关键词： 小儿手足口病   心理护理   健康教育   依从性影响  

摘要： 目的:探讨心理护理联合健康教育指导对小儿手足口病心理状态和治疗依从性的影响.方法:采用分组对照原则进行研究干预,研究时间挑选2015年1月至2016年12月,研究对象均选择院内小儿手足口病患儿,样本总例数为70例,随机分为联合、常规两组,比较两组患儿干预前后心理状态、症状消退时间与治疗依从性.结果:联合组患儿经过护理干预后,其SCARED、DSRSC评分分别为(38.67±3.55)分、(12.54±3.22)分,情绪改善情况明显优于常规组;患儿高热、腹泻等症状消退时间也要早于常规组;比较依从性,联合组依从患儿人数较多,依从度高于常规组(P<0.05),差异具有统计学意义.结论:在治疗小儿手足口病时,重视患儿心理状态影响,通过提高治疗舒适度以减轻其恐惧状态,对提高患儿配合度,提高治疗效果有积极作用.

关键词： 手足口病   EV71   牛磺熊去氧胆酸   抗病毒作用  

摘要： 手足口病(Hand,foot and mouth disease,HMFD)是一种全球性的流行病,患者多为5岁以下的婴幼儿。患者起初为发热,随后在手、口、足等部位会出现溃疡和水泡疹的症状,部分患者病情恶化会引发中枢神经系统疾病、如脑炎、肺水肿等疾病,严重者甚至会死亡。肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16是目前报道引起手足口病的最多常见的两种病原体,它们都是无外膜包裹的正链RNA病毒,同属小RNA病毒科。手足口病在我国流行迅速,自2008年以来,已造成一千多万名儿童感染,数千名儿童死亡,这严重威胁了我国儿童的生命安全健康。虽然疫苗已被证明可以有效地诱导对EV71的免疫,但这些疫苗不能诱导对其他手足口病病原体的交叉保护,如柯萨奇病毒A16(Coxsackievirus A16)。此外,由于EV71病毒固有的高变异性,仅靠接种疫苗几乎不可能完全根除这种病毒。因此,开发抗肠病毒71型药物作为治疗肠病毒71型手足口病的辅助治疗策略是非常必要的。而在临床上尚无治疗手足口病的特效药物,因此,急需开发治疗手足口病的有效药物。牛磺熊去氧胆酸(Taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)是天然熊胆的主要活性成分,临床上已经被用来治疗胆结石。目前,对TUDCA研究最为广泛的是其在肝脏中对胆固醇溶解和分泌作用,而有关TUDCA的抗病毒作用的研究较少,尤其是对手足口病的影响尚未见报道。本研究基于细胞生物学,病毒学和生物化学等研究方法,发现了牛磺熊去氧胆酸这一临床药物的新用途—抗EV71、CVA16等病毒的感染,并初步探究了其抗病毒作用机制。研究结果如下:(1)MTT细胞毒性实验的检测结果显示,500μM和1m M的TUDCA对细胞的毒性非常小,且一定程度上还促进细胞生长。在RD细胞(Rhabdomyosarcoma cell,RD)中,TUDCA对EV71感染的RD细胞也具有保护作用,且在一定浓度范围内具有剂量效应,即TUDCA作用浓度越高,表现出来的细胞保护作用越强。(2)TUDCA抵抗EV71感染的作用不仅体现在提高细胞的存活率,还表现为对病毒蛋白VP1和3D的合成以及病毒粒子产生的抑制。(3)TUDCA不仅对EV71具有抗感染作用,对CVA16和口炎疱疹VSV同样具有抑制作用,这提示TUDCA可能具有广谱抗病毒的作用。(4)TUDCA对EV71和CVA16的抑制作用都体现在早期阶段,通过抑制病毒的入侵和吸附来抵抗病毒感染。TUDCA处理不影响细胞的内吞活性,TUDCA可在体外与病毒粒子发生某种作用使病毒感染性降低。TUDCA作为一种早已上市投入临床使用的药物,其安全性和稳定性能得到保证,这非常有利于开展后续TUDCA在体内抗手足口病效果研究。本研究发现了TUDCA能抑制手足口病病毒复制这一新用途,为抗手足口病药物研究提供了新的思路和方案。

关键词： 小儿手足口病   舒适护理   满意度  

摘要： 目的:探讨对小儿手足口病采用舒适护理方案进行护理的临床价值.方法:选择我院收治手足口病患儿计110例,随机分为常规护理对照组(n=55)与舒适护理实验组(n=55),对比护理效果.结果:实验组症状缓解时间短于对照组,P<0.05,满意度高于对照组,P<0.05.结论:对小儿手足口病采用舒适护理可加快症状改善,并可提高护理满意度.

关键词： 热毒宁注射液   利巴韦林   小儿手足口病   护理效果  

摘要： 目的观察热毒宁注射液联合利巴韦林治疗小儿手足口病的疗效及护理效果。方法将我院2018年1月～2018年9月收诊的手足口病患儿50例作为对象,采用随机数表法均分成对照组与实验组各25例。对照组行利巴韦林治疗,实验组行利巴韦林+热毒宁注射液治疗。两组患儿均配合护理干预,观察并评价两组患儿的临床疗效。结果实验组总有效率显著高于对照组(P<0.05);实验组退热时间、口腔溃疡愈合时间以及皮疹消退时间都比对照组短(P<0.05)。结论小儿手足口病,热毒宁注射液联合利巴韦林治疗,配合护理干预,效果满意,值得推广借鉴。

关键词： 手足口病   EV71疫苗   接种意愿   影响因素  

摘要： 目的通过调查了解社区5岁以下儿童家长手足口病认知情况及EV71疫苗接种意愿,为做好健康宣教及疫苗接种提供依据。方法从某社区卫生服务中心接种门诊及所辖社区幼儿园中随机抽取5岁以下儿童家长共372人,统一使用自制的问卷进行面对面调查。结果 372名受调查儿童家长手足口病知识知晓率为48.39%;EV71疫苗知识的知晓率为43.82%,有58.06%的家长愿意为孩子接种EV71疫苗。logistic回归分析显示,知道EV71疫苗(P<0.05,OR=3.36)、知道EV71疫苗可预防EV71型手足口病(P<0.05,OR=2.401)是儿童家长愿意为孩子接种该疫苗的保护因素。不愿意接种和考虑中的主要原因是担心疫苗的安全性和副反应(58.97%),其次是担心疫苗的效果(25.00%)。结论该社区儿童家长手足口病知识知晓率及EV71疫苗接种意愿均不高,应有针对性地加强手足口病知识和EV71疫苗宣教和推广,以提高家长EV71疫苗接种意愿。

关键词： 重组酶介导扩增   手足口病   肠道病毒71   柯萨奇病毒A16   双重   内参   实时荧光   侧流层析试纸条   探针介导的重组酶扩增   结核分枝杆菌   利福平耐药   rpoB基因   点突变   CRISPR-Cas13a  

摘要： 重组酶介导扩增(RAA)技术是一种新兴的核酸恒温扩增技术,具有我国自主知识产权,因其具有快速、灵敏、特异、高效、仪器设备要求低、测试成本低、操作简单的特点,非常适合于偏远地区和现场的快速筛查。RAA技术从发明至今,已经应用于多种病原微生物的检测,主要检测病原体的特异性序列,但是缺乏内部扩增质控。探针介导的重组酶扩增(PDRA)是基于RAA技术的改良,利用单探针和单引物进行SNP位点识别,利用该方法检测了 5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)A1298C的SNP位点,证明该技术具有检测SNP位点和点突变的潜力。规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR)及其相关蛋白13a(Cas13a)系统,是一种新的RNA靶向系统,Cas13a具有RNase活性,当crRNA与Cas13a蛋白形成复合物,然后识别靶标RNA,特异性切割靶标RNA,同时激活Cas13a的非特异性切割活性,CRISPR-Cas13a系统被开发为一种核酸检测工具,尤其与RPA技术结合后,可以检测单拷贝核酸以及单碱基突变。手足口病是由肠道病毒感染引起的儿童急性传染病,已经成为我国的一个重要的公共卫生问题,肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CVA16)是引起手足口病的两种主要病原体,因此建立病原体的快速检测方法,对疾病的早发现、早诊断和早治疗以及对疫情防控具有重要意义。结核病特别是耐药结核病给我国造成了极大的疾病负担,而利福平在结核治疗中非常重要,如果结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)发生利福平耐药,会增加治疗难度和治疗费用,增加结核传播风险。有许多关于结核分枝杆菌利福平耐药的机制研究,最主要的是利福平作用靶标基因rpoB基因发生突变,从而造成细菌耐药。因此,需要建立一种快速检测rpoB基因突变的方法。本文基于RAA技术,PDRA技术,CRISPR-Cas13a技术,建立检测EV71和CVA16的RT-RAA方法并进行评价,建立检测结核分枝杆菌利福平耐药rpoB基因突变的PDRA方法、RAA-Cas13a方法并进行评价。第一部分逆转录重组酶介导扩增方法应用于肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型检测目的:本研究基于RAA技术分别建立肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CVA16)的两种灵敏、特异的快速检测方法。第一种是基于恒温荧光检测系统的含内参的双重实时荧光RT-RAA方法(real time RT-RAA),第二种是结合侧流层析试纸条的RT-RAA 方法(LFSRT-RAA)。方法:(1)从GenBank数据库下载EV71和CVA16的基因序列,序列比对后选择VPI基因的保守区作为RAA引物和探针的设计区域,根据设计原则设计数对引物对,通过实时荧光法筛选最佳引物对,建立实时荧光RAA方法。(2)加入内参探针和内参质粒,建立含内参的双重实时荧光RT-RAA方法。(3)进行逆转录酶、反应温度的优化从而确定最佳反应条件。(4)依据实时荧光法筛选的最佳引物和探针序列,按照试纸条法要求进行修饰,建立侧流层析试纸条RT-RAA方法。(5)采用含EV71、CVA16的VP1保守基因的重组质粒标准品分析两种方法的灵敏性,采用其他肠道病毒分析特异性。(6)采用已建立的双重实时荧光RT-RAA方法、侧流层析试纸条RT-RAA方法和文献报道的实时荧光RT-qPCR方法检测445份手足口病疑似病例的临床标本,对方法的检测效能进行评价。结果:建立了 EV71和CVA16的含内参的双重实时荧光RT-RAA方法,在荧光检测仪中42℃反应30分钟。检测EV71和CVA16的检测限为47拷贝/反应和38拷贝/反应,特异性好,与其他肠道病毒无交叉反应。检测445份临床标本,与RT-qPCR相比,双重实时荧光RT-RAA检测EV71和CVA16的诊断灵敏度分别为92.3%和99.0%,诊断特异性分别为99.7%和100%。建立了可视化的EV71和CVA16的侧流层析试纸条RT-RAA方法,42℃反应30分钟,采用侧流层析试纸条对产物进行检测,检测EV71和CVA16的检测限均为91拷贝/反应,特异性好,与其他肠道病毒无交叉反应。检测445份临床标本,与RT-qPCR相比,侧流层析试纸条RT-RAA检测EV71和CVA16的诊断灵敏度分别为90.1%和94.9%,诊断特异性分别为99.7%和100%。结论:建立的EV71和CVA16双重实时荧光RT-RAA方法和侧流层析试纸条RT-RAA方法具有在偏远地区或者现场应用的潜力。第二部分探针介导的重组酶扩增应用于结核分枝杆菌rpoB基因突变检测目的:本研究基于探针介导的重组酶扩增(PDRA)建立快速检测结核分枝杆菌(MTB)rpoB基因突变的检测方法。方法:(1)针对rpoB基因的3个常见

关键词： 重症手足口病   临床特征   病原体   EV-71   儿童  

摘要： 目的:揭示湘西自治州人民医院重症手足口病(Severe hand,foot and mouth disease,SHFMD)的临床特征与病原体,为临床诊疗提供参考依据。方法:回顾性分析2014年1月至2019年12月湘西自治州人民医院的1506例重症手足病患者的临床资料,揭示重症手足口病患者的临床特征和病原体;并采用SPSS 20.0软件包,对相关因素进行logistic回归分析。结果:在1506例患者中,病原体检测率为94.56%(阳性1424例,阴性82例);男性占60.63%(913例),女性占39.37%(593例);3岁以下占92.96%(1400例)。各月份发病率如下,1月份占1.93%,2月份占1.66%,3月份占2.59%,4月份占16.53%,5月份占23.71%,6月份占16.93%,7月份占13.94%,8月份占3.78%,9月份占4.25%,10月份占6.05%,11月份占4.78%,12月份占3.85%,发病率超过10%的月份是4-7月。可提示病情恶化的7个指标包括,呼吸、心率、肢体抖动、体温、血糖、乳酸和脑钠肽;其中,呼吸与心率增快、肢体抖动、体温为临床参考指标,血糖、乳酸、脑钠肽为实验室参考指标。年度收治患者数如下,2014年473例,2015年79例,2016年423例,2017年283例,2018年155例,2019年11例。病原体分析结果提示,EV-71感染占66.09%(941例),Cox A16占8.43%(120例),其他病毒肠道病毒引起占25.48%(363例)。结论:(1)湘西自治州的重症手足口病发病人数多,3岁以下为主,男多于女。发病季节有两个高峰,分别为4-7月和9-12月。(2)重症手足口病有7个指标可提示病情恶化,即:呼吸、心率、肢体抖动、体温、血糖、乳酸、脑钠肽;其中,呼吸增快、心率增快、肢体抖动、体温为临床参考指标,血糖、乳酸、脑钠肽为实验室参考指标。(3)湘西自治州重症手足口病的主要病原体为EV-71,接种EV-71疫苗后重症手足口病的发病人数明显下降。(4)重症手足口病目前尚无特异性治疗措施,接种手足口病疫苗是最经济的策略,应继续鼓励接种EV-71疫苗。同时,建议开发多价疫苗。

关键词： 手足口病   重组柯萨奇病毒载体   多价肠道病毒候选黏膜疫苗   新生儿Fc受体   分子设计  

摘要： 手足口病是一种病毒性传播疾病，以手、脚、腹股沟和臀部的斑丘疹或水疱为特征，并伴有口腔溃疡性疼痛的儿童易患疾病，主要是由肠道病毒引起，以EV-A71、柯萨奇病毒A16(CV-A16)为主。目前上市的手足口病疫苗仅有EV-A71灭活疫苗，尚未见EV-A71黏膜免疫疫苗以及其它型别肠道病毒疫苗问世。黏膜是病原侵入的重要门户，EV-A71、CV-A16等手足口病患儿的排泄物、口鼻分泌物、唾液及疱疹液等带毒，可通过密切接触、飞沫、污染物品等途径，以口鼻咽部黏膜为入侵门户，会在黏膜及其淋巴组织中复制，复制的较大量的病毒通过吞咽等方式进入肠道，在肠道黏膜及淋巴组织进一步大量增殖，大量复制的病毒通过病毒血症及其它方式扩散至其它器官系统引发相应疾病。因此，口鼻咽的黏膜接种免疫，可以在诱导系统性免疫的同时，可在病毒的入侵门口提供黏膜免疫保障，以提高防护效果。　　新生儿Fc受体(FcRn)在人体广泛分布，可与Fc在特定条件下发生结合，可保护目的蛋白不被降解，且能够转运Fc融合抗原至黏膜下诱导黏膜免疫应答。我课题组近年来利用重组柯萨奇病毒B3(rCV-B3)减毒株作为递送系统重组表达外源抗原片段能够引起机体的免疫反应。为探索以rCV-B3为病毒载体、以Fc-FcRn为抗原黏膜转运方式、以口鼻咽黏膜接种方式，是否能够诱导机体系统性免疫和有效的黏膜免疫，本课题构建靶向FcRn的EV-A71抗原片段SP70的重组病毒，通过口鼻咽黏膜途径接种小鼠，以期能够有效诱导抗EV-A71中和抗体及黏膜免疫应答。并利用免疫信息学分析EV-A71、CV-A16的有效B细胞、Th细胞及CTL细胞表位，进行基于rCV-B3病毒载体和FcRn转运的多价肠道病毒候选黏膜疫苗分子设计与计算验证。为多价肠道病毒黏膜免疫疫苗的研究提供研究基础。　　方法：利用生物信息学方法构建SP70-Fc蛋白的三级结构，并模拟该蛋白对机体的免疫系统的激活情况。利用分子生物学方法将SP70-Fc序列插入CV-B3载体中以获得重组病毒质粒。将重组病毒转染vero细胞，并进行传代，利用WB检测蛋白的表达情况，并用电镜观察重组病毒的外部结构。同时通过空斑实验检测病毒增殖情况。将小鼠分为三组，分别为SP70-Fc、SP70-Fc-mut和空白组，三组分别接种105TCID50的F1代病毒以及相同体积的DMEM培养基，通过小鼠眼眶取血以检测血清中和抗体以及EV-A71特异性IgG，以及鼻腔灌洗液中的sIgA情况;在免疫六个月后检测血清中EV-A71特异性IgG情况以及免疫后各器官的病理变化情况。利用生物信息学方法预测EV-A71和CV-A16的抗原表位，通过适当的Linker将表位进行串联，再与Fc片段连接，对构建的多表位蛋白进行理化性质、三级结构以及免疫模拟的预测。　　结果：对SP70-Fc的预测结果表明能够形成正确的三级结构并能诱导免疫保护。对Fc片段的位点进行了突变，并扩增得到了SP70-Fc序列。成功构建了两株CV-B3-SP70-Fc重组病毒，在转染细胞后能够包装出病毒，在电镜下能够观察到病毒的外部结构。成功表达外源抗原片段，并能成功了获得多代病毒。重组病毒在通过口鼻咽黏膜接种免疫接种小鼠后，能够引起小鼠的免疫反应，在血清中能够检测到针对EV-A71病毒的中和抗体和IgG，以及在鼻腔灌洗液中能够检测到相应的sIgA。在免疫六个月后，在SP70-Fc组的小鼠血清中仍能检测到较高的EV-A71特异性IgG，且各器官均未表现出病理变化。构建的靶向FcRn的多表位串联的针对EV-A71和CV-A16的疫苗蛋白的预测结果显示能够诱导相应的免疫反应。　　结论：以CV-B3减毒株为载体，重组表达SP70-Fc片段的重组病毒通过口鼻咽黏膜接种免疫后能够成功包装出病毒，表达外源抗原片段，并能够更好的激活机体免疫反应产生有效的黏膜免疫并维持更长时间的特异性IgG而且有良好的安全性;利用CV-B3病毒载体靶向FcRn的重组抗原表达策略可能会成为新的疫苗设计方案。

关键词： 手足口病   肠道病毒EV71   结构蛋白VP1   多肽疫苗   贵州  

摘要： 目的:根据贵州省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患儿肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)分离株的病毒蛋白1(Viral Protein 1,VP1)结构序列研制多肽疫苗(epitope peptide vaccine,EPV)并研究其对小鼠的免疫保护作用。方法:选取2013年3月1日至2015年12月31日从贵州省HFMD患儿的咽拭子样本中分离到17株EV71毒株,其VP1氨基酸(Amino Acid,AA)序列一致(共297个AA),据此设计并合成多肽片段(一段为27个AA外,其余均为20个AA);用EV71感染HFMD病愈患儿的阳性血清,通过间接酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法筛选出免疫原性较好的多肽片段,制成EPV;将EPV免疫无特定病原体(Specific Pathogen Free,SPF)健康雌鼠,并设注射佐剂的对照组;将雌鼠的子代小鼠随机分为注射和不注射EV71病毒颗粒的2个亚组;注射2天后处死小鼠,分别取小鼠的骨骼肌、小肠和脑组织,通过逆转录聚合酶链式反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测病毒感染情况,同时苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色后显微镜下观察病理改变。结果:共设计并合成了19段含交叉序列的多肽片段,从中筛选出了3段免疫原性较好的多肽片段(P2:VSRALTHALPAPTGQNTQVS;P4:ALQAAEIGASSNA SDESMIE;P8:YANWDIDITGYAQMRRKVEL),制成了3种EPV并成功免疫雌鼠,取雌鼠的子代小鼠进行后续试验。RT-PCR结果显示,各感染病毒亚组的骨骼肌、小肠和脑组织中均能检测到EV71病毒,而未感染病毒亚组均检测不到。病理结果显示,接种佐剂母鼠的子代小鼠在感染EV71病毒后,骨骼肌、小肠和脑组织均出现明显的炎性改变;接种EPV母鼠的子代小鼠骨骼肌、小肠和脑组织的炎性改变明显减轻,3种EPV对EV71所致炎症的改善作用无明显差异;接种EPV母鼠的未注射病毒亚组子代小鼠骨骼肌、小肠和脑组织中均未检测到EV71病毒,也未观察到明显的炎性改变。结论:制备所得的3种VP1抗原表位EPV均具有良好的抗原性,通过免疫母鼠均能对小鼠产生较好的免疫保护作用,成功创建了一种新型的EV71 VP1抗原表位EPV。

关键词： 甘肃省   手足口病   流行特征  

摘要： 目的分析甘肃省2014-2018年手足口病流行特征及病原学构成特点,为制定手足口病防制措施提供依据。方法采用描述性流行病学方法对2014-2018年甘肃省手足口病资料进行统计分析。结果 2014-2018年甘肃省手足口病年均报告发病率为41.38/10万。2014-2017年发病率呈下降趋势,2018年发病率又明显升高。每年5-7月为发病第一高峰期,9-11月出现次高峰;主要发病人群为5岁以下的幼托和散居儿童,男女占比为1.47∶1;病原学监测2014年以CVA 16毒株为主,2015-2018年以其他肠道病毒为主。2014-2018年甘肃省手足口病高发地区为嘉峪关市、酒泉市和兰州市,报告发病率依次为96.13/10万、62.86/10万和59.37/10万。结论 2014-2018年甘肃省手足口病发病主要是5岁及以下儿童,发病具有时间和空间的聚集性,需重视病原监测及分型,在多发地区和发病高峰期,针对高发人群开展重点防控。