关键词： 手足口病   肠道病毒71型   长链非编码RNA   差异表达   发病机制  

摘要： 肠道病毒71型(Enterovirus71，EV71)是重症手足口病(Hand-food-mouth disease，HFMD)的主要病原体，其感染可引起中枢神经系统并发症，严重者可危及生命。重症HFMD的暴发对儿童健康造成了严重威胁，探讨EV71感染的发病机制对HFMD的防治尤为重要。长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)在宿主内参与多种疾病的发生发展，值得注意的是，lncRNA可与病毒相互作用来调节宿主或病毒的基因表达，在病毒感染和抗病毒免疫中发挥重要作用，而lncRNA在EV71感染中的功能尚未得到验证。本研究通过RNA-Seq技术对EV71感染中宿主内lncRNA和mRNA的表达特征进行描述，对差异基因的相关功能进行生物信息学分析和实验验证，探讨lncRNA对EV71感染的影响，这对阐明EV71的发病机制和制定HFMD防治策略有重要意义。　　目的：　　1.描述EV71感染后lncRNA和mRNA的表达特征，筛选出感染前后显著变化的基因，为阐述lncRNA的功能提供数据支持。　　2.分析差异表达基因的功能和相关信号通路，为研究EV71的致病机制指明方向。　　3.验证lncRNA与病毒复制及细胞因子水平变化的关系，探讨lncRNA在病毒感染中的免疫调控作用。　　方法：　　1.构建EV71感染的RD细胞模型（感染组n=3，对照组n=3）和3日龄Balb/c乳鼠模型（感染组n=3，对照组n=3），TRIzol萃取法提取样本总RNA，去除核糖体RNA后构建cDNA文库。采用第二代高通量测序技术检测样本中RNA的表达量，随机挑选基因进行real-time PCR验证测序结果，并预测样本中以前未被注释的新lncRNA。　　2.筛选EV71感染前后差异表达的lncRNA和mRNA，构建lncRNA-mRNA共表达网络，并预测lncRNA顺式调控和反式调控的靶基因。　　3.对差异表达lncRNA的靶基因和差异表达的mRNA进行GO功能注释和KEGG通路分析，通过mRNA的已知功能来预测lncRNA在EV71感染中的调控作用。　　4.结合文献检索及生物信息学分析结果，挑选EV71感染中具有潜在重要作用的lncRNA并设计smart silencer，在RD细胞中进行功能缺失性研究，验证lncRNA对EV71感染中病毒复制和细胞因子表达的影响。　　结果：　　1.质控分析和real-time PCR验证提示RNA-Seq测序结果可靠。共预测出3801个之前未被注释的新lncRNA，其中RD细胞中鉴定出2216个新lncRNA，小鼠骨骼肌中鉴定出1585个新lncRNA。　　2.质谱分析结果显示EV71感染中宿主内大量lncRNA和mRNA表达量发生改变。其中RD细胞感染组与对照组相比，有23个lncRNA和372个mRNA表达量显著改变;小鼠感染组和对照组相比，有104个lncRNA和2647个mRNA表达量显著变化(FC≥2，P＜0.05)。　　***功能注释提示差异表达的基因与细胞核、细胞质、细胞外外泌体的成分改变有关，与蛋白质结合、ATP结合、转运活性等分子功能相关，主要参与信号转导、转录、免疫反应等生物学过程;KEGG通路分析显示差异基因主要参与病毒感染性疾病、免疫系统反应、代谢过程和神经系统疾病等相关信号通路。　　***71感染可显著上调NEAT1的表达，功能分析及文献检索结果提示NEAT1在病毒感染中具有重要调控作用。NEAT1功能缺失性研究表明抑制RD细胞中NEAT1的表达可降低宿主内EV71复制和IL8表达水平。　　结论：　　***71感染RD细胞和乳鼠均可引起大量lncRNA和mRNA的表达水平发生改变。　　2.差异表达的lncRNA与病毒感染性疾病、神经系统疾病高度相关，可能通过调控宿主内免疫系统反应、细胞成分改变、代谢、蛋白质结合、转录等参与EV71感染的致病过程。　　***1可能在EV71感染后的免疫应答中起重要作用，可影响病毒的复制和细胞因子IL8的表达。

关键词： 手足口病   预防及控制  

摘要： 手足口病是一种常泛滥在小儿间的传染性疾病,常发生于5岁以下的儿童。手足口病主要是肠道病毒感染所致,据报道,引发手足口病的病毒有20余种,但感染病毒主要以柯萨奇病毒A16型、肠道病毒EV 71为主。小儿患病后会出现口痛、厌食,同时在手、口腔、足部等位置出现疱疹,因而得名手足口病,某些患儿还会出现低热症状,甚至引发更为严重的并发症。对于手足口病的治疗,临床缺乏特效药治疗,主要依靠自身免疫系统,大部分的患儿在1周后会自愈。因而对于手足口病的预防,比治疗更为重要,下文就手足口病的预防与控制展开讨论。

关键词： 手足口   流行病学   防治  

摘要： 目的:分析红花岗区2016～2018年手足口病的流行病学特征。方法:采用个案调查和流行病学调查的方法对7217例手足口病进行流行病学特征分析,包括病原学、病情、病例分布区域、分布年龄等。结果:红花岗区2016-2018年手足口病例共7217例,实验室确诊198例,确诊病例在病原学分布上,其他肠道病毒比例高于EV71型、CoxA16型病毒(P<0.05);在病情分布上,重症手足口57例(0.79%),普通手足口7160例(99.21%),死亡病例为0;在病例区域分布上,长征街道办事处(13.98%)、忠庄街道办事处13.98%(13.04%)及忠庄街道办事处(11.39%)为主要分布区域,比例高于其他区域(P<0.05);在发病年龄分布上,0～3岁比例83.37%,4～岁比例为15.37%,10～岁比例为1.01%,25岁及以上比例为0.25%,0～3岁年龄段比例显著高于其他年龄段(P<0.05)。结论:红花岗区2016～2018年手足口病以普通型为主,长征、忠庄及新蒲街道办事处为发病集中区域,而0～3岁年龄段小儿为发病集中群体。

关键词： 重症手足口病   甲泼尼龙   不同剂量   临床疗效  

摘要： 目的探讨不同剂量甲泼尼龙治疗小儿重症手足口病的临床效果。方法选择我院小儿科近年来收治的82例重症手足口病患儿,所有患儿均给予甲泼尼龙治疗,根据用药剂量的不同将患儿分为观察组(大剂量组)与对照组(小剂量组),每组41例,观察两组患儿治疗后的临床疗效。结果观察组患儿治疗总有效率为92.7%,明显优于对照组患儿的78.0%,组间差异有统计学意义(P<0.05),两组患儿用药后不良反应发生率之间差异未见统计学意义(P> 0.05)。结论短期大剂量应用甲泼尼龙治疗小儿重症手足口病的临床疗效优于小剂量治疗,且不会增加不良反应发生的风险。

关键词： 手足口病   预防措施   护理   儿童  

摘要： 目的总结小儿手足口病的护理措施,以最大限度地提高患儿的治愈率。方法在小儿手足口病护理中,做好预防和针对性的护理,患儿出现发热和疮疹后应立即进行隔离,尽快将患儿送往医疗机构进行诊治,医疗机构对该病进行多方面的宣教,宣传该病的可防可控性,建议家长不要带孩子去较为拥挤的地方,降低感染概率。在患儿发病后,做好患儿的口腔清洁,指导患儿合理饮食,加强体温监测,做好皮疹的护理,提供给家属心理安慰和疏导。结果通过对以上方法进行总结,得出手足口病的预防措施包括做好消毒隔离、开通绿色通道、加强知识宣传,护理措施包括口腔、饮食、发热、皮疹、心理护理。结论手足口病发病后能治愈,但没有相应的疫苗可注射,家长在平时应教育孩子勤洗手,避免发生感染。在患儿发病后,实施针对性的护理干预措施,能够明显提高该疾病的临床疗效。

关键词： 肠道病毒   手足口病   柯萨奇病毒A组10型   疫苗  

摘要： 手足口病由多种肠道病毒引起,一直以来对中国婴幼儿的健康重大公共问题造成巨大的威胁。2008年国家将手足口病定为法定传染病以来,人们对手足口病的研究逐渐增多。起初,肠道病毒71(Enterovirus,71 EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CoxA16)是引起手足口病的病原体。2011年后柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CoxA6)和柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CoxA10)成为引起中国手足口病的主要病原体,引起了人们的关注。CVA10能引起手足口病的重症病例,因此现就CVA10的病原学、流行病学、乳鼠模型、疫苗的研究等做一综述。

关键词： 手足口病   发病机制   免疫反应   代谢组学  

摘要： 目的：　　1分析手足口病(hand，foot and mouth disease，HFMD)重症化的免疫与代谢危险因素和代谢谱的变化及代谢机制，为重症HFMD的早期识别和临床干预提供依据。　　2构建肠道病毒71型(Enterovirus71，EV71)感染重症HFMD乳鼠模型和人清道夫受体B2(Homo sapiens scavenger receptor class B，member2，hSCARB2)基因敲入(knock in，KI)小鼠模型，为重症HFMD发病机制研究提供模型支持。　　3揭示局部器官免疫在EV71感染诱发重症过程中的作用，为重症HFMD的治疗提供理论依据。　　方法：　　1收集2013至2017年4月～9月在郑州市儿童医院和新乡医学院第一附属医院住院治疗的HFMD病例，采用巢式序列病例对照研究分析免疫和代谢指标的变化，应用多元回归模型分析重症HFMD潜在的危险因素。采用LC-MS分析健康对照和EV71阳性病例血清，健康对照血清来自于郑州市中心医院检查的5岁以下健康儿童。通过OPLS-DA模型中的VIP值，结合t检验(两组间)或单因素方差分析(三组间)和两两组别间倍性变化≥1.5或≤0.667的标准筛选差异代谢产物。通过代谢物的生物功能分析，寻找与重症HFMD发生相关的代谢通路和差异代谢产物。　　2通过腹腔、颅内和肌肉注射等三种途径感染3日龄BALB/c乳鼠(2×106pfu/小鼠)，记录临床评分和生存情况。苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin，H&E)染色和尼氏染色观察病理学改变。各组织器官的病毒载量采用VP1免疫组化分析和TCID50测定。线粒体损伤和超微病理采用JC-1荧光探针和透射电镜进行分析。通过感染不同日龄BALB/c乳鼠研究EV71病毒的年龄易感性。Spearman秩相关分析中枢神经系统损伤与肺部病变的关系。采用CRISPR/Cas9技术构建hSCARB2KI小鼠模型，并通过荧光定量PCR、免疫组化和Western blot进行基因和蛋白水平的鉴定。5日龄和1周龄KI小鼠和WT小鼠分别经颅内注射感染EV71(2×106pfu/小鼠)，并记录小鼠感染后的症状和临床评分。　　33日龄BALB/c乳鼠经腹腔注射感染EV71病毒(2×106pfu/小鼠)，感染后第7天(7days post infection，7dpi)计算肺组织的脏器系数，采用流式细胞仪检测外周血和肺组织免疫细胞表型。应用Mouse Inflammation ArrayⅠ试剂盒分析肺组织匀浆上清中细胞因子变化，组织匀浆上清炎症细胞因子及活性物质的检测采用酶联免疫吸附法和Griess法。H&E染色、马松(Masson)和PAS糖原染色观察肺组织病理学改变。通过甲苯胺蓝染色和类胰蛋白酶表达检测组织肥大细胞。Spearman秩相关分析肥大细胞与EV71感染诱发中枢神经损伤和肺水肿的关联。应用蛋白质组和Western blot检测乳鼠脑组织和肺组织的免疫分子。　　结果：　　1单因素分析显示，农村生活(OR=1.89，P=0.005)、高热(＞39℃)(OR=2.40，P=0.014)是重症HFMD的危险因素。对所有发病时间HFMD病例的临床数据进行多元回归分析显示，嗜酸性粒细胞(OR=0.91，P＜0.0001)、Na+(OR=0.74，P=0.0002)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)(OR=1.06，P=0.02)是重症HFMD的独立影响因素。巢式序列病例对照研究基础上的多元回归分析显示，感染发病第1天，嗜酸性粒细胞(OR=0.80，P=0.02)、Na+(OR=0.53，P=0.02)和肌酸激酶(creatine kinase，CK)(OR=0.82，P=0.008)是重症HFMD的独立影响因素;感染发病第2天，嗜酸性粒细胞(OR=0.69，P=0.04)和Na+(OR=0.52，P=0.03)是重症HFMD的独立影响因素;感染发病第3天，Na+(OR=0.68，P=0.03)是重症HFMD的独立影响因素;感染发病第4天，嗜酸性粒细胞(OR=0.85，P=0.004)、球蛋白(OR=1.54，P=0.002)是重症HFMD的独立影响因素;感染发病≥5天，球蛋白(OR=1.20，P=0.02)是重症HFMD的独立影响因素。　　HFMD重症化进程伴随血清代谢谱的改变，经筛选共得到62个差异代谢物。生物功能分析显示，这些差异代谢物在体内主要涉及的代谢通路有：丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢;三羧酸循环;D-谷氨酰胺、D-谷氨酸代谢;乙醛酸和二羧酸代谢;缬氨酸，亮氨酸和异亮氨酸生物合成;泛酸和辅酶A生物合成;谷胱甘肽代谢。二十二碳六烯酰PAF C-16(AUC=0.85，95％CI：0.77～0.94，P

关键词： 小儿手足口病   免疫球蛋白   超敏C反应蛋白  

摘要： 目的探讨免疫球蛋白和超敏C反应蛋白检测运用在手足口病患儿中的效果。方法选取2017年3月～2018年3月我院儿科收治的手足口病患儿105例作为研究对象,再选择同期来我院体检的健康儿童103例作为对照组,分别检测两组的超敏C反应蛋白和免疫球蛋白,对两组的检测结果进行比较分析。结果两组均顺利完成检验,与对照组相比,观察组的hs-CRP水平较高,组间对比,差异有统计学意义(P<0.05);同时,观察组的IgA和IgG水平低于对照组(P<0.05);但是IgM水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论临床上给予手足口病患儿免疫球蛋白和超敏C反应蛋白检测有助于准确判断患儿病情。

关键词： 手足口病   圆形分布法   气象因素   预测模型  

摘要： [目的]分析2014-2017年昭通市手足口病流行特征;基于气象因素建立手足口病预测模型。[材料与方法]从《中国疾病预防控制信息系统》收集昭通市各级医疗机构依法报告的手足口病病例、昭通市各县区的手足口病监测资料,收集昭通市2014-2017年的日平均气温、日平均降水、日平均湿度、日平均风级、日平均云量等气象数据。利用集中度和圆形分布法分析手足口病的发病情况,利用Mapinfo分析手足口病空间分布情况,利用哈佛疾病风险指数模型建立手足口病流行风险预测模型并进行验证、评价模型。[结果]昭通市2014-2017年共报告手足口病6661例,各年发病率分别为:28.74/10万、18.02/10万、50.71/10万、25.77/10万,年度间呈交替波动,发病具有一定的季节性。发病高峰日是5月16日,四年间高峰期在3月10日-7月25日之间,流行期在1月4日-9月29日之间。发病以5岁以下儿童为主,占发病总数的97.00%,其中发病主要集中在1岁组和2岁组分别占37.11%,25.57%。发病有较明显的空间集聚性,主要集中在昭阳区和水富县。病原体以EV-A71、CV-A16为主,2014-2017年间两者交替成为优势毒株,EV-A71和CV-A16主要分布在5月份,EV-A71毒株优于CV-A16。EV-A71型手足口病有较强的季节性M值为0.86,发病高峰日是5月10日,高峰期分别为4月21日-6月1日,流行期为4月1日-6月21日。四年间不同地区手足口病病原学分型的优势毒株不断发生变化;也存在其它肠道病毒(EV)构成上升的现象。影响手足口病发病的主要气象因素为日平均气温(0R=5.28)、日平均湿度(0R=1.33)、日平均降水(OR=0.60)、日平均风级(OR=0.72)。手足口病平均危险分值9.14分,危险指数(RI)为2.19,属于较高危疫情。基于气象因素制定了昭通市手足口病风险预测模型,RI=RS温度+RS降水+RS风级+RS湿度/P温度RS温度+P降水RS降水+P风级RS风级+P湿度RS湿度并进行可视化,应用红色表示风险极高,橙色表示风险高,黄色表示风险中等,绿色表示风险底。模型ROC曲线下面积为0.74。[结论]昭通市手足口病防控工作的重点区域是流动人口比较多的地区如昭阳区和水富县,同时要加强各地区的风险评估,监测和预警。防控关键期在2-11月,病例高峰期是3-7月,次高峰是11月。重点人群是5岁以下儿童,特别是散居儿童和幼托儿童。基于主要气象因素,建立昭通市手足口病发病风险预测模型,有助于完善手足口病预警预测系统。

关键词： 儿科门诊   急症诊断   小儿急性脱水   小儿惊厥   小儿手足口病  

摘要： 由于儿童处于生命机体的初始阶段,身体各项器官的发育仍不成熟,自身的免疫能力也相对较弱,因此很容易受到外在环境的影响出现各类危急症状。作为儿科临床医生,在面对儿童出现的各类突发急症时,必须要综合考虑儿童患病的诱因,出现的症状,以及自身机体的特点,才能对其做出最准确的判断和最有效的救治。因此本文中,我将以门诊中遇到的一个案例为参考,针对儿科门诊常见急症的临床表现与救治方法展开探究。