关键词： 组蛋白去乙酰化酶   三阴性乳腺癌   组蛋白去乙酰化酶抑制剂  

摘要： 组蛋白去乙酰化酶(HDAC)异常高表达促进多种肿瘤的增殖、侵袭和转移,是新近鉴定的抗三阴性乳腺癌(TNBC)治疗靶点。近年来已研发多种HDAC抑制剂广泛用于抗肿瘤基础研究与临床治疗。本文综述了HDAC家族蛋白参与TNBC发生的分子机制和HDAC抑制剂用于抗TNBC治疗的研究进展,讨论了目前HDAC抑制剂的局限性、未来研发方向和以HDAC为靶点的抗TNBC研究新策略。

关键词： 组蛋白去乙酰化酶   二茂铁查耳酮   抗三阴性乳腺癌  

摘要： 目的设计合成二茂铁查耳酮类组蛋白去乙酰化酶抑制剂缀合物,并研究其体外组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)抑制活性和抗乳腺癌活性。方法以单乙酰二茂铁为原料,通过Claisen-Schmidt羟醛缩合、酰胺或酯化反应在二茂铁查耳酮上引入组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi),并采用组蛋白去乙酰化酶试剂盒和CCK-8试剂盒考察所合成的目标缀合物对HDACs的抑制活性和抗乳腺癌活性。结果合成了36个未见文献报道的新化合物,其结构均经过核磁共振氢谱和高分辨质谱加以确证。初步的生物活性测试结果表明,所合成的二茂铁查耳酮HDACi对HDAC1和HDAC6展现出了较强的抑制活性,对HDAC8仅展现出了中等的抑制活性;目标化合物对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231均有抑制活性,并对MDA-MB-231有更强的选择性。其中侧链为六个亚甲基的异羟肟酸类化合物对酶的抑制活性和抗肿瘤活性均强于其他衍生物。尤其是化合物10e对HDAC1[IC50=(0.021±0.007)μmol·L-1]展现出了最强的抑制活性和选择性,是阳性药物伏立诺他(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)[IC50=(0.045±0.003)μmol·L-1]的2倍;同时,化合物10e对MDA-MB-231[IC50=(1.1±0.15)μmol·L-1]也有最强的抑制活性,甚至是阳性药物SAHA的3倍[IC50=(3.6±0.23)μmol·L-1];此外,目标化合物对正常的乳腺上皮细胞MCF-10A基本没有毒性,而SAHA却展现出了一定的毒性。结论 HDACi是一类重要的抗肿瘤靶点药物,化合物10e可以作为抗三阴性乳腺癌先导化合物,值得进一步研究。

关键词： 乳腺肿瘤   聚合酶链反应   基因表达   bel-2结合抗凋亡基因1   表皮生长因子受体  

摘要： 目的检测bcl-2结合抗凋亡基因1（BAG-1）和表皮生长因子受体（EGFR）mRNA在三阴性乳腺癌（TNBC）中的表达情况。方法收集十堰市太和医院2013年10月至2014年8月收治的TNBC患者51例，采用实时定量聚合酶链反应检测TNBC组织及其部分对应癌旁组织中BAG-1 mRNA和EGFR mRNA的表达，分析基因表达与TNBC患者临床病理参数之间的关系。结果BAG-1 mRNA和EGFR mRNA在TNBC组织中均为高表达状态，相对表达量分别为0.57±0.25、0.61±0.21，其在TNBC组织中的表达水平均高于癌旁组织（0.19±0.12、0.21±0.11），差异均有统计学意义（t值分别为5.12、7.17，均P〈0.001）。不同临床分期、淋巴结转移TNBC患者的BAG-1 mRNA和EGFR mRNA表达水平比较，差异均有统计学意义（均P〈0.05），而不同肿瘤直径、年龄的患者两种基因mRNA表达水平差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论BAG-1 mRNA、EGFR mRNA在TNBC中呈高表达状态，其高表达可能与患者不良预后相关，可作为预测TNBC患者预后的分子指标。

关键词： 三阴性乳腺癌   靶向治疗   EGFR抑制剂   耐药性  

摘要： 目的三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)是最具侵袭性的乳腺癌亚型,在乳腺癌中占15%~20%。目前尚无批准的靶向治疗可用于TNBC。与其他乳腺癌亚型相比,TNBC表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)通常过表达,这对该疾病来说是一个潜在治疗靶点。本研究总结TNBC治疗现状、研究方向及进展,靶向治疗在TNBC中应用的可能性,探讨其产生及获得耐药性的潜在因素。方法应用PubMed数据库检索系统,以"TNBC、靶向治疗、EGFR抑制剂和耐药性"等为关键词,检索2005-01-2017-03的相关文献。纳入标准:(1)TNBC治疗现状;(2)TNBC的靶向治疗;(3)靶向治疗耐药的机制。排除标准:(1)非TNBC的治疗现状;(2)非TNBC的治疗策略;(3)非TNBC治疗的耐药机制。根据纳入和排除标准,选择符合分析的文献34篇。结果目前TNBC靶向治疗缺乏响应,有必要对TNBC病患进行分层,开发有效的联合疗法来提高靶向治疗效用。蛋白质精氨酸甲基转移酶1(recombinant human protein arginine methyltransferase 1,PRMT1)抑制剂与EGFR单抗(monoclonal antibody,mAb),及小分子酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)与抗多聚(ADP-核糖)聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)抑制剂的联合用药或许会成为TNBC的有效治疗策略。EGFR单抗和免疫检查点抑制剂的联合用药或许会成为一种有前景的治疗方法。结论 TNBC的抗EGFR靶向治疗或许是一种可行的治疗方式,尽管目前没有专门批准用于TNBC治疗的药物,但相关临床试验正在进行中,将为以后的治疗带来启示。

关键词： 二茂铁衍生物   合成   抗三阴性乳腺癌  

摘要： 目的设计、合成杂环二茂铁衍生物,并研究其抗三阴性乳腺癌活性。方法以二茂铁查耳酮为先导化合物,对其进行结构改造,合成了一系列含有杂环的二茂铁衍生物,并通过CCK8试剂盒测试化合物抗乳腺癌活性。结果合成了28个二茂铁衍生物,其结构均通过1H-NMR和MS加以确证。初步的生物活性测试结果表明,所合成的二茂铁衍生物对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞有较强的选择性和抑制活性,其中咪唑杂环化合物抗肿瘤活性强于相应的吡唑类和嘧啶化合物。尤其是28a[IC50=(1.6±0.23)μmol·L^(-1)]对MDA-MB-231的抑制活性分别是先导化合物3[IC50=(10.7±1.41)μmol·L^(-1)]和他莫昔芬[IC50=(13.7±1.17)μmol·L^(-1)]的6和10倍,同时这些二茂铁衍生物对正常乳腺上皮细胞MCF-10A均没有毒性。结论本研究为开发具有抗三阴性乳腺癌活性的化合物提供了信息和依据。

关键词： AZD1775   AZD6738   ATR   WEE1   三阴性乳腺癌   协同致死性  

摘要： 一、背景与目的 三阴性乳腺癌（Triple-negative Breast Cancer,TNBC）是指雌激素受体（Estrogen receptor,ER）、孕激素受体（Progesterone receptor,PR）和人类表皮生长因子受体 2（Human epidermal growth factor receptor 2,HER-2）均无表达的一类乳腺癌,是所有乳腺癌类型中恶性程度最高、预后最差的亚型。TNBC对内分泌治疗和抗HER2治疗多无效,且传统化疗治疗TNBC效果并不理想,因此现阶段探索针对TNBC的新兴疗法是乳腺癌研究的重点和难点。大多数TNBC都存在p53突变,意味着细胞G1期检查点失活,使细胞更依赖于G2/M期检查点来监控DNA损伤。研究表明,WEE1激酶和ATR激酶在G2/M期检查点和DNA损伤反应（DNAdamge response,DDR）中发挥着重要作用。本研究旨在探究WEE1抑制剂AZD1775联合ATR抑制剂AZD6738在TNBC中的抗肿瘤活性。通过体内外模型证实AZD1775和AZD6738的协同抗TNBC作用,并通过免疫印迹、免疫荧光和裸鼠皮下移植瘤模型等手段阐明AZD1775和AZD6738协同致死性的分子机制。从而为临床治疗TNBC提供新的手段。二、材料与方法1.探究AZD1775对TNBC细胞的影响用AZD1775处理7种TNBC细胞系,CCK8法检测TNBC细胞对AZD1775的敏感性。Western blot 检测 AZD1775 处理 TNBC 细胞 MDA-231 和 Hs578t后,对DDR相关蛋白、cleaved-caspase-3和pHH3表达的影响。2.比较ATR抑制剂、ATM抑制剂和DNA-PKcs抑制剂与AZD1775联用的效果用ATR抑制剂AZD6738、ATM抑制剂KU-60019或DNK-PKcs抑制剂NU7441和AZD1775联合运用处理MDA-231和Hs578t,CCK8法检测细胞活力比较三种联合方案抗增殖效果。3.检测AZD1775和AZD6738的协同作用AZD6738处理7种TNBC细胞系后,CCK8法检测TNBC细胞对AZD1775的敏感性。运用CCK8和细胞克隆形成实验在TNBC细胞中检测AZD1775和AZD6738单药或联合的抗增殖能力。利用CompuSyn软件计算上述实验中AZD1775和AZD6738的联合指数（Combination Index,CI）。流式技术检测AZD1775和AZD6738单药或联合对细胞凋亡的影响。4.比较 AZD1775 和 AZD6738 在 MDA-231、Hs578t、MCF7 和 MCF10A 中的联合效果 两种浓度比（1:5或5:1）的AZD1775和AZD6738联合处理MDA-231、Hs578t、MCF7和MCF10A,CCK8法检测细胞活力后,运用CompuSyn软件计算在各个细胞中AZD1775和AZD6738的CI值。AZD1775和AZD6738单药或联合处理MDA-231、Hs578t、MCF7和MCF10A后,流式技术检测细胞周期的改变。5.检测AZD1775与AZD6738联合对细胞DNA损伤和复制压力的影响AZD1775 和 AZD6738 单药或联合处理 MDA-231 和 Hs578t 后,Western Blot检测DDR相关蛋白、cleaved-caspase-3和pHH3的表达情况;流式技术检测γH2AX表达的变化;免疫荧光检测γH2AX、pRPA32（S4/S8）、RAD51的表达情况。6.分析AZD1775与AZD6738联合对细胞有丝分裂的影响AZD1775和AZD6738单药或联合处理MDA-231和Hs578t后,流式技术检测单个细胞的γ H2AX和pHH3表达情况。免疫荧光检测pHH3和α-tubulin的表达变化并观察有丝分裂和细胞核的形态。7.探讨CDKs激酶对AZD1775与AZD6738联合效应的作用CDK1/2 抑制剂 Roscovitine 或 CDK4/6 抑制剂 Palbociclib 预先处理 MDA-231和Hs578t后,再用AZD1775和AZD6738联合处理细胞,CCK8法检测增殖情况,免疫荧光检测γH2AX和RAD51的表达变化。Roscovitine或Palbociclib预先处理MDA-231和Hs578t后,用两种浓度比（1:5或5:1）的AZD1775和AZD6738联合处理细胞,CCK8法检测细胞活力后,运用CompuSyn软件计算在预处理前后AZD1775和AZD6738的CI值。8.明确AZD1775和AZD6738与顺铂联用的效果AZD1775和AZD6738单药或联合与顺铂共同处理MDA-231和Hs5

关键词： 大麻叶泽兰   迈克尔反应受体分子   谷胱甘肽   超高效液相色谱-质谱联用技术   精准发现   STAT3特异性抑制剂   三阴性乳腺癌  

摘要： 研究目的迈克尔反应受体分子是一类含有由烯键或炔键与吸电子基团共轭相连形成的亲电共轭体系官能团的化合物,是一类重要的生理活性分子,它可以通过与蛋白质半胱氨酸或精氨酸残基的共价结合调节细胞内众多信号转导通路从而发挥其生物学活性及治疗作用。STAT3是信号转导转录活化蛋白家族的重要成员。激活的STAT3通过调控关键基因,刺激肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤微血管形成、促进肿瘤细胞转移、侵袭等,参与肿瘤的发生、发展。抑制STAT3的激活,能阻断与肿瘤发生、发展相关联的多条通路。STAT3小分子抑制剂已成为肿瘤化疗研究的热点之一。STAT3为三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer,TNBC)的重要生物标志物。一些STAT3抑制剂结构共同点是具有“α-β不饱和羰基或砜基等”基团,为迈克尔反应受体分子(Michael reaction acceptor,简称MRA)。MRA是一类在生物医药领域具有良好应用前景的有机小分子,MRA型STAT3特异性抑制剂已成为分子靶向抗TNBC药物研究的热点。本研究以谷胱甘肽(GSH)作为探针,运用超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC-MS)快速发现菊科(Compositae)泽兰属(Eupatoritm L)植物大麻叶泽兰(Eupatorium cannabinum Linn.)中具有MRA型STAT3特异性抑制剂的化合物。在以GSH为探针的孵育实验研究指导下,依据UPLC-MS谱图,根据色谱峰消失或峰面积强弱变化及体外药效活性,判断在EEECL F4-F10中存在抗TNBC细胞的MRA型化合物,本研究利用中压柱层析色谱技术对EEECLF4-F10进行了分离、纯化,并运用HPLC分析所得流分,合并得到有效部位ECL MRAs,并对其进行了体外抑制TNBC细胞株的实验研究。为了进一步明确这些化合物的化学结构及生物活性,本研究应用硅胶柱层析、中压柱层析、高效液相色谱、超高效液相色谱、制备液相色谱等现代色谱技术研究ECL MRAs的化学成分,并利用1H NMR、13C NMR、1H-1HCOSY、HSQC、HMBC、NOSEY、HR-ESI-MS、ESI-MS、IR等现代波谱技术鉴定解析化合物的化学结构,阐明有效部位ECL MRAs中化学成分的化学结构类别及主要化合物的化学结构;对分离得到的化合物,系统评价其体外对TNBC细胞的抑制作用。研究方法1、通过硅胶柱层析、中压柱层析、高效液相色谱、超高效液相色谱、制备液相色谱等现代色谱技术从ECL MRAs中分离、纯化化合物。2、利用 1H NMR、13C NMR、1H-1HCOSY、HSQC、HMBC、NOSEY、HR-ESI-MS、ESI-MS、IR等现代波谱技术鉴定解析化合物的化学结构。3、STAT3荧光素酶报告基因检测筛选STAT3特异性抑制剂。4、MTT法研究化合物体外对三阴性乳腺癌细胞的抑制作用。5、利用中压柱层析技术,对EEECLF4-F10进行分离、纯化。6、利用RP-HPLC对EEECL F4-F10进行分析,合并流分得到有效部位ECL MRAs。7、MTT法研究ECL MRAs体外对三阴性乳腺癌细胞的抑制作用。研究结果1、运用现代色谱技术从ECL MRAs中分离纯化得到了 9个化合物。2、运用现代波谱技术鉴定所得到的9个化合物的化学结构,均为倍半萜类化合物,其中 3 个为新化合物,其化学结构分别为(3aR,4R,6Z,9S,10E,11aR)-9-((2-hydroxy-3-methyl-butanoyl)oxy)-6,10-dimethyl-3-methylene-2-oxo-2,3,3a,4,5,8,9,11a-octahydrocyclodeca[b]furan-4-yl(E)-2-(acetoxymethyl)but-2-enoate(1);(3aR,4R,6Z,9S,10E,1 1aR)-9-hydroxy-6,10-dimethyl-3-methyl ene-2-oxo-2,3,3a,4,5,8,9,1 1a-octahydrocyclodeca[b]furan-4-yl(E)-2-(aceto-xymethyl)but-2-enoate(2);(3aS,4R,6Z,9R,10E,1 1aR)-9-hydroxy-6,10-dimethyl-3-methylene-2-oxo-2,3,3a,4,5,8,9,1 1a-octahydrocyclodeca[b]furan-4-yl(E)-2-(acetoxymethyl)but-2-enoate(3),分别命名为Eucannabnolide A-C;6个已知的倍半萜类化合物分别为hiyodorilactone B(4),9β-hydroxy-8β-O-tlgloyl

关键词： 银杏外种皮   三阴性乳腺癌   银杏酸C13:0   增殖   转移   芳香烃受体(AhR)   细胞色素P4501B1(CYP1B1)   上皮间质转化(EMT)  

摘要： 银杏是集食用、药用和景观于一体的多用途经济作物,是当今天然植物活性物质研发的热点之一。银杏叶子、白果和外种皮皆具有药用价值,而银杏外种皮作为银杏果壳外的肉质部分,在银杏白果采收时,一直被当作废物而丢弃,造成资源的浪费。近年来,国内外对银杏外种皮的应用研究主要集中在生物农药方面,对其抗癌成分的活性研究较少。乳腺癌是女性常见肿瘤,在我国呈高发趋势。三阴性乳腺癌在乳腺癌中恶性程度较高,具有较强的细胞增殖和转移特性。目前,三阴性乳腺癌的治疗主要以化学药物对细胞的毒性治疗,其中存在缺乏有效的靶向治疗手段,并且预后较差面临复发转移的危险,同时还给机体带来严重的副作用。天然活性物质因其长效、温和、低毒副作用等诸多优势,已成为部分乳腺癌症患者的首选。因此,从银杏外种皮中筛选出抗三阴性乳腺癌的天然活性物质,对预防和治疗乳腺癌的发生发展具有重要意义。本课题中我们以三阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和鼠乳腺癌细胞株4T-1作为研究对象,采用细胞毒性追踪筛选方法,从银杏外种皮中分离出对MDA-MB-231和4T-1细胞均具有明显毒杀作用的天然活性化合物:2-羟基-6-十三烷基苯甲酸,即银杏酸C13:0,并对其抗癌机理进行了深入研究。主要结果如下:1.采用细胞毒性追踪分离方法,从银杏外种皮中筛选分离到一种单体化合物。试验以对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和4T-1具有毒性作用为筛选指标,通过对银杏外种皮的乙醇粗提物进行萃取分离,确定其中表现较高毒性作用的石油醚组分进行硅胶柱层析得到9个组分（S1-S9）,并对其毒性效果较好的S4组分进一步进行半制备液相分离纯化,最终从银杏外种皮中分离到对人源MDA-MB-231和鼠源4T-1细胞均具有显著毒杀作用的一种天然活性单体化合物,纯度为95.28%。采用液质及核磁结构鉴定手段,确定此化合物为2-羟基-6-十三烷基苯甲酸,即银杏酸C13:0（GA13:0）。2.在体外抗癌研究中,银杏酸C13:0均可抑制三阴性人乳腺癌MDA-MB-231和鼠乳腺癌4T-1细胞的增殖能力并表现出相似的抑癌机制,即银杏酸C13:0通过激活芳香烃受体（AhR）信号通路中的相关分子靶点,如:促进上游AhR和芳香烃受体核转位子（ARNT）蛋白的表达,活化外源响应因子（XRE）以及激活下游细胞色素P450 1（CYP1）家族中CYP1B1的蛋白表达,从而抑制MDA-MB-231和4T-1细胞的增殖作用。3.在体内抗癌研究中,我们利用三阴性乳腺癌4T-1细胞构建BALB/C小鼠同源移植瘤模型,研究银杏酸C13:0对小鼠体内乳腺肿瘤生长的抑制效果,并测定其血清中天门冬氨酸转氨酶（AST）,丙氨酸转氨酶（ALT）,尿素氮（BUN）和肌酐（CREA）等指标。结果显示,与对照组相比,银杏酸C13:0可显著抑制小鼠体内乳腺肿瘤的生长和肺转移,同时血清中AST、ALT、BUN和CREA各项检测指标和小鼠体重无明显变化,说明银杏酸C13:0对机体无不良影响。4.银杏酸C13:0抑制小鼠体内乳腺肿瘤生长和肺转移的机理研究。银杏酸C13:0通过激活AhR传导途径:上调AhR和CYP1B1蛋白的表达,并通过诱导线粒体凋亡途径:下调Bcl-2,上调Bax和Cleaved caspase-3蛋白的表达抑制肿瘤生长;此外,还通过抑制上皮间质转化（EMT）相关蛋白变化,如:上调E-cadherin以及下调Snail、Vimentin、MMP-2和MMP-9等蛋白的表达来抑制肿瘤的肺转移。

关键词： 可溶性PD-1   免疫逃逸   三阴性乳腺癌   细胞衰老   肿瘤疫苗  

摘要： 研究背景乳腺癌(breast carcinoma)是来源于乳腺上皮组织的恶性肿瘤。根据流行病学研究,全球乳腺癌发病率逐年上升,在女性恶性肿瘤发病率中已跃居为首位,并且发病年龄趋向年轻化,严重危害女性生命健康。乳腺癌在病理分子水平上呈现高度异质性,其治疗也主要依据肿瘤分期及分子分型来决定。当前,乳腺癌具体治疗方法包含手术、放疗、化疗、内分泌治疗、靶向治疗等。在多学科综合治疗下,乳腺癌患者预后有了大幅度提升。然而,对于三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)患者来说,现有的治疗手段依旧匮乏,患者在诊治后容易出现肿瘤复发与转移,往往预后较差。因此,探索新的治疗方法显得尤为重要。免疫疗法(immunotherapy)在2013年被“Science”杂志评为“十大科学突破之首”。在乳腺癌的防治中,免疫治疗也越来越受关注。基于肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)和宿主关系的研究,学者们发现肿瘤疫苗是一种能提高三阴性乳腺癌患者预后的潜在治疗方案。目前,肿瘤疫苗(tumorvaccine)形式有多种,如灭活的全细胞疫苗、蛋白/肽疫苗、DNA疫苗、基因工程改造疫苗等。临床试验或是基础研究中,大多数肿瘤疫苗抗肿瘤的效果表现一般。研究指出,造成疫苗效果不佳的原因有多种,其中一方面可能是由于疫苗抗原呈递及T细胞激活的过程中缺乏某些炎性、细胞因子的辅助或是在此过程中负性免疫调节机制的激活。因此,开发新型肿瘤疫苗以克服这些障碍是当前疫苗研究的热点。近年来有研究指出,在化疗或放疗干预下,肿瘤细胞自身能够分泌多种细胞炎性因子,激活机体的免疫功能,促进肿瘤细胞自身的清除。进一步的研究揭示了这种现象的本质。这是由于治疗诱导肿瘤细胞发生了加速性衰老(accelerated senescence)。肿瘤细胞衰老后从具有活性的增殖状态进入了不可逆的生长停滞状态,并且在形态和代谢发生了特征改变,如细胞生长停止、形态变不规则、胞内颗粒增多、产生衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal)、分泌生长因子及炎性细胞因子等。衰老肿瘤细胞(senescence tumor cells,STC)不可逆停止生长,拥有大量肿瘤抗原,能分泌独特的刺激因子作用于机体免疫系统,这表明,它能克服疫苗所面临的辅助因子缺乏的障碍,具有作为新型疫苗的潜力,其抗肿瘤效应令人期待。肿瘤患者接受治疗会导致TME发生变化,肿瘤细胞免疫逃逸机制也会随之激活,进而削弱治疗的效果。PD-1/PD-L1是主要的免疫逃逸机制之一。在正常机体中,PD-1/PD-L1信号通路起着负性免疫调节作用,能维持免疫功能的平衡,避免自身免疫性疾病发生。而对于肿瘤细胞而言,该通路是其自我保护,防止被免疫细胞清除的防御机制。显然,肿瘤疫苗接种后会改变患者TME,PD-1/PD-L1通路激活后会阻碍肿瘤抗原呈递乃至T细胞活化,导致疫苗失效。这意味着衰老肿瘤细胞疫苗(senescence tumor cells vaccine,STC)也可能会面临该通路的限制,而阻断该通路或将恢复疫苗的疗效。大量的实验研究将疫苗与商业化的阻滞剂联合以克服PD-1/PD-L1通路带来的负性作用。但是,临床上,商业化抗体所带来的经济负担和药物副作用是患者长期难以承受的。有学者在系统性红斑狼疮、慢性肝炎等免疫系统过度激活的患者血液中,检测到了可溶性PD-1分子(solublePD-1,sPD-1)。sPD-1能通过封闭免疫细胞表面的PD-L1分子使机体免疫系统持续、过强激活。因此若STC自身能分泌sPD-1,开发成新型的STCV,这不仅克服了疫苗上述所提及的障碍,还能减轻患者负担,值得我们去深入探讨。研究目的1.利用X线照射或不同浓度的干扰素γ刺激小鼠三阴性乳腺癌细胞株4T1,检测PD-L1分子的表达情况,明确治疗或肿瘤微环境调整是否会引起4T1细胞免疫逃逸。2.构建能稳定分泌可溶性PD-1分子的4T1细胞株及阴性对照细胞株,分别标记为4T1/sPD-1、4T1/NC,并探讨慢病毒感染、sPD-1的表达是否对肿瘤细胞性质造成影响。3.X线照射联合PARP抑制剂Veliparib在体外诱导4T1、4T1/NC、4T1/sPD-1细胞发生衰老,通过检测衰老相关β-半乳糖苷酶、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21的表达确定细胞衰老状态。同时用ELISA检测衰老前后细胞分泌表型的变化,揭示其作为疫苗的潜能。4.将衰老4T1、4T1/NC、4T1/sPD-1细胞制备成疫苗对小鼠进行接种,观察疫苗本身的致瘤性,研究小鼠外周血、脾中免疫细胞变化,探讨sPD-1是否能增强STCV的安全性及其机制。5.诱导4T1、4T1/NC、4T1/

关键词： 多柔比星   三阴性乳腺癌   乳腺肿瘤   纳米粒子  

摘要： 目的制备载多柔比星(Dox)聚乙二醇-聚乳酸聚乙醇酸(PEG-PLGA)纳米胶束,并研究其抗三阴性乳腺癌作用。方法以D,L-丙交酯和乙交酯为原料,采用本体聚合法合成PEG-PLGA共聚物,通过透析法制备Dox-PEG-PLGA纳米胶束;核磁共振1HNMR对其结构进行表征;透射电子显微镜观察纳米粒形态;激光粒度仪测定平均粒径、粒径分布;紫外分光度法测定纳米粒的载药率、包封率及体外释放;MTT法评价Dox-PEG-PLGA对鼠TNBC细胞4T1的细胞毒性,并通过流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测药物内吞。结果制备的纳米胶束呈圆形,大小较为均一,平均粒径约为135 nm,载药率为(9.70±0.33)%,包封率为(71.63±1.33)%;且工艺重现性良好,在96 h下呈现缓慢释放。Dox和Dox-PEGPLGA 24 h半数抑制浓度(IC50)分别为2.355 428和14.446 3μg·mL^(-1)。结论 Dox-PEG-PLGA纳米胶束具有较小的粒径、良好的缓释性能并能显著提高抗肿瘤效能。