关键词： 三阴性乳腺癌   PD-1/PD-L1   近红外二区荧光   磁共振   双模态分子影像   疗效监测  

摘要： 背景:三阴性乳腺癌(TNBC)分化及预后差、侵袭能力强。近期研究表明免疫检查点阻断治疗(ICBT)可以提高TNBC的病理完全缓解和生存率,有望成为该亚型乳腺癌有效的治疗策略。然而,ICBT仅有20%-30%有效率。因此,如何筛选ICBT可能的获益者是TNBC治疗最受关注的问题。许多研究表明PD-L1在肿瘤微环境的阳性表达情况与良好愈后相关,目前免疫组化(IHC)是检测PD-L1表达的常规方法,然而IHC存在以下弊端:为有创的检测方法;无法实现动态监测;不同抗体的检测平台判读标准及方法存在差异。有研究证明利用放射性核素可检测肿瘤PD-L1表达情况并预测PD-1/PD-L1疗效,然而由于其放射性难以满足连续动态检测的临床需求。多模态成像技术因融合多种模态成像技术的优势,可满足在体、动态监测PD-L1表达水平,并有望提高ICBT疗效评估的准确性。目的:构建靶向PD-L1的高特异性、低背景荧光/核磁双模态成像分子探针,探索在体预测ICBT疗效的更有效方法。方法:1、利用电镜、吸收、发射光谱及T1弛豫时间对探针的形态、荧光、核磁性能进行表征。2、在细胞水平利用CCK8实验验证探针的安全性,利用未带靶的对照探针、不同PD-L1表达的细胞以及竞争性抑制实验验证探针靶向性。3、在小动物水平利用未带靶探针、竞争性抑制以及不同表达水平的肿瘤验证NPs-Ate靶向性4、在小动物水平分别进行PD-1联合化疗、放疗及INF-γ联合治疗,在体监测在治疗过程中PD-L1表达及小鼠愈后。结果:1、成功合成了荧光/核磁双模态靶向PD-L1的探针GdDTPA-HSA@ICG-Atezoilzumab(NPs-Ate),其大小均一,粒径约7nm,具有良好的荧光和磁共振特性,在近红外二区可见荧光拖尾信号。2、NPs-Ate在细胞及小动物水平均表现出良好的靶向性,有良好的生物相容性。人乳腺癌移植瘤模型中,36小时的信号背景比(SBR)最高,达到11.51。经过游离抗体阻断后较阻断前摄取减少34.2%,小鼠异位移植瘤模型及磁共振也观察到类似的结果。3、在小动物水平,NPs-Ate可以无创反映INF-γ、放疗、化疗干预后引起的PD-L1表达水平升高,以及联合免疫治疗PD-L1后的增加,该增加与免疫治疗疗效相关。结论:基于靶向PD-L1的NPs-Ate荧光/核磁双模态成像可以监测小鼠PD-L1在治疗中的变化、预测PD-1/PD-L1疗效,可能成为无创动态检测乳腺癌PD-L1表达的有力工具。

关键词： 丁香醛   查尔酮   CKAP2基因   抗癌活性   乳腺癌  

摘要： 背景及目的：三阴性乳腺癌（Triple-negativebreastcancer,TNBC），是乳腺癌亚型中最具侵袭性、高复发率、高死亡率、差预后的一类高度异质性的乳腺恶性肿瘤。由于目前缺乏有效的靶向治疗，其临床治疗仍以化疗为主。但是随着长期用药，肿瘤细胞对化疗药物的敏感性下降，易产生耐药。基于此，本论文合成了一个新型的丁香醛类查尔酮衍生物CSH1，并在分子和细胞水平上阐明其抗三阴性乳腺癌的药理活性及分子作用机制。　　实验方法：通过3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑（MTT）法测定CSH1对TNBC细胞的毒性;通过集落克隆形成实验和5-乙炔基-2-脱氧尿苷（EdU）染色法测定细胞增殖活性;通过AnnexinV和PI双染的流式细胞（FACS）技术检测细胞凋亡情况;通过PI单染的FACS技术检测细胞周期分布情况;通过免疫荧光（IF）技术检测DNA损伤情况;采用细胞粘附实验和Transwell实验检测细胞粘附、迁移和侵袭能力;通过转录组测序（RNA-seq）检测mRNA转录水平的改变;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测各种mRNA的转录水平;通过CKAP2siRNA转染实验检测CKAP2蛋白的生物学功能;蛋白免疫印迹（WB）实验检测增殖和转移信号通路相关蛋白的表达水平。　　实验结果：CSH1诱导肿瘤细胞DNA损伤并抑制其修复，导致细胞周期阻滞和细胞凋亡。RNA-seq结果表明，由CSH1引起的改变基因中仅有4%的基因与DNA损伤和修复相关，却有近18%的基因与细胞粘附和迁移相关。进一步的实验结果表明，CSH1显著影响FAK的分布及其磷酸化，减弱TNBC细胞与细胞外基质之间的黏附作用并抑制其迁移。机制研究结果表明，CSH1通过抑制CKAP2介导的FAK和STAT3磷酸化信号通路的激活，达到抑制TNBC细胞的增殖、粘附和迁移的效果。　　实验结论：综上所述，我们的结果表明CKAP2介导的FAK和STAT3磷酸化信号通路是治疗TNBC的一个具有临床实际应用价值的靶点，且CSH1是一个潜在的抗TNBC药物。

关键词： 阿尼芬净   伏立诺他   POLR2A   乳腺癌   凋亡   自噬  

摘要： 目的:探讨阿尼芬净(Anidulafungin,ANI)促伏立诺他(Vorinostat,Suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)的抗三阴性乳腺癌细胞作用及其可能机制。方法:通过CCK-8实验检测ANI、SAHA或其联合药物处理MDA-MB-231、MDA-MB-453乳腺癌细胞24小时及48小时的细胞活力,并计算药物联合指数。平板克隆形成实验检测乳腺癌细胞的增殖能力。通过Annexin V/PI双染色流式细胞术和caspase-3活性检测试剂盒检测乳腺癌细胞凋亡。si RNA干扰检测POLR2A在ANI、SAHA抗乳腺癌中的作用,并用CCK-8实验检测POLR2A表达下调后ANI与SAHA处理的乳腺癌细胞活力。Western Blot检测ANI、SAHA、自噬抑制剂巴弗洛霉素A1(Bafilomycin A1,Baf A1)、POLR2A敲低后MDA-MB-231和/或MDA-MB-453细胞凋亡及自噬相关蛋白Bcl-2、Bax、BECLIN1、SQSTM1/p62、LC3蛋白表达水平。结果:ANI、SAHA或其联合药物处理以时间和剂量依赖性的方式抑制MDA-MB-231和MDA-MB-453细胞的活力,而ANI和SAHA联合药物处理在抗三阴性乳腺癌细胞作用中具有协同效应,同时具有诱导乳腺癌细胞凋亡和自噬作用。POLR2A杂合性缺失的三阴性乳腺癌细胞对ANI、SAHA及其联合药物处理更敏感。ANI、SAHA或其联合药物处理可下调三阴性乳腺癌细胞中POLR2A表达,而敲低POLR2A表达可诱导MDA-MB-231细胞凋亡与自噬,并增强三阴性乳腺癌细胞对ANI与SAHA的敏感性。结论:ANI和SAHA联合应用对三阴性乳腺癌细胞有协同抑制作用。POLR2A杂合性缺失的三阴性乳腺癌细胞对ANI、SAHA及其联合用药更敏感,其机制与ANI、SAHA及其联合用药下调POLR2A表达有关。图7幅,表6个,参考文献88篇

关键词： G4   TNBC   c-MYC   抗肿瘤活性  

摘要： 乳腺癌是一种常见的女性恶性肿瘤,在女性相关癌症死亡率中居于首位。三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer,TNBC)是乳腺肿瘤中最具侵袭性的分子亚型,是雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2均为阴性的一种特殊乳腺癌。由于其复发率高、转移性强、预后不良等,成了临床一直关注的焦点。因此,需要迫切开发新的治疗TNBC方案。 G-四链体(G-quadruplex,G4)由富含鸟嘌呤的核酸序列形成一种特殊核酸结构。四个鸟嘌呤通过Hoogsteen氢键排列形成环状的G-四分体,多个G-四分体通过π-π相互堆叠形成G4。G4存在于许多真核细胞的基因组中,例如在DNA复制起点,染色体末端,启动子调节区域中,决定各种生物过程的关键功能,包括DNA复制,端粒维持,转录,同源重组和表观遗传学等,因此成为近年来新发展抗癌药物的重要靶点。 目前研究表明,c-MYC是一种重要的癌基因,在细胞生长、增殖和凋亡中起着至关重要的作用。稳定c-MYC G4一方面可以下调c-MYC基因的转录,由于c-MYC基因表达的异常导致调控的失调,抑制了癌细胞生长增殖,另一方面还可以形成稳定的R环,R环的扩散会引起转录依赖性的DNA损伤,也抑制了癌细胞生长增殖。因此,开发具有高活性和低毒性的靶向c-MYC G4的小分子成为新的抗肿瘤策略。 本论文合成一类靶向c-MYC启动子G4的咪唑联苯类化合物,通过核磁共振波谱、高分辨质谱和高效液相色谱法对化合物的结构进行表征。利用荧光光谱法检测化合物与G4的亲和力,使用圆二色光谱法分析化合物对G4的稳定性,通过CCK-8测定化合物对细胞的增殖活性的影响,综合多方面因素,即亲和力、稳定性和细胞毒性,我们筛选出最有活性的化合物BP-3。 通过核磁共振波谱、计算机分子模拟对接等方法分析研究BP-3与c-MYC G4之间的结合模式。同时也对比了联苯化合物BP3和未联苯化合物BP-7与G4之间的结合能力。对化合物结构-活性进行分析,研究不同的取代基团和不同的取代位置等对G4的影响,为后续化合物的优化改造以及合成新的靶向c-MYC G4化合物提供新的思路。 在细胞水平上,通过双荧光素酶报告基因、RT-PCR和western blot实验说明化合物BP-3能够靶向c-MYC G4,下调c-MYC基因的表达水平。通过免疫荧光和western blot实验说明化合物BP-3能够诱导转录依赖性的DNA损伤;通过平板克隆实验测得化合物BP-3具有较强的抗肿瘤细胞增殖的活性,呈浓度依赖性;通过细胞划痕、transwell迁移实验说明化合物BP-3能够抑制细胞的迁移能力,呈浓度依赖性和时间依赖性;通过细胞周期实验说明化合物BP-3能将细胞阻滞在G0/G1期和G2/M期;通过细胞凋亡和自噬相关实验说明BP-3能够诱导细胞凋亡和细胞自噬。 在体内活性评价上,化合物BP-3能够抑制肿瘤的生长,有较强的抗TNBC活性;通过免疫组织化学说明BP-3抑制肿瘤组织中c-MYC的表达。通过小鼠体重变化和器官重量可以发现BP-3的毒性较弱。 本论文设计合成出靶向c-MYC G4的小分子BP-3,具有较好的亲和力和稳定性,在细胞水平以及小鼠模型中都体现了较强的抗TNBC活性。

关键词： 三阴性乳腺癌   灵芝小分子化合物   药物靶点   DARTS  

摘要： 三阴性乳腺癌是一种乳腺癌亚型,在乳腺癌中大约占15%,严重威胁女性生命健康。与其他亚型相比,三阴性乳腺癌具有侵袭性强,容易发生局部复发和远处转移等特点。目前三阴性乳腺癌只能依靠化疗,并且治疗效果不佳,这是乳腺癌学界的一道世界性难题。缺乏特定的治疗靶点是导致三阴性乳腺癌一直没有很好治疗手段的主要原因。研究发现,著名中药灵芝具有抑制肿瘤转移的作用,因此选用灵芝中的小分子化合物来进行抗三阴性乳腺癌研究可能提供新的策略。Drug Affinity Responsive Target Stability(DARTS)是根据小分子药物与其靶标蛋白结合后导致靶蛋白对蛋白酶降解的敏感性下降而发展起来的一项新靶点鉴定技术,由于无需药物保护性修饰且无药物活性依赖性,因此可广泛应用于药物筛选与靶点鉴定。本课题通过非标记的DARTS方法来寻找灵芝小分子化合物LZ-22抗三阴性乳腺癌细胞迁移的作用靶点并揭示其分子作用机制。我们的研究一方面为三阴性乳腺癌的治疗提供新的靶点与策略,另一方面也为传统中医药现代化提供科学依据。 本课题首先检测了灵芝中的小分子化合物LZ-22对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231划痕愈合能力,Transwell迁移与侵袭能力的影响。随后采用DARTS方法来寻找LZ-22在抗三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移作用中的靶点蛋白,经LC-MS/MS检测和蛋白质组学数据分析,我们筛选出了与三阴性乳腺癌迁移高度相关的整合素β1蛋白(Integrinβ1,ITGB1)为靶蛋白。接着用SDS-PAGE法检验LZ-22与纯蛋白结合以及LZ-22竞争性抑制ITGB1蛋白与090荧光探针结合,采用表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)实验分析了LZ-22与ITGB1的分子作用力。同时,我们用细胞免疫荧光实验分析了ITGB1在MDA-MB-231细胞中的定位。随后用si RNA技术敲低了MDA-MB-231细胞中ITGB1的蛋白表达,并观察MDA-MB-231细胞在单独敲低ITGB1蛋白后与敲低ITGB1再加药后对细胞迁移功能的影响。接着用Western blot法验证了LZ-22对于ITGB1-FAK-AKT信号通路的影响,并用q PCR来检测在加药后细胞中ITGB1蛋白m RNA的变化。最后,我们利用分子对接实验用来预测ITGB1蛋白与LZ-22的结合位点。 实验结果表明灵芝中的小分子化合物LZ-22能够显著抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的划痕愈合能力,Transwell迁移与侵袭能力。通过对DARTS的质谱数据进行表达模式聚类分析与KEGG信号通路分析,我们挑选出可能的靶点蛋白ITGB1,DARTS、SPR、纯蛋白结合与竞争性抑制实验均验证了LZ-22与ITGB1蛋白的结合。在单独敲低MDA-MB-231细胞中的ITGB1蛋白后细胞的划痕愈合能力,Transwell迁移与侵袭能力与单独加入LZ-22化合物一样被显著性抑制。在敲低MDA-MB-231细胞中的ITGB1蛋白后LZ-22的效果与对照组比较出现了显著性差异。同时LZ-22能够通过下调ITGB1、FAK、P-FAK与P-AKT蛋白的表达,影响MDA-MB-231细胞中的ITGB1-FAK-AKT信号通路。分子对接结果表明LZ-22可能通过与ITGB1蛋白活性口袋中的ASN249,TYR121和LYS71三个氨基酸残基形成氢键的方式相互作用。总之,LZ-22能够通过靶向ITGB1蛋白来抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移。

关键词： 杂化外泌体   紫杉醇   三阴性乳腺癌   靶向递药  

摘要： 目的:乳腺癌是女性中最常见的恶性肿瘤,其新发病例与死亡病例在全球女性肿瘤中均排第一。三阴性乳腺癌(TNBC)是乳腺癌的一种亚型,约占乳腺癌新发病例的15%～20%。外泌体是生物源性的纳米囊泡,在递药系统方面具有广泛的应用。本课题将肿瘤细胞外泌体与脂质体(lipo)经挤压制备了杂化外泌体(HE),用HE包载紫杉醇(PTX)用于TNBC的治疗,以增强PTX对TNBC细胞的靶向性,降低其对正常组织的毒副作用,并有效抑制TNBC细胞的增殖与迁移。方法:采用差速离心法提取TNBC细胞来源的外泌体,通过薄膜分散法制备lipo,再通过挤压法制备膜融合型HE,利用纳米颗粒跟踪分析(NTA)、动态光散射(DLS)、透射电子显微镜(TEM)、考马斯亮蓝染色和蛋白质印迹(WB)对二者进行粒径、形态、蛋白三方面的表征。通过挤压法制备载紫杉醇杂化外泌体(PTX-HE),测定载药后的粒径分布,经高效液相色谱法(HPLC)测定其载药量与包封率,并考察其在不同p H下的释放情况。将HE用荧光染料Dil标记后考察TNBC细胞对HE的体外摄取情况,通过CCK-8实验和划痕实验考察PTX-HE对TNBC细胞的杀伤作用及迁移抑制作用。将HE用荧光染料Di R标记后注射到TNBC模型小鼠体内,通过小动物活体成像系统观察HE在不同时间点的体内分布情况。将TNBC模型小鼠分为5组,每组6只,分别为PBS组、空白HE组、游离PTX组、载紫杉醇脂质体(PTX-lipo)组、PTX-HE组,给药剂量按PTX含量计算为5 mg/kg,给药体积均为100μL,给药间隔为两天,累积给药四次,于给药后24 h测定肿瘤体积与模型小鼠体重。治疗结束后通过比较各组肿瘤体积的大小、肿瘤体重及肿瘤组织病理切片来评价PTX-HE的体内抗肿瘤效果,通过比较各组小鼠体重、肝肾功能因子水平及主要器官病理组织切片来评价PTX-HE的安全性。结果:提纯的TNBC细胞外泌体粒径为113.00±4.58 nm,空白lipo粒径为134.23±2.44 nm,HE粒径为157.28±3.13 nm,三者均为具有双层膜结构的圆形纳米粒子,中间为空心,形态相似,外泌体标志蛋白TSG101、CD9、CD63和能逃避巨噬细胞吞噬的功能蛋白CD47在外泌体和HE上均有表达,且外泌体和HE的蛋白分布相同。通过挤压法制备的PTX-HE载药量为6.20±0.79%,包封率为86.79±11.07%,载药后HE的粒径增加了18 nm左右,且PTX-HE在p H 5.3的条件下累积释放更多。体外研究表明,TNBC细胞对HE的摄取效率远高于lipo且呈时间相关性。PTX-lipo处理TNBC细胞24 h的IC50值为6.32±3.08μg·m L,而PTX-HE处理TNBC细胞24 h的IC50值为4.32±0.48μg·m L,在给药浓度为4μg·m L时,PTX-HE能更明显的抑制TNBC细胞迁移。Lipo与HE经荧光染料Di R标记后注射到TNBC模型小鼠体内,首先分布于全身各处,随着循环时间的增加,lipo与HE在肿瘤部位逐渐积累而在其他组织中的分布逐渐减少,但在循环24 h后,HE在肿瘤部位的含量要远高于lipo。接受PTX-HE治疗的小鼠,其肿瘤体积相比PBS组要显著降低,而游离PTX与PTX-lipo组的小鼠肿瘤体积相比PBS组虽有一定程度的降低但不明显,H&E染色与TUNEL染色也证明了PTX-HE组的肿瘤细胞死亡最为显著。虽然PTX-HE组、PTX-lipo组及游离PTX组的小鼠体重变化与PBS组相似,但游离PTX组的小鼠ALT、BUN及CR水平均要显著高于PTX-HE组,且H&E染色也证明游离PTX组的小鼠肝脏组织显示较明显的炎性细胞浸润,而其他处理组的主要器官组织切片均无异常。结论:本课题成功制备了基于肿瘤细胞外泌体与lipo的杂化外泌体制剂PTX-HE,不仅提高了PTX对TNBC的靶向性,显著提高了PTX的抗肿瘤效果,还显著降低了PTX的肝肾毒性,具有较高的安全性,实现了TNBC的靶向治疗,为未来HE的靶向治疗应用提供了参考。图29幅,表18个,参考文献62篇

关键词： 琵琶甲虫   三阴性乳腺癌   JKW-13   侵袭   迁移  

摘要： 三阴性乳腺癌(Triple negative breast cancer,TNBC)是指雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(HER2)表达均为阴性的乳腺癌,发病率约为12-17%,是女性中死亡率最高的癌症类型。TNBC的瘤体较大、分级偏高、有较强浸润和转移特征,且发病人群年轻化,导致TNBC成为癌症治疗中面临的重大挑战。结构多样的天然产物是新药开发的重要来源,多数抗肿瘤药物都是天然产物或其衍生物。在新药研发时经常以天然产物为先导化合物,进行结构优化即可获得具有成药性的药物分子。课题组前期选用天然昆虫药日本琵琶甲虫,通过提取、分离及纯化后获得具有活性的先导化合物,经过结构修饰、活性筛选等步骤,得到一系列高效低毒的抗TNBC转移化合物,有望为抗乳腺癌的新药研发提供具有前景的候选化合物。 本文从日本琵琶甲虫中获得具有抗TNBC活性的小分子化合物JKW-14,通过结构优化获得了73个JKW-14衍生物(课题组他人完成)。采用CCK8法检测不同化合物对TNBC细胞的毒性,通过划痕实验评价化合物的迁移抑制活性,并优选出活性最佳化合物JKW-13。通过转录组测序分析JKW-13对TNBC细胞基因表达谱的影响,KEGG通路富集分析JKW-13影响TNBC细胞的相关信号通路,并采用免疫印迹法(Western blot,WB)验证这些信号通路相关蛋白的表达情况。通过荧光染色观察JKW-13对细胞线粒体膜电位和活性氧水平的影响。划痕实验评价JKW-13探针的活性,基于活性的蛋白质组分析(Activity-based protein profiling,ABPP)法筛选小分子探针与蛋白结合的最佳浓度。 结果显示,JKW-13能显著抑制TNBC细胞HCC1806、MDA-MB-231、BT549的迁移侵袭,影响细胞内部分基因的m RNA水平,通过TGF-β通路抑制EMT进程,诱导细胞线粒体损伤、膜电位下降及活性氧(ROS)水平升高。经生物素修饰制备了4种JKW-13的小分子探针,部分探针保留了迁移抑制活性,为后续的靶标垂钓工作奠定了物质基础。因此我们认为,JKW-13抑制乳腺癌细胞迁移活性良好,可能通过TGF-β信号通路、线粒体损伤、激发ROS等途径影响乳腺癌细胞迁移和侵袭,修饰合成的JKW-13探针为其靶点发现奠定了物质基础。

关键词： 虫草素   转录组   三阴性乳腺癌   Hedgehog   Hippo  

摘要： 前期研究表明,蛹虫草活性成分虫草素能有效抑制乳腺癌移植瘤的生长和转移,但其作用机制未清楚。本研究取三阴性乳腺癌移植瘤样品,通过转录组测序技术分析虫草素抗乳腺癌移植瘤的分子作用机制。结果表明,以P<0.05、log2|FC|>1为标准,筛选获得584个差异表达基因,其中上调基因69个,下调基因515个;KEGG分析表明,虫草素对乳腺癌移植瘤的分子调控涉及Hippo signaling pathway、Hedgehog signaling pathway、ECM-receptor interction、TGF-beta signaling pathway等多条癌症相关信号通路;GO分析表明,这些差异基因富集在biological adhesion、growth、metabolic process、locomotion和biological process等16个生物学过程中,提示虫草素对乳腺癌移植瘤生长与转移有极显著的调节作用;进一步对生长和转移过程的基因进行PPI互作分析,提示Hedgehog signaling pathway、Hippo signaling pathway是虫草素抗三阴性乳腺癌的重要潜在作用通路。研究结果提示Hippo-Yap/TAZ信号通路和Hedgehog-Gli信号通路为潜在作用通路,为进一步理解虫草素治疗三阴性乳腺癌的分子机制奠定了基础。

关键词： 黄芪解毒汤   三阴性乳腺癌   术后复发转移   不良反应   糖类抗原153   癌胚抗原  

摘要： 目的探讨黄芪解毒汤抗三阴性乳腺癌术后复发转移的临床效果。方法选取2016年2月至2018年2月大连市中西医结合医院收治的56例原发性三阴性乳腺癌术后患者作为研究对象,按照电脑随机分组方法将其分为对照组与观察组,每组各28例。对照组患者采用紫杉醇周期性化疗或手术治疗,观察组患者在对照组的基础上采用黄芪解毒汤治疗。比较两组患者治疗前后的血清肿瘤标志物、电子计算机断层扫描(CT)下实体瘤体积、不良反应及长期治疗结果。结果治疗后,观察组患者的糖类抗原153(CA153)、癌胚抗原(CEA)高于对照组,CT下实体瘤体积小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者的不良反应总发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者治疗后6、12、18个月复发转移率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在三阴性乳腺癌术后患者的治疗中,使用黄芪解毒汤,不仅可以有效降低患者的CA153、CEA水平,还可以减少术后不良反应发生的概率,同时有助于降低术后复发转移的概率。

关键词： 木犀草素   顺铂   三阴性乳腺癌   Nrf2-ARE   协同作用  

摘要： 目的通过木犀草素协同顺铂调控Nrf2-ARE信号探讨其抗三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231的作用。方法MTT法检测木犀草素和顺铂单用或联用对TNBC细胞MDA-MB-231活力影响,并采用Compusyn计算协同指数(CI);AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测木犀草素和顺铂单用或联用对MDA-MB-231细胞凋亡影响;Transwell侵袭与迁移实验检测木犀草素和顺铂单用或联用对MDA-MB-231细胞侵袭与迁移能力影响;流式细胞术分析木犀草素和顺铂单用或联用对MDA-MB-231细胞CD24^(+)/CD44^(+)表达量的影响;蛋白质印迹法检测Nrf2-ARE信号关键蛋白核因子E2相关因子(Nrf2)、编码还原型辅酶/醌氧化还原酶(NQO1)、血红素氧合酶-1(HO-1)和人谷胱甘肽S转移酶A1(GSTA1)表达的变化。结果24、48及72h下木犀草素(40μmol/L)和顺铂(5μg/mL)联合给药细胞存活率最低,且CI<1,表明木犀草素与顺铂给药24h后两药即具有协同效应,差异有统计学意义,P<0.05;木犀草素(20μmol/L)和顺铂(5μg/mL)共同处理下细胞凋亡率最高,表明两药联用促进细胞凋亡;木犀草素(20μmol/L)和顺铂(5μg/mL)共同处理下细胞侵袭与迁移能力最弱,差异有统计学意义,P<0.05;木犀草素(40μmol/L)和顺铂(5μg/mL)共同处理下CD24^(+)/CD44^(+)表达量最低,表明两药联合具有增强抑制细胞迁移作用;木犀草素(40μmol/L)和顺铂(5μg/mL)联合处理下Nrf2、NQO1、HO-1和GSTA1表达量最低,表明其通过抑制Nrf2蛋白从而抑制Nrf2-ARE通路下游耐药关键酶系NQO1、HO-1及GSTA1的表达,增加细胞用药敏感性,且具有联合效应。结论木犀草素通过调控Nrf2-ARE信号通路能够提高MDA-MB-231细胞对顺铂敏感性,提示木犀草素可作为化疗增敏剂与顺铂联合应用于TNBC的治疗。