关键词:
紫外–高效液相色谱法
肠道病毒71型
柯萨奇病毒A组16型
牛血清白蛋白
蛋白质含量检测
摘要:
目的 建立一种定量检测EV71-CA16二价手足口病灭活疫苗中间品(纯化液、原液、浓缩液)的蛋白质含量的紫外高效液相色谱(UV-HPLC)方法。方法 采用UV-HPLC法并且使用体积排阻色谱柱对肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CA16)、牛血清白蛋白(BSA)等不同来源的蛋白质含量的进行检测。对该方法的检测范围、标准曲线通用性、重复性进行验证。结果 EV71病毒、CA16病毒和BSA原液这三种蛋白样品的线性回归方程的回归系数在0~20μg/mL均大于0.975,0~100μg/mL均大于0.985。BSA蛋白系列标准液的相对标准偏差(RSD)在2~20μg/mL含量范围内≤7.3%,20~100μg/mL含量范围内≤1.5%。同一批次的EV71蛋白样品的3条不同标准曲线计算值之间的RSD在0~20μg/mL含量范围内≤11%,20~100μg/mL含量范围内≤3%。3个批次的EV71或者CA16蛋白样品的标准曲线计算值之间的RSD在0~20μg/mL含量范围内均≤12.5%,20~100μg/mL含量范围内均≤3%。EV71和CA16蛋白含量计算值的RSD在2~10μg/mL范围内≤16.5%,10~20μg/m范围内≤9.5%,20~100μg/mL范围内≤4%。将同一BSA的峰面积代入EV71或CA16标准曲线计算出蛋白含量值,该计算值与BSA理论值的比值在20~100μg/mL范围内约为1.63,4~20μg/mL约为1,0~4μg/mL约为0.5。结论方法要求具有较大的线性范围,可检测不同浓度范围的原液(0~100μg/mL)和纯化液(0~20μg/mL)及浓缩液(>100μg/mL);具有标准曲线通用性、简便性,同一标曲适用于EV71、CA16、BSA等不同来源的蛋白质含量的检测;并且具有较好的重复性。