关键词： 甲状腺乳头状癌   miR-124   IQGAP1   双荧光素酶报告基因   侵袭转移  

摘要： 研究背景及目的： 甲状腺癌是最常见的内分泌器官来源恶性肿瘤,占所有内分泌肿瘤的94.5%和所有恶性肿瘤的2.6%,发病率在头颈部恶性肿瘤中居首位。PTC的发生、发展是一个多因素、多基因、多信号通路综合参与作用的复杂过程,癌基因的激活、抑癌基因的缺失及相关蛋白的异常表达均可导致甲状腺滤泡细胞的异常增殖及变异,最终形成肿瘤。因此,研究PTC的浸润和转移过程,探讨癌细胞转移的分子机理,寻找早期诊断甲状腺癌、预测转移的生物标记和干预治疗的靶分子,对于进一步提高患者治愈率与生存率具有重要的意义。 MicroRNA (miRNA)是近些年来被发现的一类非编码单链小RNA分子。成熟的miRNA通过和靶基因mRNA的3’UTR以完全或不完全互补的方式结合,导致mRNA降解,抑制其翻译。已有许多研究证实miRNA的异常表达与多种人类肿瘤密切相关,比如肝癌、胃癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、甲状腺癌等。因此深入探索miRNA在肿瘤中的异常表达谱(expression profile)及其功能学影响,对研究肿瘤的发病机制具有重要的意义。并将有助于肿瘤的早期诊断、治疗及预后的判断与预测。含IQ模序的GTP酶活化蛋白1(IQmotif-containing GTPase-activation protein1, IQGAP1)其表达量的异常上调已经于多病种肿瘤组织和肿瘤细胞株中被观察到。IQGAP1蛋白可结合信号通路上的多个蛋白成分,起到致癌的作用。并已经有研究证实IQGAP1参与甲状腺癌的侵袭转移的过程中。然而,IQGAP1差异性表达的分子机制尚不十分清楚。 所以本研究的目的为检测miR-124在甲状腺乳头癌组织中的表达情况,探讨miR-124在甲状腺乳头状癌发生发展、侵袭转移中的相关功能机制,验证IQGAP1为miR-124的靶基因。方法： 1.收集2013年3月-2013年10月在中南大学湘雅医院手术切除并经病理确诊的15例无淋巴结转移甲状腺乳头状癌患者新鲜组织,8例甲状腺乳头状癌伴淋巴结转移患者的原发灶组织、其对应的8例转移淋巴结癌组织,以及6例甲状腺腺瘤肿块旁组织作为对照。采用实时荧光定量real-time PCR方法检测miR-124在无转移甲状腺癌组织、有转移甲状腺癌原发灶、转移灶组织、腺瘤肿块旁组织中的表达情况。选取三个甲状腺乳头状癌细胞系K1、BCPAP、TPC-1及正常甲状腺细胞系Nthy-ori3-1用real-time PCR方法检测miR-124的表达差异。 2.将Has-miR-124mimics使用脂质体LipofectamineTM2000转染入K1细胞,同时设置阴性对照组及空白对照组。real-time PCR方法检测转染后miR-124的表达情况。同时用real-time PCR和western-blot方法检测下游靶基因IQGPA1的表达情况;MTT法检测细胞的增殖并绘制生长曲线;流式细胞学检测细胞增殖及凋亡情;划痕试验检测细胞迁徙能力;Transwell法检测细胞侵袭的能力。 3.运用生物信息学(miRanda、miRbase, Targetscan)预测IQGAP1为miR-124的可能的下游靶基因并用双荧光素酶报告基因系统进行特异性验证。 结果： ***-time PCR检测在腺瘤肿块旁组织、无转移甲状腺乳头状癌、有淋巴结转移甲状腺乳头状癌原发灶、转移甲状腺乳头状癌淋巴结转移灶中miR-124的相对表达量依次降低(P<0.01)。甲状腺乳头状癌细胞系K1、BCPAP和TPC-1中miR-124的表达较正常甲状腺细胞系明显降低(P<0.01)。 ***-124mimics转染K1后检测证实miR-124表达明显增强。miR-124表达增强后,24-72小时后细胞增殖能力明显下降,增殖指数降低,凋亡增加(P<0.05)。细胞迁徙能力和侵袭能力均明显下降(P<0.05,P<0.01)。 ***-124增强后IQGAP1的mRNA和蛋白表达量均有明显降低(P<0.05,P<0.01)。生物信息学和双荧光素酶报告基因系统特异性验证证实IQGAP1为miR-124的靶基因。 结论： ***-124在甲状腺乳头状癌组织及细胞中低表达尤其是淋巴结转移灶中更为明显,提示miR-124与甲状腺乳头状癌侵袭转移相关。 2.上调miR-124表达后能降低甲状腺乳头状癌细胞的增殖、侵袭和转移能力,提示miR-124可作为治疗甲状腺乳头状癌的潜在靶点。 3. IQGAP1为miR-124的靶基因,miR-124可能是通过调控IQGAP1来抑制甲状腺乳头状癌细胞的增殖、侵袭转移。

关键词： IQGAP1   血管紧张素Ⅱ   足细胞   凋亡   细胞外调节蛋白激酶1/2  

摘要： 研究背景： 肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin-angiotensin-aldosterone system, RAAS)激活参与慢性肾脏疾病的发生发展,若及时将其阻滞,可以减轻蛋白尿,减缓终末期肾脏疾病的进展。血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)作为RAAS主要效应分子,其作用除直接改变肾小球血流动力学外,还通过多种非血流动力学机制发挥其肾脏损伤作用,如氧化应激、细胞外基质聚集、炎症因子的产生、细胞骨架的紊乱、细胞周期失常以及凋亡等。足细胞作为一种终末分化的上皮细胞,是肾小球滤过屏障的重要组成部分,其损伤或丢失在蛋白尿的发生以及肾小球疾病的进展中发挥重要作用。本实验组前期研究已经证实,Ang Ⅱ可诱导足细胞凋亡。但其具体分子机制仍未完全清楚。近期研究发现支架蛋白IQ domain GTPase-activating protein1(IQGAP1)在人体内广泛表达,且在多种细胞的凋亡过程中发挥重要作用。但IQGAP1是否参与Ang Ⅱ诱导的足细胞凋亡尚未见报道,本研究旨在探讨IQGAP1在Ang Ⅱ诱导足细胞凋亡中的作用以及可能的分子机制。为足细胞病理生理研究及IQGAP1分子生物学功能的深入发掘提供新的理论依据。 方法： 第一部分：36只SPF级雄性Wistar大鼠随机数字法分为正常对照2周组、生理盐水输注2周组、Ang Ⅱ输注2周组、正常对照4周组、生理盐水输注4周组和Ang Ⅱ输注4周组,每组大鼠6只。每周末测量大鼠血压及24h尿蛋白量。分别于14天、28天处死动物取肾,PAS染色观察肾组织病理学改变,电镜观察足细胞超微结构改变,TUNEL检测足细胞凋亡。免疫组化、免疫荧光、real-time PCR、Western blotting检测IQGAP1在肾小球的表达及分布。Western blotting检测肾小球半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达。采用偏相关分析探讨IQGAP1蛋白表达量和caspase-3活化量之间的相关性。 第二部分：体外培养条件永生性小鼠足细胞,未分化足细胞用含10U/ml IFN-γ的培养基在33℃培养箱中传代培养,然后用不含IFN-y的培养基在37℃培养箱中诱导分化10-14d用于后续实验。药物干预前无血清培养基同步化12h。(1)随机分组：正常对照组、10-8M AngⅡ刺激细胞不同时间(1h、3h、6h、12h、24h)以及不同浓度(10-12M,10-10M,10-8M,10-6M) AngⅡ刺激细胞6h组。(2)采用流式细胞术以及Hoechst-33258染色检测足细胞凋亡率。(3)免疫荧光、real-time PCR及Western blotting检测足细胞IQGAP1的表达及分布。(4)转染IQGAP1siRNA,观察其对AngⅡ诱导足细胞凋亡的影响。 第三部分：体外培养条件永生性小鼠足细胞,未分化足细胞用含lOU/ml IFN-γ的培养基在33℃培养箱中传代培养,然后用不含IFN-y的培养基在37℃培养箱中诱导分化10-14d用于后续实验。药物干预前无血清培养基同步化12h。(1)丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPK)通路(包含P38、JNK和ERK1/2三条主要通路)抑制剂SB202190, SP600125或U0126预处理足细胞,观察其对IQGAP1蛋白表达及AngⅡ诱导足细胞凋亡的影响。(2)转染IQGAP1siRNA,观察其对MAPK信号蛋白磷酸化水平的影响。(3)采用免疫共沉淀法研究IQGAP1与ERKl/2结合水平的变化。 结果： 第一部分：(1)AngⅡ输注组大鼠血压升高,实验第14天达峰值并维持在较高水平；第7天时便出现显著蛋白尿,且随时间的延长尿蛋白量持续增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)AngⅡ输注组出现轻度系膜细胞增殖和系膜基质增加,生理盐水输注组和正常对照组均未见明显病理改变。(3)透射电镜观察足细胞显示,AngⅡ输注2周组及4周组均可见明显的足突融合、消失,并伴有染色质凝集以及核固缩、核碎裂等足细胞凋亡的表现。生理盐水输注组和正常对照组均未见明显改变。(4)TUNEL显示,AngⅡ输注后足细胞凋亡显著增加；免疫印迹发现,AngⅡ输注后大鼠肾小球caspase-3活化明显增加(P<0.05)。(4)正常对照组IQGAP1沿毛细血管袢线性分布,与nephrin共定位表达,AngII输注后IQGAP1表达量显著增加(P<0.05),且其蛋白表达与caspase-3活化量呈显著正相关(r=0.689,P<0.05)。 第二部分：(1)AngⅡ以剂量和时间依赖方式诱导足细胞凋亡。(2)正

关键词： 肺泡II型上皮细胞   IQGAP1蛋白   增殖   分化   迁移  

摘要： 目的观察IQGAP1对肺泡II型上皮细胞增殖、分化及迁移过程的影响。 方法通过转染IQGAP1-siRNA干扰肺泡II型上皮细胞（AlveolarEpithelial Cells type II，AEC II）中IQGAP1的表达，设空白对照组。1、采用直接细胞计数法分析IQGAP1对AEC II细胞数目的影响；2、采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法分析IQGAP1对AEC II增殖能力的影响；3、通过Transwell迁移实验分析IQGAP1在AEC II迁移过程中的作用；4、通过Western blotting检测AEC II特异性标志物（SP-C）和AEC I的特异性标志物（AQP-5）的表达，分析IQGAP1对AEC II分化过程的影响。 结果1、IQGAP1-siRNA组干预后24h、48h和72h细胞数目较对照组明显减少(P<0.01)；2、IQGAP1-siRNA组干预后24h、48h和72h细胞增殖活性较对照组显著降低(P<0.01)；3、与对照组相比，siRNA干扰内源性IQGAPl的表达，AEC II细胞的迁移程度下降约50％(P<0.05)；4、干扰组培养24h后见SP-C大量表达，AQP-5少量表达，48h后见SP-C表达明显增多，AQP-5几乎没有表达，提示AEC II向AEC I的分化受到抑制。 结论IQGAP1对肺泡II型上皮细胞的增殖、分化及迁移过程起着重要的调控作用。

关键词： 甲胎蛋白   角蛋白19   PEG10   IQGAP1   原发性肝癌   肿瘤标志物  

摘要： 背景：肝细胞癌(HCC)是常见的肿瘤，目前发病率居世界第5位，死亡率居第3位，肝癌的发病率随着年龄的增长而增加。但在肝癌发病率高的国家，被诊断为肝癌的甚至在20岁以下，且男性的发病率更频繁。肝癌起病隐匿、发展迅速、死亡率较高、严重威胁人们的生命健康。肝癌的发生是多因素、多途径、多阶段、长时间作用的结果。导致肝癌发生的危险因素主要是肝硬化，还包括病毒感染（如：HBV、HCV）、过量饮酒、吸烟、摄入黄曲霉毒素B1、氯乙烯、糖尿病和遗传疾病（如血色素沉着症和α1-抗胰蛋白酶缺陷病），研究发现重叠的因素显著提升肝癌的风险。 目前亚临床型肝癌是肝癌治疗的最佳阶段。亚临床型的肝癌是指无临床症状和体征的肝癌，多为高危人群在体检时发现。人类根治肝癌寄希望于肝癌的早期诊断和治疗，目前治疗肝癌的首选方法为外科手术切除，也可以使用综合性治疗的方法包括微波消融、TACE、射频消融、放疗、肝移植及生物疗法等。假如肝癌能早期诊断，则可早期治疗并取得较好的效果，提高肝癌患者的5年生存率。如今诊断HCC的主要方法包括影像学检查、实验室和病理学检查。目前病理学检查是诊断肝癌最准确的方法，但必须经过手术或是穿刺获得病变组织，这个方法往往不能被大部分的患者所接受。血清中肿瘤标志物的检测，因为其具有特异性高、敏感性高、痛苦少等特点，越来越受到人们的关注，AFP是特异性的肝癌细胞高表达蛋白质，是第一个检测和临床跟踪肝癌患者的血清肿瘤标志物。由于AFP在肝炎、肝硬化等疾病中也有升高，且有一定的假阳性率，目前尚无任何肿瘤标志物可完全诊断肝癌，所以可通过联合检测以提高肝癌的早期诊断率，因此发现新的血清肿瘤标志物意义重大。 目的：检测血清肿瘤标志物AFP(a-FetoProtein)、PEG10(Paternally expressed gene10)、IQGAP1（IQ motif containing GTPase activating proteins1）、CK19（cytokeratin19）在肝癌、肝硬化和健康人血清中的水平，探讨上述四项肿瘤标志物的单独血清检验及联合检验对HCC患者的临床诊断价值，分析CK19、PEG10、IQGAP1对AFP阴性的肝癌的诊断价值。希望能够提高HCC诊断率及发现新的理想的血清肿瘤标志物。 材料与方法：采集来自河南省人民医院2012年12月至2013年11月期间住院患者的血清标本156例，作为研究对象，年龄为32-81岁，平均58±11.5岁。包括肝癌组96例，健康人组30例，肝硬化组30例，所有研究对象的血清离心后储存于-100℃的冰箱内，统一进行检测，用ELISA法（酶联免疫吸附法)检测各组AFP、CK19、PEG10、IQGAP1的表达情况，应用方差检验的方法对数据进行分组比较分析。AFP、CK19、PEG10、IQGAP1诊断肝癌的最佳临界值，用受试者工作特征曲线（ROC）。分析过程使用SPSS17.0软件。 结果： 1、三组患者血清中AFP、CK19、PEG10、IQGAP1在肝癌组的表达显著高于肝硬化组和健康组，差异有统计意义（p<0.05）。 2、血清肿瘤标志物AFP、CK19、PEG10、IQGAP1诊断肝癌的敏感度分别为85.4%、42.9%、72.7%、78.6%。特异度分别为80.0%、87.2%、86.9%、83.3%。 3、采用AFP与CK19、PEG10、IQGAP1分别行平行联合检测方法，可以明显提高诊断HCC的敏感度，采用AFP与CK19、PEG10、IQGAP1分别行系列联合检测方法，可以提高了诊断HCC的特异度。 4、血清肿瘤标志物CK19、PEG10、IQGAP1在AFP阴性的肝癌的水平经方差比较分析，CK19在AFP阴性的肝癌组中的水平明显高于肝硬化组，差异有统计意义（p<0.05）；PEG10、IQGAP1在AFP阴性的肝癌组与肝硬化组的水平，差异无统计意义（p>0.05）。 5、CK19对AFP阴性的肝癌诊断的准确度最高，敏感度为50%，特异度为90.9%。 结论： 1、原发性肝细胞癌组的血清AFP、CK19、PEG10、IQGAP1水平均高于肝硬化组及健康对照组。 2、PEG10、IQGAP1可成为诊断肝癌的血清标志物，CK19的敏感度较低，尚不能单独用于诊断肝癌。CK19、PEG10、IQGAP1与AFP的联合检测增加了诊断肝癌的敏感度及特异度。 3、CK19对AFP阴性的肝癌诊断的准确度最高，在肝癌的早期诊断中可能作为AFP有价值的补充。

关键词： IQGAP1   非小细胞肺癌   PC14/B   增殖   转移  

摘要： 肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率在男性中排第一位，在女性中也仅次于乳腺癌居第二位[1]。随着生活方式的改变、人口老龄化、环境污染的加重，肺癌的发病率仍有增高的趋势，且这一趋势在发展中国家表现尤为突出。肺癌常见的远处转移有肝、脑、骨等器官组织，是导致患者生活质量降低、预后差的主要原因。 研究表明IQGAP1是一种进化保守的多结构域蛋白[2]，可以与多种信号分子及蛋白相互结合参与信号通路的整合和细胞功能的调节，如钙离子/钙调蛋白[3]、E-cadherin[4]、S100B[5]、 Cdc42/Rac1[6]等。已有大量文献报道IQGAP1在多种肿瘤组织和细胞株中高表达，然而关于IQGAP1在非小细胞肺癌中的作用和机制如何，国内外相关文献报道甚少。本实验通过检测不同非小细胞肺癌细胞株中IQGAP1的表达，质粒下调细胞株中IQGAP1的表达，观察其对非小细胞肺癌细胞株增殖和转移的影响，并初步探讨其分子机制。 目的： （1）检测IQGAP1在不同非小细胞肺癌细胞株中的表达情况;（2）通过下调内源性IQGAP1的表达水平，研究IQGAP1对非小细胞肺癌增殖和转移的作用，初步探讨IQGAP1在非小细胞肺癌细胞株中作用的分子机制。 方法： （1） Real time-PCR和Western blot检测IQGAP1在A549、PC14、PC14/B表达差异;（2）通过携带IQGAP1的shRNA载体，抑制非小细胞肺癌细胞株PC14/B中IQGAP1表达，得到稳定沉默IQGAP1蛋白的细胞及对照细胞（PC14/B、NC-PC14/B、IQGAP1RNAi-PC14/B），通过MTT法、平板克隆形成实验、划痕、Transwell等检测不同IQGAP1表达的PC14/B细胞株增殖和转移能力的改变;（3） Western Blot和细胞免疫荧光法检测E-cadherin在PC14/B、IQG-AP1RNAi-PC14/B的表达差异。 结果: （1）三株不同非小细胞肺癌细胞株中PC14/B中IQGAP1表达最高;（2）下调IQGAP1的细胞株构建成功;抑制内源性IQGAP1的IQGAP1RNAi-PC14/B细胞株增殖、转移能力减弱;（3）抑制内源性IQGAP1的IQGAP1RNAi-PC14/B细胞株E-cadherin表达增加。 结论 IQGAP1是一个具有多功能的癌基因，广泛参与细胞黏附、细胞迁移、细胞信号外转导等多种功能。在不同的非小细胞肺癌细胞株中IQGAP1表达量具有差异，与不发生脑转移细胞株A549、PC14相比，IQGAP1在特异性脑转移细胞株PC14/B中高表达，并能增强PC14/B细胞增殖、转移能力，抑制E-钙粘蛋白的表达。

关键词： 结肠癌   RhoC   IQGAP1   淋巴结转移  

摘要： 目的：研究Ras同源基因C（RhoC）和IQGAP1在结肠癌和癌旁组织中的表达情况及二者与结肠癌临床病理特征的关系,初步探讨RhoC和IQGAP1在结肠癌中的相关性。 方法：以蚌埠医学院第一附属医院2011.1-2011.12手术切除80例结肠癌存档蜡块为研究对象，用免疫组织化学方法检测RhoC与IQGAP1在结肠癌组织中的表达情况，以30例癌旁组织作为对照组，并分析二者的相关性及其与结肠癌临床病理特征、预后之间的关系。 结果：1、RhoC及IQGAP1在结肠癌组织中的阳性表达率分别为66.25%(53/80)和71.25%(57/80)，高于对应癌旁组织，且差异具有统计学意义。 ***在结肠癌组织中的表达与TNM分期、淋巴结转移和分化程度相关(P<0.05)，而与性别、年龄、肿瘤大小无关(P>0.05)。 3、IQGAP1在结肠癌组织中的表达与TNM分期、淋巴结转移和分化程度相关(P<0.05)，而与性别、年龄、肿瘤大小无关(P>0.05)。 4、 RhoC和IQGAP1二者在结肠癌转移中呈正关联作用(r=0.598,P<0.001)。 结论：***和IQGAP1均在结肠癌中高表达，且与结肠癌的发生、侵袭转移密切相关。 ***和IQGAP1在结肠癌的侵袭转移中可能起着正相关作用。 3．联合检测RhoC和IQGAP1蛋白对结肠癌的临床分期及预后可能有一定的参考价值。

关键词： 食管鳞癌   KIAA1522   失巢凋亡   粘附连接   IQGAP1  

摘要： 食管癌是我国常见的恶性肿瘤之一,其死亡率在我国恶性肿瘤中居第四位。中国食管癌以鳞状细胞癌为主。肿瘤转移是食管癌治疗失败和患者死亡的主要原因,而肿瘤细胞的抗失巢凋亡能力是导致肿瘤转移的重要机制之一。 食管癌中癌蛋白CTTN能通过活化AKT信号通路保护细胞免受失巢凋亡,本实验前期工作曾利用GST-pulldown技术以CTTN的PRD和SH3结构域捕获到食管癌细胞中与CTTN相互作用蛋白KIAA1522(?)IQGAP1。KIAA1522是一个功能未知的新蛋白。结构域分析表明KIAA1522可能通过其富含脯氨酸的FH1结构域与众多粘附蛋白及细胞骨架蛋白结合,在细胞粘附、运动、增殖、凋亡等多个过程中发挥功能。Gene Expression Atlas和EMBL-EBI数据库中显示多种肿瘤组织中KIAA1522mRNA表达上调,提示KIAA1522在肿瘤发生发展中发挥作用。 本研究采用免疫组化技术检测KIAA1522蛋白在食管癌及癌旁组织中表达,在136例食管鳞癌中KIAA1522P日性表达率为61.75%,而在127例手术切端组织中的阴性表达率为98.42%。通过Realtime PCR分析发现,食管癌、手术切端组织、以及食管癌细胞系中KIAA1522基因均以转录本1表达为主,Western结果表明KIAA1522蛋白的分子量为170KD。功能研究表明,KIAA1522通过转录水平正调控IQGAP1蛋白表达,进而激活S6K信号通路,促进细胞的增殖。在细胞悬浮状态下,KIAA1522蛋白敲降可降低粘附连接中Cadherin/Catenin复合物分子(β-catenin、α-catenin、 y-cateni、p120ctn)、Actin多聚化分子(IQGAP1、Arp3、N-WASp、VASP和CTTN). Actin重排分子(Paxillin和Fasin),粘附相关激酶FAK的表达和Src. ERK的活化,从而抑制细胞间粘附形成,促进细胞失巢凋亡。而且,在悬浮状态TKIAA1522介导的粘附及失巢凋亡调控中,IQGAP1蛋白发挥部分作用。通过免疫荧光及免疫共沉淀实验,观察到KIAA1522蛋白与粘附相关分子IQGAP1、CTTN、β-catenin-在细胞连接处共定位和相互作用。IQGAP1和CTTN均正反馈调控KIAA1522蛋白表达。提不KIAA1522、IQGAP1、CTTN三蛋白相互作用而彼此调控,从而促进细胞骨架多聚化及粘附连接形成过程,保护细胞免受失巢凋亡。 IQGAP1在结直肠癌也存在过表达,并且与淋巴结转移和临床分期正相关。功能研究表明,结直肠癌细胞中IQGAP1也能通过正向调控细胞粘附连接分子E-cadherin、β-catenin、α-catenin的表达、ERK/MAPK、S6K/S6信号通路活化而促进细胞间粘附形成,从而抑制细胞失巢凋亡。在结直肠癌、肺癌细胞悬浮状态下,IQGAP1也反馈正调控KIAA1522蛋白表达,并且均能活化ERK,进而保护细胞免受失巢凋亡。 综上所述,KIAA1522及相互调控蛋白IQGAP1在食管癌细胞增殖及抗失巢凋亡中都发挥重要作用。细胞贴壁状态下,KIAA1522通过转录水平正向调控IQGAP1表达,进而活化S6K信号通路,促进食管癌细胞增殖。细胞悬浮状态下,KIAA1522通过促进Actin多聚化而促进细胞间粘附形成,保护食管癌细胞免受失巢凋亡。KIAA1522可能通过促进细胞增殖而促进肿瘤生长,并通过抵抗细胞凋亡而促进食管癌转移,是一种新的介导细胞间粘附的肌动蛋白相关的癌蛋白。在结直肠癌和肺癌中KIAA1522和I IQGAP1也发挥重要作用。

摘要： IQGAP1 interacts with numerous binding partners through a calponin homology domain (CHD), a WW motif, IQ repeats, a Ras GAP related domain (GRD), and a conserved C-terminal (CT) domain. Among various biological and cellular functions, IQGAP1 plays a role in cell-matrix interactions and actin cytoskeleton dynamics in membrane ruffling and lamellipodium protrusion. Phosphorylation in the CT domain regulates intramolecular interaction and IQGAP1 cellular activity. In a recent study, we discovered that IQGAP1 surprisingly localizes to actively retracting edges, instead of protruding areas, in B16F10 mouse melanoma cells and some other cells types. In these current studies we examined localization of IQGAP1 mutants to retracting versus protruding areas in phorbol ester-stimulated B16F10 cells. Cells were co-transfected with GFP-IQGAP1 full length (GFP-IQGAP1-FL), as an internal control, and one of five Myc-tagged IQGAP1 constructs (FL, CA, DeltaCHD, DeltaGRD or DeltaCT). The cotransfected cells were plated onto laminin for 30 minutes, stained with anti-Myc and anti-WAVE2 antibodies, and normalized fluorescence measurements were made in retracting and protruding areas. Retracting cell areas were defined as GFP-IQGAP1-FL positive and WAVE2 negative, while protruding cell areas were defined as GFP-IQGAP1-FL negative and WAVE2 positive. In retracting areas there were large decreases in both DeltaGRD and DeltaCT localization, a slight decrease in DeltaCHD localization, and normal localization of the CA mutant. In areas of cell protrusion there were large increases in both DeltaGRD and DeltaCT localization, and normal localization of DeltaCHD and CA mutants. These results indicate that two domains, GRD and CT, are essential for normal localization of IQGAP1 to retracting cell areas. Furthermore, our results suggest a model in which IQGAP1 in the areas of cell retraction is in the open, phosphorylated, conformation. Additionally we investigated the knockdown of IQGAP1 in B16F10

关键词： IQGAP1   卵巢癌   肿瘤干细胞   分化   侵袭  

摘要： 目的： 探索支架蛋白IQGAP1在卵巢癌肿瘤干细胞的表达,并观察IQGAP1对卵巢癌肿瘤干细胞分化过程中的侵袭能力的影响。 方法： 以浆液性卵巢癌3AO细胞株为亲本细胞,无血清悬浮培养法获得肿瘤干细胞。采用流式细胞术验证肿瘤干细胞的标记分子CD24表达,利用细胞免疫荧光实验观察干性分子OCT4和SOX2的定位。利用含10%胎牛血清培养基诱导其分化,期间光镜下观察细胞形态变化。 qRT-PCR法和Western-blot法分别检测IQGAP1mRNA和蛋白的表达水平变化。通过划痕实验和Transwell小室观察细胞迁移侵袭能力;采用wst-1法检测细胞增殖能力。 结果： 1.利用3AO细胞株通过无血清培养法获得表型CD24(-)表型的肿瘤干细胞。 2.相比3AO细胞株中,IQGAP1在肿瘤干细胞中呈低表达。 3.在3AO细胞株中,沉默IQGAP1后减弱了肿瘤迁移、侵袭能力,而不会改变细胞的增殖活性。 4.在卵巢肿瘤干细胞分化过程中,OCT4和SOX2表达下降,而IQGAP1表达增加;同时肿瘤细胞的侵袭能力增强。 5.在卵巢肿瘤干细胞分化过程中,IQGAP1沉默后细胞侵袭能力减弱。 结论： 1.无血清培养法是获得肿瘤干细胞比较成熟简便的实验技术。 2.在肿瘤干细胞分化过程中其侵袭能力逐步增强,且IQGAP1可能参与了该变化。

关键词： Lung and intrathoracic tumors   Metastasis   Cloning   Squamous cell carcinoma   RNA interference   Secondary lung tumors   Cell proliferation   Transfection  

摘要： IQGAP1 is a scaffolding protein that can regulate several distinct signaling pathways. The accumulating evidence has demonstrated that IQGAP1 plays an important role in tumorigenesis and tumor progression. However, the function of IQGAP1 in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) has not been thoroughly investigated. In the present study, we showed that IQGAP1 was overexpressed in ESCC tumor tissues, and its overexpression was correlated with the invasion depth of ESCC. Importantly, by using RNA interference (RNAi) technology we successfully silenced IQGAP1 gene in two ESCC cell lines, EC9706 and KYSE150, and for the first time found that suppressing IQGAP1 expression not only obviously reduced the tumor cell growth, migration and invasion in vitro but also markedly inhibited the tumor growth, invasion, lymph node and lung metastasis in xenograft mice. Furthermore, Knockdown of IQGAP1 expression in ESCC cell lines led to a reversion of epithelial to mesenchymal transition (EMT) progress. These results suggest that IQGAP1 plays crucial roles in regulating ESCC occurrence and progression. IQGAP1 silencing may therefore develop into a promising novel anticancer therapy. © 2014 Wang et al.