关键词： 3,5-二叔丁基水杨酸锌   纳米粒   三阴性乳腺癌   纳米沉淀法  

摘要： 目的3,5-二叔丁基水杨酸锌[Zn(DTBS)2]在水中的溶解度极低,易发生聚集沉淀而降低药效,为了克服这一缺陷,故制备可以提高原料药物生物利用度的3,5-二叔丁基水杨酸锌纳米粒(ZnNPs),并检测其对三阴性乳腺癌细胞的活性抑制作用。方法纳米沉淀法制得ZnNPs后,测定该纳米粒的形态、粒径、Zeta电位、包封率和载药量,MTS法检测它对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用。结果所得纳米粒呈大小均一的实心球状结构,粒径为(240±18)nm,ζ电位为(-35±8)mV,包封率为(82.66±1.98)%,载药量为(11.77±0.28)%。ZnNPs从50μmol/L的浓度开始,呈浓度和时间依赖性地抑制三阴性乳腺癌细胞活性,且相较于同样浓度的游离[Zn(DTBS)2],ZnNPs处理显示出更强的抗癌活性。结论Zn⁃NPs可增强Zn(DTBS)2对三阴性乳腺癌细胞活性的抑制作用。

关键词： 邻苯甲酰磺酰亚胺   HDAC抑制剂   抗肿瘤   三阴性乳腺癌   构效关系  

摘要： 作为一种关键的表观遗传调节因子,组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)在癌症的发展中发挥着重要作用。小分子HDACs抑制剂已被证明能够抑制肿瘤增殖并诱导细胞凋亡,因此受到了广泛的研究关注。本研究设计和合成了一系列新的邻苯甲酰磺酰亚胺衍生物作为HDACs抑制剂。生物学实验表明,目标化合物9a展现出优于vorinostat的HDACs抑制活性,且对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)具有良好的体内外抗肿瘤活性。所有动物实验经山东大学药学院伦理委员会批准(批准号:230094)。该项工作是以邻苯甲酰磺酰亚胺为母核发展HDACs抑制剂的一次探索,以9a为代表的活性化合物可以作为先导化合物进一步研究。

关键词： CA-4   三阴性乳腺癌   PI3K  

摘要： 目的 以CA-4为先导化合物,按照微管蛋白和PI3K双靶点活性进行设计、合成一种CA-4类衍生物[1-(3,5-二氟苯基)-2-(6-甲氧基-2-(1-(3,4,5-三甲氧基苯基)乙烯基)苯并呋喃-5-基)乙烯]。并在人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞上进行PI3K活性初步研究。方法 采用MTT法测定IC50值,倒置显微镜观察细胞状态,流式细胞术检测细胞周期阻滞情况,AutodockTools系统进行衍生物和PI3K分子对接,ELISA法检测细胞上清液中PI3K分泌表达量,RT-PCR和Western blot分别检测PI3K mRNA和蛋白表达水平。结果 该衍生物对MDA-MB-231细胞的IC_(50)=5.78 μmol·L^(-1),使细胞内出现一系列凋亡形态变化,阻滞细胞生长周期于G_(2)期,与PI3K良好结合,结合自由能为-36.4008 kJ·mol^(-1),降低PI3K分泌量且下调PI3K的基因和蛋白表达水平。结论 该衍生物的PI3K靶点活性得到了初步验证,也可为此类化合物进一步机制研究提供参考。

关键词： RNA   三阴性乳腺癌   药物递送系统  

摘要： 三阴性乳腺癌(TNBC)作为最具侵袭性的乳腺癌亚型,具有复发率高、死亡率高、治疗方法少等特点。核糖核酸干扰(RNA interference,RNAi)疗法可高效地调控靶标基因及相关下游通路,与化疗药物等联合应用,能够显著改善TNBC治疗效果,对基因调控和疾病治疗有重要意义。然而,RNA作为药物易被核酸酶降解、易被免疫系统识别及难以进行跨膜运输,因此设计靶向药物递送系统是RNA药物开发的重要目标。通过对抗TNBC的RNA药物递送系统进行综述并对其未来发展方向进行展望,以期为RNA药物的研发提供参考,促进RNA药物临床转化。

关键词： 瑞香狼毒提取物   乳腺癌多药耐药   凋亡   Nrf2   抗氧化  

摘要： 该研究将探讨瑞香狼毒提取物(SCL)抑制乳腺癌多药耐药的作用及机制。实验以人三阴性乳腺癌细胞亲本株MDA-MB-231,及其阿霉素耐药细胞株MDA-MB-231/ADR为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;DAPI染色和Annexin-V/Pi凋亡双染检测细胞凋亡,Western blot(WB)检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬酶(caspase)-9、caspase-3的表达水平,免疫荧光染色观察Nrf2细胞内分布,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平。实验结果显示SCL的耐药因子是0.69,对应地,阿霉素和紫杉醇的耐药因子分别是8.40、16.36;DAPI染色结果显示SCL能够导致乳腺癌细胞核皱缩、碎裂;Annexin-V/Pi凋亡双染显示,在中、高剂量SCL的作用下,耐药细胞的平均凋亡率分别为32.64%、50.29%;WB检测结果提示:SCL能够明显降低抗凋亡蛋白Bcl-2、caspase-9和caspase-3表达水平,明显升高促凋亡蛋白Bax表达水平,进一步研究发现,SCL能够显著促进Keap1的表达,并明显抑制Nrf2和HO-1的表达,同时能够明显减少Nrf2的入核表达水平;相应地,流式检测细胞内ROS水平明显升高。综上所述,瑞香狼毒能够显著抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231多药耐药细胞的增殖,引起细胞凋亡,其机制与抑制Keap1/Nrf2信号通路,导致耐药细胞内ROS累积,并增加凋亡相关蛋白的表达有关。

关键词： 华泽兰   Aspergillus puniceus   次级代谢产物   口山酮   三阴性乳腺癌   凋亡  

摘要： 从华泽兰根部分离得到一株内生真菌Aspergillus puniceus.采用正相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱及半制备高效液相色谱等方法,从该菌株的发酵液中分离得到8个结构类似的口山酮类化合物,通过现代波谱技术分别鉴定为3′,4′-hydrogenated austocystins A(1)、austocystin M(2)、austocystin F(3)、austocystin D(4)、austocystin B(5)、austocystin K(6)、austocystin A(7)、austocystin H(8).MTT结果显示化合物5对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞具有较好的选择性细胞毒活性(IC_(50)为1.28μmol·L^(-1)).另外,流式细胞术检测化合物5作用于MDA-MB-231细胞后凋亡率的变化,相比于对照组,最高总凋亡率为69.7%.同时,AO/EB双荧光染色也证明化合物5能够诱导MDA-MB-231的细胞凋亡.JC-1线粒体膜电位检测进一步显示化合物5能够通过线粒体途径诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-231的细胞凋亡.

关键词： 细胞周期蛋白激酶7(CDK7)   CDK7选择性抑制剂   N76-1   结构优化   三阴性乳腺癌  

摘要： 三阴性乳腺癌（TNBC）是侵袭性很强的乳腺癌亚型,约占乳腺癌总病例的10%-20%,由于异质性高、侵袭性强且缺乏特异性靶点等特点,目前治疗TNBC的方案仍以化疗为主。然而,传统化疗药物的毒副作用比较大,易产生耐药,因此开发新型的TNBC治疗药物具有重要的现实意义。 细胞周期蛋白依赖性激酶7（CDK7）是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶CDK家族的成员,具有调控细胞周期和m RNA转录的双重功能。研究表明,CDK7与TNBC的发生和发展密切相关,TNBC的特异性基因“Achilles cluster”的转录依赖于CDK7。因此,通过抑制CDK7的生物活性来调控TNBC相关基因的转录,可以达到抑制TNBC细胞生长的目的。基于此,CDK7抑制剂已经成为一种潜在的TNBC治疗药物。 N76-1是本课题组前期报道的一种新型CDK7抑制剂,前期结果显示其在体内外可以有效抑制TNBC细胞增殖,具有强效的抗TNBC作用。然而,N76-1对CDK7选择性不佳,对CDK2和CDK9仍有较强的抑制作用。因此,本论文以N76-1为先导化合物,结合N76-1与CDK7蛋白对接的共晶结构,对其N-4苯环,N-2苯环和共价弹头三个部分进行结构优化,考察对选择性和活性的影响,研究构效关系,最终期望获得高选择性高活性的CDK7抑制剂。本文共计合成21个N76-1的衍生物,通过1H-NMR、13C-NMR对该系列衍生物进行了结构确证,进一步地,对合成的衍生物进行了药理活性评价。通过CDK7激酶抑制活性实验发现,化合物8j对CDK7的IC50为5.6n M,与阳性药物THZ1相当。同时,对CDK2和CDK9的IC50分别为492.1n M和635.5n M,选择性相较于N76-1显著提高。此外,8j在体内外表现出明显的肿瘤细胞抑制作用,对两种三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和Cal-148中的抑制IC50分别为0.6μM和2.41μM。在MDA-MB-231裸鼠异种移植瘤模型中,在8mg/kg的给药剂量下,8j显示出较强的体内抗肿瘤活性,与阳性对照药物THZ1（10mg/kg）相当。此外,Western Blotting试验表明8j可以浓度依赖性地抑制MDA-MB-231细胞中RNA聚合酶S2、S5和S7三个位点的磷酸化水平,证实其可以抑制CDK7的生理功能。以上结果将为具有自主知识产权的新型CDK7选择性抑制剂的深入研究奠定基础。 此外,噁唑结构普遍存在于各类生物活性化合物中。本文开发了一种以α-氨基酮为原料,通过TBHP/KI催化的氧化环合一锅制备2-芳酰基噁唑衍生物的绿色合成方法。在此条件下以中高产率获得了20个2-芳酰基噁唑衍生物,并通过1H-NMR、13C-NMR和MS确证其结构。该方法温和简便,为合成2-芳酰基噁唑衍生提供了新的思路。