关键词： 宫腔粘连   胎盘间充质干细胞   雌激素   动物模型  

摘要： 目的: 探究人胎盘间充质干细胞和（或）雌激素对于宫腔粘连大鼠的影响,并初步探索其机制。 方法: 通过机械损伤法成功建立宫腔粘连大鼠后,随机分为阴性对照组（Negative control group）,模型对照组（Control group）,模型+雌激素治疗组（E2 group）,模型+胎盘间充质干细胞治疗组（Stem cell group）,模型+胎盘间充质干细胞联合雌激素治疗组（E2+stem cell group）,每组10只。各治疗组分别使用单独胎盘间充质干细胞0.5ml（1x10～6/ml）、单独雌激素(0.5mg/（kg*d）)及两者联合给药治疗宫腔粘连大鼠,治疗干预21天后观察动情周期,每组随机选取5只大鼠与健康可育雄性大鼠以2:1的比例进行合笼妊娠实验,并统计妊娠结局。同时各组剩余的5只大鼠进行子宫造模侧取材。通过HE染色观察子宫内膜厚度、子宫内膜腺体数,Masson染色了解子宫内膜纤维化面积,免疫组化染色测定子宫内膜组织Ki-67和Vimentin蛋白的表达,评估各组治疗效果。最后采用高通量测序技术检测及分析胎盘间充质干细胞移植组与模型对照组间差异表达m RNA,初步探索胎盘间充质干细胞治疗宫腔粘连的机制。 结果: 1.构建宫腔粘连大鼠模型的评价指标 （1）子宫大体形态学:与正常组相比,模型组子宫外观水肿且薄,子宫内膜大体形态菲薄,不平整,存在子宫内膜损伤。 （2）HE染色示:与正常组相比,模型组子宫内膜层破坏,腺上皮细胞不完整,结构松散,形态失常,大量纤维化增生,子宫内膜腺体数减少（p≤0.001）、子宫内膜厚度变薄（p≤0.01）。Masson染色示:模型组较正常组子宫内膜纤维化面积增加（p≤0.01）。 2.胎盘间充质干细胞培养与鉴定 （1）胎盘间充质干细胞原代细胞贴壁生长,生长快,细胞融合度达80%传代。传代后显微镜下见胎盘间充质干细胞形态为长梭形,形态清晰且稳定。 （2）流式细胞仪检测胎盘间充质干细胞表面抗原,其中CD73（97.60%）、CD90（99.40%）、CD105（92.30%）及CD44（90.30%）持续高表达,CD34（3.32%）持续低表达。 3.宫腔粘连大鼠药物干预后疗效评价 （1）HE染色示:模型对照组与构建宫腔粘连大鼠模型中一致。E2组和Stem cell组的子宫内膜腺体数及子宫内膜厚度较模型对照组无统计学意义,E2+stem cell组子宫内膜腺体数（p≤0.01）及子宫内膜厚度（p≤0.05）较模型对照组增加。E2+stem cell组子宫内膜厚度较Stem cell组增加（p≤0.05）。Masson染色示:E2组、Stem cell组和E2+stem cell组子宫内膜纤维化面积较模型对照组均降低（p≤0.001）,E2+stem cell组子宫内膜纤维化面积显著低于Stem cell组（p≤0.001）,Stem cell组子宫内膜纤维化面显著低于E2组（p≤0.001）。 （2）与阴性对照组相比,模型对照组Ki-67表达量降低（p≤0.001）,Vimentin表达量升高（p≤0.001）。E2组、Stem cell组和E2+stem cell组较模型对照组Ki-67表达量升高（p≤0.05）、Vimentin表达量降低（p≤0.001）。Stem cell组与E2组间Ki-67及Vimentin表达量无统计学意义。E2+stem cell组相比Stem cell组Ki-67表达量显著升高（p≤0.001）,而Vimentin表达量无统计学意义。 （3）妊娠结局显示,模型对照组胚胎数显著低于阴性对照组（p≤0.001）。E2组胚胎数高于模型对照组（p≤0.05）,Stem cell组和E2+stem cell组胚胎数均显著高于模型对照组（p≤0.001）,Stem cell组与E2+stem cell组间胚胎数无统计学意义。 4.高通量测序结果 （1）Stem cell组与模型对照组间存在各自特有的m RNA,数目分别为905和219,两组间存在显著差异的m RNA数849个,其中表达上调m RNA数765个,表达下调m RNA数84个。 （2）GO分析提示差异表达m RNA主要涉及细胞组成、结合、细胞过程、单生物体过程等生物进程,KEGG通路主要集中在细胞因子-细胞因受体子通路、MAPK信号通路、c GMP-PKG信号通路及钙信号通路。 结论: 1.通过子宫内膜刮宫损伤可成功构建宫腔粘连大鼠。 2.胎盘间充质干细胞在体外培养中具有良好稳定的传代增殖能力。 3.胎盘间充质干细胞移植宫腔粘连大鼠可促进子宫内膜细胞增殖、降低子宫内膜纤维化,提高妊娠率,胎盘间充质干细胞联合E2效果更佳。 4.胎盘间充质干细胞移植组与模型对照组子宫内膜存在显著差异表达m RNA,其可

关键词： 宫腔粘连   子宫内膜纤维化   内质网应激   TGF-β/SMAD通路   上皮-间充质转化  

摘要： 目的:内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)、转化生长因子β(transfor ming growth factor beta,TGF-β)/SMAD通路和上皮-间充质转化(epithelial–mesenchymal transition,EMT)是影响子宫内膜纤维化的重要因素,通过动物实验和细胞实验探究ERS、TGF-β/SMAD通路和EMT在子宫内膜纤维化过程中的上下游调控关系。方法:通过机械性和感染性双重损伤手术建立宫腔粘连(intrauterine adhesion,IUA)大鼠模型,并在动物体内预防性注射ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)观察内质网应激对宫腔粘连模型大鼠子宫内膜纤维化的影响。使用ERS激活剂tunicamycin和TGF-β/SMAD通路抑制剂A 83-01处理人子宫内膜上皮细胞(human endometrial epithelial cells,HEECs)用于体外机制研究。采用Masson染色和天狼星红染色观察子宫内膜组织形态和判断子宫内膜纤维化程度,免疫组织化学、免疫荧光和Western blot检测不同组子宫组织和HEECs中ERS、TGF-β/SMAD通路、EMT和纤维化标志物的蛋白表达水平。结果:与假手术组相比,IUA-4D组、IUA-8D组和IUA-12D组子宫腔逐渐缩小直至完全封闭,子宫内膜纤维化程度逐渐加深,ERS标志物BIP、XBP1S、Caspase-12和CHOP、TGF-β/SMAD通路信号分子TGF-β1、SMAD3和Snail、间充质标志物Vimentin和α-SMA及纤维化标志物Collagen I均明显升高,上皮标志物E-cadherin和Cytokeratin 18均明显下降。与IUA-8D组相比,IUA-8D+4-PBA组子宫内膜纤维化程度减轻,ERS标志物BIP、XBP1S、Caspase-12和CHOP、TGF-β/SMAD通路信号分子TGF-β1、SMAD3和Snail、间充质标志物Vimentin和α-SMA及纤维化标志物Collagen I均明显下降,上皮标志物Cytokeratin 18升高。与对照组相比,tunicamycin组ERS标志物BIP、XBP1S、Caspase-12和CHOP、TGF-β/SMAD通路信号分子TGF-β1、SMAD3和Snail、间充质标志物Vimentin和α-SMA及纤维化标志物Collagen I均明显升高,上皮标志物E-cadherin和Cytokeratin 18均明显下降。与tunicamycin组相比,tunicamycin+A 83-01组的ERS标志物BIP、XBP1S、Caspase-12和CHOP均无统计学差异,但TGF-β/SMAD通路信号分子TGF-β1下降,SMAD3被完全抑制,Snail被明显抑制。与对照组相比,tunicamycin+A 83-01组的上皮标志物E-cadherin和Cytokeratin 18下降,间充质标志物Vimentin和α-SMA无统计学差异,纤维化标志物Collagen I升高。结论:ERS激活后通过TGF-β/SMAD通路诱导EMT的发生促进子宫内膜纤维化。

关键词： 宫腔粘连   健脾补肾活血法   人工周期   子宫球囊支架  

摘要： 目的: 本研究目的在于通过观察活血养膜方加人工周期治疗中重度宫腔粘连(Intrauterine adhesion,IUA)的临床疗效,探讨活血养膜方联合人工周期治疗对中重度IUA患者术后宫腔形态恢复情况、月经情况、中医证候积分、内膜水平,以及血清相关炎症因子水平的影响,为IUA的中西医结合治疗提供临床思路和参考依据。 方法: 收集年龄20～40岁之间,于2022年2月1日至2022年11月31日在广州中医药大学第三附属医院妇二科住院,行宫腔镜检查术确诊为中重度宫腔粘连,并行宫腔镜下宫腔粘连分离术(Transcervical Resection of Adhesions,TCRA),术后放置子宫球囊支架一枚的患者。纳入60例符合研究标准的受试者,按照随机数字表法,以1:1比例随机分为西药组、中西药组各30例。西药组:术后第1天及术后第1次月经来潮第3天均开始服用:戊酸雌二醇片、阿司匹林肠溶片,共21天,服药最后10天加服地屈孕酮片,所有药物共服用2个月经周期。中西药组:术后第1天及术后第1次月经来潮第3天均在西药组方案基础加服中药活血养膜方21天,共服用2个月经周期。两组患者均于术后第2次月经干净后3～7天内返院复查宫腔镜。统计分析2周期治疗后两组患者的临床总疗效、月经疗效、中医证候积分、宫腔粘连评分、内膜水平,及血清炎症因子水平,比较两组间治疗效果有无差异,结合生化指标和心电图等评价各组治疗方案有无不良健康损害。 结果: 1、临床总疗效:治疗后中西药组的临床总有效率(90.00%)明显高于西药组(66.67%),差异有统计学意义(P<0.05)。 2、月经疗效:治疗后中西药组的月经疗效总有效率(93.33%)明显高于西药组(73.33%),差异有统计学意义(P<0.05)。 3、宫腔粘连评分:两组患者治疗后宫腔粘连评分均较各组治疗前下降,差异有统计学意义(P<0.05),两组患者治疗后宫腔粘连评分差异有统计学意义(P<0.05),且治疗后两组间宫腔粘连评分差值差异有统计学意义(P<0.05),中西药组粘连评分下降更明显。 4、中医证候积分:两组患者治疗后中医证候积分均较各组治疗前下降,差异有统计学意义(P<0.05),两组患者治疗前后中医证候积分差值有统计学意义(P<0.05),且中西药组中医证候积分差值优于西药组,治疗后中西药组的中医证候疗效总有效率(86.70%)明显高于西药组(60.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。 5、子宫内膜水平:两组患者治疗后子宫内膜厚度、子宫内膜容积均较各组治疗前增高,差异均有统计学意义(P<0.05),治疗后两组间子宫内膜厚度、子宫内膜容积差异均有统计学意义(P<0.05);两组患者治疗后子宫动脉血流指数PI、RI均较各组治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05),治疗后两组间PI、RI差异均具有统计学意义(P<0.05)。 6、血清炎症因子水平:两组患者治疗后血清IL-6均较各组治疗前下降,差异均有统计学意义(P<0.05),治疗后两组间IL-6水平差异具有统计学意义(P<0.05);两组患者治疗后血清TNF-α均较各组治疗前下降,差异均有统计学意义(P<0.05),治疗后两组间TNF-α水平差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论: 1、活血养膜方联合人工周期治疗,比单纯西药治疗更能明显提高中重度IUA患者TCRA术后临床总疗效和月经疗效,可促进宫腔形态恢复,改善患者中医证候积分。 2、活血养膜方联合人工周期治疗,比单纯西药治疗更能有效提高IUA患者子宫内膜厚度、子宫内膜容积,改善子宫内膜血流指数PI、RI,并降低血清炎症因子IL-6、TNF-α 水平。

关键词： 宫腔粘连   反复种植失败   气化理论   调肾宣络畅膜方   中药敷贴  

摘要： 目的基于气化理论,通过对比内服调肾宣络畅膜方联合中药敷贴与单纯口服调肾宣络畅膜方对肾虚血瘀型宫腔粘连（intrauterine adhesions,IUA）致反复种植失败（recurrent implantation failure,RIF）患者中医证候积分、再移植前子宫动脉血流指标及子宫内膜厚度的差异性;探讨中医内外合调对肾虚血瘀型IUA致RIF患者子宫容受性的改善情况,为中医内外合调法促进内膜修复、改善胚胎再次移植前子宫内膜微环境提供科学依据。方法对符合纳入标准的72例病例编号,并采用随机数字表法,按随机原则分为治疗组（口服调肾宣络畅膜方+中药敷贴治疗）36例,对照组（口服调肾宣络畅膜方）36例,治疗3个疗程。观察对比两组患者治疗前后中医证候积分改善情况、三维超声下子宫动脉搏动指数（pulsation index,PI）、子宫动脉阻力指数（resistance index,RI）及月经第21天子宫内膜厚度的变化,行统计学分析,评价其疗效及安全性。结果本研究治疗结束,经质控筛选后,试验组和对照组各脱落与剔除5名受试者,3名因无法坚持治疗后脱落,7名中途因个人原因而主动退出。1.中医证候积分疗效比较（1）中医证候积分（详见附表4）:组内比较:两组均可显著改善患者月经情况,腰膝酸软,小腹胀痛,性欲减退,畏寒肢冷,神疲乏力症状（P<0.05）;治疗组还可改善小便频数,面色晦暗症状（P<0.05）,失眠健忘症状治疗前后改善有差异（P<0.05）;对照组还可显著改善头晕耳鸣症状（P<0.05）,失眠健忘、小便频数、面色晦暗症状治疗前后比较无统计学差异（P>0.05）。组间比较:两组治疗后患者月经情况,腰膝酸软,小腹胀痛,性欲减退,小便频数,畏寒肢冷,神疲乏力,面色晦暗症状组间比较有统计学差异（P1>0.05）,且治疗组月经情况,腰膝酸软,小腹胀痛,性欲减退,小便频数,畏寒肢冷,神疲乏力,面色晦暗症状改善优于对照组（P1>0.05）;治疗后两组头晕耳鸣、失眠健忘症状无统计学差异（P1>0.05）。（2）中医证候积分总积分:治疗后两组中医证候积分总积分均较治疗前明显降低（P<0.01）,且治疗组降低情况优于对照组（P<0.01）。（3）中医整体疗效（详见表10）:治疗组总有效率为80.65%,愈显率45.16%;对照组有效率71.00%,愈显率16.13%,治疗组优于对照组（P<0.05）。2.子宫内膜血流比较（1）子宫动脉PI:治疗前后比较,两组均可有效降低窗口期子宫动脉PI值（P<0.01）,治疗后组间比较,治疗组PI降低较对照组更明显（P<0.05）;（2）子宫动脉RI:治疗前后比较,两组均可有效降低窗口期子宫动脉RI值（P<0.01）,治疗后组间比较,治疗组RI降低较对照组更明显（P<0.05）。3.子宫内膜厚度治疗前后比较,两组均可增加窗口期子宫内膜厚度（P<0.01）;治疗后组间比较,治疗组增加子宫内膜厚度较对照组更优（P<0.05）。4.安全性指标研究期间,两组患者安全性指标均正常,未出现不良反应。结论1.基于气化理论,口服调肾宣络畅膜方联合中药敷贴对于改善肾虚血瘀型IUA致RIF患者月经情况,腰膝酸软,小腹胀痛,性欲减退,小便频数,畏寒肢冷,神疲乏力,面色晦暗症状有效,且疗效优于单纯口服调肾宣络畅膜方。2.单纯口服调肾宣络畅膜方及口服调肾宣络畅膜方联合中药敷贴均可降低肾虚血瘀型IUA致RIF患者PI、RI值,增加月经第21天子宫内膜厚度;且口服调肾宣络畅膜方联合中药敷贴较单独口服中药疗效更佳。3.基于气化理论中医内外合调有利于提高IUA致RIF患者再移植前子宫内膜血流灌注,增加子宫内膜容受性。

关键词： IL-33   子宫内膜纤维化   IUA  

摘要： 目的利用机械损伤法构建小鼠宫腔粘连（Intrauterine adhesion,IUA）动物模型,初步探讨炎性细胞因子白细胞介素（Interleukin,IL）33在IUA中的作用。 方法选取性成熟未孕雌性6-8周龄C57BL/6J小鼠60只,适应性饲养后,采用机械损伤造模法建立IUA动物疾病模型,随机分为5组,每组12只:正常对照组（CON）、假手术组（SHAM）、IUA模型组、IUA+重组IL-33（rm IL-33）干预组和IUA+IL-33抑制剂（IL-33抗体）干预组,造模7天后取子宫内膜组织。 采用酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA）检测IL-33及相关炎性因子（IL-1β、TNF-ɑ、IL-6及IL-10）的表达;Western blot检测子宫内膜组织中IL-33、上皮干细胞标志物（SOX9、FOXA2、SSEA1）、血管生成标志物（VEGF）蛋白表达水平;RT-q PCR检测子宫内膜组织中IL-33、上皮干细胞标志物及血管生成标志物的m RNA表达水平。 将子宫内膜组织标本制作石蜡切片,HE染色观察子宫内膜形态学及腺体数量的改变;Masson染色评估子宫内膜纤维化面积比例;免疫组化染色（IHC）观察纤维化标志物（TGF-β1）的表达情况;免疫荧光双染色观察F4/80+表达情况及IL-33在子宫内膜中的细胞定位情况。 结果***-33及相关炎性因子（IL-1β、TNF-α、IL-6及IL-10）在IUA子宫内膜组织中的表达情况:IL-33在小鼠IUA模型的组织和血浆中高表达;IL-33及相关促炎因子IL-1β、TNF-α和IL-6在IUA+rm IL-33干预组表达升高,IL-10抗炎细胞因子在IUA+αIL-33Ab干预组表达升高。结果表明,IL-33及相关炎性因子与子宫内膜纤维化有关。 ***-33加重子宫内膜形态学病理变化及纤维化:IUA+rm IL-33干预组较IUA组子宫内膜形态学病理变化加重,表现为宫腔粘连程度加深,腺体数量显著减少,子宫内膜明显变薄,间质可见大量纤维组织增生。抑制IL-33的表达后,宫腔残余面积增加,内膜层腺体数量变丰富,子宫内膜相对均匀,纤维化面积减少。纤维化面积比例如下:CON组（2.5%）,SHAM组（3%）,IUA模型组（18%）,IUA+rm IL-33干预组（29%）,IUA+αIL-33Ab干预组（2.7%）。免疫组化结果显示IL-33干预后子宫内膜组织中纤维化标志物TGF-β1的表达升高。结果表明,IL-33可使IUA的子宫内膜在形态学上发生显著变化,加重子宫内膜纤维化,抑制IL-33可在一定程度上改善内膜子宫内膜纤维化。 ***-33对子宫内膜组织上皮干细胞及血管生成的影响:IUA+IL-33干预组SOX9、FOXA2、SSEA1及VEGF表达量明显减低;抑制IL-33后SOX9、FOXA2、SSEA1及VEGF表达量显著增加。结果还显示FOXA2在腺上皮中表达。IL-33可能通过影响干细胞增殖分化能力及血管生成的作用途径对子宫内膜产生影响。 ***中IL-33的细胞来源:F4/80+在IUA中表达升高,在进行IL-33共定位时,免疫荧光双染后可见IL-33与F4/80+在子宫内膜组织中的同一位置表达,提示IL-33可能来源于子宫内膜巨噬细胞。同时,增加IL-33会进一步上调IUA中巨噬细胞表达,加重内膜纤维化。 结论IL-33对IUA的形成具有促进作用,抑制IL-33可在一定程度上减轻内膜纤维化。

关键词： 宫腔粘连   耳穴压豆   补肾化瘀法   雌孕激素序贯   中西医结合  

摘要： 目的:采用滋肾祛瘀养膜方联合耳穴压豆防治宫腔粘连(肾虚血瘀证)术后再复发,观察其治疗效果、改善临床症状情况及对子宫动脉血流指标的影响,以期为临床医生治疗本病提供参考。材料与方法:选自2020年9月至2022年12月于辽宁中医药大学附属医院就诊的宫腔粘连的患者,满足纳入标准的有60例,依据随机数字表法平均分组,各30例。两组患者均于本院行宫腔镜进行粘连分离术,术后予不同的治疗,对照组予中药汤剂、生长激素及雌孕激素序贯治疗,观察组术后在其基础上加用耳穴压豆治疗,疗程共三个月经周期。治疗前后对患者的宫腔粘连评分、子宫内膜厚度、子宫动脉阻力指数(RI)、子宫动脉搏动指数(PI)、中医证候积分、焦虑自评量表等资料进行记录,并进行两组疗效评价,进一步随访停药后3个月内两组患者的月经恢复情况、内膜厚度变化及子宫动脉血流指标等情况,对上述临床资料进行统计学分析。结果:1.一般情况:对照组及观察组患者的年龄、病程、宫腔操作次数、治疗前的宫腔粘连评分、中医证候积分、子宫内膜厚度、RI、PI及焦虑自评量表评分差异无显著性(P>0.05),表明具有可比性。2.宫腔粘连评分:治疗前后比较,两组患者的宫腔形态均有所改善,粘连评分均有所下降,组内差异(P<0.05)具有统计学意义;对比治疗后的宫腔粘连评分,观察组较对照组下降更明显,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。3.中医证候积分:治疗前后比较,两组患者的积分均有下降,组内差异具有统计学意义(P<0.05);观察组中医证候积分相较于对照组下降更明显,组间差异具有统计学意义(P<0.05);随访3个月后组内中医证候积分差异显著(P<0.05),具有统计学意义。4.子宫内膜厚度:经过治疗前后比较,两组患者的子宫内膜厚度均较前增加,组内差异比较结果具有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后的内膜厚度较对照组治疗后的内膜厚度增加明显,组间数据差异具有统计学意义(P<0.05);经过3个月的随访,组内子宫内膜厚度的差异仍显著(P<0.05),具有统计学意义。5.子宫动脉阻力指数(RI)及子宫动脉血流搏动指数(PI):治疗前后比较,两组患者的子宫动脉阻力指数(RI)及子宫动脉血流搏动指数(PI)均较前下降,组内差异具有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后的子宫动脉阻力指数(RI)及子宫动脉血流搏动指数(PI)较对照组下降更明显,组间差异具有统计学意义(P<0.05);随访3个月后组内子宫动脉阻力指数(RI)及子宫动脉血流搏动指数(PI)差异显著(P<0.05),具有统计学意义。6.焦虑自评量表评分:治疗前后比较,两组患者的焦虑自评量表评分均较治疗前下降,组内差异具有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后焦虑自评量表评分下降明显,组间差异具有统计学意义(P<0.05);随访3个月后组内焦虑自评量表评分差异显著(P<0.05),具有统计学意义。7.中医证候积分疗效:治疗后,对照组的总有效率为66.6%,观察组的总有效率为86.6%,组间差异(P<0.05)具有统计学意义。结论:1.导师自拟滋肾祛瘀养膜方联合耳穴压豆能改善宫腔粘连(肾虚血瘀证)患者术后子宫内膜菲薄的情况,促进子宫内膜血流,加速子宫内膜修复,降低术后再次复发率,具有较好的临床疗效。2.导师自拟滋肾祛瘀养膜方联合耳穴压豆能改善宫腔粘连(肾虚血瘀证)分离术后患者的中医证候积分及降低焦虑评分。3.导师自拟滋肾祛瘀养膜方联合耳穴压豆治疗宫腔粘连(肾虚血瘀证)分离术后患者,未见明显的不良反应,无药物毒副作用,具有安全性,可以作为该病的有效治疗方法。

关键词： 宫腔粘连   载雌二醇介孔硅水凝胶   细胞实验   动物实验   功能性   相容性  

摘要： 目的: 本研究旨在将治疗宫腔粘连的屏障疗法与雌激素药物疗法相结合,研发一种新型材料制备成雌二醇宫内缓释系统。前阶段设计制备组织相容性好的水凝胶,并负载载雌二醇介孔硅,平稳缓释雌二醇。本阶段主要目的探究该新型雌二醇宫内缓释系统材料PHMH-Si水凝胶在体外细胞中及动物体内进行试验,以探究该新型材料是否具备良好的生物安全性和功能性,最终为临床治疗宫腔粘连(IUA)提出新的方法及参考依据。 材料和方法: 将我们的实验对象PHMH-Si水凝胶,与生物相容安全度高的PHEMA水凝胶作为对照材料进行对比实验。首先,采用高糖培养基与相同体积和重量的水凝胶共同浸泡72小时提取浸取液。用人脐静脉内皮细胞作为实验所需细胞。然后,将不同的浸取液与人脐静脉细胞混合,进行不同天数的培养,并使用细胞死活染色法和莱卡荧光显微镜观察细胞死亡情况,以评估材料与组织的相容性。在另外一组板上也用两种水凝胶浸取液与人脐静脉细胞共同培养1,3,5天,加入cck-8溶液10ul,置入培养箱中孵育1小时测450nm处吸光度,根据吸光度计算不同天数时细胞增殖率,计算实验材料对细胞的增殖率,判断细胞的生物安全性。 在功能性实验中,将我们的实验对象PHMH-Si水凝胶,与不含雌激素的PHMH水凝胶作为对比实验,在高糖培养基中浸泡,提取浸取液。原代人子宫内膜细胞及经过培养传代后,用子宫内膜细胞在96孔板上种板,再加入各组浸取液培养不同天数,测量450nm处OD值,计算细胞增殖率,判断材料促子宫内膜生长的功能性。同时加做细胞染色死活实验判断PHMH-Si水凝胶的生物安全性。 为了进一步研究该水凝胶在活体动物体内对子宫内膜的促生长作用以及治疗宫腔粘连的效果,我们设计了SD大鼠动物实验。将大鼠分为A,B,C三组,每组大鼠四只,A组为假手术组(仅作开关腹),B组为造模组(手术行人工造成子宫粘连模型),C组为实验组(大鼠造宫腔粘连模型后置入PHMH-Si水凝胶)。三组实验大鼠完成手术后,继续饲养大鼠13.5天后处死并取出子宫。接下来,我们将对子宫进行病理学检查,制作出组织切片。为了确定水凝胶的有效性,我们采用HE染色和MASSON染色技术,并对切片的结果进行详细的记录和分析。 统计方法:指标使用SPSS25.0软件进行统计分析。计量资料均值±标准差表示,先进行描述统计分析检验数据的正态性,再用Levene检验方差齐性,若方差齐性则进行单因素方差分析(ONE WAY AVOVA),并采用LSD(总体均数有差异,P<0.05)或Scheffe(总体均数无差异,P>0.05)进行组间两两多重比较;若方差不齐采用Welch稳健方差分析,并采用Dunnett’s T3进行组间两两多重比较。P<0.05被认为具有统计学意义。 结果: 1.通过将两种水凝胶浸取液在人脐静脉内皮细胞中培养1、3和5天后的死、活细胞染色的代表性荧光图像,可知PHEMA以及PHMH-Si水凝胶的细胞增殖和扩散良好,5d的时候会观察到少许死亡细胞,与空白组对比无明显差别。根据细胞增殖率的测定,其中PHEMA水凝胶5d后的细胞增殖率与空白对照组比较计算出增殖率为113.37%,而另一组计算吸光度得出PHMH-Si水凝胶5d后的细胞增殖率为96.66%。PHMH-Si水凝胶的细胞增殖率与PHEMA水凝胶无显著差异。因此证明了,PHMH-Si水凝胶在体外细胞毒性实验中对实验细胞低毒性。 2.细胞功能性实验中人子宫内膜细胞与PHMH-Si水凝胶提取物共培养5d后,细胞存活率为对照组的117.37%。该实验结论证实了我们设计的载雌二醇水凝胶系统可以促进子宫内膜的生长。该组的细胞死活染色也可观察到第5天各组红色死细胞无明显差异,证明实验材料PHMH-Si水凝胶在子宫内膜细胞中也有很好的生物安全性,不会造成细胞死亡增加。 3.大鼠实验结果显示,假手术组的子宫内膜厚度明显高于造模组(P<0.01),而置入载雌二醇介孔硅水凝胶的实验组子宫内膜厚度虽然薄于假手术组,但明显高于造模组(P<0.05)。在子宫内膜腺体计数比较方面,假手术组腺体数目最多,造模组最少,实验组略少于假手术组,但明显多于造模组(P<0.05)。三组大鼠单位面积纤维化比较表明,宫腔内置入载雌二醇介孔硅水凝胶能显著抑制子宫内膜纤维化。PHMH-Si组的纤维化面积百分比小于IUAs组造模组,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论: 经过本阶段研究中,我们发现雌二醇介孔硅水凝胶PHMH-Si对脐静脉内皮细胞的较好生物安全性和对促子宫内膜生长有一定功能性;动物实验中也对大鼠宫腔粘连有一定的治疗作。初步表明了我们的新型雌二醇宫内缓释系统材料有良好的生物安全性和功能性。

关键词： 雌二醇凝胶   剂量   宫腔粘连   预防   治疗  

摘要： 背景:宫腔粘连(intrauterine adhesions,IUA)是由于宫腔内的创伤、炎症等各种因素的刺激引起子宫内膜的基底层受损,子宫内膜的异常增生造成宫腔内部或宫颈管粘连,是多种因素作用的结果。宫腔粘连主要是由外源性的损伤或内源性的刺激引起,如人工流产术、稽留流产清宫术、剖宫产术、慢性子宫内膜炎等,少数也与家族遗传有关。医疗技术的发展以及三胎政策的开放,人工流产的比率正在逐年升高,人工流产现已成为造成IUA的一项重要因素,人工流产手术会增加IUA的发生几率,并且随着人工流产次数的增加,IUA的发生概率也越大,预防治疗IUA是临床上需要解决的问题。雌二醇是一种雌激素治疗剂,可使子宫内膜腺体和间质增生、修复,促进人工流产术后子宫内膜的修复,对于短期内多次人工流产术后的病人,雌激素的使用剂量有待讨论,常规剂量的雌激素还是增加雌激素剂量,以及增加雌激素剂量后是否会产生较大的副作用是本文探讨的内容。 目的:1.比较两种剂量的经皮雌二醇凝胶预防短期内两次人工流产术后宫腔粘连的效果。 2.比较两种剂量的经皮雌二醇凝胶使用后的副作用发生情况,加大剂量是否会引起不良反应。 方法:1.采用双向性队列研究的方式,选取随州市中心医院2019年5月至2022年5月门诊收治的半年内有两次人工流产的患者,能够定期复查且能够接受治疗方案的患者作为研究对象。 2.将收集的研究对象分为两组,2019年5月-2020年11月收集的术后使用雌二醇凝胶2.5g/天的患者作为对照组;2020年12月-2022年5月收集的术后使用雌二醇凝胶5.0g/天的患者作为观察组。 3.术后1个月门诊复查血常规、肝肾功能、阴道超声及宫腔镜探查,进行宫腔粘连的诊断分级评分(AFS评分)。 4.将收集到的结果进行统计分析,采用SPSS23.0进行分析。 结果:1.两组患者的年龄、停经天数及生产次数之间差异比较无统计学意义(P>0.05)。 2.两组患者宫腔粘连的比较:观察组宫腔粘连的发生率低于对照组(P<0.05),其中观察组的中重度宫腔粘连的发生有所下降,轻度宫腔粘连的发生率明显低于对照组。 3.两组治疗前后子宫内膜的增长情况:两组研究对象用药后相较于用药前子宫内膜有明显增长(P<0.01),两组患者用药前子宫内膜厚度无统计学差异(P>0.05),用药1周期后观察组子宫内膜增长情况优于对照组子宫内膜增长情况(P<0.05)。 4.两组患者用药1周期后宫腔粘连诊断分级评分的比较:通过宫腔镜探查,观察组与对照组之间的AFS评分有统计学差异(P<0.05)。 5.两组患者月经恢复情况的比较:观察组的月经异常率低于对照组,两组之间的月经异常率有统计学差异(P<0.05)。 6.两组患者用药后副作用的比较:两组患者均未发生肝肾功能损伤、凝血功能障碍及血脂异常的情况,两组间副作用的比较无统计学意义。 结论:1.对于短期内两次人流术后的患者,大剂量经皮雌二醇凝胶更有助于子宫内膜的生长,降低宫腔粘连的发生率 2.术后使用2.5 g/天和5.0 g/天经皮雌二醇凝胶目前未发生肝肾功能的损伤、凝血功能及血脂异常,具有临床应用价值。

关键词： 宫腔粘连   冷刀   影响因素   术后妊娠率  

摘要： 目的:观察HEOS冷刀系统对宫腔粘连患者的术后妊娠结局影响,分析冷刀分离宫腔粘连后患者的各种因素与妊娠结局的关系,以确定用HEOS冷刀系统治疗宫腔粘连后的妊娠结局是否良好,判断HEOS冷刀系统治疗宫腔粘连后妊娠结局是否良好提供依据。方法:2020年10月至2022年01月,新疆医科大学第一附属医院妇科门诊收治符合纳入标准145例宫腔粘连患者的病例资料进行一个回顾性的分析,收集患者术前、术中、术后资料,电话随访妊娠率、粘连再复发、月经改善情况、不良反应发生情况,分析术后妊娠率与各因素关系。结果:1.一般情况:患者平均年龄为30.86±3.434岁,术后妊娠率:51%。2.各因素与妊娠结局单因素分析结果显示病因、病程、术前粘连程度、既往电切史、TCRA次数、术后内膜厚度、宫腔形态、月经恢复情况与冷刀分离术后妊娠结局有统计学意义(P<0.05);孕次、宫腔操作次数、术前月经、再粘连无统计学意义(P>0.05);多因素分析结果显示病程、术后子宫内膜厚度、既往电切史等为影响术后妊娠的危险因素,分别计算曲线下面积分别为0.683,0.771,0.658综合因素曲线下面积为0.846。结论:冷刀分离宫腔粘连可保护子宫内膜,提高妊娠率,病因、病程、术前粘连程度、既往电切史、TCRA次数、术后内膜厚度、宫腔形态、月经恢复情况均为影响冷刀术后妊娠率的影响因素。