关键词： G4   TNBC   c-MYC   抗肿瘤活性  

摘要： 乳腺癌是一种常见的女性恶性肿瘤,在女性相关癌症死亡率中居于首位。三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer,TNBC)是乳腺肿瘤中最具侵袭性的分子亚型,是雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2均为阴性的一种特殊乳腺癌。由于其复发率高、转移性强、预后不良等,成了临床一直关注的焦点。因此,需要迫切开发新的治疗TNBC方案。 G-四链体(G-quadruplex,G4)由富含鸟嘌呤的核酸序列形成一种特殊核酸结构。四个鸟嘌呤通过Hoogsteen氢键排列形成环状的G-四分体,多个G-四分体通过π-π相互堆叠形成G4。G4存在于许多真核细胞的基因组中,例如在DNA复制起点,染色体末端,启动子调节区域中,决定各种生物过程的关键功能,包括DNA复制,端粒维持,转录,同源重组和表观遗传学等,因此成为近年来新发展抗癌药物的重要靶点。 目前研究表明,c-MYC是一种重要的癌基因,在细胞生长、增殖和凋亡中起着至关重要的作用。稳定c-MYC G4一方面可以下调c-MYC基因的转录,由于c-MYC基因表达的异常导致调控的失调,抑制了癌细胞生长增殖,另一方面还可以形成稳定的R环,R环的扩散会引起转录依赖性的DNA损伤,也抑制了癌细胞生长增殖。因此,开发具有高活性和低毒性的靶向c-MYC G4的小分子成为新的抗肿瘤策略。 本论文合成一类靶向c-MYC启动子G4的咪唑联苯类化合物,通过核磁共振波谱、高分辨质谱和高效液相色谱法对化合物的结构进行表征。利用荧光光谱法检测化合物与G4的亲和力,使用圆二色光谱法分析化合物对G4的稳定性,通过CCK-8测定化合物对细胞的增殖活性的影响,综合多方面因素,即亲和力、稳定性和细胞毒性,我们筛选出最有活性的化合物BP-3。 通过核磁共振波谱、计算机分子模拟对接等方法分析研究BP-3与c-MYC G4之间的结合模式。同时也对比了联苯化合物BP3和未联苯化合物BP-7与G4之间的结合能力。对化合物结构-活性进行分析,研究不同的取代基团和不同的取代位置等对G4的影响,为后续化合物的优化改造以及合成新的靶向c-MYC G4化合物提供新的思路。 在细胞水平上,通过双荧光素酶报告基因、RT-PCR和western blot实验说明化合物BP-3能够靶向c-MYC G4,下调c-MYC基因的表达水平。通过免疫荧光和western blot实验说明化合物BP-3能够诱导转录依赖性的DNA损伤;通过平板克隆实验测得化合物BP-3具有较强的抗肿瘤细胞增殖的活性,呈浓度依赖性;通过细胞划痕、transwell迁移实验说明化合物BP-3能够抑制细胞的迁移能力,呈浓度依赖性和时间依赖性;通过细胞周期实验说明化合物BP-3能将细胞阻滞在G0/G1期和G2/M期;通过细胞凋亡和自噬相关实验说明BP-3能够诱导细胞凋亡和细胞自噬。 在体内活性评价上,化合物BP-3能够抑制肿瘤的生长,有较强的抗TNBC活性;通过免疫组织化学说明BP-3抑制肿瘤组织中c-MYC的表达。通过小鼠体重变化和器官重量可以发现BP-3的毒性较弱。 本论文设计合成出靶向c-MYC G4的小分子BP-3,具有较好的亲和力和稳定性,在细胞水平以及小鼠模型中都体现了较强的抗TNBC活性。

关键词： 三阴性乳腺癌   蛇孢菌素   免疫原性细胞死亡   内质网应激   氧化应激  

摘要： 三阴性乳腺癌（TNBC）缺乏明确致癌驱动生物标记,是最难治的乳腺癌亚型,亟需开发安全有效的药物用于TNBC的治疗。与其他乳腺癌亚型相比,TNBC具有更显著的免疫学特点,表现为更高肿瘤浸润淋巴细胞和肿瘤突变负荷等特征,这种特点可为其治疗提供更多选择和开发手段。MHO7（6-epi-ophiobolin G）为海洋真菌来源的二倍半萜类化合物,是蛇孢菌素类化合物（ophiobolins）家族中成员之一。MHO7在本课题组前期研究中表现出显著的抑制乳腺癌作用,在雌激素受体阳性乳腺癌中可作为雌激素受体α下调剂发挥作用。但对于雌激素受体表达为阴性的TNBC细胞,MHO7在前期活力检测中仍表现出显著抑制肿瘤细胞增殖的效果,但尚无MHO7作用于TNBC的机制研究。本课题在前期研究基础上,对MHO7在TNBC体内外药效及机制展开研究。 体外细胞检测表明MHO7对多种TNBC细胞系均表现出显著抑制增殖和促进凋亡的作用,半数抑制浓度(IC50)范围为0.96～1.75μM。体内构建人TNBC细胞的裸鼠皮下荷瘤模型,在30 mg/kg和60 mg/kg MHO7腹腔注射给药下,分别达到63%和79%体积抑瘤率。在4T1细胞构建的乳腺癌移植瘤模型中,MHO7在10 mg/kg和30 mg/kg剂量下分别有56%和70%抑瘤率,并显著抑制乳腺癌的肺转移。对上述两种动物模型进行体内MHO7安全性评价,结果表明在不同剂量范围（10～60 mg/kg）MHO7对小鼠均无致死作用,且对血液中肝肾功能指标及肝肾病理组织形态均无显著性影响,而阿霉素（DOX）组（2.5和5mg/kg）均出现死亡和一定的肝肾损伤。血液生化分析表明MHO7对小鼠血常规的各个指标无显著影响。上述均表明MHO7在体内外显示出有效抑制TNBC细胞增殖及肿瘤生长和转移的作用,具有安全有效抗TNBC作用。 通过转录组学技术分析MHO7潜在的作用通路及靶点,细胞水平转录组结果提示MHO7显著上调内质网、氧化应激及炎症免疫相关信号通路基因,而下调细胞周期信号通路基因。MHO7给药后裸鼠肿瘤组织的转录组分析表明MHO7在体内的显著影响免疫调控信号通路。转录组分析结果表明MHO7可通过激活内质网和氧化应激通路诱导细胞凋亡,该效应与免疫激活作用相关,提示MHO7具有诱导应激依赖性的肿瘤免疫原性细胞死亡（ICD）作用。 通过实时荧光定量PCR和Western blot检测内质网应激的基因和蛋白,表明MHO7激活PERK/e IF2α/ATF4/CHOP信号通路诱导细胞凋亡。通过转染si RNA沉默CHOP基因表达,CHOP沉默可以逆转MHO7诱导的凋亡作用,另外CHOP可以通过上调bax及cleaved caspase 3促进凋亡。通过流式细胞术检测活性氧（ROS）水平以验证氧化应激的作用,结果发现MHO7显著升高ROS水平,检测GSH和GSSG含量显示MHO7显著下调GSH及GSH/GSSG水平,表明MHO7可以激活氧化应激。加入ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸与MHO7共处理后,采用western blot检测内质网应激信号通路PERK/e IF2α/ATF4/CHOP蛋白表达,这些蛋白表达受到抑制。上述结果表明MHO7可以诱导内质网应激及氧化应激介导的细胞凋亡。 通过免疫荧光,Western blot以及化学发光法在体外检测ICD标志物损伤相关分子模式（DAMPs）的释放,结果表明MHO7可促进DAMPs包括CRT,HSP70,HMGB1及ATP的暴露和释放,DAMPs释放可诱导ICD作用。体内4T1肿瘤组织转录组揭示MHO7体内抗TNBC的作用与特异性免疫激活显著相关。分别通过流式细胞术和ELISA试验检测脾脏中免疫细胞分群和血清中免疫细胞因子的水平,结果显示MHO7显著上调树突状细胞（DCs）成熟标志物CD86+和抗原呈递标记MHC-II的表达,促进辅助性T细胞（CD4+T细胞）和细胞毒性T细胞（CD8+T细胞）活化,并抑制调节性T细胞（Tregs）产生。此外,MHO7促进血清中免疫因子IFN-γ、IL-1β和IL-6的释放。作为ICD体内验证金标准,疫苗试验也表明MHO7可作为免疫调节剂有效发挥抗肿瘤作用。这些都表明MHO7显著诱导ICD,并基于此机制激活体内抗肿瘤免疫效应抑制TNBC体内生长和转移。 综上,本研究进行了MHO7抗TNBC药效与机制研究,证实MHO7在体内外具有显著抗TNBC药效及良好安全性;基于体内外转录组学分析揭示和验证MHO7的作用机制与内质网应激信号通路和ICD介导的免疫激活效应相关;MHO7可显著激活体内抗肿瘤免疫效应发挥抑制TNBC生长和转移的作用。

关键词： 杂化外泌体   紫杉醇   三阴性乳腺癌   靶向递药  

摘要： 目的:乳腺癌是女性中最常见的恶性肿瘤,其新发病例与死亡病例在全球女性肿瘤中均排第一。三阴性乳腺癌(TNBC)是乳腺癌的一种亚型,约占乳腺癌新发病例的15%～20%。外泌体是生物源性的纳米囊泡,在递药系统方面具有广泛的应用。本课题将肿瘤细胞外泌体与脂质体(lipo)经挤压制备了杂化外泌体(HE),用HE包载紫杉醇(PTX)用于TNBC的治疗,以增强PTX对TNBC细胞的靶向性,降低其对正常组织的毒副作用,并有效抑制TNBC细胞的增殖与迁移。方法:采用差速离心法提取TNBC细胞来源的外泌体,通过薄膜分散法制备lipo,再通过挤压法制备膜融合型HE,利用纳米颗粒跟踪分析(NTA)、动态光散射(DLS)、透射电子显微镜(TEM)、考马斯亮蓝染色和蛋白质印迹(WB)对二者进行粒径、形态、蛋白三方面的表征。通过挤压法制备载紫杉醇杂化外泌体(PTX-HE),测定载药后的粒径分布,经高效液相色谱法(HPLC)测定其载药量与包封率,并考察其在不同p H下的释放情况。将HE用荧光染料Dil标记后考察TNBC细胞对HE的体外摄取情况,通过CCK-8实验和划痕实验考察PTX-HE对TNBC细胞的杀伤作用及迁移抑制作用。将HE用荧光染料Di R标记后注射到TNBC模型小鼠体内,通过小动物活体成像系统观察HE在不同时间点的体内分布情况。将TNBC模型小鼠分为5组,每组6只,分别为PBS组、空白HE组、游离PTX组、载紫杉醇脂质体(PTX-lipo)组、PTX-HE组,给药剂量按PTX含量计算为5 mg/kg,给药体积均为100μL,给药间隔为两天,累积给药四次,于给药后24 h测定肿瘤体积与模型小鼠体重。治疗结束后通过比较各组肿瘤体积的大小、肿瘤体重及肿瘤组织病理切片来评价PTX-HE的体内抗肿瘤效果,通过比较各组小鼠体重、肝肾功能因子水平及主要器官病理组织切片来评价PTX-HE的安全性。结果:提纯的TNBC细胞外泌体粒径为113.00±4.58 nm,空白lipo粒径为134.23±2.44 nm,HE粒径为157.28±3.13 nm,三者均为具有双层膜结构的圆形纳米粒子,中间为空心,形态相似,外泌体标志蛋白TSG101、CD9、CD63和能逃避巨噬细胞吞噬的功能蛋白CD47在外泌体和HE上均有表达,且外泌体和HE的蛋白分布相同。通过挤压法制备的PTX-HE载药量为6.20±0.79%,包封率为86.79±11.07%,载药后HE的粒径增加了18 nm左右,且PTX-HE在p H 5.3的条件下累积释放更多。体外研究表明,TNBC细胞对HE的摄取效率远高于lipo且呈时间相关性。PTX-lipo处理TNBC细胞24 h的IC50值为6.32±3.08μg·m L,而PTX-HE处理TNBC细胞24 h的IC50值为4.32±0.48μg·m L,在给药浓度为4μg·m L时,PTX-HE能更明显的抑制TNBC细胞迁移。Lipo与HE经荧光染料Di R标记后注射到TNBC模型小鼠体内,首先分布于全身各处,随着循环时间的增加,lipo与HE在肿瘤部位逐渐积累而在其他组织中的分布逐渐减少,但在循环24 h后,HE在肿瘤部位的含量要远高于lipo。接受PTX-HE治疗的小鼠,其肿瘤体积相比PBS组要显著降低,而游离PTX与PTX-lipo组的小鼠肿瘤体积相比PBS组虽有一定程度的降低但不明显,H&E染色与TUNEL染色也证明了PTX-HE组的肿瘤细胞死亡最为显著。虽然PTX-HE组、PTX-lipo组及游离PTX组的小鼠体重变化与PBS组相似,但游离PTX组的小鼠ALT、BUN及CR水平均要显著高于PTX-HE组,且H&E染色也证明游离PTX组的小鼠肝脏组织显示较明显的炎性细胞浸润,而其他处理组的主要器官组织切片均无异常。结论:本课题成功制备了基于肿瘤细胞外泌体与lipo的杂化外泌体制剂PTX-HE,不仅提高了PTX对TNBC的靶向性,显著提高了PTX的抗肿瘤效果,还显著降低了PTX的肝肾毒性,具有较高的安全性,实现了TNBC的靶向治疗,为未来HE的靶向治疗应用提供了参考。图29幅,表18个,参考文献62篇

关键词： 虫草素   转录组   三阴性乳腺癌   Hedgehog   Hippo  

摘要： 前期研究表明,蛹虫草活性成分虫草素能有效抑制乳腺癌移植瘤的生长和转移,但其作用机制未清楚。本研究取三阴性乳腺癌移植瘤样品,通过转录组测序技术分析虫草素抗乳腺癌移植瘤的分子作用机制。结果表明,以P<0.05、log2|FC|>1为标准,筛选获得584个差异表达基因,其中上调基因69个,下调基因515个;KEGG分析表明,虫草素对乳腺癌移植瘤的分子调控涉及Hippo signaling pathway、Hedgehog signaling pathway、ECM-receptor interction、TGF-beta signaling pathway等多条癌症相关信号通路;GO分析表明,这些差异基因富集在biological adhesion、growth、metabolic process、locomotion和biological process等16个生物学过程中,提示虫草素对乳腺癌移植瘤生长与转移有极显著的调节作用;进一步对生长和转移过程的基因进行PPI互作分析,提示Hedgehog signaling pathway、Hippo signaling pathway是虫草素抗三阴性乳腺癌的重要潜在作用通路。研究结果提示Hippo-Yap/TAZ信号通路和Hedgehog-Gli信号通路为潜在作用通路,为进一步理解虫草素治疗三阴性乳腺癌的分子机制奠定了基础。

关键词： 黄芪解毒汤   三阴性乳腺癌   术后复发转移   不良反应   糖类抗原153   癌胚抗原  

摘要： 目的探讨黄芪解毒汤抗三阴性乳腺癌术后复发转移的临床效果。方法选取2016年2月至2018年2月大连市中西医结合医院收治的56例原发性三阴性乳腺癌术后患者作为研究对象,按照电脑随机分组方法将其分为对照组与观察组,每组各28例。对照组患者采用紫杉醇周期性化疗或手术治疗,观察组患者在对照组的基础上采用黄芪解毒汤治疗。比较两组患者治疗前后的血清肿瘤标志物、电子计算机断层扫描(CT)下实体瘤体积、不良反应及长期治疗结果。结果治疗后,观察组患者的糖类抗原153(CA153)、癌胚抗原(CEA)高于对照组,CT下实体瘤体积小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者的不良反应总发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者治疗后6、12、18个月复发转移率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在三阴性乳腺癌术后患者的治疗中,使用黄芪解毒汤,不仅可以有效降低患者的CA153、CEA水平,还可以减少术后不良反应发生的概率,同时有助于降低术后复发转移的概率。

关键词： 木犀草素   顺铂   三阴性乳腺癌   Nrf2-ARE   协同作用  

摘要： 目的通过木犀草素协同顺铂调控Nrf2-ARE信号探讨其抗三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231的作用。方法MTT法检测木犀草素和顺铂单用或联用对TNBC细胞MDA-MB-231活力影响,并采用Compusyn计算协同指数(CI);AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测木犀草素和顺铂单用或联用对MDA-MB-231细胞凋亡影响;Transwell侵袭与迁移实验检测木犀草素和顺铂单用或联用对MDA-MB-231细胞侵袭与迁移能力影响;流式细胞术分析木犀草素和顺铂单用或联用对MDA-MB-231细胞CD24^(+)/CD44^(+)表达量的影响;蛋白质印迹法检测Nrf2-ARE信号关键蛋白核因子E2相关因子(Nrf2)、编码还原型辅酶/醌氧化还原酶(NQO1)、血红素氧合酶-1(HO-1)和人谷胱甘肽S转移酶A1(GSTA1)表达的变化。结果24、48及72h下木犀草素(40μmol/L)和顺铂(5μg/mL)联合给药细胞存活率最低,且CI<1,表明木犀草素与顺铂给药24h后两药即具有协同效应,差异有统计学意义,P<0.05;木犀草素(20μmol/L)和顺铂(5μg/mL)共同处理下细胞凋亡率最高,表明两药联用促进细胞凋亡;木犀草素(20μmol/L)和顺铂(5μg/mL)共同处理下细胞侵袭与迁移能力最弱,差异有统计学意义,P<0.05;木犀草素(40μmol/L)和顺铂(5μg/mL)共同处理下CD24^(+)/CD44^(+)表达量最低,表明两药联合具有增强抑制细胞迁移作用;木犀草素(40μmol/L)和顺铂(5μg/mL)联合处理下Nrf2、NQO1、HO-1和GSTA1表达量最低,表明其通过抑制Nrf2蛋白从而抑制Nrf2-ARE通路下游耐药关键酶系NQO1、HO-1及GSTA1的表达,增加细胞用药敏感性,且具有联合效应。结论木犀草素通过调控Nrf2-ARE信号通路能够提高MDA-MB-231细胞对顺铂敏感性,提示木犀草素可作为化疗增敏剂与顺铂联合应用于TNBC的治疗。

关键词： 三阴性乳腺癌   中药   活性成分   中药复方   作用机制  

摘要： 三阴性乳腺癌(TNBC)作为乳腺癌的一种亚型,具有侵袭性强、复发转移率高等特点,严重威胁女性身心健康,由于缺乏明确的分子靶标,目前仍以化疗为主,但临床治愈率低。中药可通过多途径、多靶点抑制TNBC的生长、降低其复发转移率,具有独特的治疗优势。文章结合国内外的最新研究成果,对中药及其活性成分抗TNBC的作用及其机制进行综述,为中药新药的开发及临床应用提供参考。

关键词： Antimycin   MDA⁃MB⁃231   MCF⁃10A   IC50  

摘要： 研究Antimycin类天然产物对三阴性乳腺癌细胞MDA⁃MB⁃231特异性生长抑制和杀伤作用.三种结构类似的天然产物Antimycin⁃1,⁃2和⁃3对MDA⁃MB⁃231细胞生长都有很强的抑制作用,其IC50分别为1.34±0.07,160±20和180±50 nmol·L^(-1),Antimycin⁃1活性是Antimycin⁃2和Antimycin⁃3的一百多倍.10 nmol·L^(-1)的Antimycin⁃1就可有效抑制MDA⁃MB⁃231细胞增殖,药物处理细胞24和48 h后的抑制率分别达到约80%和90%.显微镜下可以观察到,10和100 nmol·L^(-1)的Antimycin⁃1都不同程度地杀伤MDA⁃MB⁃231细胞,1000 nmol·L^(-1)的Antimycin⁃1甚至使细胞几乎消溶,只留下突起的核和胞质残骸.而同样浓度药物造成的乳腺正常细胞MCF⁃10A和结肠癌细胞HCT116形态的改变不明显.1和5 nmol·L^(-1)的Antimycin⁃1对细胞集落抑制率分别达到52%和95%.20和50 nmol·L^(-1)的Antimycin⁃1也明显改变MDA⁃MB⁃231细胞核形态,核呈畸形,皱缩严重,核膜破损.5,10和100 nmol·L^(-1)的Antimycin⁃1处理MDA⁃MB⁃231细胞12,24和48 h引发细胞凋亡和坏死数量增加,并呈现时间和剂量依赖性.5,10和20 nmol·L^(-1)的Antimycin⁃1处理MDA⁃MB⁃231细胞6,12和24 h后,没有观察到对细胞周期时相的明显影响.20 nmol·L^(-1)的Antimycin⁃1处理MDA⁃MB⁃231细胞12,16,20和24 h后,引起胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平随处理时间延长呈逐渐下降趋势.以上结果证明,纳摩尔级的Antimycin⁃1能有效抑制和杀伤三阴性乳腺癌MDA⁃MB⁃231细胞.

关键词： 三阴性乳腺癌   Beclin-1   小分子激动剂   自噬   凋亡  

摘要： 细胞自噬（Autophagy）是一种进化上保守的溶酶体降解途径,在细胞内环境稳态、细胞发育、细胞免疫、能量代谢、抑制肿瘤、预防神经退行性病变和延长寿命方面起着至关重要的作用。细胞自噬的药理学激活可能是治疗乳腺癌等人类癌症的有效方法之一。Beclin-1是自噬过程中的关键调控蛋白,作为III型磷脂酰肌醇3-激酶（class III phosphatidylinositol 3-kinase,PI3KC3）复合体的关键亚基调节自噬过程中关键的限速步骤。作为肿瘤抑制因子,BECN1基因的单等位基因缺失与多种癌症相关,因此Beclin-1是包括乳腺癌在内的多种癌症的潜在治疗靶点。然而由于其BH3（Bcl-2-homology-3）结构域,CCD（Coiled coil domain）结构域为螺旋结构,ECD（Evolutionary conserved domain）结构域的可药口袋浅,Beclin-1与PI3KC3复合体的人源高分率的结构信息尚未解析等原因,Beclin-1的靶向药物设计比较困难。本研究基于Beclin-1已有的晶体结构,分析其在形成PI3KC3复合体过程中的结构变化过程和关键的蛋白质相互作用界面。利用多种变构位点识别方法在其ECD结构域表征了一个潜在的变构位点。进一步采用分子对接的高通量虚拟筛选方法将SPECS库中的小分子化合物对接到变构位点,筛选候选的小分子激动剂。经过三轮的分子对接筛选,挑选了32个化合物作为候选的小分子激动剂。通过对细胞水平的自噬激活活性筛选和抗乳腺癌细胞增殖活性筛选,我们发现化合物10能够诱导乳腺癌细胞自噬,上调Beclin-1的水平。同时对MCF-7,MDA-MB-231,MDA-MB-468,BT-549细胞都具有较好的抗增殖活性,对MDA-MB-231细胞尤为明显(IC50=15.22μmol·L-1)。我们发现化合物10能够完美的对接到变构位点中,并且形成了稳定的相互作用。分子动力学模拟结果表明化合物10-Beclin-1复合体是一个稳定的系统。体外机制研究表明,化合物10能够诱导MDA-MB-231细胞发生自噬相关性死亡。同时还发现化合物10激活自噬后,还伴随细胞凋亡的发生。本研究确定了候选化合物10作为开发有效的、具有选择性靶向Beclin-1激活细胞自噬的先导化合物,为进一步开发和优化用于临床治疗的靶向Beclin-1激活自噬小分子药物提供依据。

关键词： 三阴性乳腺癌   光热治疗   PD-1/PD-L1通路   CD47-SIRPα通路   肿瘤相关巨噬细胞  

摘要： 三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)是具有高侵袭、易转移特性的一种恶性肿瘤。由于缺乏雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)的表达,在病理组织和分子表型方面极具异质性。其治疗仍然是肿瘤学中的一个挑战,亟待开发高效、特异的治疗手段。TNBC在乳腺癌各亚型中最具免疫原性,并且具有较高水平的TILs和PD-L1蛋白的表达,可能从免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitor,ICI)治疗中获益。然而肿瘤微环境中的各种免疫抑制细胞、多免疫检查点的上调均限制了单一ICI疗法在TNBC中的作用。TNBC上同时存在PD-L1和CD47的过表达,意味着其抗肿瘤固有免疫和适应性免疫均受到抑制。联合应用PD-1和CD47两种ICI,同时唤醒TNBC肿瘤局部的固有和适应性免疫应答,同时逆转肿瘤微环境中M2型肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)等免疫抑制细胞的功能,为治疗TNBC带来了诱人的前景。本项目中,我们构建了一个刺激响应多功能抗TNBC纳米平台(ZIF-PQ-PDA-AUN),发挥光热协同双ICI效应。ZIF-PQ-PDA-AUN的光热疗法可以热消融肿瘤细胞,同时促进TILs向肿瘤的浸润;AUNP-12和PQ912通过切断PD-L1和CD47信号,恢复了肿瘤中的固有和适应性免疫应答,并进一步增强M1型TAMs的吞噬作用、诱导了促肿瘤的M2型TAMs向抗肿瘤的M1型TAMs的极化。与单一ICI免疫疗法相比,该纳米递送系统呈现出更强的抗肿瘤免疫效应、更低的自身免疫副反应,以期为TNBC的治疗提供可借鉴的新策略。