenin. Moreover, a small GTPase, Ran1, contributes to the nuclear translocation of -catenin and the activation of Wnt target genes. These results suggest that IQGAP1 functions as a regulator of translocation of -catenin in the canonical Wnt signaling pathway.

关键词： 血管紧张素Ⅱ   IQGAP1   肾小球损伤  

摘要： 目的研究血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)输注及替米沙坦干预对大鼠肾小球IQ domain GTPase-activating protein1(IQGAP1)表达的影响,并探讨IQGAP1在AngⅡ诱导肾小球损伤中的作用。方法 36只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为生理盐水输注组、AngⅡ输注组和替米沙坦干预组,每周末测量大鼠血压及24h尿蛋白量,分别于14、28天处死大鼠取肾,光镜、电镜观察肾组织病理学及超微结构改变;免疫组织化学法、免疫荧光法及免疫印迹法检测IQGAP1在肾小球的表达及分布。结果 AngⅡ输注7天时大鼠出现显著的血压升高和尿蛋白量增加,且随输注时间的延长,血压及尿蛋白量进行性增高。替米沙坦干预可显著降低血压,并减少尿蛋白量。肾组织病理学显示AngⅡ输注组出现轻度系膜细胞增殖和系膜基质增加,且超微结构显示足细胞裂隙膜变窄,足突融合,替米沙坦干预可显著减轻上述病理改变。生理盐水输注组IQGAP1低水平表达并沿毛细血管袢呈线性分布,AngⅡ输注后IQGAP1表达量显著增加(P<0.05),而替米沙坦干预可显著抑制IQGAP1的表达上调(P<0.05);相关分析显示IQGAP1表达量与尿白蛋白量呈正相关(r=0.645,P<0.05)。结论 IQGAP1表达上调可能在AngⅡ诱导肾小球损伤中发挥重要作用。

关键词： 含IQ模序的GTP酶活化蛋白1   多发性骨髓瘤   MAP激酶信号通路   细胞增殖   细胞外信号调节激酶  

摘要： 目的:探讨含IQ模序的GTP酶活化蛋白1(IQ motif-containing GTPase-activating protein 1,IQGAP1)在骨髓瘤细胞中的过表达及其机制。方法:RT-PCR和Western blotting检测RPMI8226和U266细胞IQGAP1表达;使用不同的寡核苷酸序列构建沉默人IQGAP1的shRNA质粒(clone 1、clone 2、clone 3和clone 4)、转染RPMI8226细胞,RT-PCR和Western blotting检测其IQGAP1表达;Western blotting检测RPMI8226-shIQGAP1组(clone 1)、RPMI8226-shRNA阴性对照组和RPMI8226未转染组细胞p-ERK1/2、ERK1/2、Akt、p-AKT、STAT3和p-STAT3水平,免疫共沉淀确定IQGAP1和ERK的关系。结果:IQGAP1在RPMI8226和U266骨髓瘤细胞株中过表达,使用shRNA表达质粒沉默RPMI8226细胞IQGAP1后,IQGAP1表达减少,在有或无血管内皮生长因子(VEGF)/白细胞介素6(IL-6)作用下检测RPMI8226-shIQGAP1组(clone 1)细胞增殖明显下降。进一步检测3组细胞p-ERK1/2、ERK1/2、AKT、p-AKT、STAT3和p-STAT3蛋白水平,与RPMI8226-shRNA阴性对照组和RPMI8226未转染组相比,RPMI8226-shIQGAP1组ERK1/2磷酸化水平下降70.2%,免疫共沉淀法明确在RPMI8226细胞中IQGAP1和ERK存在相互作用。结论:IQGAP1在骨髓瘤细胞中的过表达可能与MAPK途径的ERK相互作用有关。

关键词： MOLECULES   RESEARCH   ENDOCYTOSIS   INSULIN   GHRELIN receptors   CORONIN  

摘要： Recruitment of specific molecules to a specific membrane site is essential for communication between specialized membranous organelles. In the present study, we identified IQGAP1 as a novel GDP-bound-Rab27a-interacting protein. We found that IQGAP1 interacts with GDP-bound Rab27a when it forms a complex with GTP-bound Cdc42. We also found that IQGAP1 regulates the endocytosis of insulin secretory membranes. Silencing of IQGAP1 inhibits both endocytosis and the glucose-induced redistribution of endocytic machinery, including Rab27a and its binding protein coronin 3. These processes can also be inhibited by disruption of the trimeric complex with dominant negative IQGAP1 and Cdc42. These results indicate that activation of Cdc42 in response to the insulin secretagogue glucose recruits endocytic machinery to IQGAP1 at the cell periphery and regulates endocytosis at this membrane

关键词： N-WASP   Arp2   3 complex   Cdc42   Rac1   actin   Forster resonance energy transfer  

摘要： IQGAP1 stimulates branched actin filament nucleation by activating N-WASP, which then activates the Arp2/3 complex. N-WASP can be activated by other factors, including GTP-bound Cdc42 or Rac1, which also bind IQGAP1. Here we report the use of purified proteins for in vitro binding and actin polymerization assays, and Forster (or fluorescence) resonance energy transfer (FRET) microscopy of cultured cells to illuminate functional interactions among IQGAP1, N-WASP, actin, and either Cdc42 or Rac1. In pyrene-actin assembly assays containing N-WASP and Arp2/3 complex, IQGAP1 plus either small G protein cooperatively stimulated actin filament nucleation by reducing the lag time before 50% maximum actin polymerization was reached. Similarly, Cdc42 and Rac1 modulated the binding of IQGAP1 to N-WASP in a dose-dependent manner, with Cdc42 enhancing the interaction and Rac1 reducing the interaction. These in vitro reconstitution results suggested that IQGAP1 interacts by similar, yet distinct mechanisms with Cdc42 versus Rac1 to regulate actin filament assembly through N-WASP in vivo. The physiological relevance of these multi-protein interactions was substantiated by 3-color FRET microscopy of live MDCK cells expressing various combinations of fluorescent N-WASP, IQGAP1, Cdc42, Rac1, and actin. This study also establishes 3-color FRET microscopy as a powerful tool for studying dynamic intermolecular interactions in live cells. (c) 2013 Wiley Periodicals, Inc.