关键词： 手足口病   SARIMA模型   BATS模型   时间序列   认知  

摘要： 目的了解自贡市手足口病流行特征及发病规律,探索发病率与各种因素间的关系,构建自贡市手足口病时间序列预测模型并评价模型的拟合和预测效果,了解自贡市幼托儿童家长等重点人群对手足口病认知情况及EV71疫苗接种意愿,为合理配置医疗卫生资源,有目标、有重点的开展手足口病防控工作而提供科学依据。方法收集整理资料,利用发病率、构成比等指标对自贡市手足口病疫情进行流行病学描述。采用ArcGIS10.2软件,用不同颜色表示不同发病率,分别绘制2016～2021年自贡市各区县年发病率分布图;综合应用卡方检验、时间序列分析等方法对资料进行分析处理。查询文献,函询专家,自制问卷,对自贡市医生、教师及家长等重点人群进行问卷调查,了解重点人群对手足口病知晓情况、疫苗接种意愿及影响因素。对自贡市大型医疗机构、幼儿园及疫苗接种点等重点环境开展“环境+人群”手足口病动态监测。所采用的统计软件包括SPSS22.0、SAS9.1及R4.2.2。结果（1）2016-2021年自贡市累计报告手足口病10660例,年平均发病率为62.86/10万,重症数累计报告3例,重症率为0.03%,无死亡病例报告。除2018年与往年流行高峰不一致外,其余年份均呈现夏季和秋冬季两个发病高峰,发病率较高的地区主要集中在自流井区;男性发病率和女性发病率差异不具有统计学显著性（χ2=30,P>0.05）,发病率较高的年龄组主要集中在1～3岁年龄组,以二级以上医疗机构报告病例占比远高于基层医疗机构,占93.5%上;病原学监测阳性率为78.3%,其中EV71检出 163 份,占 11.46%;Cox A16 检出 414 份,占 29.11%;CoxA4 检出 6 份,占 0.42%;Cox A6检出181份,占12.73%;Cox A10检出52份,占3.66%;其他肠道病毒通用型检出606份,占42.62%。对健康儿童隐形进行常态化监测,阳性率为15.61%,重点场所外环境监测阳性率为5.13%,环境阳性样本阳性高峰呈现一定的季节性。（2）手足口病相关知识认知情况调查,总共发放问卷5900份,回收有效问卷5837份,回收有效率98.93%。手足口疾病及疫苗知识题有7道,参与调查人员应答题总数为40859道,总体知晓率为59.96%。问卷调查显示:小孩子年龄越小、居住地在城镇、按要求给孩子进行儿童保健的家长更愿意给孩子接种EV71疫苗,而教师和医务人员以及少数民族的接种意愿更低。（3）利用两种时间序列预测模型（SARIMA及BATS）对手足口病发病情况进行分析及预测,结果显示BATS与SARIMA能较好拟合自贡市手足口病发病情况,BATS预测较SARIMA更切合真实发病趋势。结论近年来自贡市手足口病疫情形势较为严峻,研究表明在做好基于临床病例监测报告的前提下,定期对幼托机构/学校、数字化接种门诊及医疗机构等重点场所开展定期的重点人群和外环境病原学监测,便于更好获取某一区域中肠道病原血清型的迁延特征,以弥补当前监测模式中的不足。同时针对其他因素对传染病报告、监测影响,采取不同时间序列模型对辖区内手足口病流行趋势进行预测,更好为手足口病防控参考,也能在为疫情防控以便于能在流行高峰之前强化重点人群的健康教育工作,切实有效降低发病率和重症率,降低疾病负担。

关键词： 手足口病   柯萨奇病毒A6型   灌胃感染   腹腔注射   RNA-Seq   动物模型  

摘要： 背景手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是一种常见的传染性疾病,由多种肠道病毒引起,主要影响五岁以下婴幼儿。手足口病主要通过消化道传播,症状包括发热、手、足、口部出现疱疹或斑丘疹等,也可引起神经系统、呼吸系统的严重并发症。人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)疫苗的推广使得HFMD病原体的流行谱发生了变化,柯萨奇病毒A6型(Coxsackievirus A6,CA6)成为主要流行病原体之一。与其他HFMD病原体相比,CA6引起的手足口病表现为非典型性病症,引起的皮疹分布更为广泛,皮损严重,疱疹多见甚至出现大疱疹、腐蚀性皮疹等,且常出现脱甲症。目前对CA6感染发病机制尚不清楚,也缺乏针对性的药物和疫苗,其中缺乏合适的动物模型是机制研究以及抗病毒药物和疫苗研发受到限制的重要原因。本研究旨在建立一种更具拟似性的CA6动物感染模型,采用7日龄的BABL/c小鼠,通过灌胃感染CA6病毒来模拟疾病的发生发展。通过观察感染动物的临床症状和死亡率,检测各个组织中病毒扩增情况和病理变化,确定该模型已成功建立,以及确定模型的主要生物学指标。基于该动物模型,我们进一步分析了机体对抗病毒感染的免疫调控机制:分析起抗病毒主导作用的细胞群,参与免疫反应的细胞因子;同时使用RNA-Seq技术筛选出感染后不同时间点血液和后肢肌肉中差异表达的基因,探究机体感染与致病相关的分子动态表达谱。本研究建立的CA6小鼠感染模型,为疾病的发病机理和治疗研究提供了新的实验模型和研究方法。我们基于模型对CA6病毒感染的免疫机制的研究,有望为相关疾病的预防和治疗提供新的思路和靶点,从而提高对手足口病的认识和防治水平。相信本研究的结果将对于HFMD及其他相关传染病的防治和控制产生积极的影响,为促进全球公共卫生事业的发展作出贡献。方法 采用7日龄BALB/c小鼠,通过灌胃感染或腹腔注射感染方式,灌胃感染1×106.5TCID50 CA6病毒,腹腔注射1 × 104.5TCID50 CA6病毒。灌胃和注射体积均为100μl。对照组分别灌胃或腹腔注射等体积的PBS。每天观察动物感染后的临床症状、死亡率及体重变化。于感染后第1天、3天、5天和7天分别取材血液、肌肉、心、肝、肺、胃、小肠、大肠、大脑、脑干和脊髓,利用荧光实时定量PCR探针法测定各组织内病毒载量,对比病毒在小鼠体内各个组织的扩增情况;同时利用H&E检测各组织病理变化,确定病理损伤主要组织;检测不同时间点免疫细胞和细胞因子的变化情况,分析免疫调节机制。同时,感染后第3天、5天和7天分别取材血、肌肉、脑、胸腺和脾组织,通过RNA-Seq技术分析不同时间点差异表达基因,筛选CA6感染导致手足口病的致病相关基因和免疫调节基因。结果灌胃感染CA6病毒的小鼠临床症状表现为,活动减少、后肢渐行性瘫痪,感染4天后小鼠体重迅速下降,第8天小鼠全部死亡。组织内病毒载量测定发现病毒可经血液扩散至各个组织器官并进行复制,其中以血液、肌肉、脊髓中病毒载量最高。病理学观察发现CA6病毒感染导致小鼠的肌肉、小肠和大肠等组织发生损伤,但损伤程度略有不同。在CA6感染小鼠模型中,病毒的主要复制部位为后肢骨骼肌,骨骼肌内病毒载量远高于其他组织;骨骼肌的主要组织病理学表现为肌肉纤维断裂、坏死,大量炎细胞浸润,且病毒抗原呈弥散性分布。经过流式细胞术检测感染后中性粒细胞与单核细胞在外周血中的占比,可以发现灌胃感染引起免疫细胞的数量升高对抗CA6的入侵,在此过程中天然免疫发挥了主导作用;免疫组化与免疫荧光提示感染后期肌肉组织中存在大量中性粒细胞与巨噬细胞的浸润,且造成肌肉细胞发生变性坏死;脊髓中中性粒细胞也发生了浸润,提示神经组织也受到病毒侵染;血清中促炎细胞因子IL-6、IL-18、IFN-γ浓度总体均显著性升高,结合血液中的中性粒细胞数量升高,提示感染后小鼠出现了强烈的炎症反应。通过对CA6病毒感染组小鼠血液、肌肉、脑、胸腺和脾进行RNA-Seq测序分析,分别统计出同一组织不同时间点共同变化的差异基因,发现:血液中有1399个共有差异基因,肌肉中有2674个,脑中有4251个,胸腺中有1676个,脾中有1586个。对这些共有差异基因进行功能分析发现:在血液和后肢肌肉中,机体对病毒的反应(response to virus)相关基因处于激活表达状态。在血液中,差异表达基因还富集于细胞因子介导的信号通路、对IL-1β的反应等免疫相关通路。尤其是在抵御病毒和细菌入侵方面,基因的差异表达显著富集于免疫相关的生物学过程。此外,DEGs还涉及到代谢和免疫反应相关的分子功能,如ATP代谢过程、对干扰素β((interferon-beta))的反应、调节先天免疫和适应性免疫、正向调节细胞因子产生等等。KEGG分析表明血液

关键词： 手足口病   流行病学特征   预防控制  

摘要： 目的：分析手足口病的流行病学特征与预防控制措施。方法：从2022年1月—2023年1月本县各医疗卫生机构上报的传染病信息中获取60例手足口病患儿病例资料，统计分析手足口病的流行病学特征，并通过相关研究文献资料、专题会议及函询研究专家等方式来制定预防措施。结果：分析发现，男患儿发病率高于女患儿，发病年龄在3岁以下居多，病原学特征为柯萨奇病毒A6型、肠道病毒71型居多，临床表现主要为手足疹，主要传播途径多为呼吸传播及接触传播，地区分布主要集中在农村地区，发病季节主要多为夏季、春季。结论：对手足口病的流行病学特征进行分析，并采取积极的预防、控制措施，能有效治疗患儿及避免手足口病大范围传播。

关键词： 手足口病   鱼腥草   微生态制剂   肠道微生物组学   血液代谢组学  

摘要： 手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)是由肠道病毒71型(Enterovirus A71,EV71)、柯萨奇病毒(Coxsackievirus,CV)的A组16型(CA16)等主要病原体引起的以手足口等部位疱疹为典型症状的丙类传染病,患者多为5岁以下婴幼儿,2020年前该病占到5岁以下儿童疾病的90%以上,会造成短时间内大范围流行。自手足口疫苗上市以来,虽然EV71感染率显著下降,但2021年全国手足口病发病率仍为96.08/10万,主要是CA16病毒感染所致。针对手足口病主要病原及患者特点,本研究拟运用相关生物学技术对手足口病防治开展研究。针对婴幼儿肝肾发育不够成熟,对婴幼儿用药必须慎重的特点,首先应用细胞模型对团队筛选出来的药食两用植物鱼腥草的主要成分抑制引起手足口病重症的主要病原体EV71病毒作用进行了研究。研究发现鱼腥草具有抑制病毒复制作用(IC=3.22 g/L)、抗病毒吸附作用和抑制病毒穿入作用,主要成分中槲皮素具有抑制病毒复制作用(IC=0.403 mg/m L)、作用60 min时表现出抑制病毒穿入作用,芦丁作用60 min时表现出抑制病毒穿入作用和预处理阻滞病毒生长作用,绿原酸作用60 min时表现出抑制病毒穿入作用,金丝桃苷表现出预处理阻滞病毒生长作用和抗病毒吸附作用。其次,采用昆明鼠乳鼠动物模型对鱼腥草水提液和由乳酸菌、长双歧杆菌组成的微生态制剂对近年来引起手足口病的主要病原体CA16开展防治效果研究。本研究以腹腔注射病毒的方式构建动物模型,以灌胃的方式给药,以乳鼠的临床症状、死亡情况和体重为研究指标,通过研究发现,各种浓度的鱼腥草水提液和微生态制剂预防和治疗对CA16病毒感染均具有一定的作用,其中临床症状得分和体重变化差异不显著,但生存率的改变却有着显著性的差异。最后,为进一步探索对手足口病具有防治作用的微生态制剂和相关物质奠定基础,开展了手足口病肠道微生物组学和血液代谢组学研究。对采集的健康儿童和手足口病患儿粪便,同时在二代Nova Seq 6000平台和三代Pac Bio Sequel平台使用16S r DNA测序技术测定肠道微生物群,从门、科、属和种水平上分析了两个平台的16S r DNA序列的不同结果,结果表明两组间存在显著差异,手足口病患儿肠道微生物群的多样性和丰度低于健康儿童。Roseburia inu Linivorans、Romboutsia timonensis和Ruminococcus bicircu Lans三个物种在健康儿童中比在手足口病患儿中更丰富,表明这三个物种可能被用作调节手足口病病人肠道微生物群的益生菌。对采集的健康儿童和手足口病患儿静脉血取血清,通过液相色谱-质谱联用分析仪对正负离子谱进行检测,查询相关数据库,根据独立测试的p值,对有组间显著性差异的物质根据准确的分子离子质量进行鉴定,鉴定出6个潜在的生物标志物。其中与健康对照组相比,手足口病患儿的前列腺素A1(PGA1)、白三烯C4、12(S)-HPETE和6-β-氢化皮质醇增加,手足口病患者的L-苏氨酸和L-胱氨酸降低,因此对这6种物质具有改变作用的物质具有潜在开发成为防治手足口病功能性食品或药物的能力。通过肠道微生物组学和血液代谢组学的研究同时也为手足口病发病机制研究、手足口病发病预测、相关检测标志物的发现奠定了基础。总之,鱼腥草水提液对EV71和CA16病毒引起的手足口病防治具有一定的作用,由乳酸菌、长双歧杆菌组成的微生态制剂对CA16病毒引起的手足口病防治具有一定的作用,肠道微生物组学和代谢组学研究结果为今后手足口病防治微生态制剂的开发、相关功能物质的发现提供了理论支持。

关键词： 重症手足口病   肠道病毒71型   巨噬细胞极化   炎症因子  

摘要： 【目的】　　1.探讨巨噬细胞炎症性极化与重症手足口病的相关性。　　2.探讨巨噬细胞是否是EV71感染所致炎症因子风暴的主要炎症因子来源细胞，并验证IFN-γ是否能作为HFMD重症发展早期的预测因子。　　【方法】　　1.建立小鼠HFMD重症模型：分别向3、6、9日龄的小鼠中腹腔注射EV71病毒液，对照组注射同等剂量的DMEM培养基。注射病毒液或者培养基后连续观察小鼠的生存情况以及症状健康评分情况，并选取最佳日龄小鼠模型组并开展后续动物实验。　　2.动物模型中初步明确巨噬细胞与重症HFMD炎症因子风暴发生相关性　　(1)3日龄乳鼠感染EV71后，濒死的小鼠立即进行断颈处死，其它小鼠在感染14天后按同样方法处理并收集肺、骨骼肌等组织器官。使用HE染色方法观察肺及骨骼肌组织的病理变化，确认重症HFMD小鼠组织部位发生炎症损伤。　　(2)使用荧光定量PCR（qPCR）检测IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-1β在肺、骨骼肌组织中的表达变化，以确认重症HFMD炎症因子风暴的发生。　　(3)采用免疫组化方法（IHC）检测巨噬细胞的标记物（F4/80）在肺及骨骼肌组织中的表达情况，确认巨噬细胞与重症HFMD组织部位炎症损伤有关。　　3.体外细胞实验进一步明确EV71感染导致的巨噬细胞炎症性极化是炎症因子风暴发生的重要原因。　　(1)分离腹腔来源的巨噬细胞，使用不同剂量EV71病毒液攻毒后观察细胞形态变化，验证EV71感染与巨噬细胞极化相关性。　　(2)使用上述巨噬细胞进行体外实验。设置空白组（对照组）、EV71组、IFN-γ+EV71组，分别在不同时间段观察各细胞组形态变化。利用qPCR检测EV71感染组中不同时间段（6h、12h、24h、48h）炎症因子（IFN-γ、IL-1β、TNF-α、IL-6）的mRNA表达变化，进一步验证巨噬细胞是否为EV71感染所致重症HFMD中过量炎症因子的主要分泌细胞。　　(3)使用ELISA方法检测EV71组、IFN-γ+EV71组中不同时间段炎症因子（IL-6、TNF-α、IL-1β）的表达水平变化;并采用Spearman相关性分析验证在IFN-γ+EV71组中不同时间内炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β与IFN-γ的相关性，初步筛选在HFMD临床重症发生早期中有预测价值的炎症因子。　　4.进一步验证IFN-γ在重症HFMD发展早期的作用。利用ELISA检测3日龄乳鼠在接种EV71病毒后1周内每天IFN-γ血清学水平变化，明确IFN-γ是否能作为HFMD重症发展早期的预测指标。　　【结果】　　1.3日龄乳鼠接种EV71病毒后第2天，表现为嗜睡、活动量少等轻症表现，而在第3天小鼠陆续出现弓背、后肢无力或瘫痪等重症表现，后续全部死亡。EV71感染6日龄小鼠后期只有2只小鼠死亡，而9日龄感染小鼠中刚开始出现活动量减少、精神状态萎靡，随后症状恢复，最后与对照组小鼠无差别。遂选取3日龄乳鼠作为本课题中的小鼠模型对象，并且以接种EV71病毒后第3天的小鼠模型作为重症组、第2天的小鼠模型作为轻症组，正常小鼠作为对照组。　　***染色观察重症组的肺、骨骼肌组织，结果显示组织均严重损伤并伴有大量炎症细胞浸润;免疫组化检测肺及骨骼肌组织中巨噬细胞标记物（F4/80）的表达，较轻症组而言，重症组的肺及骨骼肌组织中出现明显的棕褐色颗粒物;qPCR方法检测动物模型各组中肺及骨骼肌组织中IFN-γ、IL-6、TNF-α和IL-1β的表达水平，重症组中炎症因子较轻症组及对照组明显升高（P＜0.05）。　　***71攻毒腹腔来源的巨噬细胞，结果显示随着病毒滴度增加，巨噬细胞表现为伸出伪足，并随时间变化伪足更明显。表明EV71感染时可诱导巨噬细胞炎症型极化（Ⅰ型）。　　4.细胞实验中，分别在6h、12h、24h观察到IFN-γ+EV71组及EV71组中巨噬细胞的形态，较对照组而言，均伸出伪足。随时间变化IFN-γ+EV71组中细胞伪足较EV71组更明显。qPCR检测各组中24h时间点的细胞分型标志物iNOS及Arg-1表达，结果显示IFN-γ+EV71组及EV71组两组中均以iNOS升高为主，前者较后者表达明显（P＜0.05）。进一步表明EV71感染时诱导巨噬细胞Ⅰ型极化。　　***检测在EV71组细胞中不同时间段炎症因子的mRNA表达变化，实验结果显示EV71感染导致巨噬细胞分泌大量IFN-γ、IL-6、TNF-α、IL-1β等促炎因子。进一步验证了巨噬细胞是EV71感染重症HFMD中过量炎症因子主要的分泌细胞。　　***方法检测IFN-γ+EV71组及EV71组分别在6h、12h、24h、48h中炎症因子（IL-6、TNF-α、IL-1β）的表达水平，结果显示炎症因子随时间进展，IFN-γ+EV71组中炎症

关键词： 手足口病   流行性腮腺炎   猩红热   小波分析   运气学说  

摘要： 目的: 收集整理2005-2018年广东省三种常见小儿温疫类疾病(手足口病、流行性腮腺炎、猩红热)的发病资料。基于运气学说,探讨五运六气变化对广东省手足口病、流行性腮腺炎、猩红热发病规律的影响,以期为广东省相关传染病的预防及治疗提供思路。 方法:1、整理2005-2018年广东省手足口病、流行性腮腺炎、猩红热发病资料并建立 数据库,包括年发病人数、年发病率、月发病人数、月发病率等。 2、分别对广东省手足口病、流行性腮腺炎、猩红热三种温疫类疾病进行小波分析及统计学分析。采用SPSS 22.0,Matlab2016b及Origin2018完成以上统计分析。 3、对三种温疫类疾病的发病特点进行分析,探索广东省手足口病、流行性腮腺炎、猩红热的发病规律特点,并在运气学说的指导下,分析其与五运六气的关联性。 结果: 1.广东省手足口病发病包含了时间尺度为74个月、50个月及38个月的3个周期变化规律,在74个月时间尺度的周期变化最为明显,为其第一主周期。在74个月时间尺度上,发病率的平均周期为12个月;在50个月时间尺度上平均周期为8-9个月;在38个月时间尺度上平均周期为7-8个月。从五运而言,14年间广东省手足口病最高发病年份为2014年,即甲午之年,从六气而言,广东省手足口病多发于三之气时段。 2.广东省流行性腮腺炎发病包含了时间尺度为74个月及37个月的2个周期变化规律,在74个月时间尺度的周期变化最为明显,为其第一主周期。在74个月时间尺度上,发病率的平均周期为12个月;在37个月时间尺度上,发病率的平均周期为6个月。从五运而言,14年间广东省流行性腮腺炎最高发病年份为2011年,即辛卯之年,从六气而言,广东省流行性腮腺炎多发于三之气时段。 3.广东省猩红热发病包含了时间尺度为71个月、63个月及83个月的3个周期变化规律,在71个月时间尺度的周期变化最为明显,为其第一主周期。在71个月时间尺度上,发病率的平均周期为11-12个月;在63个月时间尺度上平均周期为10-11个月;在83个月时间尺度上平均周期为13-14个月。从五运而言,14年间广东省猩红热最高发病年份为2017年,即丁酉之年,从六气而言,广东省猩红热多发于终之气时段。 结论: 广东省手足口病、流行性腮腺炎、猩红热的发病特点与五运六气存在密切的关联性。三种温疫类疾病的发病周期具有多周期及多周期相互叠加特征,且均存在与运气学说相近的周期变化规律。小波分析能够为揭示运气学说的科学性提供一定的佐证,也能为温疫类疾病的规律探寻提供新的途径。

关键词： 手足口病   气象因素   交互作用  

摘要： 目的 分析贵阳市5岁及以下儿童手足口病流行情况及气象因素间的交互作用，为预警监测及防控提供科学依据。方法 采用R4.0.2软件对2013—2021年贵阳市5岁及以下儿童手足口病流行特征进行描述性统计，利用广义相加模型分析气象因素与手足口病交互影响。结果 2013—2021年贵阳市累积报告手足口病209 783例，平均发病率76.82/10万。发病有明显的周期性和季节性，每年发病出现2个高峰，3—5月出现第一高峰，平均发病率为132.91/10万，9—10月出现次高峰，平均发病率为98.63/10万。气温差、平均气温与发病风险均呈倒“V”型，气温差峰值为9.0℃(RR=1.127,95%CI:1.101～1.713)，后呈负向相关趋势；平均气温从4.4℃开始，峰值在19.0℃左右出现(RR=1.462,95%CI:1.334～1.823)，随后逐渐降低。手足口病发病风险随着日平均风速0.78～2.70 m/s时，正相关，当日平均风速从2.70 m/s增至5.40 m/s时，进入平台期，7.10 m/s达到峰值(RR=1.883,95%CI:1.584～2.231)。平均气温在19.0℃左右，且日平均风速高(0.78～7.10 m/s)发病风险大；气温差在9.0℃同时湿度差较低时，发病风险较高，气温差低同时湿度差大时，发病风险低。结论 平均气温、日平均风速、气温差等气象因素与手足口病的发病密切相关，呈非线性且有一定的滞后性，气象因素两两存在协同交互效应，对手足口病的早期防治预警监测等应综合考虑气象因素。

关键词： 免疫球蛋白   超敏C反应蛋白   小儿手足口病  

摘要： 目的：探究免疫球蛋白和超敏C反应蛋白在小儿手足口病中的应用价值。方法：文中抽取50例小儿手足口病患儿作为此次研究对象，2020年12月～2022年10月为病例选取起始时间，将其设为观察组；选择同期进行体检的50例健康儿童作为对照组，采用免疫比浊法对观察组以及对照组免疫球蛋白和超敏C反应蛋白进行检测。结果：进行分别检测后观察组IgG、IgM、IgA、Hs-CRP水平和对照组相比，P<0.05，两组数据具有统计学意义。结论：对患儿进行免疫球蛋白和超敏C反应蛋白检测可有效鉴别小儿手足口病，为临床诊断提供依据。

关键词： 手足口病   新型冠状病毒   穿透素-3  

摘要： 研究背景及目的手足口病(Hand-foot-mouth disease,HFMD)是由多种肠道病毒感染引起的传染性疾病,肠道病毒71型(Enterovirus A71,EV-A71)、柯萨奇病毒A16型(Coxsackievirus A16,CA16)和柯萨奇病毒 A10 型(coxsackievirus A10,CA10)是主要的致病病毒。为了深入了解手足口病的致病机制,本研究利用手足口小鼠感染模型,通过转录组、蛋白质组和磷酸化蛋白质组等组学研究手段,对感染动物的肌肉组织,从基因表达、蛋白水平及磷酸化位点改变等进行不同角度分析,研究三种病毒感染导致的机体免疫反应的共同变化因素。同时,我们利用严重急性呼吸综合征冠状病毒 2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)小鼠感染模型,通过蛋白质组学及磷酸化蛋白质组学,分析SARS-CoV-2感染后小鼠多个器官中参与新冠肺炎的关键分子。最终,我们发现参与天然免疫的蛋白PTX3(Pentraxin 3)在机体对抗病毒侵染时具有特殊作用。PTX3是一种可溶性识别分子,可识别多种外源微生物和补体成分,在细菌、真菌和病毒感染引发的天然免疫中都发挥重要作用。针对PTX3对炎症反应作用的多样性,本文重点研究其在EV-A71感染小鼠引起的肌炎和在SARS-CoV-2感染小鼠导致的严重肺炎中的重要影响。方法1)7日龄Balb/c小鼠腹腔注射100 μl 100 LD50 EV-A71病毒,于感染后第2天和第5天分离肌肉进行蛋白质组及磷酸化蛋白质组分析。2)7日龄ICR小鼠分别腹腔注射100 μl 100 LD50 EV-A71,CA16或CA10,于感染后第2天分离血液、肌肉、脾和胸腺,检测病毒载量并进行RNA-Sequencing测序分析。3)10 周龄 K18-hACE2 小鼠滴鼻感染 50 μl 1×105 TCID50 SARS-CoV-2,于感染后第5天分离大脑皮质,海马,丘脑,肺和肾脏进行蛋白质组及磷酸化蛋白质组分析。4)10日龄C57小鼠腹腔注射感染100μl 100 LD50 EV-A71病毒,6-12周龄hACE2 小鼠滴鼻感染 50 μl 1×105 TCID50 SARS-CoV-2,采用 qRT-PCR 及 ELISA 技术检测病毒感染后组织中PTX3含量变化,免疫荧光检测产生PTX3的细胞来源。5)ELISA检测PTX3与EV-A71结合能力;细胞中和实验研究PTX3对病毒感染细胞的保护作用。6)10日龄C57小鼠与PTX3-/-小鼠分别经腹腔注射感染100 μl 100 LD50 EV-A71病毒,C57治疗组每日腹腔注射200 μg/kg PTX3蛋白,PTX3-/-治疗组每日腹腔注射400 μg/kg PTX3蛋白观察记录临床表现,于感染后第3、5、7天取材血液及后肢骨骼肌,qRT-PCR检测病毒载量,通过H&E、免疫组化、流式细胞术、MPO含量检测和luminex检测炎性细胞和促炎因子表达,从而比较分析机体炎症反应。通过免疫荧光及qRT-PCR检测肌肉组织C3沉积和FH聚集,探究病毒感染过程中PTX3与补体互作调节炎症反应的作用机制。7)6-12周龄hACE2与hACE2&PTX3-/-鼠滴鼻感染50 μl 1×105 TCID50 SARS-CoV-2,观察记录体重变化,于感染后3、5和7天取材血液和肺组织,qRT-PCR检测病毒载量,H&E观察病理损伤,探究PTX3在SARS-CoV-2感染中的作用。8)10日龄C57小鼠、PTX3-/-小鼠与PSGL-1-/-小鼠分别经腹腔注射感染100 μl 100 LD50 EV-A71病毒,感染0天起每日腹腔注射P-Selectin拮抗剂(2mg/kg),观察记录小鼠临床评分,体重和生存率,于感染后第3、5、7天取材血液及后肢骨骼肌,qRT-PCR检测病毒载量,通过H&E和MPO含量检测观察炎症发生情况。探究PTX3与PSGL-1互作在病毒感染中的作用机制。结果1)利用手足口小鼠感染模型,通过蛋白质组及磷酸化蛋白质组分析小鼠感染EV-A71病毒后不同时间点的差异表达蛋白及磷酸化位点,根据模糊C均值聚类方法将差异表达蛋白及磷酸化位点以FC值划分为6个趋势,其中在持续上调的趋势中检测出162个差异表达蛋白和110个差异表达磷酸化位点,发现PTX3蛋白在病毒感染后持续上调表达。转录组分析EV-A71、CA16、CA10三种病毒共有差异表达基因,发现血液中共有554个,肌肉中共有2027个,脾脏中共有2623个,胸腺中共有1348个。而Ptx3基因在三种病毒感染后的肌肉组织中均表达上调。表明PTX3可能是手足口病病毒感染导致的共性表达上调因子。2)利用S