关键词： 二代测序   高通量筛选   三阴性乳腺癌   余甘子   抗肿瘤  

摘要： 目的:乳腺癌治疗中的一个世界性难题是三阴性乳腺癌的临床治疗目前没有特效药物。本研究以MDA-MB-231细胞为模型,应用基于二代测序的高通量筛选技术发现中药余甘子具有抗三阴性乳腺癌作用,并进一步研究余甘子抗三阴性乳腺癌机理。方法:1.以二代测序为基础的高通量技术筛选出余甘子,进行差异表达基因KEGG富集分析。2.设置实验组和对照组,在体外培养人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用四氮唑蓝(MTT)比色法检测经余甘子(320、160、80、40、20、10、5μg/m L)处理MDA-MB-231细胞24 h后的细胞活性并计算IC50;3.流式细胞术分析经余甘子(20μg/m L)处理MDA-MB-231细胞24 h后的细胞的周期变化;4.细胞划痕实验判断余甘子(20μg/m L)处理后MDA-MB-231细胞迁移能力;5.荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测经余甘子(20μg/m L)处理MDA-MB-231细胞24 h后的Cyclin G2和细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子p21的表达水平;***数据库分析三阴性乳腺癌患者Cyclin G2、p21的表达与预后情况。结果:与对照组比较,余甘子(320、160、80、40、20、10、5μg/m L)在体外对MDA-MB-231细胞活性具有明显的抑制作用(P<0.05),且这种抑制作用呈浓度依赖效应;余甘子(20μg/m L)可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖,细胞周期阻滞在G1/S期;余甘子(20μg/m L)能显著上调MDA-MB-231细胞中Cyclin G2、p21 m RNA的表达水平(P<0.05);余甘子(20μg/m L)细胞划痕间伤口愈合距离百分比明显高于对照组,而抑制后细胞划痕间伤口愈合距离百分比明显低于对照组;通过KMplot分析临床数据提示高表达Cyclin G2、p21水平具有潜在增加三阴性乳腺癌患者良好预后的作用。结论:应用基于二代测序的高通量筛选技术发现中药余甘子(20μg/m L)具有抗三阴性乳腺癌作用,其机制可能与上调Cyclin G2、p21 m RNA水平有关。

关键词： 多肽   前药设计   超分子自组装   三阴性乳腺癌   抗肿瘤作用  

摘要： 超分子自组装是生物体构建自身结构实现复杂功能的重要手段，并在生物医学领域广泛用于仿生材料的构建。在众多仿生材料中，多肽因其生物可降解性和易于功能化修饰等突出优势，是一类重要的生物材料。进一步将多肽和其他功能性分子键合获得的两亲性杂合多肽衍生物，不仅丰富了分子结构设计，而且可自组装形成更为多样的微观结构，实现特殊的生物学功能，是多肽自组装及其生物医学应用研究领域的热点。　　三阴性乳腺癌(TNBC)是雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及人表皮生长因子受体2(Her-2)均为阴性的乳腺癌，具有恶性程度高、不依赖瘤体大小多脏器远端转移等特点，是临床上预后最差的乳腺癌。由于不表达相应受体，TNBC对激素疗法和分子靶向疗法不敏感，同时对免疫疗法的响应率低。目前，化疗是临床上对TNBC有效的唯一一种系统性治疗手段，但化疗药物的非选择性蓄积导致其严重的毒副作用，并限制了临床治疗剂量和药效。此外，TNBC微环境复杂，其肿瘤基质成分不仅限制了药物的瘤内分布，同时也造成了免疫抑制微环境。多肽自组装药物递送载体具有高药物负载率和肿瘤特异性富集能力，有望提高化疗药物或免疫调节剂的肿瘤蓄积和渗透。其中，多肽分子设计如何决定其自组装行为及载体理化特性，并影响生物相互作用是其中的关键科学问题。在此，我们设计合成了一系列两亲性多肽，通过评价其自组装特性和生物相互作用，筛选出具有良好肿瘤蓄积能力的两亲性多肽，并据此构建了自组装前药(SAPD)，提高了对转移性TNBC的治疗效果，降低了副作用，并揭示了其作用机制。　　为探究多肽亲水链段影响其自组装载体与生物相互作用的规律，我们首先合成了一系列含有相同亲水头基(HKD)、β-折叠片段(VVQQ)和疏水脂肪酸链(Pal)，但带有不同重复四肽片段(X4)的杂合多肽。我们发现，Pal-GVVQQHyp4HKD(Hyp4)形成的PPⅡ结构可通过形成空间位阻，减少血液中内源性蛋白与β-折叠片段和脂肪酸链的吸附，降低自组装载体的非特异性清除。该载体具有弱酸性(pH6.5)响应聚集的能力，显著提高了药物在微酸性肿瘤部位富集。该载体可有效包载多西他赛(DTX)，载药量可达16.2％，并将DTX在体内半衰期从游离药的0.46h延长到13.35h，将DTX的瘤内蓄积提高7.56倍，并提高了DTX的最大耐受剂量(MTD)，有效抑制了TNBC原位瘤生长和肺转移。　　在此基础上，我们进一步研究了Hyp4扩大高毒性药物DM1治疗窗的能力，发现采用Hyp4包载将DM1得MTD提高了1倍。进一步设计合成得到DM1自组装前药DM1-CGVVQQHyp4HKD(DM1-Hyp4)不仅提高了载药量，还通过降低DM1在毒性器官（脾和肾）的蓄积和瞬时暴露，将其MTD提高了8倍。在给予MTD的DM1后，DM1-Hyp4(4mg/kg)对原发肿瘤的生长抑制率达到92％，而DM1(0.5mg/kg)的抑制率仅为39％。　　肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)及其分泌的胞外基质是抑制TNBC内药物渗透以及免疫细胞浸润的主要生理屏障。为进一步提高Hyp4载体抗TNBC的效果，我们将调控CAFs活性的洛沙坦引入到两亲性多肽，构建了SAPD载体(LST-Hyp4)，并同时递送细胞免疫原性死亡(ICD)诱导剂DM1。我们发现，LST-Hyp4在较低剂量和给药频率时，即可抑制CAFs活性和胶原生成，从而促进药物渗透。递送的DM1可在肿瘤部位诱导ICD和免疫细胞浸润，最终激活抗肿瘤免疫应答，提高抗TNBC治疗效果。　　我们的研究表明，在两亲性多肽序列中引入具有空间占位功能的Hyp4和微酸性敏感的HKD多肽片段可通过抑制非特异性蛋白吸附，有效延长自组装载体的血液循环，实现肿瘤倾向性蓄积;通过还原敏感键共价偶联药物构建的SAPD，课改变药物生物分布和活性药物暴露，显著提高肿瘤靶向药物递送效率，增强治疗效果，降低副作用。我们的研究揭示了两亲性多肽的设计原理和SAPD体内生物转化机制，阐明了SAPD策略提高TNBC化疗效果和安全性方面的机理，为临床TNBC化疗和联合治疗提供了新策略，具有潜在的临床应用价值。

关键词： 虫草素   三阴性乳腺癌   网络药理学   TNF信号通路  

摘要： 蛹虫草Cordyceps militaris(L.)Fr.又名北虫草,是我国珍贵药食兼用菌。虫草素作为蛹虫草的主要活性成分之一,具有低毒、安全性高、高活性等天然优势,其显著的抗肿瘤作用更是受到极大的关注。三阴性乳腺癌(TNBC)作为女性乳腺癌中的最强“杀手”,当前治疗仍以化疗为主,寻找天然产物或药物进行联合以增强化疗的效果,是当前治疗的重要方向之一。因此,本研究将虫草素和抗肿瘤一线药(阿霉素)联合使用,以期丰富蛹虫草药效物质虫草素的药效基础理论,为治疗TNBC的临床用药提供新思路。本研究首先检测了联合用药的效应;其次,在体内、外明确了联合用药对TNBC的活力、增殖、迁移、凋亡和生长的影响及其毒副作用;再进一步基于网络药理学解析联合用药的分子作用机制;最后结合分子对接和生物学实验对分子机制进行初步验证。主要研究结果如下:(1)联合指数(CI)计算结果显示,供试浓度下虫草素联合阿霉素抗乳腺癌的CI值均小于1,表明联合用药呈协同效应;其中80μM虫草素联合1μM阿霉素的CI值仅为0.665,对细胞抑制率为60.31%±1.06,达到了细胞的半数致死率。(2)体外细胞实验显示,联合用药后细胞趋向变圆、逐渐脱落、破碎;平板克隆形成实验验证了联合用药抑制了细胞增殖,细胞增殖率仅为7.03%±1.19;细胞划痕实验证明联合用药抑制了细胞迁移,细胞迁移率仅为18.82%±2.43;Hochest 33258和DNA Laddder凋亡实验检测到联合用药诱导了细胞凋亡,细胞凋亡率达78.52%±11.18,并可观察到断裂的凋亡DNA条带。(3)体内裸鼠移植瘤实验显示,对照组的瘤重是联合组的3.57倍,联合组的肿瘤抑制率为79.53%±12.63,分别是虫草素组和阿霉素组的1.21倍和1.34倍;进一步发现,联合组的动物体重均匀,肝脏颜色红润、质地均匀、弹性较好,肝指数及肝功血清指标ALT,AST正常,与对照组相比,无显著性差异(P>0.05),表明联合用药在体内显著抑制乳腺癌生长的同时且并无明显毒性。(4)通过网络药理学探究联合用药的机制,预测获得虫草素和阿霉素相关靶点分别为147个和2469个;联合用药抗乳腺癌潜在作用靶点涉及76个;GO分析显示,76个靶点主要富集在肿瘤细胞凋亡、细胞转移、细胞周期等过程;KEGG和Enrichr分析显示,靶点主要富集在TNF、IL-17、AGE-RAGE和凋亡等6条与肿瘤生长密切相关的信号通路中,其中以TNF信号通路富集最显著。同时,TNF信号通路与富集的其他多条信号通路相互作用,表明联合用药的分子机制与调控TNF信号通路中的CFLAR、NFKB1、MAP3K7、MAPK8、CASP3、ICAM1、MMP3、MMP9、JUNB、CXCL1、CCL2等11个靶点有关。(5)分子对接结果显示,虫草素、阿霉素与11个靶点的结合能均小于0,表明二者分别能与11个靶点自发结合;并且二者可分别与CFLAR、MMP3和MAP3K7等关键蛋白的氨基酸残基形成氢键、PI键、H-PI复合键等作用,从而稳定地结合在蛋白的活性口袋中;同时,联合用药在基因和蛋白水平上也相应地上调了CASP3和MAPK8,下调了CFLAR、NFKB1、MAP3K7、ICAM1、MMP3、MMP9、JUNB、CXCL1、CCL2的表达,这与网络药理学的分析一致,提示联合用药可调控TNF信号通路中11个靶点抑制TNBC的生长。虫草素联合阿霉素在体内、外均能协同抑制TNBC的生长且并无明显毒性,其关键机制与对TNF信号通路中多靶点的调控有关,这为丰富蛹虫草药效物质虫草素的药效基础理论提供了科学依据。

关键词： 紫草素   微乳   靶向抗肿瘤   三阴性乳腺癌   CD133  

摘要： 目的评价CD133抗体修饰的紫草素微乳(anti CD133 antibody-modified shikonin-loaded microemulsion,Anti CD133Ab-SKN-MEs)治疗三阴性乳腺癌的可行性及优势。方法利用经典的成乳工艺制备紫草素微乳(SKN-MEs),再通过EDC/NHS缩合技术制备Anti CD133Ab-SKN-MEs,以粒径、Zeta电位、包封率为指标优化投料比、抗体修饰密度等工艺参数;采用MTT法考察三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖行为,利用异硫氰酸荧光素(FITC)作为探针定性定量考察细胞摄取行为,借助膜联蛋白V-PE/7-氨基放线菌素D(Annexin V-PE/7-AAD)试剂盒考察给药组诱导细胞凋亡行为;借助悬浮培养技术富集MDA-MB-231干细胞,通过各给药组孵育观察细胞成球性以及CD133+细胞率;建立裸鼠MDA-MB-231异位移植瘤模型,设生理盐水、紫草素(SKN)、SKN-MEs、Anti CD133Ab-SKN-MEs,4 mg/kg隔天iv 5次,观察肿瘤体积、裸鼠生存时间、抑瘤率和CD133+细胞比率。结果 Anti CD133Ab-SKN-MEs的最佳质量比为1.0%,抗体密度为0.025%,粒子形态圆整,粒径为(31.4±2.1)nm,电位为(-18.7±2.5)m V,包封率为(93.6±2.8)%;Anti CD133Ab-SKN-MEs对MDA-MB-231细胞的IC50为(1.53±0.43)μg/m L,细胞摄取显著高于SKN和SKN-MEs,孵育8 h可诱导(67.9±4.2)%细胞凋亡;Anti CD133Ab-SKN-MEs可以显著抑制MDA-MB-231干细胞的成球性,明显降低CD133+细胞率;Anti CD133Ab-SKN-MEs体内抑瘤率为78.5%,69 d后仍有12.5%裸鼠存活,瘤组织CD133+细胞率显著降低。结论与SKN相比,Anti CD133Ab-SKN-MEs在治疗三阴性乳腺癌方面优势明显,机制可能与降低肿瘤细胞干性作用有关。

关键词： 咖啡酸对硝基苯乙酯   三阴性乳腺癌   转移   表皮生长因子受体  

摘要： 三阴性乳腺癌（TNBC）是一种恶性程度高、侵袭能力强和远端转移较快的异质性疾病,转移是导致患者治疗失败的主要原因。肿瘤的转移过程十分复杂,存在大量翻译异常亢进的蛋白,这些蛋白许多都已成为肿瘤治疗的分子靶点。表皮生长因子受体（EGFR）是这些翻译亢进蛋白的重要代表之一,且在TNBC中高表达,并能激活细胞内的多条信号通路,在促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和瘤体血管生成等方面起着重要作用。因此,分析经药物处理TNBC后涉及的EGFR分子信号通路的内源性活性蛋白表达水平的变化对乳腺癌发展的分析和药物治疗效果的监测有重要的意义。前期研究发现,咖啡酸对硝基苯乙酯（CAPE-pNO2）通过p53信号通路对结肠癌、调节细胞凋亡相关蛋白对宫颈癌等起促进癌细胞凋亡和抑制肿瘤生长的作用,但对癌症的迁移和侵袭的影响未曾涉及。本研究以TNBC为基础,采用MTT、划痕、Transwell、平板克隆和黏附等细胞实验,分析CAPE-pNO2对MDA-MB-231细胞活性、转移、侵袭、克隆及基质胶黏附的影响;构建MDA-MB-231细胞荷瘤裸鼠模型,经CAPE-pNO2处理后,以瘤重、瘤体积和荷瘤生长体积曲线,HE和TUNEL染色分析CAPE-pNO2对荷瘤生长、转移与凋亡的影响。用Western blot法检测CAPE-p NO2处理细胞和荷瘤裸鼠后的EGFR/STAT3/Akt通路中相关蛋白的表达变化,以分析其生长和转移的分子生物学特性。细胞实验:MDA-MB-231细胞经CAPE-pNO2处理后,MTT、划痕、transwell等实验被实施以分析其对细胞活性、迁移及侵袭等的影响。MTT结果表明CAPE-pNO2在2.5-10μM浓度的范围内,对细胞生长活性没有显著地影响;然而在20-80μM内呈浓度依赖性的抑制细胞生长活性。划痕结果显示给药组的划痕宽度较空白组的大,表明细胞的迁移能力被减弱。Transwell结果显示给药组穿过Tranwsell小室细胞数量较少,表明细胞的转移能力被削弱。平板克隆结果显示CAPE-pNO2能够减少克隆斑点形成的数量并抑制斑点的生长,表明CAPE-pNO2抑制了细胞克隆能力的形成。黏附实验结果显示给药组的细胞与基质胶黏附的数量比空白组的少,表明CAPE-pNO2减弱了细胞与基质胶的黏附作用。Western blot结果表明CAPE-pNO2显著下调EGFR/STAT3/Akt通路中p-EGFR、p-STAT3和p-Akt的表达;下调MMP-2、MMP-9、Survivin和VEGFA的表达;再者,EMT相关蛋白（N-cadherin、Vimentin和E-cadherin）的表达也受到不同程度的影响。荷瘤裸鼠实验:以构建的MDA-MB-231细胞荷瘤裸鼠模型为研究对象。CAPE-pNO2每天一次腹腔注射给药,给药38天时处死荷瘤裸鼠。通过瘤重、瘤体积和荷瘤生长体积曲线,分析发现CAPE-pNO2能显著抑制荷瘤生长。HE和TUNEL染色荷瘤组织,结果表明CAPE-pNO2能明显促进荷瘤组织中肿瘤细胞的原位凋亡。组织形态学（HE染色）分析发现CAPE-pNO2抑制了肿瘤细胞的肺转移和脾转移。IHC染色荷瘤组织,结果表明CAPE-pNO2明显抑制了Ki-67和VEGFA蛋白的表达。Western blot检测荷瘤组织中EGFR相关蛋白的表达,结果表明,CAPE-pNO2显著抑制EGFR/STAT3/Akt通路中p-EGFR、EGFR、p-STAT3和p-Akt的表达;下调MMP-2、MMP-9、Survivin和VEGFA的表达;再者,EMT相关蛋白（N-cadherin、Snail、Vimentin和E-cadherin）的表达也受到不同程度的影响。在本研究中,经CAPE-pNO2处理MDA-MB-231细胞和荷瘤裸鼠后,Western blot分析结果表明CAPE-pNO2能够调节细胞和荷瘤组织中EGFR/STAT3/Akt通路相关蛋白的表达,这主要体现在CAPE-pNO2能够显著抑制乳腺癌的生长与转移。

关键词： 三阴性乳腺癌   芹菜素   肿瘤干细胞   Hippo信号通路  

摘要： 目的:三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC),是所有乳腺癌类型中恶性程度最高的一种。为了探究更多有效的治疗药物,前期实验中,我们在天然化合物库中进行了 TNBC抑制剂的筛选,并鉴定出了芹菜素是一种潜在的抑制剂。本实验旨在探讨芹菜素对TNBC细胞的抑制作用及其分子作用机制。方法:(1)芹菜素对TNBC细胞增殖影响的检测:本实验中使用的TNBC细胞为MDA-MB-231 和 MDA-MB-436,我们用 0、2、4、8、16、32、64μM 浓度的芹菜素对这两种TNBC细胞系进行干预(24、48、72 h),采用SRB比色法检测芹菜素对两种TNBC细胞系细胞活力的影响。用平板克隆形成实验检测芹菜素对两种TNBC细胞系增殖能力的影响,此实验中用0、5、10、20、40 μM浓度的芹菜素对两种TNBC细胞系进行干预72 h,再用正常培养基培养十天,染色后进行图像拍摄和克隆计数。(2)芹菜素对TNBC细胞迁移能力影响的检测:用划痕实验检测芹菜素对两种TNBC细胞系迁移能力的影响。对TNBC细胞进行划痕后,选用0、5、10、20μM的芹菜素在无血清条件下对TNBC细胞进行干预。对六孔板每个孔的相同位置进行拍照并分析(0、12、24 h)。另外用Transwell实验进行进一步验证,两种TNBC细胞系用芹菜素预处理24 h以后,加入Transwell小室中,24 h以后进行固定染色,于倒置显微镜下拍照计数,并对细胞数目进行统计。(3)芹菜素对TNBC细胞乳腺癌干细胞(BCSCs)性能影响的检测:我们用0、10、20μM的芹菜素对MDA-MB-231 和MDA-MB-436进行干预72 h,用anti-CD24-PE和anti-CD44-FITC抗体进行染色,于流式细胞仪检测CD44+/CD24干细胞亚群百分比的变化情况。另外我们还进行了肿瘤干细胞成球实验检测芹菜素对TNBC细胞微球体形成能力的影响。我们用0、10、20 μM的芹菜素对两种TNBC细胞系进行干预72 h。而后将细胞在超低附着板中培养10天,于显微镜下拍摄图像并计算微球体的数目。(4)芹菜素对TNBC细胞分子作用机制的检测:用0、5、10、20μM的芹菜素对 MDA-MB-231 和 MDA-MB-436 干预 72 h,用 RT-qPCR 检测 Hippo 通路下游基因CTGF、CYR61 mRNA表达水平。用Western Blot检测芹菜素对Hippo信号通路相关蛋白水平的影(YAP、TAZ、CTGF、CYR61)。最后用CO-IP检测芹菜素对YAP/TAZ-TEADS蛋白间相互作用的影响。(5)芹菜素体内抗肿瘤形成能力的检测:将18只裸鼠随机分成6组(A组、B组、C组、D组、E组、F组),A组、B组、C组分别注射1x106、1x105、1x104的0.1%DMSO预处理过的MDA-MB-231细胞(对照组),D组、E组、F组分别注射1×106、1×105、1×104芹菜素预处理过的MDA-MB-231细胞(给药组)。每组3只裸鼠,其中一只双侧皮下注射,另外两只单侧注射。每两天观察一次裸鼠的生长状况,每周记录一次肿瘤形成率、肿瘤体积和肿瘤重量。实验结束时记录剥离出的肿瘤的体重和体积,并拍摄图像。结果:(1)芹菜素抑制了 TNBC细胞的增殖:SRB比色法实验结果显示芹菜素对正常乳腺组织细胞毒性较小,且能够抑制TNBC细胞的增殖,其抑制作用与药物干预剂量和时间呈依赖性。芹菜素干预72 h后,在TNBC细胞系MDA-MB-436和MDA-MB-231中,IC50值分别约为30和33μM。平板克隆形成实验结果显示芹菜素显著降低了两种TNBC细胞系的平板克隆形成率。(2)芹菜素抑制了 TNBC细胞的迁移:划痕实验结果表明芹菜素10和20 μM浓度能够显著减少MDA-MB-231和MDA-MB-436的迁移距离。Transwell迁移实验中,对Transwell小室迁移细胞数目进行统计分析可知,芹菜素能够使MDA-MB-231和MDA-MB-436细胞迁移数量显著减少,其抑制作用与芹菜素的干预剂量呈依赖性。(3)芹菜素抑制了 TNBC细胞BCSCs性能:流式细胞分析结果表明在MDA-MB-231和MDA-MB-436细胞中芹菜素降低了 CD44+/CD24-肿瘤干细胞亚群的百分比。肿瘤干细胞成球实验中,芹菜素显著减少了两种细胞系形成乳腺球的数量,表明芹菜素能够降低TNBC细胞的自我更新能力。(4)芹菜素通过Hippo通路抑制了 TNBC细胞相关基因和蛋白水平的表达:RT-qPCR及Western Blot结果显示,芹菜素未使Hippo信号通路中YAP和TAZ的蛋白表达水平发生明显变化,但是芹菜素以剂量依赖性的方式显著降低了下游靶基因CTG

关键词： 组蛋白去乙酰化酶   三阴性乳腺癌   组蛋白去乙酰化酶抑制剂  

摘要： 组蛋白去乙酰化酶(HDAC)异常高表达促进多种肿瘤的增殖、侵袭和转移,是新近鉴定的抗三阴性乳腺癌(TNBC)治疗靶点。近年来已研发多种HDAC抑制剂广泛用于抗肿瘤基础研究与临床治疗。本文综述了HDAC家族蛋白参与TNBC发生的分子机制和HDAC抑制剂用于抗TNBC治疗的研究进展,讨论了目前HDAC抑制剂的局限性、未来研发方向和以HDAC为靶点的抗TNBC研究新策略。

关键词： 组蛋白去乙酰化酶   二茂铁查耳酮   抗三阴性乳腺癌  

摘要： 目的设计合成二茂铁查耳酮类组蛋白去乙酰化酶抑制剂缀合物,并研究其体外组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)抑制活性和抗乳腺癌活性。方法以单乙酰二茂铁为原料,通过Claisen-Schmidt羟醛缩合、酰胺或酯化反应在二茂铁查耳酮上引入组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi),并采用组蛋白去乙酰化酶试剂盒和CCK-8试剂盒考察所合成的目标缀合物对HDACs的抑制活性和抗乳腺癌活性。结果合成了36个未见文献报道的新化合物,其结构均经过核磁共振氢谱和高分辨质谱加以确证。初步的生物活性测试结果表明,所合成的二茂铁查耳酮HDACi对HDAC1和HDAC6展现出了较强的抑制活性,对HDAC8仅展现出了中等的抑制活性;目标化合物对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231均有抑制活性,并对MDA-MB-231有更强的选择性。其中侧链为六个亚甲基的异羟肟酸类化合物对酶的抑制活性和抗肿瘤活性均强于其他衍生物。尤其是化合物10e对HDAC1[IC50=(0.021±0.007)μmol·L-1]展现出了最强的抑制活性和选择性,是阳性药物伏立诺他(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)[IC50=(0.045±0.003)μmol·L-1]的2倍;同时,化合物10e对MDA-MB-231[IC50=(1.1±0.15)μmol·L-1]也有最强的抑制活性,甚至是阳性药物SAHA的3倍[IC50=(3.6±0.23)μmol·L-1];此外,目标化合物对正常的乳腺上皮细胞MCF-10A基本没有毒性,而SAHA却展现出了一定的毒性。结论 HDACi是一类重要的抗肿瘤靶点药物,化合物10e可以作为抗三阴性乳腺癌先导化合物,值得进一步研究。

关键词： 乳腺肿瘤   聚合酶链反应   基因表达   bel-2结合抗凋亡基因1   表皮生长因子受体  

摘要： 目的检测bcl-2结合抗凋亡基因1（BAG-1）和表皮生长因子受体（EGFR）mRNA在三阴性乳腺癌（TNBC）中的表达情况。方法收集十堰市太和医院2013年10月至2014年8月收治的TNBC患者51例，采用实时定量聚合酶链反应检测TNBC组织及其部分对应癌旁组织中BAG-1 mRNA和EGFR mRNA的表达，分析基因表达与TNBC患者临床病理参数之间的关系。结果BAG-1 mRNA和EGFR mRNA在TNBC组织中均为高表达状态，相对表达量分别为0.57±0.25、0.61±0.21，其在TNBC组织中的表达水平均高于癌旁组织（0.19±0.12、0.21±0.11），差异均有统计学意义（t值分别为5.12、7.17，均P〈0.001）。不同临床分期、淋巴结转移TNBC患者的BAG-1 mRNA和EGFR mRNA表达水平比较，差异均有统计学意义（均P〈0.05），而不同肿瘤直径、年龄的患者两种基因mRNA表达水平差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论BAG-1 mRNA、EGFR mRNA在TNBC中呈高表达状态，其高表达可能与患者不良预后相关，可作为预测TNBC患者预后的分子指标。

关键词： 三阴性乳腺癌   靶向治疗   EGFR抑制剂   耐药性  

摘要： 目的三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)是最具侵袭性的乳腺癌亚型,在乳腺癌中占15%~20%。目前尚无批准的靶向治疗可用于TNBC。与其他乳腺癌亚型相比,TNBC表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)通常过表达,这对该疾病来说是一个潜在治疗靶点。本研究总结TNBC治疗现状、研究方向及进展,靶向治疗在TNBC中应用的可能性,探讨其产生及获得耐药性的潜在因素。方法应用PubMed数据库检索系统,以"TNBC、靶向治疗、EGFR抑制剂和耐药性"等为关键词,检索2005-01-2017-03的相关文献。纳入标准:(1)TNBC治疗现状;(2)TNBC的靶向治疗;(3)靶向治疗耐药的机制。排除标准:(1)非TNBC的治疗现状;(2)非TNBC的治疗策略;(3)非TNBC治疗的耐药机制。根据纳入和排除标准,选择符合分析的文献34篇。结果目前TNBC靶向治疗缺乏响应,有必要对TNBC病患进行分层,开发有效的联合疗法来提高靶向治疗效用。蛋白质精氨酸甲基转移酶1(recombinant human protein arginine methyltransferase 1,PRMT1)抑制剂与EGFR单抗(monoclonal antibody,mAb),及小分子酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)与抗多聚(ADP-核糖)聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)抑制剂的联合用药或许会成为TNBC的有效治疗策略。EGFR单抗和免疫检查点抑制剂的联合用药或许会成为一种有前景的治疗方法。结论 TNBC的抗EGFR靶向治疗或许是一种可行的治疗方式,尽管目前没有专门批准用于TNBC治疗的药物,但相关临床试验正在进行中,将为以后的治疗带来启示。