关键词： 聚ADP核糖聚合酶1   细胞周期蛋白依赖性激酶12   双靶抑制剂   苯并咪唑甲酰胺衍生物   三阴性乳腺癌  

摘要： 三阴性乳腺癌（Triple-negative breast cancer,TNBC）由于缺乏人表皮生长因子受体2以及雌激素、孕激素受体的表达,是乳腺癌中最为恶性的一种亚型。临床上TNBC的治疗主要以手术和全身放化疗为主,但TNBC对放化疗不敏感、缺少可药靶标及治疗药物,所以它的预后较差、复发转移率和死亡率居高不下。因此,针对TNBC的病理生理学特点不断寻找新的靶向治疗策略和设计研究相应治疗药物是亟需解决的重要科学问题和临床未满足的重要需求。 聚ADP-核糖聚合酶1(Poly（ADP-ribose）polymerase,PARP1)隶属于PARP家族,是与DNA单链修复密切相关的核酶。大量研究证实,在BRCA突变的TNBC中,PARP1抑制剂与BRCA突变会导致DNA损伤修复途径受损,造成DNA双链断裂,表现出合成致死的表型,即PARP1和BRCA同时出现缺陷时会导致TNBC细胞死亡。因此PARP1抑制是一种极具潜力的BRCA突变型TNBC的治疗策略。到目前为止,已有包括Olaparib、Talazoparib在内的多个PARP1小分子抑制剂被FDA批准应用于临床治疗中。然而这些药物的持续使用也导致肿瘤患者出现获得性耐药,限制了PARP1抑制剂抗TNBC的临床疗效。研究发现,在TNBC中,细胞周期蛋白依赖性激酶12（cyclin-dependent kinase,CDK12）可以通过磷酸化RNA聚合酶II来调控DNA损伤修复基因的转录,与PARP1之间存在合成致死的相互作用,诱导BRCA野生型或突变型TNBC细胞的死亡。因此,针对CDK12和PARP1进行双靶向药物设计成为了TNBC治疗的一种潜在有效策略。迄今为止,还没有针对CDK12/PARP1的双靶向抑制剂被报道。 基于此,本论文通过综合运用药效团融合、分子对接等计算机辅助药物设计方法并结合药理学实验,设计、合成、筛选了一系列双靶向CDK12/PARP1的小分子抑制剂。首先,我们分析了PARP1抑制剂Veliparib和CDK12抑制剂THZ531的共晶结构,确定了PARP1/CDK12的关键药效团和双靶抑制剂化学骨架的最佳延伸位点。然后,我们利用药效团融合策略,设计并合成了具有苯并咪唑甲酰胺的小分子化合物,获得先导化合物L1。酶抑制活性评价结果表明,先导化合物L1（1μM）对CDK12和PARP1的抑制率分别为54.6%和87.5%。分子对接表明,L1的苯并咪唑甲酰胺是支持PARP1活性的核心骨架,并同时与CDK12形成了分子间氢键。因此,我们在后续药物设计中保留了这部分骨架结构。为进一步提高CDK12的酶抑制活性,我们合成了化合物6a-e,探究L1末端嘧啶环的改变对化合物活性的影响。构效结果表明,具有5位吸电取代基（Cl,Br,I,CF3）的末端嘧啶环是保持CDK12酶抑制活性的关键。分子对接表明,L1的羰基与CDK12的Asp819形成了分子间氢键。接着,我们进一步合成了化合物8a-e和10a-b,探究将羰基变为吸电能力不同的基团后对化合物活性的影响。构效结果表明,羰基是保持化合物活性所必需的。考虑到先导化合物L1苯环取代位点的不同也可能影响活性,我们在苯环的间位进行了系列化合物的延伸,并合成了化合物12a-n。构效结果表明,苯环为间位取代时,化合物活性最佳。最后,基于已报道的PARP1抑制剂结构,我们将哌啶环进行了生物电子等排体替换,并合成了化合物15a-n。构效结果表明,化合物15a-n的酶抑制活性以及细胞抗增殖活性均下降。综上所述,基于先导化合物结构和结合模式分析,我们经过四轮化学修饰和构效关系研究,获得了最优选的双靶向CDK12/PARP1小分子抑制剂12e。 接下来,通过酶抑制活性结果表明,优选化合物12e表现出良好的CDK12抑制活性（77.3%,1μM）,并保持了对PARP1较优的抑制率（97.4%,1μM）。细胞热位移测定结果表明,优选化合物12e可以在TNBC细胞中直接靶向CDK12和PARP1,并提高靶点蛋白的热稳定性。后续的Western blot实验验证了优选化合物12e能够以剂量依赖性的方式下调下游相关因子p Ser2 CTD,p Ser5CTD,PAR的表达。DNA损伤修复效果的初步研究表明,优选化合物12e可以抑制RAD51的表达,并上调了γ-H2AX表达水平,表明了12e能够抑制DNA修复,导致DNA损伤增加,诱导TNBC细胞死亡。在后续的表型研究中,我们通过流式细胞术分析发现优选化合物12e可以诱导细胞周期阻滞在G2/M期,诱导TNBC细胞凋亡。Western blot实验也在蛋白水平上进一步证明优选化合物12e能以剂量依赖性的方式诱导细胞凋亡。药代动力学结果表明,优选化合物12e可以进行体内抗肿瘤活性评价。最后,在TNBC异种

关键词： G4   TNBC   c-MYC   抗肿瘤活性  

摘要： 乳腺癌是一种常见的女性恶性肿瘤,在女性相关癌症死亡率中居于首位。三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer,TNBC)是乳腺肿瘤中最具侵袭性的分子亚型,是雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2均为阴性的一种特殊乳腺癌。由于其复发率高、转移性强、预后不良等,成了临床一直关注的焦点。因此,需要迫切开发新的治疗TNBC方案。 G-四链体(G-quadruplex,G4)由富含鸟嘌呤的核酸序列形成一种特殊核酸结构。四个鸟嘌呤通过Hoogsteen氢键排列形成环状的G-四分体,多个G-四分体通过π-π相互堆叠形成G4。G4存在于许多真核细胞的基因组中,例如在DNA复制起点,染色体末端,启动子调节区域中,决定各种生物过程的关键功能,包括DNA复制,端粒维持,转录,同源重组和表观遗传学等,因此成为近年来新发展抗癌药物的重要靶点。 目前研究表明,c-MYC是一种重要的癌基因,在细胞生长、增殖和凋亡中起着至关重要的作用。稳定c-MYC G4一方面可以下调c-MYC基因的转录,由于c-MYC基因表达的异常导致调控的失调,抑制了癌细胞生长增殖,另一方面还可以形成稳定的R环,R环的扩散会引起转录依赖性的DNA损伤,也抑制了癌细胞生长增殖。因此,开发具有高活性和低毒性的靶向c-MYC G4的小分子成为新的抗肿瘤策略。 本论文合成一类靶向c-MYC启动子G4的咪唑联苯类化合物,通过核磁共振波谱、高分辨质谱和高效液相色谱法对化合物的结构进行表征。利用荧光光谱法检测化合物与G4的亲和力,使用圆二色光谱法分析化合物对G4的稳定性,通过CCK-8测定化合物对细胞的增殖活性的影响,综合多方面因素,即亲和力、稳定性和细胞毒性,我们筛选出最有活性的化合物BP-3。 通过核磁共振波谱、计算机分子模拟对接等方法分析研究BP-3与c-MYC G4之间的结合模式。同时也对比了联苯化合物BP3和未联苯化合物BP-7与G4之间的结合能力。对化合物结构-活性进行分析,研究不同的取代基团和不同的取代位置等对G4的影响,为后续化合物的优化改造以及合成新的靶向c-MYC G4化合物提供新的思路。 在细胞水平上,通过双荧光素酶报告基因、RT-PCR和western blot实验说明化合物BP-3能够靶向c-MYC G4,下调c-MYC基因的表达水平。通过免疫荧光和western blot实验说明化合物BP-3能够诱导转录依赖性的DNA损伤;通过平板克隆实验测得化合物BP-3具有较强的抗肿瘤细胞增殖的活性,呈浓度依赖性;通过细胞划痕、transwell迁移实验说明化合物BP-3能够抑制细胞的迁移能力,呈浓度依赖性和时间依赖性;通过细胞周期实验说明化合物BP-3能将细胞阻滞在G0/G1期和G2/M期;通过细胞凋亡和自噬相关实验说明BP-3能够诱导细胞凋亡和细胞自噬。 在体内活性评价上,化合物BP-3能够抑制肿瘤的生长,有较强的抗TNBC活性;通过免疫组织化学说明BP-3抑制肿瘤组织中c-MYC的表达。通过小鼠体重变化和器官重量可以发现BP-3的毒性较弱。 本论文设计合成出靶向c-MYC G4的小分子BP-3,具有较好的亲和力和稳定性,在细胞水平以及小鼠模型中都体现了较强的抗TNBC活性。

关键词： 三阴性乳腺癌   灵芝小分子化合物   药物靶点   DARTS  

摘要： 三阴性乳腺癌是一种乳腺癌亚型,在乳腺癌中大约占15%,严重威胁女性生命健康。与其他亚型相比,三阴性乳腺癌具有侵袭性强,容易发生局部复发和远处转移等特点。目前三阴性乳腺癌只能依靠化疗,并且治疗效果不佳,这是乳腺癌学界的一道世界性难题。缺乏特定的治疗靶点是导致三阴性乳腺癌一直没有很好治疗手段的主要原因。研究发现,著名中药灵芝具有抑制肿瘤转移的作用,因此选用灵芝中的小分子化合物来进行抗三阴性乳腺癌研究可能提供新的策略。Drug Affinity Responsive Target Stability(DARTS)是根据小分子药物与其靶标蛋白结合后导致靶蛋白对蛋白酶降解的敏感性下降而发展起来的一项新靶点鉴定技术,由于无需药物保护性修饰且无药物活性依赖性,因此可广泛应用于药物筛选与靶点鉴定。本课题通过非标记的DARTS方法来寻找灵芝小分子化合物LZ-22抗三阴性乳腺癌细胞迁移的作用靶点并揭示其分子作用机制。我们的研究一方面为三阴性乳腺癌的治疗提供新的靶点与策略,另一方面也为传统中医药现代化提供科学依据。 本课题首先检测了灵芝中的小分子化合物LZ-22对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231划痕愈合能力,Transwell迁移与侵袭能力的影响。随后采用DARTS方法来寻找LZ-22在抗三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移作用中的靶点蛋白,经LC-MS/MS检测和蛋白质组学数据分析,我们筛选出了与三阴性乳腺癌迁移高度相关的整合素β1蛋白(Integrinβ1,ITGB1)为靶蛋白。接着用SDS-PAGE法检验LZ-22与纯蛋白结合以及LZ-22竞争性抑制ITGB1蛋白与090荧光探针结合,采用表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)实验分析了LZ-22与ITGB1的分子作用力。同时,我们用细胞免疫荧光实验分析了ITGB1在MDA-MB-231细胞中的定位。随后用si RNA技术敲低了MDA-MB-231细胞中ITGB1的蛋白表达,并观察MDA-MB-231细胞在单独敲低ITGB1蛋白后与敲低ITGB1再加药后对细胞迁移功能的影响。接着用Western blot法验证了LZ-22对于ITGB1-FAK-AKT信号通路的影响,并用q PCR来检测在加药后细胞中ITGB1蛋白m RNA的变化。最后,我们利用分子对接实验用来预测ITGB1蛋白与LZ-22的结合位点。 实验结果表明灵芝中的小分子化合物LZ-22能够显著抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的划痕愈合能力,Transwell迁移与侵袭能力。通过对DARTS的质谱数据进行表达模式聚类分析与KEGG信号通路分析,我们挑选出可能的靶点蛋白ITGB1,DARTS、SPR、纯蛋白结合与竞争性抑制实验均验证了LZ-22与ITGB1蛋白的结合。在单独敲低MDA-MB-231细胞中的ITGB1蛋白后细胞的划痕愈合能力,Transwell迁移与侵袭能力与单独加入LZ-22化合物一样被显著性抑制。在敲低MDA-MB-231细胞中的ITGB1蛋白后LZ-22的效果与对照组比较出现了显著性差异。同时LZ-22能够通过下调ITGB1、FAK、P-FAK与P-AKT蛋白的表达,影响MDA-MB-231细胞中的ITGB1-FAK-AKT信号通路。分子对接结果表明LZ-22可能通过与ITGB1蛋白活性口袋中的ASN249,TYR121和LYS71三个氨基酸残基形成氢键的方式相互作用。总之,LZ-22能够通过靶向ITGB1蛋白来抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移。

关键词： 三阴性乳腺癌   蛇孢菌素   免疫原性细胞死亡   内质网应激   氧化应激  

摘要： 三阴性乳腺癌（TNBC）缺乏明确致癌驱动生物标记,是最难治的乳腺癌亚型,亟需开发安全有效的药物用于TNBC的治疗。与其他乳腺癌亚型相比,TNBC具有更显著的免疫学特点,表现为更高肿瘤浸润淋巴细胞和肿瘤突变负荷等特征,这种特点可为其治疗提供更多选择和开发手段。MHO7（6-epi-ophiobolin G）为海洋真菌来源的二倍半萜类化合物,是蛇孢菌素类化合物（ophiobolins）家族中成员之一。MHO7在本课题组前期研究中表现出显著的抑制乳腺癌作用,在雌激素受体阳性乳腺癌中可作为雌激素受体α下调剂发挥作用。但对于雌激素受体表达为阴性的TNBC细胞,MHO7在前期活力检测中仍表现出显著抑制肿瘤细胞增殖的效果,但尚无MHO7作用于TNBC的机制研究。本课题在前期研究基础上,对MHO7在TNBC体内外药效及机制展开研究。 体外细胞检测表明MHO7对多种TNBC细胞系均表现出显著抑制增殖和促进凋亡的作用,半数抑制浓度(IC50)范围为0.96～1.75μM。体内构建人TNBC细胞的裸鼠皮下荷瘤模型,在30 mg/kg和60 mg/kg MHO7腹腔注射给药下,分别达到63%和79%体积抑瘤率。在4T1细胞构建的乳腺癌移植瘤模型中,MHO7在10 mg/kg和30 mg/kg剂量下分别有56%和70%抑瘤率,并显著抑制乳腺癌的肺转移。对上述两种动物模型进行体内MHO7安全性评价,结果表明在不同剂量范围（10～60 mg/kg）MHO7对小鼠均无致死作用,且对血液中肝肾功能指标及肝肾病理组织形态均无显著性影响,而阿霉素（DOX）组（2.5和5mg/kg）均出现死亡和一定的肝肾损伤。血液生化分析表明MHO7对小鼠血常规的各个指标无显著影响。上述均表明MHO7在体内外显示出有效抑制TNBC细胞增殖及肿瘤生长和转移的作用,具有安全有效抗TNBC作用。 通过转录组学技术分析MHO7潜在的作用通路及靶点,细胞水平转录组结果提示MHO7显著上调内质网、氧化应激及炎症免疫相关信号通路基因,而下调细胞周期信号通路基因。MHO7给药后裸鼠肿瘤组织的转录组分析表明MHO7在体内的显著影响免疫调控信号通路。转录组分析结果表明MHO7可通过激活内质网和氧化应激通路诱导细胞凋亡,该效应与免疫激活作用相关,提示MHO7具有诱导应激依赖性的肿瘤免疫原性细胞死亡（ICD）作用。 通过实时荧光定量PCR和Western blot检测内质网应激的基因和蛋白,表明MHO7激活PERK/e IF2α/ATF4/CHOP信号通路诱导细胞凋亡。通过转染si RNA沉默CHOP基因表达,CHOP沉默可以逆转MHO7诱导的凋亡作用,另外CHOP可以通过上调bax及cleaved caspase 3促进凋亡。通过流式细胞术检测活性氧（ROS）水平以验证氧化应激的作用,结果发现MHO7显著升高ROS水平,检测GSH和GSSG含量显示MHO7显著下调GSH及GSH/GSSG水平,表明MHO7可以激活氧化应激。加入ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸与MHO7共处理后,采用western blot检测内质网应激信号通路PERK/e IF2α/ATF4/CHOP蛋白表达,这些蛋白表达受到抑制。上述结果表明MHO7可以诱导内质网应激及氧化应激介导的细胞凋亡。 通过免疫荧光,Western blot以及化学发光法在体外检测ICD标志物损伤相关分子模式（DAMPs）的释放,结果表明MHO7可促进DAMPs包括CRT,HSP70,HMGB1及ATP的暴露和释放,DAMPs释放可诱导ICD作用。体内4T1肿瘤组织转录组揭示MHO7体内抗TNBC的作用与特异性免疫激活显著相关。分别通过流式细胞术和ELISA试验检测脾脏中免疫细胞分群和血清中免疫细胞因子的水平,结果显示MHO7显著上调树突状细胞（DCs）成熟标志物CD86+和抗原呈递标记MHC-II的表达,促进辅助性T细胞（CD4+T细胞）和细胞毒性T细胞（CD8+T细胞）活化,并抑制调节性T细胞（Tregs）产生。此外,MHO7促进血清中免疫因子IFN-γ、IL-1β和IL-6的释放。作为ICD体内验证金标准,疫苗试验也表明MHO7可作为免疫调节剂有效发挥抗肿瘤作用。这些都表明MHO7显著诱导ICD,并基于此机制激活体内抗肿瘤免疫效应抑制TNBC体内生长和转移。 综上,本研究进行了MHO7抗TNBC药效与机制研究,证实MHO7在体内外具有显著抗TNBC药效及良好安全性;基于体内外转录组学分析揭示和验证MHO7的作用机制与内质网应激信号通路和ICD介导的免疫激活效应相关;MHO7可显著激活体内抗肿瘤免疫效应发挥抑制TNBC生长和转移的作用。

关键词： 杂化外泌体   紫杉醇   三阴性乳腺癌   靶向递药  

摘要： 目的:乳腺癌是女性中最常见的恶性肿瘤,其新发病例与死亡病例在全球女性肿瘤中均排第一。三阴性乳腺癌(TNBC)是乳腺癌的一种亚型,约占乳腺癌新发病例的15%～20%。外泌体是生物源性的纳米囊泡,在递药系统方面具有广泛的应用。本课题将肿瘤细胞外泌体与脂质体(lipo)经挤压制备了杂化外泌体(HE),用HE包载紫杉醇(PTX)用于TNBC的治疗,以增强PTX对TNBC细胞的靶向性,降低其对正常组织的毒副作用,并有效抑制TNBC细胞的增殖与迁移。方法:采用差速离心法提取TNBC细胞来源的外泌体,通过薄膜分散法制备lipo,再通过挤压法制备膜融合型HE,利用纳米颗粒跟踪分析(NTA)、动态光散射(DLS)、透射电子显微镜(TEM)、考马斯亮蓝染色和蛋白质印迹(WB)对二者进行粒径、形态、蛋白三方面的表征。通过挤压法制备载紫杉醇杂化外泌体(PTX-HE),测定载药后的粒径分布,经高效液相色谱法(HPLC)测定其载药量与包封率,并考察其在不同p H下的释放情况。将HE用荧光染料Dil标记后考察TNBC细胞对HE的体外摄取情况,通过CCK-8实验和划痕实验考察PTX-HE对TNBC细胞的杀伤作用及迁移抑制作用。将HE用荧光染料Di R标记后注射到TNBC模型小鼠体内,通过小动物活体成像系统观察HE在不同时间点的体内分布情况。将TNBC模型小鼠分为5组,每组6只,分别为PBS组、空白HE组、游离PTX组、载紫杉醇脂质体(PTX-lipo)组、PTX-HE组,给药剂量按PTX含量计算为5 mg/kg,给药体积均为100μL,给药间隔为两天,累积给药四次,于给药后24 h测定肿瘤体积与模型小鼠体重。治疗结束后通过比较各组肿瘤体积的大小、肿瘤体重及肿瘤组织病理切片来评价PTX-HE的体内抗肿瘤效果,通过比较各组小鼠体重、肝肾功能因子水平及主要器官病理组织切片来评价PTX-HE的安全性。结果:提纯的TNBC细胞外泌体粒径为113.00±4.58 nm,空白lipo粒径为134.23±2.44 nm,HE粒径为157.28±3.13 nm,三者均为具有双层膜结构的圆形纳米粒子,中间为空心,形态相似,外泌体标志蛋白TSG101、CD9、CD63和能逃避巨噬细胞吞噬的功能蛋白CD47在外泌体和HE上均有表达,且外泌体和HE的蛋白分布相同。通过挤压法制备的PTX-HE载药量为6.20±0.79%,包封率为86.79±11.07%,载药后HE的粒径增加了18 nm左右,且PTX-HE在p H 5.3的条件下累积释放更多。体外研究表明,TNBC细胞对HE的摄取效率远高于lipo且呈时间相关性。PTX-lipo处理TNBC细胞24 h的IC50值为6.32±3.08μg·m L,而PTX-HE处理TNBC细胞24 h的IC50值为4.32±0.48μg·m L,在给药浓度为4μg·m L时,PTX-HE能更明显的抑制TNBC细胞迁移。Lipo与HE经荧光染料Di R标记后注射到TNBC模型小鼠体内,首先分布于全身各处,随着循环时间的增加,lipo与HE在肿瘤部位逐渐积累而在其他组织中的分布逐渐减少,但在循环24 h后,HE在肿瘤部位的含量要远高于lipo。接受PTX-HE治疗的小鼠,其肿瘤体积相比PBS组要显著降低,而游离PTX与PTX-lipo组的小鼠肿瘤体积相比PBS组虽有一定程度的降低但不明显,H&E染色与TUNEL染色也证明了PTX-HE组的肿瘤细胞死亡最为显著。虽然PTX-HE组、PTX-lipo组及游离PTX组的小鼠体重变化与PBS组相似,但游离PTX组的小鼠ALT、BUN及CR水平均要显著高于PTX-HE组,且H&E染色也证明游离PTX组的小鼠肝脏组织显示较明显的炎性细胞浸润,而其他处理组的主要器官组织切片均无异常。结论:本课题成功制备了基于肿瘤细胞外泌体与lipo的杂化外泌体制剂PTX-HE,不仅提高了PTX对TNBC的靶向性,显著提高了PTX的抗肿瘤效果,还显著降低了PTX的肝肾毒性,具有较高的安全性,实现了TNBC的靶向治疗,为未来HE的靶向治疗应用提供了参考。图29幅,表18个,参考文献62篇

关键词： 琵琶甲虫   三阴性乳腺癌   JKW-13   侵袭   迁移  

摘要： 三阴性乳腺癌(Triple negative breast cancer,TNBC)是指雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(HER2)表达均为阴性的乳腺癌,发病率约为12-17%,是女性中死亡率最高的癌症类型。TNBC的瘤体较大、分级偏高、有较强浸润和转移特征,且发病人群年轻化,导致TNBC成为癌症治疗中面临的重大挑战。结构多样的天然产物是新药开发的重要来源,多数抗肿瘤药物都是天然产物或其衍生物。在新药研发时经常以天然产物为先导化合物,进行结构优化即可获得具有成药性的药物分子。课题组前期选用天然昆虫药日本琵琶甲虫,通过提取、分离及纯化后获得具有活性的先导化合物,经过结构修饰、活性筛选等步骤,得到一系列高效低毒的抗TNBC转移化合物,有望为抗乳腺癌的新药研发提供具有前景的候选化合物。 本文从日本琵琶甲虫中获得具有抗TNBC活性的小分子化合物JKW-14,通过结构优化获得了73个JKW-14衍生物(课题组他人完成)。采用CCK8法检测不同化合物对TNBC细胞的毒性,通过划痕实验评价化合物的迁移抑制活性,并优选出活性最佳化合物JKW-13。通过转录组测序分析JKW-13对TNBC细胞基因表达谱的影响,KEGG通路富集分析JKW-13影响TNBC细胞的相关信号通路,并采用免疫印迹法(Western blot,WB)验证这些信号通路相关蛋白的表达情况。通过荧光染色观察JKW-13对细胞线粒体膜电位和活性氧水平的影响。划痕实验评价JKW-13探针的活性,基于活性的蛋白质组分析(Activity-based protein profiling,ABPP)法筛选小分子探针与蛋白结合的最佳浓度。 结果显示,JKW-13能显著抑制TNBC细胞HCC1806、MDA-MB-231、BT549的迁移侵袭,影响细胞内部分基因的m RNA水平,通过TGF-β通路抑制EMT进程,诱导细胞线粒体损伤、膜电位下降及活性氧(ROS)水平升高。经生物素修饰制备了4种JKW-13的小分子探针,部分探针保留了迁移抑制活性,为后续的靶标垂钓工作奠定了物质基础。因此我们认为,JKW-13抑制乳腺癌细胞迁移活性良好,可能通过TGF-β信号通路、线粒体损伤、激发ROS等途径影响乳腺癌细胞迁移和侵袭,修饰合成的JKW-13探针为其靶点发现奠定了物质基础。

关键词： 虫草素   转录组   三阴性乳腺癌   Hedgehog   Hippo  

摘要： 前期研究表明,蛹虫草活性成分虫草素能有效抑制乳腺癌移植瘤的生长和转移,但其作用机制未清楚。本研究取三阴性乳腺癌移植瘤样品,通过转录组测序技术分析虫草素抗乳腺癌移植瘤的分子作用机制。结果表明,以P<0.05、log2|FC|>1为标准,筛选获得584个差异表达基因,其中上调基因69个,下调基因515个;KEGG分析表明,虫草素对乳腺癌移植瘤的分子调控涉及Hippo signaling pathway、Hedgehog signaling pathway、ECM-receptor interction、TGF-beta signaling pathway等多条癌症相关信号通路;GO分析表明,这些差异基因富集在biological adhesion、growth、metabolic process、locomotion和biological process等16个生物学过程中,提示虫草素对乳腺癌移植瘤生长与转移有极显著的调节作用;进一步对生长和转移过程的基因进行PPI互作分析,提示Hedgehog signaling pathway、Hippo signaling pathway是虫草素抗三阴性乳腺癌的重要潜在作用通路。研究结果提示Hippo-Yap/TAZ信号通路和Hedgehog-Gli信号通路为潜在作用通路,为进一步理解虫草素治疗三阴性乳腺癌的分子机制奠定了基础。

关键词： 黄芪解毒汤   三阴性乳腺癌   术后复发转移   不良反应   糖类抗原153   癌胚抗原  

摘要： 目的探讨黄芪解毒汤抗三阴性乳腺癌术后复发转移的临床效果。方法选取2016年2月至2018年2月大连市中西医结合医院收治的56例原发性三阴性乳腺癌术后患者作为研究对象,按照电脑随机分组方法将其分为对照组与观察组,每组各28例。对照组患者采用紫杉醇周期性化疗或手术治疗,观察组患者在对照组的基础上采用黄芪解毒汤治疗。比较两组患者治疗前后的血清肿瘤标志物、电子计算机断层扫描(CT)下实体瘤体积、不良反应及长期治疗结果。结果治疗后,观察组患者的糖类抗原153(CA153)、癌胚抗原(CEA)高于对照组,CT下实体瘤体积小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者的不良反应总发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者治疗后6、12、18个月复发转移率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在三阴性乳腺癌术后患者的治疗中,使用黄芪解毒汤,不仅可以有效降低患者的CA153、CEA水平,还可以减少术后不良反应发生的概率,同时有助于降低术后复发转移的概率。

关键词： 木犀草素   顺铂   三阴性乳腺癌   Nrf2-ARE   协同作用  

摘要： 目的通过木犀草素协同顺铂调控Nrf2-ARE信号探讨其抗三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231的作用。方法MTT法检测木犀草素和顺铂单用或联用对TNBC细胞MDA-MB-231活力影响,并采用Compusyn计算协同指数(CI);AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测木犀草素和顺铂单用或联用对MDA-MB-231细胞凋亡影响;Transwell侵袭与迁移实验检测木犀草素和顺铂单用或联用对MDA-MB-231细胞侵袭与迁移能力影响;流式细胞术分析木犀草素和顺铂单用或联用对MDA-MB-231细胞CD24^(+)/CD44^(+)表达量的影响;蛋白质印迹法检测Nrf2-ARE信号关键蛋白核因子E2相关因子(Nrf2)、编码还原型辅酶/醌氧化还原酶(NQO1)、血红素氧合酶-1(HO-1)和人谷胱甘肽S转移酶A1(GSTA1)表达的变化。结果24、48及72h下木犀草素(40μmol/L)和顺铂(5μg/mL)联合给药细胞存活率最低,且CI<1,表明木犀草素与顺铂给药24h后两药即具有协同效应,差异有统计学意义,P<0.05;木犀草素(20μmol/L)和顺铂(5μg/mL)共同处理下细胞凋亡率最高,表明两药联用促进细胞凋亡;木犀草素(20μmol/L)和顺铂(5μg/mL)共同处理下细胞侵袭与迁移能力最弱,差异有统计学意义,P<0.05;木犀草素(40μmol/L)和顺铂(5μg/mL)共同处理下CD24^(+)/CD44^(+)表达量最低,表明两药联合具有增强抑制细胞迁移作用;木犀草素(40μmol/L)和顺铂(5μg/mL)联合处理下Nrf2、NQO1、HO-1和GSTA1表达量最低,表明其通过抑制Nrf2蛋白从而抑制Nrf2-ARE通路下游耐药关键酶系NQO1、HO-1及GSTA1的表达,增加细胞用药敏感性,且具有联合效应。结论木犀草素通过调控Nrf2-ARE信号通路能够提高MDA-MB-231细胞对顺铂敏感性,提示木犀草素可作为化疗增敏剂与顺铂联合应用于TNBC的治疗。