关键词： 细胞周期蛋白激酶7(CDK7)   CDK7选择性抑制剂   N76-1   结构优化   三阴性乳腺癌  

摘要： 三阴性乳腺癌（TNBC）是侵袭性很强的乳腺癌亚型,约占乳腺癌总病例的10%-20%,由于异质性高、侵袭性强且缺乏特异性靶点等特点,目前治疗TNBC的方案仍以化疗为主。然而,传统化疗药物的毒副作用比较大,易产生耐药,因此开发新型的TNBC治疗药物具有重要的现实意义。 细胞周期蛋白依赖性激酶7（CDK7）是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶CDK家族的成员,具有调控细胞周期和m RNA转录的双重功能。研究表明,CDK7与TNBC的发生和发展密切相关,TNBC的特异性基因“Achilles cluster”的转录依赖于CDK7。因此,通过抑制CDK7的生物活性来调控TNBC相关基因的转录,可以达到抑制TNBC细胞生长的目的。基于此,CDK7抑制剂已经成为一种潜在的TNBC治疗药物。 N76-1是本课题组前期报道的一种新型CDK7抑制剂,前期结果显示其在体内外可以有效抑制TNBC细胞增殖,具有强效的抗TNBC作用。然而,N76-1对CDK7选择性不佳,对CDK2和CDK9仍有较强的抑制作用。因此,本论文以N76-1为先导化合物,结合N76-1与CDK7蛋白对接的共晶结构,对其N-4苯环,N-2苯环和共价弹头三个部分进行结构优化,考察对选择性和活性的影响,研究构效关系,最终期望获得高选择性高活性的CDK7抑制剂。本文共计合成21个N76-1的衍生物,通过1H-NMR、13C-NMR对该系列衍生物进行了结构确证,进一步地,对合成的衍生物进行了药理活性评价。通过CDK7激酶抑制活性实验发现,化合物8j对CDK7的IC50为5.6n M,与阳性药物THZ1相当。同时,对CDK2和CDK9的IC50分别为492.1n M和635.5n M,选择性相较于N76-1显著提高。此外,8j在体内外表现出明显的肿瘤细胞抑制作用,对两种三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和Cal-148中的抑制IC50分别为0.6μM和2.41μM。在MDA-MB-231裸鼠异种移植瘤模型中,在8mg/kg的给药剂量下,8j显示出较强的体内抗肿瘤活性,与阳性对照药物THZ1（10mg/kg）相当。此外,Western Blotting试验表明8j可以浓度依赖性地抑制MDA-MB-231细胞中RNA聚合酶S2、S5和S7三个位点的磷酸化水平,证实其可以抑制CDK7的生理功能。以上结果将为具有自主知识产权的新型CDK7选择性抑制剂的深入研究奠定基础。 此外,噁唑结构普遍存在于各类生物活性化合物中。本文开发了一种以α-氨基酮为原料,通过TBHP/KI催化的氧化环合一锅制备2-芳酰基噁唑衍生物的绿色合成方法。在此条件下以中高产率获得了20个2-芳酰基噁唑衍生物,并通过1H-NMR、13C-NMR和MS确证其结构。该方法温和简便,为合成2-芳酰基噁唑衍生提供了新的思路。

关键词： 三阴性乳腺癌   微流控法   紫杉醇   ROR1 siRNA   脂质纳米颗粒  

摘要： 三阴性乳腺癌（Triple Negative Breast Cancer,TNBC）因其进展快、易转移且预后较差,被称为“乳腺癌之王”。TNBC一线化疗药物紫杉醇（Paclitaxel,PTX）主要通过稳定微管使细胞周期停滞,抑制肿瘤细胞生长。然而,PTX的临床应用受到毒副作用等方面的限制。受体酪氨酸激酶样孤儿受体1（Receptor Tyrosine Kinase-like Orphan Receptor 1,ROR1）作为膜受体参与诸多信号通路,促进TNBC的增殖和远端转移。基于核糖核酸干扰（Ribonucleic Acid Interference,RNAi）疗法的ROR1小干扰RNA（Small Interfering RNA,si RNA）可有效沉默和干扰ROR1基因的表达,抑制TNBC的生长和迁移。遗憾的是,裸RNA在体内易被降解,递送困难,这使得RNAi疗法在TNBC治疗中受到严重限制。因此,需要寻找合适的递送载体。脂质纳米颗粒（Lipid Nanoparticle,LNP）作为一种高效的核酸药物递送载体,可保护ROR1 si RNA递送至靶细胞。同时,微流控法可解决传统LNP制备工艺中粒径分布广及批次间重复性差等问题。基于上述背景,我们利用微流控法制备共载PTX及ROR1 si RNA的脂质纳米颗粒（PR-LNP）,减少PTX的毒副作用,并沉默ROR1基因的表达。本研究主要包括以下三个方面: ***-LNP的制备 通过微流控法制备PR-LNP,以PTX包封率、琼脂糖凝胶中RNA迁移距离为评价指标,采用单因素控制变量法对磷脂的质量、水相介质、氮磷比等因素进行优化。经研究确定最优处方及制备工艺:DOTAP:DOPE:CHOL:DSPE-PEG2000的质量比为14:56:5:3、水相介质为10 n M p H 4.0柠檬酸盐缓冲液、吐温-80占水相体积的1.5%、药脂比为1:20、氮磷比为8、有机相和水相的流速比为1:3及总流速0.5m L/min。 ***-LNP的表征 对PR-LNP的粒径与电位、形态、包封率和载药量等理化性质及稳定性进行考察,并评价了PR-LNP的体外释放特性。结果显示,PR-LNP粒径为148.50±0.80nm、PDI为0.24±0.02、电位为17.43±0.66 m V,透射电子显微镜下PR-LNP呈形态均一、结构完整的球形。PR-LNP的PTX包封率为96.36±0.34%,PTX载药量为3.35±0.18%;ROR1 si RNA包封率为86.07±1.23%,ROR1 si RNA载药量为0.44±0.03%。PR-LNP在10%血清中24 h内稳定性良好,体外释放结果显示PR-LNP在p H 7.4 PBS中48 h内累积释放率达67%,缓慢释放。 ***-LNP的体外评价研究 采用4T1细胞模型,研究PR-LNP对4T1细胞的摄取、毒性及转移的影响,考察ROR1 si RNA干扰ROR1基因表达情况,评价PR-LNP的体外入胞能力、抑制肿瘤细胞生长和转移能力以及ROR1 si RNA的沉默效果。将荧光标记香豆素6包载于LNP中,摄取实验结果显示4 h内香豆素6荧光强度逐渐增加,4 h后载体LNP促使药物从溶酶体逃逸,使其进入细胞质发挥作用。与流式细胞仪定量测定结果一致。蛋白质印迹实验结果显示80μM ROR1 si RNA在体外可有效阻断ROR1基因的表达。细胞毒性结果显示PR-LNP可显著抑制4T1细胞增殖,其IC50为1.39μg/m L,且R-LNP及空白载体安全性良好。细胞划痕、迁移及侵袭实验结果显示沉默ROR1基因表达可显著抑制4T1细胞体外转移,ROR1 si RNA与PTX协同作用,进一步增强抑制转移能力。 ***-LNP的体内评价研究 以4T1荷瘤小鼠为模型,评价PR-LNP在体内的递药特性、代谢情况、抑制肿瘤的增殖和转移能力以及制剂初步生物安全性。采用荧光标记DIR LNP进行组织分布定性、半定量分析及测定PTX在组织中含量,结果显示PR-LNP显著增加24 h内PTX在肿瘤和肺部的药物累积（P<0.05）。在药物动力学中,PR-LNP的PTX半衰期较游离PTX提高1.23倍,血浆清除率降低12.68%,有效延长PTX血液循环时间。药效学评价结果显示PR-LNP组肿瘤抑制率为49.24%,较游离PTX组提高约2.77倍,肿瘤重量较游离PTX组有显著性差异（P<0.001）。对肿瘤TUNEL和CD8+T细胞免疫荧光染色切片,结果表明PR-LNP可诱导大量肿瘤细胞凋亡并增加CD8+T细胞浸润,促进免疫应答。通过记录肺部结节个数及观察肺部H&E染色切片,结果表明PR-LNP可有效抑制肺转移灶的形成。PR-LNP初步生物安全性考察结果显示荷瘤小鼠给药期间体重

关键词： 藜麦多不饱和脂肪酸   抗三阴性乳腺癌   铁死亡   ERK1/2信号通路   分子机制  

摘要： 三阴性乳腺癌(Triple negative breast cancer,TNBC)是乳腺癌的一个特殊亚型,其显著特点在于强烈的侵袭性和转移性。由于高度的异质性和缺乏明确的分子靶点,使得TNBC对内分泌靶向治疗和免疫治疗不敏感。TNBC尽管对术前辅助化疗有初步反应,但患者的远端复发率高,预后比其他乳腺癌亚型差,迫切需要深入挖掘来自自然界中的植物产物,并预期从中筛选出新型、高效、无毒的针对三阴性乳腺癌抗癌药物。藜麦((Chenopodium quinoa Willd.),是一种被归入假谷物类的植物,属于苋科,该植物在山西省的种植范围十分广泛,并且在医疗保健领域已经显现出了非凡的科学开发应用潜质。尽管藜麦籽不是油料作物,但种子中含高比例的多不饱和脂肪酸,特别是必需脂肪酸,如亚油酸(ω-6)和α-亚麻酸(ω-3)。有报道显示藜麦多不饱和脂肪酸在抗肿瘤方面作用,具有很大的潜力成为肿瘤治疗的营养辅助手段或潜在药物来源。铁死亡是一类铁依赖性的非凋亡性细胞死亡形式,它与脂质过氧化反应有着密切的联系。TNBC是一种铁和脂质含量高的肿瘤,诱导铁死亡是一种值得探索的潜在治疗策略。 本研究以藜麦为原料,利用石油醚提取具有抗三阴性乳腺癌活性的成分,通过气相色谱质谱联用(GC-MS),鉴定其为多不饱和脂肪酸(PUFA)。为深入探究PUFA对三阴性乳腺癌的抗性效应及其潜在的分子机制,计划进一步在细胞和动物模型上开展相关研究。这一举措旨在更全面地理解PUFA在抗癌过程中的作用,从而为三阴性乳腺癌的治疗提供新的思路和策略。主要研究结果如下: (1)从藜麦中提取具抗三阴性乳腺癌的活性成分,藜麦多不饱和脂肪酸(PUFA);PUFA以浓度依赖性方式显著抑制三阴性乳腺癌细胞4T1和MDA-MB-468的增殖;研究结果显示,PUFA能够诱导三阴性乳腺癌细胞铁死亡。 (2)进一步的研究发现,PUFA导致三阴性乳腺癌细胞内脂质过氧化,活性氧水平表达显著升高,谷胱甘肽耗竭,并且明显改变了三阴性乳腺癌细胞中与铁死亡相关的蛋白质表达,如:GPX4、NRF2、SLC7A11、PTGS2以及FTL和TFR。 (3)通过GEO数据库和网络药理学分析发现,PUFA作用靶点可能为MAPK信号通路,PUFA通过磷酸化激活ERK1/2信号通路,促进三阴性乳腺癌的铁死亡。采用鼠源三阴性乳腺癌细胞4T1构建三阴性乳腺癌小鼠模型,PUFA处理对小鼠的肿瘤有明显的抑制作用,并且在ERK1/2抑制剂(TUDCA)处理后,小鼠肿瘤变化不明显;PUFA对小鼠的正常生理指标以及主要器官没有明显影响。PUFA处理使SLC7A11明显下调,4-HNE显著上调,磷酸化激活ERK1/2。以上实验证据表明,PUFA显著抑制了小鼠肿瘤的生长且无毒副作用,这与细胞水平揭示的抗三阴性乳腺癌效应结论一致。 综上所述,本文利用山西特有的谷物资源——藜麦开展研究,成功地提取出了一种高度具有活性的组分,为多不饱和脂肪酸,其拥有极为显著的抗三阴性乳腺癌功能。研究发现,多不饱和脂肪酸具有显著的抗癌作用,在细胞水平以及小鼠模型中皆表现出卓越的抗癌效果,且毒性和副作用极低。由于藜麦多不饱和脂肪酸来源广泛,易于提取,这为在藜麦中寻找活性分子作为潜在的抗肿瘤候选药物或开发相关营养产品提供了坚实的科学依据。

关键词： 花菁分子   三阴性乳腺癌   细胞凋亡   叶酸纳米粒子   ROS   AMPK  

摘要： 目的: 设计和合成系列近红外花菁荧光分子Cy750M-Cn,对它们的光物理性能和抗肿瘤活性进行优选,阐明其通过靶向线粒体诱导三阴性乳腺癌(TNBC)细胞凋亡的分子机制,并利用纳米技术负载研究活体抗肿瘤活性。 方法: 以花菁为母核,设计Cy750M-Cn合成路线。采用CCK-8法检测TNBC细胞的增殖活性。采用Soft agar研究细胞克隆形成能力。采用免疫印迹法(Western blot,WB)检测细胞中蛋白表达水平。采用流式细胞术检测细胞凋亡。采用免疫荧光检测线粒体共定位。通过荧光素酶检测细胞内ATP的产生。采用WST-8法检测NAD+/NADH 水平。通过微量法检测线粒体呼吸链复合体酶活性。以DSPE-PEG2000和叶酸-DSPE-PEG2000作为载体材料,通过溶剂沉淀法制备载药纳米粒子。通过透射电镜观察纳米粒子形貌。采用紫外分光光度法评价载药量和包封率。通过小动物活体成像和活体肿瘤模型验证抗癌效果。 结果: 1.设计和合成基于花菁母核的Cy750M-Cn化合物,并评估其光物理性质 设计和合成4个基于花菁为母核的Cy750M-Cn化合物,并通过氢谱、碳谱、高分辨质谱进行表征。检测其紫外荧光性质发现4个花菁分子最大紫外吸收波长大约在650 nm,最大荧光吸收波长均位于近红外发射区域。 ***750M-C1可通过促进Bax向线粒体转位,细胞色素C释放抑制TNBC细胞增殖并诱导细胞凋亡 MTT检测发现Cy750M-C1抑制多种不同类型的BC细胞增殖,其中对TNBC细胞MDA-MB-231和HBL-100细胞效果最显著,并且其增殖抑制效果优于临床药物DOX和5-FU。流式细胞术结果表明,Cy750M-C1诱导TNBC细胞MDA-MB-231和HBL-100凋亡,Western blot检测核实,Cy750M-C1促进凋亡相关蛋白PARP1裂解,Cleaved Caspase 3、Cleaved Caspase 9 剪切活化。进一步研究表明,Cy750M-C1 能够促进MDA-MB-231和HBL-100细胞促凋亡蛋白Bax从细胞质转位到线粒体、细胞色素C从线粒体释放到细胞质引发细胞凋亡。 ***750M-C1能够靶向线粒体,引起ROS上升,膜电位下降 激光共聚焦显微镜结果显示:Cy750M-C 1和Mito-tracker有良好的荧光重叠关系,表明Cy750M-C1能够很好的聚集在MDA-MB-231和HBL-100细胞线粒体上。流式细胞术实验结果显示:Cy750M-C1能够引起MDA-MB-231和HBL-100细胞内ROS上升,线粒体膜电位下降并呈现明显的量效关系。 ***750M-C1激活ROS/AMPK/Drpl信号通路,抑制线粒体呼吸链复合体酶活性,引发线粒体能量代谢障碍,导致细胞凋亡 Western blot 实验结果显示:Cy750M-C1 处理可增加 MDA-MB-23 1 和 HBL-100细胞AMPK(T172)磷酸化水平,使AMPK持续活化,且降低Drp1(S637)位点磷酸化水平并促进Drp1向线粒体转位。进一步实验结果证实:Cy750M-C1处理可降低MDA-MB-231和HBL-100细胞线粒体NADH氧化呼吸链复合体酶Ⅰ/Ⅲ/Ⅳ活性,减少线粒体内ATP产生,引发线粒体能量代谢障碍,导致细胞凋亡。 5.制备Cy750M-C 1-FA NPs并进行药剂学评价 通过溶剂沉法制备Cy750M-C1-FANPs并评价其形貌、粒径、ζ电位、包封率(EE)、载药量(LD)和体外释放等药剂学指标。结果显示:粒径在58±4.28 nm,其PDI为0.284±0.014。ζ 电位在-29.67±1.47 mV。EE(%)=90.24%±0.69%,LD(%)=8.23%±0.06%。48h体外释放大约在60%。 ***750M-C1-FANPs在荷瘤小鼠体内的肿瘤靶向性以及抗肿瘤效果 尾静脉注射Cy750M-C1-FANPs后,通过小动物活体成像仪观察。结果显示,Cy750M-C1-FANPs能够在肿瘤部位优先聚集,并且在12 h达到峰值,72 h经过肾脏代谢排出体外。同时相对于DOX和5-FU,Cy750M-C1-FANPs能够更显著的抑制肿瘤的生长并对裸鼠体重无明显影响。 结论: 1.构建了 Cy750M-Cn的合成路线并得到4个具有近红外荧光性质的花菁分子。 ***750M-C1促进Bax线粒体转位、细胞色素C释放抑制TNBC细胞增殖并诱导细胞凋亡。 ***750M-C1能够靶向线粒体,引起ROS上升,膜电位下降,激活ROS/AMPK/Drpl信号通路,抑制线粒体呼吸链复合体酶活性,NAD+/NADH 比值降低,ATP产量减少,引发线粒体能量代谢障碍,导致细胞

关键词： ZIF-8   BH3肽   抗肿瘤药物载体   pH响应   MDA-MB-231细胞  

摘要： 一直以来,人类与癌症抗争的脚步就从未停止过。当前被广泛应用于临床的化疗、放疗和手术等传统方法往往有易复发、毒副作用较高、价格高昂等局限性,因而用于癌症治疗的新兴智能纳米药物装载体系领域应声而出。经过良好设计的智能纳米载药体系不仅具有更高效的肿瘤杀伤能力和更好的生物相容性,还往往具有靶向性和多种功能。 以Bcl-2家族蛋白为作用原理构建的BH3肽具有良好的抗肿瘤能力,但同时具有肽类药物共有的不稳定、难被细胞摄取、易被蛋白酶降解、对外界环境条件敏感性高等缺点,难以直接给药发挥肿瘤细胞杀伤能力。金纳米粒子(Au NPs)是一种生物安全性较好的金属纳米材料,可以以硫金配位键与含有巯基的BH3肽紧密结合,从而将溶液中游离存在的BH3肽捕捉装载,然而该连接产物不具有长期低温储存的稳定性。类沸石咪唑酯骨架-8(ZIF-8)是一种生物安全性被广泛认可的类沸石咪唑酯骨架材料,表面的多孔结构常赋予其良好的药物装载效率。几乎所有的常见实体肿瘤细胞都具有酸性的细胞环境,ZIF-8的pH敏感性恰好可以在中性的正常组织细胞区域保护药物,在酸性的肿瘤细胞内释放药物从而实现药物的可控释放。 以三阴性乳腺癌这一易转移、难治疗的乳腺癌亚型为研究对象,根据对类沸石咪唑酯骨架材料和金纳米粒子的研究以及对BH3肽自身局限性的了解,设计了基于ZIF-8的BH3肽载药体系构建及其抗三阴性乳腺癌研究这一课题。 论文取得的主要结果为: (1)成功制备了掺入金纳米粒子和BH3连接产物Au-BH3的ZIF-8材料Au-BH3@ZIF-8并对其基础表征进行检测。用粒径和电位检测、透射电镜检测、元素分析、红外光谱分析等实验对Au-BH3@ZIF-8进行表征,证明成功合成了粒径为152 nm,电位为-17.1m V,性质稳定均一的Au-BH3@ZIF-8纳米载药系统; (2)证明了Au-BH3@ZIF-8优秀的低温储存稳定性、良好的药物装载能力以及pH响应性药物释放能力。用稳定性评价实验证明了Au-BH3@ZIF-8在八天的检测时间内保持基础表征相对稳定,可以进一步保护BH3肽药物;用BCA定量法测得Au-BH3@ZIF-8的包封率和载药率分别为29.52%和4.92%;在不同的pH条件下测试Au-BH3@ZIF-8的释药情况,测定时间内pH=5.5条件下最大释药率为74.06%,远大于测得pH=7.4条件下的最大释药率30.93%,也就是说Au-BH3@ZIF-8在实验模拟的近中性条件下结构保持稳定,在pH偏酸性的条件下结构崩解,表现出pH响应性的BH3肽可控释放。 (3)验证了Au-BH3@ZIF-8的体外抗三阴性乳腺癌能力并初步探究了其机理。用细胞摄取实验验证Au-BH3@ZIF-8可被三阴性乳腺癌细胞在短时间内成功摄取;用细胞毒性实验、台盼蓝染色实验、Hoechst染色实验、流式细胞术实验验证了Au-BH3@ZIF-8具有良好的促三阴性乳腺癌细胞凋亡能力;用集落实验、Transwell实验、细胞划痕实验证明了Au-BH3@ZIF-8能够显著抑制三阴性乳腺癌细胞生长和迁移;用线粒体跨膜电位检测、钙离子内流浓度检测、Caspase-3/-8/-9酶活性检测对Au-BH3@ZIF-8抗三阴性乳腺癌机理进行初步探究。 综上,论文利用具有pH响应性的ZIF-8和生物安全性良好的金纳米粒子及抗肿瘤药物BH3肽共同合成了Au-BH3@ZIF-8载药系统,可以利用高渗透长滞留效应(EPR效应)滞留在肿瘤部位,在酸性的三阴性乳腺癌细胞环境进行可控释药,增加药物利用率,减少对其他正常组织细胞的伤害。

关键词： 蛋白降解工具   三阴性乳腺癌   靶向蛋白降解   JQ1  

摘要： 近年来乳腺癌的新发病例数量逐年升高,已经超过了肺癌成为最常见的癌症类型。其中,三阴性乳腺癌(Triple negative breast cancer,TNBC)作为乳腺癌(Breast cancer,BC)最恶性的亚型,其特点在于不表达雌激素受体(Estrogen receptor,ER)、孕激素受体(Progesterone receptor,PR)及人表皮生长因子受体2(Human epidermal growth factor receptor 2,HER2),这一特性使得常规的激素治疗和HER2靶向治疗策略在此类乳腺癌中无效。此外,由于TNBC复杂的发病机制,如基因突变、基因组不稳定性及特殊的肿瘤微环境也进一步增加了治疗的难度。当前TNBC的主要治疗方法包括手术、放疗、化疗和若干新兴药物。在这些治疗方法中,化疗是治疗TNBC的最优选择。然而化疗后的复发率仍然很高,因此迫切需要新的治疗三阴性乳腺癌的方法。 靶向蛋白质降解(Targeted protein degradation,TPD)技术是近年迅速发展起来的一种新型治疗策略,通过设计特定的小分子药物来特异性地引导与病理相关的蛋白进入细胞内的蛋白质降解路径,从而达到治理疾病的效果。其中,基于嵌合体蛋白水解(Proteolysis-targeting chimera,PROTAC)的方法是目前研究最为广泛和深入的技术之一。目前已有二十多种药物进入临床试验,展现了其在癌症治疗中的巨大潜力。然而,对于TNBC的治疗,E3连接酶及其配体的选择匮乏限制了靶向蛋白降解技术的应用。近年来随着新的氟试剂和氟化手段的持续开发,含氟药物的发展速度得到了快速推进,促进了许多新型药物的诞生。在众多新型含氟药物中相当一部分药物具有靶蛋白降解的能力。基于此,我们设计了一种新型的多氟小分子,旨在将其作为蛋白降解工具应用于TNBC治疗中。将蛋白降解工具应用TNBC中,还需挑选合适的POI(Protein of interest)配体。研究显示,降低溴结构域蛋白4(Bromodomain-containing protein 4,BRD4)和鼠双微体蛋白2(Mouse double minute 2,MDM2)的表达对抑制TNBC细胞增殖具有明显效果,因此本文合成了JQ1和Nutlin-1作为针对这些蛋白的配体。这些配体不仅能与目标蛋白发生竞争性结合,还能促进肿瘤细胞的分化和生长停滞,甚至在特定条件下诱导细胞死亡,为其抗肿瘤活性提供了坚实的实验基础。基于以上背景,本课题聚焦于一种新型的多氟小分子作为蛋白降解工具,并将其与JQ1结合,开发了一种新的小分子药物用于治疗三阴性乳腺癌。 在本课题中,我们合成了一种新的多氟代蛋白降解剂,并成功验证了其能够有效抑制三阴性乳腺癌细胞的体外实验结果。通过深入分析JQ1和多氟化小分子的结构特征,我们确定了这种新型小分子药物的具体结构,并制定了详细的合成路线。我们按照不同的合成策略进行实验,并根据每个步骤的产率进行及时的方案调整,成功筛选出了一种高效的合成方法,从而获得了期望的目标产物。目标产物经高效液相色谱(HPLC)进一步纯化,并通过核磁共振(NMR)图谱验证了目标产物的结构。最终,我们通过对TNBC细胞进行抗增殖实验和对BRD4蛋白进行Western Blot(WB)实验来验证该药物的效果,这些实验结果不仅展示了新药物在抑制细胞增殖方面的有效性,同时也为三阴性乳腺癌的治疗提供了思路。