关键词： 脐带间充质干细胞   外泌体   3D培养   宫腔粘连  

摘要： 研究背景:宫腔粘连(IUA)会导致流产和不孕,子宫内膜损伤是IUA的起始阶段,间充质干细胞及其来源外泌体在IUA治疗中显示出显著的抗纤维化和促进子宫内膜再生的潜力。然而,由于移植后细胞活性低和停留时间短,以及间充质干细胞来源外泌体分泌量低且内部活性成分低等原因,传统二维贴壁培养间充质干细胞(2D-MSCs)及其来源外泌体(2D-MSC-Exos)的临床应用受到限制。将间充质干细胞与海藻酸盐水凝胶结合进行三维微囊化间充质干细胞培养(3D-MSCs)为解决上述问题提供新的思路。研究目的:构建微胶囊培养体系,探索3D-MSCs及其来源外泌体(3D-MSC-Exos)对IUA的治疗作用并进一步探究其分子作用机制。研究方法:1、研究第一部分构建微囊化干细胞包封体系并对干细胞进行包封培养,通过扫描电镜(SEM)等对微胶囊进行表征,通过活细胞/死细胞/凋亡细胞试剂盒、流式检测以及CCK-8试剂盒等方法检测3D-MSCs活力和增殖能力的变化,通过流式检测、免疫荧光和qRT-PCR等方法检测3D-MSCs多能性转录因子表达的改变。构建损伤子宫内膜基质细胞(EndoSCs)模型,在细胞层次验证2D-MSCs及3D-MSCs对损伤EndoSCs的治疗作用。构建IUA的动物模型,宫腔灌注2D-MSCs及3D-MSCs进行治疗,后通过HE染色检测模型动物子宫内膜结构的改善,通过Masson染色及免疫组化检测模型动物子宫内膜纤维化的改变,最后通过合笼实验检测模型动物生育力的改善。2、研究第二部分提取并鉴定间充质干细胞来源外泌体,构建损伤EndoSCs模型,在细胞层次验证2D-MSC-Exos及3D-MSC-Exos对损伤EndoSCs的治疗作用。构建IUA的动物模型,尾静脉注射2D-MSC-Exos及3D-MSC-Exos进行治疗,通过HE染色检测模型动物子宫内膜结构的改善,通过免疫组化检测模型动物子宫内膜血管生成标记物CD31表达的改变,最后通过合笼实验检测模型动物生育力的改善。3、研究第三部分通过TGF-β1构建子宫内膜纤维化的细胞模型,验证2D-MSC-Exos及3D-MSC-Exos的作用效果及效果的差异性;通过对3D-MSC-Exos和2D-MSC-Exos中miRNA表达的差异性分析结合相关文献选定miR-219-5p为研究目标,在临床标本和纤维化细胞模型中检测miR-219-5p表达的改变,通过高表达miR-219-5p验证其对纤维化EndoSCs的作用效果。研究结果:1、研究第一部分中对微胶囊的SEM检测提示微胶囊形态规整,表面分布有相互连通的孔隙,能够允许干细胞分泌的治疗性物质进出,活细胞/死细胞/凋亡细胞试剂盒和流式检测的结果提示3D-MSCs的活力好,CCK-8实验结果提示3D-MSCs的增殖能力显著高于2D-MSCs,流式检测、免疫荧光和qRT-PCR的结果提示3D-MSCs多能性转录因子的表达高于2D-MSCs;损伤EndoSCs实验结果显示,3D-MSCs较2D-MSCs能够更好的修复EndoSCs的形态,通过流式检测提示3D-MSCs较2D-MSCs能够显著降低损伤EndoSCs的凋亡增加其存活率;通过宫腔灌注干细胞对IUA小鼠模型进行治疗,HE结果显示3D-MSCs较2D-MSCs能够更好的增加子宫内膜的厚度及腺体数量,Masson染色的结果显示3D-MSCs较2D-MSCs能够更好的降低子宫内膜纤维化面积的比例,免疫组化的结果显示3D-MSCs较2D-MSCs能够更好的降低子宫内膜纤维化标志物α-SMA和I型胶原的表达,合笼实验的结果提示3D-MSCs较2D-MSCs能够更好的恢复小鼠的生育力。2、研究第二部分首先对干细胞来源外泌体进行定量及表征,结果提示3D-MSC-Exos的分泌量较2D-MSC-Exos显著增加。损伤EndoSCs实验结果显示,3D-MSC-Exos较2D-MSC-Exos能够更好的修复EndoSCs的形态,通过流式检测提示3D-MSC-Exos较2D-MSC-Exos能够显著降低损伤EndoSCs的凋亡增加其存活率,Western Blot检测结果提示3D-MSC-Exos可能通过PTEN/AKT通路对损伤EndoSCs产生治疗作用;通过尾静脉注射外泌体对IUA小鼠模型进行治疗,HE结果显示3D-MSC-Exos较2D-MSC-Exos能够更好的增加子宫内膜的厚度及腺体数量,免疫组化的结果显示3D-MSC-Exos较2D-MSC-Exos能够更好的提升子宫内膜血管标记物CD31的表达,合笼实验的结果提示3D-MSC-Exos较2D-MSC-Exos能够更好的恢复小鼠的生育力。3、研究的第三部分首先通过TGF-β1构建了子宫内膜的纤维化细胞模型,研究结果提示TGF-β1处理能够降低EndoSCs的迁

关键词： 宫腔镜膨宫系统   恒压   宫腔粘连   宫腔镜宫腔粘连分离术   并发症  

摘要： 背景宫腔镜因其相对安全且微创的特点,广泛应用于宫内疾病的诊治。为提供清晰的手术视野,膨宫系统起着重要作用。目前临床上常用的液体膨宫泵,其蠕动式的工作方式易造成手术视野抖动,影响手术医生术中的判断,使其误判手术视野的抖动是膨宫液吸收过快造成的。且如果手术过程中未能及时发现膨宫液耗竭,液体膨宫泵容易将过多的气体经子宫内膜或肌层暴露的血管泵入患者体内,增加了静脉气体栓塞的风险。而重力膨宫利用膨宫液液面与子宫之间的高度差产生的压力将膨宫液注入宫腔,液体的线性流动不易造成手术视野抖动,且膨宫液耗竭时,相同大气压无外力干预,也无泵入空气的风险。然而传统的重力膨宫需要人工调节膨宫液袋的高度,且宫腔镜术中,随着膨宫液的消耗,膨宫液液面与子宫之间的高度差逐渐减小,无法维持膨宫压力的恒定。因此本研究拟设计研发一种自动恒压无泵重力膨宫装置,通过程序控制机械自动升降以提供恒定的膨宫压力,同时具备膨宫液监测功能,为后续临床应用奠定基础。目的基于重力膨宫的原理,研发一种可自动调节膨宫液液面高度、提供恒定膨宫压力的装置,并从实验室和临床应用两方面验证该装置的有效性和安全性;利用该装置的膨宫液监测功能,分析影响宫腔镜术中膨宫液差值的相关因素,以提醒手术医生及时采取干预措施,提高手术的安全性。方法(1)装置研发:(1)膨宫液袋内液平面下降规律的探究:利用非接触式液位传感器测量膨宫液液面初始位置并标记,然后每放出100m L液体,标记并测量变化后的液平面位置,直至膨宫液使用完毕,重复测量3次,对膨宫液剩余量和膨宫液袋内液平面高度的测量数据进行拟合,探究最适合的拟合曲线并输出方程式,后续将其编写入软件系统。(2)装置设计:a定位装置,利用激光指示器确定患者子宫的大致位置(即“零点”),作为计算液面上升高度的参考起点。b液体称重装置:用于了解膨宫液的入量、剩余量及出量;辅助计算起始膨宫液面需要上升的高度以及后续宫腔镜术中液面高度如何根据膨宫液余量上升。c软件系统:根据实时的膨宫液重量、设置的膨宫压力值及“零点”位置,计算膨宫液液面目标高度并发出指令;根据膨宫液袋内液平面下降规律发出指令;计算并监测膨宫液差值和差值速率,当以上指标达到预先设置的警戒值时语音报警。d升降装置:根据软件发出的指令,将膨宫液上升或下降至目标高度以提供膨宫压力。(3)装置验证:通过人为放出膨宫液袋内液体模拟宫腔镜术中膨宫液体的消耗情况,根据膨宫液剩余重量分为6000 m L组、4000 m L组和2000 m L组,每设置一个膨宫压力,每组需测量一次膨宫液液面距离地面的高度,3组全部测完为一个循环,重复三个循环取平均值,评估80至140 mm Hg压力范围内,3组间的膨宫压力是否存在差异,以验证装置能否提供恒定的膨宫压力。(2)实验室验证:研究组使用自动恒压无泵重力膨宫装置,对照组使用液体膨宫泵,根据膨宫液是否流动分为静止状态和流动状态,比较80至140 mm Hg压力范围内,两组提供的膨宫压力间的差异,以验证重力膨宫装置的有效性。通过采用不同型号的宫腔镜,并且控制出水口的开放程度来模拟液体流动状态,共分为五个等级,液体泄漏程度逐渐增大:等级一安装一次性静脉注射针;等级二和三安装带有4.9 mm外鞘的宫腔镜,进水孔全开,出水口分别为半开或全开;等级四和五安装带有5.4 mm外鞘的宫腔镜,进水孔全开,出水口分别半开或全开。(3)临床验证:前瞻性纳入2021年10月至2022年05月于中南大学湘雅三医院就诊的中重度宫腔粘连(Intrauterine adhesions,IUAs)患者200例,并随机分配至研究组或对照组。比较两组手术视野的抖动情况和双侧宫角的清晰程度,评估装置的有效性;比较两组患者的手术时长、膨宫液入量和差值、患者术后腹痛程度及血红蛋白(Hemoglobin,Hb)和血清电解质等指标,评估装置的安全性。(4)因素分析:收集第3部分纳入的IUAs患者的临床资料包括年龄、孕次、产次、流产次数、体重指数(Body mass index,BMI)、病程、就诊类型(初诊或复诊)、粘连程度、平均动脉压(Mean arterial pressure,MAP)、宫腔深度、宫腔宽度、子宫内膜腺体开口密度、子宫肌层损伤情况、手术视野抖动情况、术中宫颈漏液情况、术后阴道流血情况、手术时长、膨宫液入量,并与差值进行单因素或多因素线性回归分析,探究宫腔镜宫腔粘连分离术(Hysteroscopic adhesiolysis,HA)中膨宫液差值的影响因素。结果(1)装置研发:(1)膨宫液袋内液平面下降的规律:将膨宫液剩余量和膨宫液袋内液平面高度的测量数据进行曲线拟合,其中三次模型拟合度最高(R=1),最终得出的拟合曲线方程为h=9×10m -10m +6.6×10m+0.4514(h为膨宫液袋内液平面高度,单位

关键词： 宫腔粘连(IUA)   子宫内膜纤维化   利西拉来(Lixisenatide)   上皮-间充质转化(EMT)   TGF-β1/Smad   MAPK  

摘要： 目的:本实验旨在探讨利西拉来（Lixisenatide）对宫腔粘连（intrauterine adhesion,IUA）的作用以及机制,为IUA的临床治疗提供新思路。 方法:动物实验,采用机械刮宫与炎症刺激联合法建立IUA大鼠模型。造模结束后,治疗组大鼠采用三种剂量的Lixisenatide皮下注射治疗两周;模型组皮下注射灭菌dd H2O两周。取材后,首先对造模是否成功评估,然后将大鼠子宫组织进行石蜡切片,采用HE及Masson染色进行病理分析;采用免疫组织化学染色方法分析转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）蛋白的表达,验证Lixisenatide是否对大鼠IUA有治疗作用。细胞实验,采用TGF-β1诱导构建人子宫内膜上皮细胞（human endometrial epithelial cells,HEECs）上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）细胞模型。通过蛋白免疫印迹（Western blot,WB）和实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q RT-PCR）实验和划痕实验探究Lixisenatide对HEECs-EMT的影响。此外,利用WB和q RT-PCR检测Lixisenatide对TGF-β1/Smad2/3和丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路的调控。 结果:高剂量Lixisenatide治疗组大鼠的子宫内膜腺体明显增加,且子宫内膜组织内胶原纤维的沉积面积明显减少。此外,中、高剂量组Lixisenatide治疗组的IUA大鼠子宫内膜组织中TGF-β1、α-SMA的表达量明显下降,而E-cadherin的表达量上升。体外实验结果表明TGF-β1可以成功诱导HEECs的EMT模型,该模型E-cadherin的表达降低,波形蛋白（Vimentin）,α-SMA,纤维连接蛋白（Fibronectin,FN）和Ⅰ型胶原A1（collagen typeⅠA1,COL1A1）表达升高,并且细胞迁移能力增加,加剧EMT。Lixisenatide处理可以抑制EMT的发生。模型组TGF-β1/Smad2/3和MAPK（ERK,p38）信号通路被激活,Lixisenatide处理可以阻断此信号转导途径。 结论:***可减轻大鼠子宫内膜纤维化,促进内膜腺体增生,改善IUA。***可以减缓IUA大鼠子宫组织中EMT的发生。***可以抑制TGF-β1诱导的HEECs-EMT的发生和ECM沉积。***可能通过阻断TGF-β1/Smad2/3和MAPK（ERK,p38）信号通路来抑制HEECs-EMT。

关键词： 宫腔镜   宫腔粘连分离术   宫腔粘连   大剂量雌激素  

摘要： 目的 分析宫腔镜下宫腔粘连分离术（TCRA）联合大剂量雌激素治疗中重度宫腔粘连的临床效果。方法 选取76例中重度宫腔粘连患者为研究对象，依据随机数字表法分为小剂量组与大剂量组，各38例。小剂量组予以TCRA联合戊酸雌二醇片口服，1 mg/次，1次/d；大剂量组予以TCRA联合戊酸雌二醇片口服，2 mg/次，2次/d，持续干预3个月。术后3个月统一评价两组的临床疗效，术前及术后3个月评价两组的子宫形态（子宫体积）和子宫内膜厚度。结果 大剂量组的总有效率高于小剂量组（P<0.05）。两组术前的子宫体积和子宫内膜厚度比较，差异无统计学意义（P>0.05）。两组术后3个月的子宫体积和子宫内膜厚度均增加（P<0.05）；大剂量组术后3个月的子宫体积和子宫内膜厚度均高于小剂量组（P<0.05）。结论 TCRA联合大剂量雌激素可以进一步提高中重度宫腔粘连的临床效果，改善子宫形态，促进子宫内膜的早期恢复。

关键词： 宫腔粘连   纤维化   自噬   炎症   电针  

摘要： 目的本课题以自噬为切入点,旨在研究电针调控宫腔粘连(Intrauterine adhesion,IUA)大鼠内膜自噬促进子宫内膜损伤修复的作用机制,以期为电针治疗宫腔粘连机制研究提供实验依据。方法实验一、电针对IUA大鼠子宫内膜修复的效应研究:45只6-8周SPF级雌性SD大鼠根据随机数字表法被随机分为:空白组、模型组和电针组,每组各15只。采用机械搔刮+脂多糖感染法构建IUA大鼠模型。在造模次日,针刺“关元”、电针双侧“三阴交”和“足三里”,刺激强度以大鼠肢体轻微颤动,持续刺激15 min,每日1次,连续3个动情周期。各组选取5只雌鼠,在造模后第3个动情期,与雄鼠2:1合笼,见阴栓者为孕1d。孕8 d处死并取出子宫组织,检查胚胎着床情况。各组剩余的10只雌鼠,于造模后第3个动情期异氟烷呼吸麻醉后,腹主动脉放血处死并取子宫组织。HE染色法观察大鼠子宫内膜形态学变化,Masson染色法观察大鼠子宫内膜纤维化程度,免疫组化法检测大鼠子宫内膜纤维化标志物转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(Alpha-smooth muscle actin,α-SMA)表达,Western Blot 法检测大鼠子宫内膜容受性标志物同源框基因10(Homeobox A10,HoxA10)和白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF)蛋白的表达,qPCR法检测大鼠子宫内膜HoxA10 和 LIF mRNA 表达。实验二、电针激活IUA大鼠子宫内膜自噬:实验动物及方法同实验一。透射电镜观察子宫内膜上皮细胞自噬小体超微结构,免疫组化法、Western Blot法和qPCR法分别检测大鼠子宫内膜组织微管相关蛋白1轻链3(Microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、自噬效应蛋白1(BECN1,Beclin 1)和选择性自噬接头蛋白(Sequestosome 1,SQSTM1/p62)蛋白和 mRNA 表达。实验三、电针抑制IUA大鼠子宫内膜炎症反应:实验动物及方法同实验一。ELISA法检测各组大鼠子宫内膜组织白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素6(Interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)含量,Western Blot法检测大鼠子宫内膜组织炎症信号通路核因子κB(Nuclear factor-kapaB,NF-κB)关键蛋白 p65、抑制性 K 激酶α(Inhibitor of KappaB Kinase alpha,IKKα)和核因子抑制蛋白α(Inhibitor kappa B alpha,IκBα)磷酸化水平,qPCR法检测子宫内膜组织 IL-1β、IL-6 和 TNF-αmRNA 表达。实验四、电针调控自噬抑制IUA大鼠子宫内膜炎症的机制:40只雌性SD大鼠被随机分为4组:模型组、电针组、电针+抑制剂组和激动剂组,每组各10只。造模及电针干预方法同实验一。电针+抑制剂组大鼠于电针治疗基础上,腹腔注射自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA),剂量为1.5 mg/kg/d,连续注射7d。激动剂组大鼠于造模后第一天腹腔注射雷帕霉素(Rapamycin,RAPA),剂量为2 mg/kg/d,连续注射7 d。各组大鼠于造模后第3个动情期异氟烷呼吸麻醉后,腹主动脉放血处死并取子宫组织。HE染色法观察大鼠子宫内膜形态学变化,Masson染色法观察大鼠子宫内膜纤维化程度。透射电镜观察子宫内膜上皮细胞自噬小体超微结构,免疫组化法检测大鼠子宫内膜组织LC3、Beclin 1、p62和TGF-β1、α-SMA表达,Western Blot法检测大鼠子宫内膜组织LC3、Beclin1、p62和p65、IKKα、IκBα磷酸化表达,qPCR法检测大鼠子宫内膜组织 LC3、Beclin 1、p62 和 IL-lβ、IL-6、TNF-αmRNA表达。结果实验一、电针对IUA大鼠子宫内膜修复的效应研究***染色法观察各组大鼠子宫内膜形态学变化:模型组大鼠内膜腺体较空白组减少(P<0.01),内膜变薄(P<0.01);电针治疗后,腺体数量显著增加(P<0.01),内膜增厚(P<0.05)。***染色观察各组大鼠子宫内膜纤维化程度:模型组大鼠内膜纤维沉积较空白组严重(P<0.01);电针治疗后,内膜纤维沉积减少(P<0.05)。3.免疫组化法检测各组大鼠子宫内膜纤维化标志物TGF-β1和α-SMA的表达:模型组大鼠TGF-β1和α-SMA表达强度较空白组增强(P<0.0

关键词： 宫腔粘连   宫腔粘连分离术   生化汤加减   血瘀型   芬吗通  

摘要： 目的: 通过回顾性研究,探讨生化汤加减对血瘀型中、重度宫腔粘连的治疗作用,为临床运用中医治疗宫腔粘连提供参考。 方法: 从2018年1月至2021年12月于中山市中医院妇产科就诊的中、重度宫腔粘连(Intrauterine Adhesions,IUA)患者中,筛选出年龄在20-40岁,符合血瘀型中医辨证且有生育要求,均行宫腔镜下宫腔粘连分离术(Transcervical Resectionof Uterine Adhesion,TCRA)+COOK球囊支架置入术的268例患者,按照术后治疗方案的不同,将患者进行分组。对照组:(N=138,中度粘连88例,重度粘连50例)):术后第1天即开始服用芬吗通(2/10,红片内含雌二醇2mg,黄片内含雌二醇2mg和地屈孕酮10mg),每天1片,先红片再黄片,按顺序连服28天,期间不停药,连续3个月经周期;治疗组(N=130,中度粘连73例,重度粘连57例):在对照组基础上,予中药方剂生化汤加减口服,术后第1天开始服用,每日1剂,500ml水煎成300ml,分袋包装,每袋150ml,早晚饭后服,连续14天,第2、3个周期与芬吗通红片同步服用,连服14天。术后1个月所有患者返院妇科门诊行COOK球囊支架取出,第4个周期月经干净后3-5天返院行宫腔镜二探检查术,在第4个周期的第18-23天返院超声科复查经阴道超声,测量子宫内膜厚度。两组患者治疗疗程均为3个月经周期,追踪并记录两组患者术前及用药治疗结束后的月经情况、子宫内膜厚度、美国生育协会(AmericanFertilitySociety,AFS)评分、宫腔恢复率以及用药治疗结束后6个月内的妊娠情况,将所得数据归纳整理,通过统计软件SPASS25.0处理,对数据进行正态性检验,计量资料采用独立样本t检验,计数资料采用卡方检验。 结果: 1.一般资料比较:两组IUA患者年龄分布在20-40岁,其中治疗组130例患者,年龄均值31.42±4.322岁;对照组138例患者,年龄均值31.8±4.854岁。术前两组IUA患者宫腔操作次数主要集中在1-3次(包括人流、清宫、产后刮宫等),治疗组宫腔操作次数均值在2.28±1.239次,对照组宫腔操作次数均值2.44±1.208次。分别对两组患者的年龄、宫腔操作次数、宫腔粘连程度进行比较,结果提示差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。 2.月经变化情况比较:通过月经积分评估月经情况。术前中度组中,治疗组月经积分15.07±4.866分,对照组月经积分14.18±3.855分,两组患者月经积分比较P>0.05,无统计学意义;重度组中,治疗组月经积分18.74±3.287分,对照组月经积分18.40±2.799分,两组患者月经积分比较P>0.05,无统计学意义。经治疗后,中度组中,治疗组月经平均积分为5.67±2.135分,对照组为6.52±2.068分,两组患者治疗后月经积分均下降,治疗后两组月经积分比较P<0.05,有统计学意义;重度组中,治疗组月经平均积分为8.56±1.680分,对照组为9.80±2.070分,两组患者治疗后月经积分均下降,治疗后两组月经积分比较P<0.05,有统计学意义。 3.子宫内膜厚度比较:术前中度组中,治疗组子宫内膜平均厚度4.748±1.419mm,对照组子宫内膜厚度5.158±1.530mm,两组数据比较P>0.05,无统计学意义;术前重度组中,治疗组子宫内膜平均厚度4.728±1.210mm,对照组子宫内膜厚度4.306±1.136mm,两组数据比较P>0.05,无统计学意义。经治疗后,中度组中,治疗组子宫内膜厚度平均为6.544±0.75mm,对照组子宫内膜厚度为6.203±0.970mm,两组患者子宫内膜厚度均较术前增厚,治疗后两组内膜厚度比较P<0.05,有统计学意义;经治疗后,重度组中,治疗组子宫内膜厚度平均为7.205±1.076mm,对照组子宫内膜厚度为7.192±1.007mm,治疗后两组内膜厚度比较P>0.05,无统计学意义。 ***评分比较:治疗前,中度组中,治疗组AFS评分6.62±0.952分,对照组6.61±0.964分,两组数据比较P>0.05,无统计学意义;重度组中,治疗组AFS评分10.60±0.923分,对照组10.36±0.776分,两组数据比较P>0.05,无统计学意义。治疗后,中度组中,两组AFS评分均下降,治疗组平均评分为1.56±1.374分,对照组平均评分为2.24±1.900分,治疗后两组AFS评分比较P<0.05,有统计学意义;重度组中,两组AFS评分均下降,治疗组平均评分为3.7±1.267分,对照组平均评分为4.44±1.264分,治疗后两组AFS评分比较P<0.05,有统计学意义。 5.宫腔恢复率比较:比

关键词： 骨髓间充质干细胞   电针治疗   宫腔粘连   炎症   纤维化  

摘要： 研究目的 宫腔粘连(Intrauterine adhesion,IUA)是子宫内膜的基底层受到损伤,从而导致子宫腔和(或)宫颈管腔闭锁或粘连的疾病,这一过程伴随着组织发生纤维化,最终导致生育能力受损。目前在临床上骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植和电针(Electroacupuncture,EA)对治疗子宫内膜损伤、恢复生育能力已有良好的应用。本研究通过建立IUA大鼠模型,移植BMSCs并联合EA干预观察疗效。探讨联合EA刺激的BMSCs移植对IUA模型大鼠受损子宫内膜的治疗效应。以及初步揭示EA联合BMSCs治疗IUA模型大鼠的效应机制。 研究方法 取60只成年未交配的雌性健康SPF级SD(Sprague-Dawley)大鼠。采用机械搔刮联合脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)感染的双重损伤法来创建大鼠IUA模型。对造模后的大鼠随机采用磷酸盐缓冲液(Phosphate-buffered saline,PBS;模型组)、仅BMSCs移植(BMSC组)、BMSCs联合EA治疗(BMSC+EA组)的干预方法。联合组给予BMSC组等量的BMSCs移植并进行EA治疗。造模结束次日起每日电针“关元”穴、双侧“足三里”和“三阴交”穴20分钟,并持续三个动情周期。在干预结束后取子宫组织。用荧光细胞标记来确定EA对BMSCs向损伤的子宫内膜部位迁移的影响。采用苏木精和伊红(Haematoxylin and eosin,H&E)染色法来检测大鼠子宫内膜厚度以及腺体数目。采用Masson染色法检测子宫内膜纤维化面积。采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)、免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)、酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELIS A)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测子宫内膜相关趋化因子基质细胞衍生因子-1(Stromal cell-derived factor-1,SDF-1)和 C-X-C 趋化因子受体 4(C-X-C chemokine receptor type 4,CXCR4)的表达,子宫内膜容受性相关因子同源框蛋白入10(Homeobox A10,HoxA10)和白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF)的表达,血管生成标志物血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达,雌激素受体(Estrogen receptor,ER)的表达,子宫内膜促炎因子白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(Tumornecrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)的表达,纤维化因子α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和转化生长因子-β1(Transforming growth factor β1,TGF-β1)的表达。最后还通过胚胎着床来评估子宫功能的恢复情况。 研究结果 荧光细胞标记显示:EA促进移植的骨髓间充质干细胞向受损子宫的迁移。与BMSC组相比,BMSC+EA组荧光细胞数量显著增多(P<0.01)。 根据Western blotting和qRT-PCR的实验结果表明:EA通过激活SDF-1/CXCR4轴,促进经尾静脉注射的BMSCs向受损子宫的迁移。与BMSC组相比,BMSC+EA组的SDF-1和 CXCR4 的表达增高(SDF-1:P<0.05,P<0.001;CXCR4:P<0.01,P<0.001)。 H&E染色结果显示:与空白组相比,模型组子宫内膜形态子宫内膜显著变薄(P<0.001)、腺体数显著减少(P<0.001)。各治疗组子宫内膜损伤均有所恢复,在BMSC+EA组中观察到的效果最好,与BMSC组相比,其子宫内膜厚度增加(P<0.05)、腺体数增多(P<0.01)。 根据ELISA和qRT-PCR结果显示:与空白组相比,模型组中子宫内膜促炎相关因子IL-1β、TNF-α和 IL-6 的表达量显著增多(IL-1β:P<0.001,P<0.001;TNF-α:P<0.001,P<0.001;IL-6:P<0.001,P<0.001)。各治疗组 IL-1β、TNF-α和 IL-6 的表达均减少,与BMSC组相

关键词： 经宫腔镜宫腔粘连分离术   生物反馈电刺激   宫腔粘连   预后  

摘要： 背景:临床上对于宫腔镜子宫粘连分离术的疗效得到了医护人员与患者的认可,但因个体特征的差异性,仍存在患者在结束手术治疗后发生不同程度的宫腔粘连症状。近年来,有许多的学者将生物反馈电刺激应用于产后及术后尿潴留、压力性尿失禁、妇科、产后盆底功能康复等。其主要是通过对肌肉产生刺激,以解除肌肉痉挛状态,改变紧绷状态所形成的收缩舒张交替状态;通过加速电刺激部位及周围血液、淋巴循环,通过周围的炎性产物代谢,抑制渗出的发生;能促进机体内释放内啡肽,内源性止痛。在内膜修复及卵巢储备功能恢复上主要是通过电刺激对周围血供情况进行改善,以恢复相关功能。 目的:探讨生物反馈刺激对重度宫腔粘连术后的影响,为重度宫腔粘连术后患者的恢复提供了清晰准确的治疗参考。 方法:选取2021年6月至2021年12月在本院就诊、确诊为宫腔粘连且在本院行腔镜下宫腔粘连分离(Transcervical resection of adhesions,TCRA)术的患者127例,依据随机数表法将患者分为观察组及对照组,剔除脱落病例后对照组患者63例,观察组患者64例。两组患者均术后给予头孢类+奥硝唑预防感染,术后第1天口服补佳乐2mg/d,同时在月经后半期开始口服黄体酮胶囊200mg/d,连续治疗3个周期。观察组在此基础上联合应用生物反馈电刺激治疗,连续治疗30d。比较两组患者术后再粘连发生率、术前术后子宫内膜厚度、子宫动脉血流[搏动指数(PI)及子宫动脉阻力指数(RI),然后测定血管化指数(VI)、血流指数(FI)及血管化血流指数(VFI)]、月经改善情况及不良反应。 结果: (1)二次宫腔镜检查结果发现观察组患者临床总有效率高于对照组(P<0.05)。 (2)二次宫腔镜检查发现,观察组宫腔再次粘连率低于对照组(P<0.05)。 (3)与治疗前比较,治疗后两组患者子宫内膜厚度均增厚(P<0.05),表现为子宫内膜增厚情况观察组显著高于对照组(P<0.05)。 (4)与治疗前比较,两组患者PI、RI水平均降低,VI、FI及VFI水平均升高(P<0.05),与对照组治疗后比较,观察组患者治疗后PI、RI水平更低,VI、FI及VFI水平更高(P<0.05)。 (5)观察组患者月经改善有效率高于对照组(P<0.05)。 (6)观察组患者不良反应发生率3.125%(2/64)低于对照组14.29%(9/63)(P<0.05)。 结论:重度宫腔粘连患者在TCRA术后辅助生物电刺激反馈治疗有利于促进患者子宫内膜的修复,改善月经与子宫内膜血流情况,具有较好的安全性,且对预防子宫粘连复发具有一定疗效。

关键词： 子宫内膜纤维化   宫腔粘连   转化生长因子β1   综述  

摘要： 宫腔粘连是子宫内膜受损后结缔组织异常增生的结果，异常增生的结缔组织由细胞外基质（extracellular matrix,ECM）大量沉积所致。转化生长因子β1（TGF-β1）在促进EMC的表达过程中具有重要的作用。TGF-β1与宫腔粘连的发生发展密切相关，是宫腔粘连复发的危险因素。本文综述了TGF-β1及其与其它细胞因子整合的相互作用在宫腔粘连中的作用机制。

关键词： 补肾活血方   重度宫腔粘连   肾虚血瘀证   疗效观察  

摘要： 目的:本研究旨在观察补肾活血方治疗重度宫腔粘连术后肾虚血瘀证的临床疗效及安全性,为临床治疗该病提供新思路、新方法。方法:收集2022年01月至2022年12月湖南中医药大学第二附属医院妇科住院部符合重度宫腔粘连肾虚血瘀证的育龄期患者60例,将纳入的60例病例随机分为对照组及治疗组,每组各30例。两组患者均于月经干净后3至7天于我院行宫腔镜下宫腔粘连分离术(TCRA),术中进行宫腔粘连评分。术后对照组予以雌孕激素(戊酸雌二醇片+地屈孕酮片)序贯治疗,治疗组在此基础加用补肾活血方治疗,连续治疗3个月经周期,通过记录患者中医症候积分的高低、月经情况的改变、彩色多普勒超声测子宫内膜厚度、子宫动脉血流阻力指数(RI)、子宫内膜血流指数(FI)、宫腔镜检查评分变化、血清白细胞介素(IL-10)水平变化,来评估其整体疗效及安全性。结果:1.总体有效率比较:治疗后对照组中医临床证候总有效率为83.33%,治疗组为93.33%;治疗后对照组总体疗效有效率为83.33%,治疗组为93.33%。两组治疗后疗效比较(P<0.05)有统计学意义,且治疗组临床疗效优于对照组。2.中医证候积分、月经情况比较:治疗后两组患者的中医证候积分、月经情况积分较治疗前均显著降低,且治疗组低于对照组,治疗组效果更佳(P<0.05)。3.子宫内膜厚度、子宫动脉血流阻力指数RI及子宫内膜血流指数FI比较:治疗后两组患者的子宫内膜厚度及子宫内膜血流指数FI较治疗前均显著增加,且治疗组高于对照组,治疗组效果更佳(P<0.05);治疗后两组患者子宫动脉血流阻力指数RI较治疗前显著降低,且治疗组低于对照组,治疗组效果更佳(P<0.05)。4.宫腔粘连评分比较:治疗后两组患者的宫腔粘连评分较治疗前均显著降低,且治疗组低于对照组,治疗组效果更佳(P<0.05)。5.血清IL-10水平比较:治疗后两组患者血清IL-10水平较治疗前均显著提高,且治疗组高于对照组,治疗组效果更佳(P<0.05)。6.安全性情况:所有患者在受试过程中均未出现严重毒副作用或明显不良反应。结论:1.补肾活血方治疗重度宫腔粘连术后肾虚血瘀证患者的疗效显著,能有效改善中医证候、月经情况,增加子宫内膜厚度,改善子宫动脉血流灌注,降低宫腔粘连评分。2.补肾活血方能够提高患者血清IL-10水平,通过调控炎症反应,改善微循环,以促进子宫内膜增长,预防宫腔粘连复发。3.补肾活血方在治疗重度宫腔粘连术后肾虚血瘀证患者的过程中,无明显毒副作用或不良反应,临床用药安全,较宫腔粘连分离术后单纯使用西药治疗效果更加显著,临床上值得进一步推广与应用。