关键词： 手足口病   柯萨奇病毒A组16型   VP1基因   系统进化树   氨基酸变异  

摘要： 目的:通过分析重庆地区2010-2015年手足口病患儿柯萨奇病毒A组16型(CA16)VP1区核苷酸序列,了解近6年重庆地区CA16-VP1基因特征,并为CA16-VP1基因研究及疫苗开发提供基础依据。方法:收集2010-2015年为手足口病的住院患儿其粪便标本,进行病原学检测,使用特异性引物利用巢式PCR方法进行CA16-VP1基因片段的扩增并测序。通过随机抽样共选择54株病毒分离株,构建系统进化树,分析重庆地区CA16-VP1氨基酸变异情况。结果:1.系统进化树显示2010-2015年重庆地区CA16病毒分离株均为B1亚型,且同时存在两个流行分支。2014-2015年病毒株均为B1b亚型,分流支上未见B1a亚型。重庆地区CA16病毒可见时间聚集性,且每年流行分布亦存在差异。2.分析54株病毒株氨基酸变异情况可见,共发现8个氨基酸变异位点,其中有22株病毒株发生了L5M变异。讨论:基因序列研究分析表明,2010-2015年重庆地区CA16分离株均为B1亚型,且存在两个传播链同时流行,可见时间聚集性。2014-2015年病毒株均为B1b亚型,提示B1b基因亚型可能在共同循环和流行过程中逐渐形成了独立的优势进化分支。病毒株中发现8个氨基酸变异位点,但本研究中的变异位点尚无文献报道,其是否影响CA16病毒毒力有待研究。

关键词： 苏州市   相城区   手足口病   流行病学   临床特征  

摘要： 目的分析苏州市相城区手足口病住院患儿流行病学和临床特征。方法以2018年6月～2019年7月苏州市相城区住院治疗的128例手足口病患者为对象,对患者临床资料进行回顾性分析,总结其流行病学特征与临床特征。结果 3岁及以下患者的比重为61.72%,3岁以上患者比重为38.28%(P<0.05);临床表现发热占79.69%(低热占31.37%,中热占50.98%,高热占17.65%),呕吐发生率为29.69%,抽搐发生率为20.31%,皮疹发生率为100%;有合并症的占48.44%,无合并症的占51.56%(P>0.05);固定在本地区居住的占48.44%,流动人口占51.56%(P>0.05);居住在托幼机构的占29.69%,散居的占35.17%,其他居住方式占35.17%(P>0.05);夏季、秋季的发生率为75.78%,春季、冬季的发生率24.22%(P<0.05);手足口病在湿度高的时间内发生率为76.56%,湿度低的时间内发生率23.44%(P<0.05)。结论苏州市相城区手足口病的发生与年龄、季节存在相关性,做好手足口病有效的预防措施、积极的隔离治疗非常重要。

关键词： 白藜芦醇   肠道病毒71   NK细胞   内质网应激   VP1  

摘要： 肠道病毒71(EV71)感染后,会引起机体发生免疫反应,其中自然杀伤细胞引起的固有免疫就是第一道防线。在本研究中,通过流式细胞术及细胞因子微球检测技术(CBA)方法检测EV71感染后手足口病患者NK细胞亚群以及细胞因子变化情况;另外,许多研究表明,白藜芦醇(Res)具有多种生物学功能,如心血管保护、突变治疗、抗细菌、抗真菌、抗病毒和抗肿瘤等。本研究中通过RES被用于保护横纹肌肉瘤(RD)细胞免受EV71损伤,进而对相关机制进行了探讨。研究表明,EV71感染后,NK细胞亚群中NKG2A+较正常对照组明显升高,细胞因子(IL-2,IL-6,IL-10,IL-17a)在手足口病患者中明显升高。RES抗EV71病毒作用的研究中发现,VP1蛋白在加入RES的实验组中分泌明显减少;RES功能实现的一个前瞻性机制是,RES可能抑制氧化应激介导的Perk/EIF2α/ATF4信号通路,下调自噬途径,抵抗EV71诱导的RD细胞损伤。此外,RES治疗显著抑制了EV71感染引起的分泌性炎症因子,如IL-6、IL-10和TNF-α。同时,氧化应激抑制剂或内质网应激(ERS)抑制剂或自噬抑制剂阻断了RES对EV71感染的RD细胞的抗病毒作用。这些结果表明,RES通过抑制氧化应激介导的ERS/自噬信号通路,减弱了EV71诱导的病毒复制和炎症效应。第一部分:EV71感染后NK细胞亚群和细胞因子检测目的:研究手足口病病人与健康对照者之间NK细胞亚群及细胞因子的变化情况。方法:收集吉林大学第一医院2016年7月至2017年9月门诊及住院病人70人,16名健康对照者标本来自长春市朝阳区疾病预防控制中心学龄前健康体检儿童。采用流式细胞术检测NK细胞亚群变化,细胞因子微球检测技术(CBA)检测细胞因子变化。结果:NKG2ACD3CD16CD56细胞亚群病人组较正常对照组比例明显升高,细胞因子(IL-2,IL-6,IL-10,IL-17a)在病人组较正常对照组明显升高。以上结果通过统计学分析,P<0.05,具有统计学差异。结论:手足口病患儿急性期检测NK细胞亚群NKG2A明显升高,同时,细胞因子IL-2,IL-6,IL-10,IL-17a明显升高,以上指标可作为EV71感染后炎症标志物。第二部分:白藜芦醇抗肠道病毒71的机制目的:建立EV71感染的RD细胞模型,进一步明确RES的抗EV71作用相关的机制。方法:采用免疫荧光法检测RES对EV71感染RD细胞内的ROS生成的影响,通过试剂盒测定细胞内MDA及SOD水平,用免疫印迹法及免疫荧光法测定细胞内VP1、内质网应激相关蛋白、自噬相关蛋白的表达,用Millipex磁珠和flexmap3d测定感染EV71的RD细胞中IL-6、IL-10和TNF-α的浓度。结果:免疫荧光法检测结果示,EV71感染可导致细胞内ROS水平明显增加,此现象可被RES显著抑制。试剂盒测定结果显示,EV71感染可导致细胞内MDA水平明显增加且SOD水平明显降低,此现象可被RES显著抑制。免疫印迹法结果示,(1)EV71感染可导致细胞内内质网应激相关蛋白表达明显增加,此现象可被RES显著抑制,预处理氧化应激抑制剂可显著阻断RES的作用;(2)EV71感染可导致细胞内自噬相关蛋白表达明显增加,此现象可被RES显著抑制,预处理内质网应激抑制剂可显著阻断RES的作用;(3)EV71感染可导致细胞内VP1表达明显增加,此现象可被RES显著抑制,预处理氧化应激抑制剂、内质网应激抑制剂及自噬抑制剂可显著阻断RES的作用。细胞因子检测结果示,EV71感染可导致细胞内细胞因子分泌明显增加,此现象可被RES显著抑制,预处理氧化应激抑制剂、内质网应激抑制剂及自噬抑制剂可显著阻断RES的作用。免疫荧光法结果示,EV71感染可导致细胞内自噬相关蛋白表达明显增加,此现象可被RES显著抑制。结论:RES通过阻断氧化应激介导的ERS/自噬途径发挥抗病毒作用。

关键词： 手足口病   肠道病毒71型   SCARB2   受体表达上调   固有免疫反应  

摘要： 近20年来手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)在全球尤其是在亚太地区广泛流行,近年来我国每年感染手足口病约200万人,位列各种传染病年感染人数之首,并呈现逐年增长趋势。手足口病的病原虽然有多种,但是绝大多数重症及死亡病例仍是由肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染引起的。SCARB2(Scavenger receptor class B,member 2)是EV71感染细胞的主要受体,其原为介导高密度脂蛋白内吞的受体,因EV71衣壳结构与其配体的相似性,SCARB2能够与EV71衣壳结合进而介导病毒的内吞,从而实现EV71对细胞的感染。然而EV71与SCARB2的相互作用关系并不止于此。本课题组曾研究发现,CVA16病毒的感染会导致SCARB2表达上调,通过二代测序进行了CVA16感染293T细胞的转录组(mRNA和miRNA)研究,发现转录组中变化最显著的是SCARB2,表达水平在感染后上调约10倍。这是个有趣而且非常重要的现象。EV71感染是否也会引起同样的SCARB2表达增加呢?其中的机制和意义又是什么呢?本研究的目的就是揭示这几个问题。论文的研究分为四部分。第一部分,验证SCARB2对EV71的重要性。分别通过siRNA抑制SCARB2表达,及过表达SCARB2来改变细胞中SCARB2的表达水平,感染EV71后病毒复制呈现出相应的降低和提高,说明SCARB2对EV71感染是至关重要的。第二部分,鉴定EV71感染是否导致SCARB2表达上调,该实验分为体外细胞实验与动物体内实验两部分。细胞实验中,用RD、HT29和293细胞,感染后检测EV71和SCARB2;动物实验采用新生小鼠颅内感染模型,在1日龄小鼠颅内攻毒EV71,取大脑组织检测EV71和SCARB2。结果均表明EV71感染引起受体SCARB2表达上调,普遍于感染后24 h达到峰值,表达量约为感染前的15倍。第三部分,初步探索受体SCARB2上调机制。文献研究表明,SCARB2上调的现象在一些病理条件下也会发生,如在药物(cerulein)刺激的胰腺炎大鼠模型中,胰腺的SCARB2表达上调,且可能是经由ERK1/2和JNK两条信号通路调控的。此外,已有报道指出EV71感染导致ERK1/2和JNK磷酸化,信号通路被激活。在此基础上,我们对受体SCARB2上调机制展开验证,在细胞实验中使用ERK1/2和JNK信号通路抑制剂,结果表明能够抑制EV71感染引起的SCARB2上调,初步证明SCARB2上调机制为EV71感染导致ERK1/2和JNK信号通路磷酸化,进而调控SCARB2的表达。本研究发现了病毒感染和其受体表达呈现相互促进的状态,这对病毒和宿主细胞来说各有什么作用和意义呢?为什么细胞会形成这样的一种反应机制?在第四部分中,探索EV71感染导致的受体SCARB2上调的作用和意义。一方面,检测EV71感染引起SCARB2上调对后续病毒感染的潜在促进作用。将EV71感染细胞后,抑制SCARB2的表达上调,随后检测感染子代EV71在二轮感染后的复制水平;或者在第二轮感染EV71-Luciferase报告基因假病毒,检测报告基因luciferase的表达水平。结果显示抑制组中二轮EV71复制水平或luciferase表达水平均显著低于正常组,可见EV71感染导致的受体SCARB2上调促进后续病毒对同一细胞的感染。另一方面,查阅文献可知,SCARB2也在抗菌及抗病毒固有免疫反应中发挥作用,故SCARB2的上调可能是做为促进抗EV71固有免疫而产生的细胞防御反应。因此,接着验证EV71感染引起SCARB2上调对固有免疫的作用。EV71感染细胞后抑制SCARB2上调,检测干扰素诱导基因(ISG54、ISG56)的含量。结果显示对照组EV71感染能够导致ISG54和ISG56转录增加,而抑制SCARB2上调则导致ISG54和ISG56转录降低。可见,EV71感染导致的受体SCARB2上调促进细胞的抗病毒固有免疫反应。本研究提示SCARB2表达上调具有对EV71感染与宿主固有免疫的双重促进作用,这可能是病毒与宿主相互作用的一种新机制,然而三者之间的关系仍需要进一步研究。综上所述,本论文研究表明SCARB2在EV71病毒感染过程中发挥重要作用,感染EV71病毒后,受体SCARB2表达量量著显上升。SCARB2上调机制为EV71感染导致ERK1/2和JNK信号通路磷酸化,进而调控SCARB2的表达。EV71感染导致的SCARB2上调既促进后续病毒对同一细胞的感染,同时又促进细胞抗病毒固有免疫反应。本论文为病毒与宿主的相互作用研究提供了新的视角。

关键词： 小儿手足口病  

摘要： 导读小儿手足口病有很强的传染性,是一种很常见的婴幼儿疾病,较多发生在5岁以下孩子身上,其中又以1—2岁婴幼儿居多。其发病有着很明显的季节性,基本是集中在每年的春季。要想让孩子远离手足口病,就一定要对其有所了解。

关键词： 手足口病   危险因素   肠道病毒71型   三结构域蛋白2   固有免疫  

摘要： 2008年以来我国手足口病年发病数及死亡病例数都占丙类传染病的第一位,是亟待解决的重大公共卫生问题。手足口病重症感染患者则会出现严重的中枢神经系统症状以及并发症,严重危害婴幼儿的健康。重症手足口病的影响因素分析,对于手足口病特别是重症手足口病的防治具有重要意义。越来越多的研究表明TRIM(Tripartite motif)蛋白家族在病毒诱导的固有免疫反应中发挥重要的调控作用。本课题以探索TRIM2在EV71触发的固有免疫反应中的作用及机制展开研究,从而为EV71感染手足口病的防治提供思路。第一部分深圳市重症手足口病相关危险因素分析目的探讨深圳市手足口病重症病例的影响因素,为减少重症手足口病的发生,降低手足口病的伤害提供科学参考。方法收集2012-2016年深圳市卫计委指定的重症手足口病收治医院的727例重症手足口病患者资料以及同期深圳市另外2家综合医院儿科或感染科的680例轻症手足口病病例资料,采用单因素χ2检验及多因素Logistic回归分析对手足口病重症病例发病危险因素进行分析。结果单因素χ2检验结果显示性别、年龄、患儿职业分类、户口类型、是否参加医疗保险、喂养方式、发病前一个月是否接种疫苗、发热、出疹、EV71、CA16等11个因素有统计学意义;多因素Logistic回归分析结果显示:散居儿童、发热以及感染EV71是手足口病重症病例的影响因素,OR值(95%CI)分别为3.86(1.156～12.987)、6.836 2.315～20.184)和8.746(3.729～20.511)。第二部分TRIM2在EV71感染手足口病固有免疫反应中的作用和机制研究目的研究显示TRIM家族成员在病毒诱导的固有免疫中发挥作用,而TRIM2调控抗病毒固有免疫的机制目前并不清楚。本次课题旨在研究TRIM2在EV71诱导的固有免疫中发挥的作用及作用机制,以期为EV71感染致手足口病的临床治疗以及药物和新型疫苗的研发提供理论基础。方法1采用基因芯片检测EV71感染THP1诱导分化成的巨噬细胞(t-M(?))后,TRIM家族分子表达变化情况,筛选表达差异变化有显著性的TRIM分子。2采用实时荧光定量PCR验证t-M(?)中筛选到的TRIM家族分子mRNA表达水平。3在t-M(?)中过表达TRIM2或以siRNA靶向干扰TRIM2后,给以EV71感染,采用实时荧光定量PCR检测细胞因子mRNA表达变化情况。4在t-M(?)中过表达TRIM2或以siRNA靶向干扰TRIM2后,给以EV71感染,采用Western blot实验检测固有免疫信号通路中不同信号分子活化情况以及EV71结构蛋白VP1的表达水平情况。5利用蛋白质免疫共沉淀及Western blot实验检测TRIM2与MDA5的相互作用情况,以及TRIM2对MDA5泛素化的影响。结果1 EV71感染t-M(?)后,TRIM家族分子发生了不同程度表达变化,其中TRIM2表达下降最为显著。2过表达TRIM2显著抑制EV71感染诱导的细胞因子IL-6,TNF-α和CCL3的产生。干扰TRIM2表达促进EV71感染诱导的细胞因子IL-6,TNF-α和CCL3的产生。3过表达TRIM2抑制MAPK和NF-κB通路中信号分子的活化,促进EV71复制。干扰TRIM2表达后能促进MAPK和NF-κB通路中信号分子活化,抑制EV71复制。4 TRIM2通过与模式识别受体MDA5相互作用,促进MDA5的K48位泛素化降解,从而负向调控MDA5下游MAPK和NF-κB信号通路活化。结论1重症手足口病影响因素众多,散居儿童、发热、有EV71感染是重症手足口病的危险因素。2 EV71感染后,TRIM2与模式识别受体MDA5相互作用,促进MDA5的K48位泛素化,阻碍MAPK和NF-κB通路中各接头分子的活化,抑制EV71诱导的细胞因子的产生,实现对EV71感染手足口病固有免疫反应的负向调控。

摘要： 当前,不论是社会还是家庭,对于小儿手足口病都非常的重视,它是一种传染性疾病,主要由肠道病毒引起,从目前的研究情况来看,可以引起手足口病的肠道病毒多达20余种,最为常见的主要为肠道病毒71型(EV 71)和柯萨奇病毒A16型(Cox A16),该病的传染对象多为5岁以内的儿童,会引起手、足、口腔等部位出现小疱疹或小溃疡,以及口痛、厌食、低热等症状,大部分患者经治疗便可痊愈,但少数患者,尤其是儿童可能发生无菌性脑膜脑炎、肺水肿、心肌炎的并发症,甚至可能直接死亡,所以对儿童的健康、安全危害极大.因此,我们有必要切实做好对小儿手足口病的护理宣教工作,提高小儿手足口病的护理质量,促进患儿康复,保障儿童的健康、安全.

关键词： 手足口病   护理   护理满意度   护理干预  

摘要： 目的 探究临床上240例手足口病患儿临床护理体会.方法 资料随机选取本院2015.1-2017.12收入240例手足口病患儿作为本次观察对象,按照护理模式不同分为观察组和对照组,各120例,对照组予以常规护理,观察组在对照组基础上予以护理干预,并对两组患者临床护理满意度进行比较.结果 观察组护理满意度为95.8％,对照组为80.0％,比较差异有意义(P＜0.05).结论 针对临床上手足口病患儿,针对性予以护理干预措施,能够有效提高临床治疗效果,提高临床护理满意度.

关键词： 小儿手足口病   综合护理干预   实施效果  

摘要： 目的:分析对小儿手足口病患者实施综合护理干预的临床效果.方法:选取我院收治的84例手足口病患儿为例,将其随机分成两组,接受常规护理的为对照组,实施综合护理干预的为观察组.对比两组患儿的护理效果.结果:观察组中,患儿治疗总有效率为,家属满意度为;对照组分别为,两组数据差异有统计学意义(P<0.05).结论:通过对手足口病患儿实施综合护理干预,可加快其症状及体征的恢复,促进家属满意度的提高,值得重视.

关键词： 危重症小儿手足口病   临床护理   观察  

摘要： 目的观察探讨危重症小儿手足口病的临床护理措施及效果。方法将2018年1月～2019年1月期间本院收治的危重症小儿手足口病患儿120例作为本次实验的观察对象,根据不同的护理方法将所有患儿平均分成观察和对照组,每组各60例,给予观察组患儿综合护理干预,对照组患儿常规护理干预,对比两组患儿退热、住院、疱疹或皮疹消退时间。结果观察组患儿的退热、住院及疱疹或皮疹消退时间均明显低于对照组,两组各项时间比较结果差异显著,P<0.05。结论对该病患儿给予的综合护理干预将传染途径切断,减小感染人群,提高治愈率的同时促进患儿病情缓解,值得临床推广应用。