关键词： 宫腔粘连   脂肪间充质干细胞   桃红四物加味方   TNF-α   IL-6   IL-18   TGF-β1   CTGF  

摘要： 目的:通过观察桃红四物加味方联合脂肪间充质干细胞对宫腔粘连模型大鼠炎症因子水平及纤维化标志物的影响,探讨其作用及其可能机制。方法:纳入60只10～12周龄健康雌性未孕SD大鼠进行实验研究,根据随机数字表法选择其中10例作为假手术组,其余采用“双重损伤法”建立宫腔粘连模型,建模7天后,随机选择3只大鼠进行形态学和病理学观察,以进行模型验证。待模型验证成功后,再次根据随机数字表法,将成功建模的大鼠分为5组,分别为:模型组、交联透明质酸钠组、中药组、脂肪间充质干细胞(Adipose Mesenchymal Stem Cells,ADSCs)移植组、联合组,联合组10只大鼠,其余各组9只大鼠。假手术组:打开腹腔,将双侧子宫充分暴露,关腹,术后常规饲养;模型组:大鼠造模完成后,同假手术组。其余大鼠分组干预,交联透明质酸钠组:开腹后,将交联透明质酸钠凝胶原位注射于损伤侧宫腔内;中药组:予以中药桃红四物加味方溶液灌胃;ADSCs组:开腹后,将ADSCs移植至损伤侧宫腔内;联合组:开腹后,移植ADSCs至损伤侧宫腔内,并同时开始桃红四物加味方溶液灌胃,灌胃同中药组;各组在治疗28d后取材,肉眼观察子宫大体形态,HE染色观察子宫组织病理变化;Masson染色分析子宫内膜组织纤维化情况,并计算纤维化面积;ELISA法检测大鼠子宫组织中肿瘤坏死因子-α(Tumour Necrosis Factor-alpha,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)的表达水平;免疫组化法检测子宫组织中转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)、结缔组织生长因子(Connective Tissue Growth Factor,CTGF)的表达水平。结果:***模型验证:建模7天后,随机选取3只模型大鼠,大体解剖显示:子宫表面呈红色,触感较差,子宫壁粗糙,形状不规则。子宫腔内有明显的血凝块、局部可见水肿、积液。HE染色示:宫腔狭窄,宫腔上皮不连续,可见纤维粘连,部分宫腔表面有复层的扁平上皮,基底层有少量的腺体,呈类椭圆形,即为造模成功。2.大鼠一般情况分析:建模前,各组大鼠一般情况良好,建模后,模型组大鼠毛发暗淡、稀疏,暴躁易怒,眼睛周围有大量的分泌物,喜欢蜷缩成一团,进食少、部分小便中带血、阴道分泌物有所增多、排泄物不成形等,干预后,各治疗组上述情况均不同程度的改善,以交联透明质酸钠组改善最明显,联合组次之。3.子宫组织病理变化分析:HE染色后显微镜下观察到假手术组子宫内膜完整均匀,表面有柱状上皮覆盖,腺体丰富,开口于内膜表面,主要分布于粘膜下层及基底层,呈椭圆形或长椭圆形;模型组子宫腔内炎性细胞浸润,成纤维细胞明显增生,其余病理表现同前;在其他治疗组中,子宫形态不规则,腺上皮和子宫内膜上皮基本完整,部分子宫内膜表面被单层柱状上皮覆盖,上皮层下可见不同数量呈圆形或椭圆形的新生腺体;4.子宫内膜纤维化分析:1)定性分析:假手术组可见少量梭状蓝色胶原纤维,结构规整,排列有序,粘膜和粘膜下层血管和肌肉呈深红色;模型组;子宫腔狭窄,几乎完全封闭,在基质层中,可以看到大量紧密排列的呈条索状的蓝色胶原纤维,形成纤维网状结构;各治疗组较模型组有所改善,子宫腔部分可见少量纤维粘连,蓝染的胶原纤维也不同程度减少。2)半定量分析:与假手术组相比,模型组纤维化面积比率显著增高(P<0.05);与模型组比较,各治疗组纤维化面积比率均有不同程度的下降(P<0.05),其中交联透明质酸钠组与联合组均下降显著,二者疗效相当,差异无统计学意义(P>0.05);与交联透明质酸钠组比较,ADSCs移植组的纤维化面积仍较高(P<0.05);与联合组相比,中药组与ADSCs移植组无显著性差异(P>0.05)。5.大鼠子宫匀浆中TNF-α、IL-6、IL-18含量比较:与假手术组比较,模型组子宫匀浆中TNF-α、IL-6、IL-18的浓度显著升高(P<0.05);与模型组比较,各治疗组的TNF-α、IL-6、IL-18含量均不同降低,尤其是交联透明质酸钠组,其次是联合组,两者无显著性差异(P>0.05);与交联透明质酸钠组比较,中药组中IL-6的含量仍较高(P<0.05),而ADSCs移植组中TNF-α、IL-18含量亦较高(P<0.05);与联合组相比,中药组与ADSCs移植组无显著性差异(P>0.05)。6.大鼠子宫组织中TGF-β1、CTGF的表达水平比较:与假手术组比较,模型组子宫组织中TGF-β1、CTGF表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,各治疗组TGF-β1、CTGF表达水平均不同程度的降低,其中交联透明质酸钠组中TGF-β1、CTGF表

关键词： 宫腔粘连   雌激素   月经量   TGF-β1   MMP-9  

摘要： 背景及目的 宫腔粘连(IUA)是因多次宫腔操作、炎症、放射线等损伤子宫内膜,内膜纤维化愈合后导致女性子宫颈管和宫腔组织粘连,出现经量减少甚至闭经、复发性流产和不孕等对女性生活质量和生殖功能的不利影响。近年来IUA发病率逐渐上升,而作为治疗“金标准”的宫腔镜宫腔粘连切除术(TCRA)术后重度IUA复发率高达62.5%。目前纤维细胞增生导致宫腔粘连这一IUA发病机制得到了国内外普遍认可,其中研究最为广泛的是促进细胞外基质形成的转化生长因子β1(TGF-β1)及与降解细胞外基质密切相关的金属蛋白酶9(MMP-9)。国内外多项临床研究发现,规律使用雌激素有效模拟了人体生理激素分泌过程,促进子宫内膜增殖生长,并使促纤维化因子如TGF-β1表达下调,纤维化降解因子如MMP-9表达上调,使受损内膜处的瘢痕被正常内膜组织覆盖,降低IUA发生率。2015年中华医学会妇产科学分会提出的宫腔粘连临床诊疗共识中建议雌激素应在TCRA术后使用,但对于外源性雌激素使用途径、种类、剂量及是否加用孕激素意见尚未统一。迄今为止,有关的雌激素不同使用途径的临床疗效对比研究较少,且为小样本数据,因此,对宫腔粘连TCRA术后雌激素不同治疗方案疗效及副作用的探讨,寻找最佳的用药途径,减少药物副作用,具有一定的临床意义。本文通过对宫腔粘连TCRA术后患者给予经皮雌激素凝胶与口服雌激素制剂,观察宫腔再粘连相关指标,如月经改善情况、宫腔形态及粘连评分、增殖晚期子宫内膜厚度、内膜TGF-β1及MMP-9的表达量、两组副作用,详细分析两者治疗效果的差异,为临床用药提供参考依据。 方法 分析2021年11月-2023年3月在深圳市宝安区人民医院明确诊断为中重度宫腔粘连的患者共42例,根据术后雌激素给药途径不同,随机分为经皮组(A组)21例、口服组(B组)21例。入组所有患者雌激素使用时间均在宫腔粘连TCRA术后开始,经皮组(A组)外涂经皮雌二醇凝胶2.5g,bid,共21天,后7天加用地屈孕酮10mg,qd。口服组(B组)口服戊酸雌二醇片1mg,bid,连续21天,后7天加用地屈孕酮10mg,qd,两组均连续用药3个周期。在接受激素治疗的3个疗程期间,我们为两组病人提供了一致的术后护理咨询服务,包括日常生活指导、电话/微信随访等,并强调患者避孕套避孕。比较术后月经改善情况、增殖晚期子宫内膜增长厚度、子宫内膜组织TGF-β1、MMP-9水平、宫腔形态、再粘连率及粘连评分情况。同时持续3个月随访记录患者用药期间不良反应情况。 结果 1.经过治疗,两组患者的月经状况都有显著改善,其中经皮组(A组)的改善率高达61.9%,口服组(B组)的改善率达到了57.1%,但两组之间的差异并不具有统计学意义(P>0.05)。 2.两组患者治疗3个周期后宫腔粘连评分较前均有显著改善,治疗后的IUA评分较治疗前呈下降趋势,且A、B组治疗后IUA评分分别为(4.52±0.98分)、(5.48±1.66分),比较差异有统计学意义(P<0.05)。 3.比较治疗后两组患者宫腔再粘连情况,差异有统计学意义(P<0.05),经皮组(A组)治疗效果优于口服组(B组)。 4.经过治疗,两组内膜TGF-β1及MMP-9表达水平发生了显著变化,治疗后两组内膜TGF-β1水平呈下降趋势,内膜MMP-9呈上升趋势。其中,经皮组的TGF-β1表达水平明显低于口服组,而MMP-9的表达水平则显著高于口服组,这些差异均具有统计学意义(P<0.05)。 5.激素治疗前两组患者增殖晚期子宫内膜厚度同治疗后相比差异有统计学意义(P<0.05)。经过治疗,两组子宫内膜厚度较前均有显著增加(P<0.05),但经皮组与口服组治疗后的子宫内膜厚度差异并不明显,没有统计学意义(P>0.05)。 6.经过比较,经皮组(A组)患者药物不良反应发生率为0.00%,口服组(B组)患者药物不良反应如乳房胀痛,恶心、呕吐等胃肠道反应的发生率则达19.05%,两组之间的对比差异有统计学显著性(P<0.05)。 结论 1.宫腔镜下宫腔粘连分离术与雌孕激素联合治疗在改善子宫内膜供血,促进内膜生长,降低宫腔粘连程度、并增加子宫内膜厚度这几方面疗效均可靠。 2.皮雌激素在减少宫腔再粘连及粘连评分、降低内膜TGF-β1含量、升高内膜MMP-9含量及减少药物副作用方面效果更好,且经皮给药方便,值得推广。

关键词： NF-κB信号通路   人羊膜间充质干细胞   宫腔粘连   上皮化   NF-κB信号通路   人羊膜间充质干细胞   上皮化  

摘要： 第一部分:诱导人羊膜间充质干细胞上皮化对NF-κB信号通路的影响 目的:探讨诱导人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)上皮化对NF-κB信号通路的影响。 方法:提取h AMSCs,将h AMSCs分为对照组、诱导组,对照组使用含血清浓度为10%的DMEM/F12培养,诱导组使用诱导培养基(10ng/ml TGF-β1+10ng/ml EGF+10ng/ml PDGF-BB+1μMβ-雌二醇)培养,CCK-8检测对照组和诱导组h AMSCs的增殖情况。培养5天后采用q RT-PCR检测对照组和诱导组上皮化标志物(CK-7、CK-19、E-cadherin)、间质标志物(Vimentin)、NF-κB信号通路关键因子(IκBα、p65)和NF-κB信号通路靶基因Cyclin D1的m RNA表达水平;采用免疫荧光检测对照组和诱导组CK-7、E-cadherin、Vimentin、IκBα、p65和p-p65的蛋白表达水平。 结果:诱导组和对照组之间的增殖率无明显差异(P>0.05)。与对照组相比,诱导组中CK-7、CK-19、E-cadherin m RNA表达升高(P<0.01),CK-7、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),Vimentin m RNA表达降低(P<0.001),蛋白表达降低(P<0.05),IκBα、p65、Cyclin D1 m RNA表达降低(P<0.0001),IκBα、p65、p-p65蛋白表达降低(P<0.05)。 结论:诱导培养基可以成功诱导h AMSCs上皮化,且h AMSCs上皮化后NF-κB信号通路关键因子及其靶基因Cyclin D1表达下调。 第二部分:干扰NF-κB信号通路对人羊膜间充质干细胞上皮化的影响 目的:探讨NF-κB信号通路在诱导h AMSCs上皮化的过程中发挥的作用。 方法:为了确认NF-κB信号通路在h AMSCs上皮化中的作用,将h AMSCs分为诱导组、抑制剂组、Ad-GFP组(空白腺病毒)、AdIκBα组(腺病毒过表达IκBα)、LV-GFP组(空白慢病毒)、LVRELA-RNAi组(慢病毒沉默p65),CCK-8检测各组h AMSCs的增殖情况。采用q RT-PCR检测CK-7、CK-19、E-cadherin、Vimentin、IκBα、p65和Cyclin D1的m RNA相对表达水平,免疫荧光检测CK-7、E-cadherin、Vimentin和IκBα、p65、p-p65的蛋白表达水平。 结果:各组之间的增殖率无明显差异(P>0.05)。抑制剂组、Ad-IκBα组、LV-RELA-RNAi组中CK-7、CK19、E-cadherin的m RNA表达较诱导组明显升高(P<0.01),CK-7、E-cadherin蛋白表达较诱导组升高(P<0.05),Vimentin的m RNA表达明显下降(P<0.0001),蛋白表达降低(P<0.05)。 结论:NF-κB信号通路参与hAMSCs上皮化的调控,下调NF-κB信号通路能有效促进h AMSCs上皮化。

关键词： 宫腔镜宫腔粘连分离术   宫腔粘连   水中毒   并发症   风险识别模型  

摘要： 背景:水中毒是宫腔镜手术潜在致死性并发症,是由于膨宫液过量吸收所导致。及时识别患者发生水中毒的风险是其预防的关键点和难点。宫腔镜术中的膨宫液吸收情况受到多种因素的影响。患者实时的膨宫液吸收速率越快,后续手术过程中患者发生水中毒的风险越高。然而,由于缺乏对患者实时吸收速率、速率随手术操作变化情况、各影响因素的状态及其影响力大小的掌握,术者在宫腔镜术中难以及时地识别风险,从而无法及时干预,减慢液体吸收,预防水中毒。 宫腔镜宫腔粘连分离术(Hysteroscopic adhesiolysis,HA)是宫腔粘连(Intrauterine adhesions,IUAs)首选的治疗方案。但在处理中重度IUAs,特别是粘连导致宫腔大部分封闭或输卵管口难以窥见时,由于难以辨认患者的宫腔层次,且手术创面大,HA术中容易发生水中毒并发症。 目的:本研究拟研发一种可实时监测宫腔镜术中患者膨宫液吸收情况的装置,包括吸收量和吸收速率,并建立包含IUAs患者临床资料、HA术中膨宫液吸收数据以及手术录像的多模态数据集;在此基础上,从膨宫液吸收速率变化检测、膨宫液吸收影响因素分析以及宫腔镜图像手术损伤识别三个维度建立HA术中水中毒风险识别模型,以辅助术者及时识别风险和及时干预,有效地预防水中毒。 方法:(1)装置研发及数据集建立:装置基于液体体积平衡法设计,分为液体收集、液体测量、数据处理和信息显示四个模块,分别用于膨宫液丢弃量的收集、膨宫液使用量及丢弃量的测量、膨宫液吸收量和速率的计算及数据存储、膨宫液吸收情况(包括实时吸收量和速率数值及变化趋势)的展示及异常数值语音告警。利用液体测量模块中使用量和丢弃量称重传感器分别测量标准砝码(2000g和5000g)各20次,以验证装置测量数据的准确性。随后,前瞻性纳入2020年5月至2021年5月期间就诊于中南大学湘雅三医院的IUAs患者。利用该装置监测HA术中患者的膨宫液吸收情况,同时拍摄HA镜下手术过程,并收集患者的基础信息、妇科疾患、生育史、生命体征和手术资料,建立多模态数据集,为后续模型研究提供数据基础。 (2)膨宫液吸收速率变化检测:针对膨宫液灌流压力起始值为100mm Hg的HA手术,利用基于滑动窗口的时间序列变点检测算法,建立膨宫液吸收状态变化检测模型,以监测膨宫液吸收速率随手术时间的变化趋势,检测水中毒风险系数显著增加的膨宫液吸收状态变化点。随后,计算模型识别状态变化点的精确率和召回率,以评估模型性能。并结合手术录像分析HA术中导致水中毒风险系数增加的因素。 (3)膨宫液吸收影响因素分析:利用岭逻辑回归、决策树、梯度提升决策树和随机森林4种机器学习算法,建立膨宫液吸收状态风险识别模型,以基于患者的12个临床特征(年龄、既往妊娠次数、平均动脉压、术前米索前列醇使用情况、膨宫液灌流压力、宫腔下段狭窄情况、术前输卵管口可见情况、子宫内膜腺体开口密度、宫腔深度、宫腔宽度、IUAs严重程度以及子宫肌层损伤情况),判断HA术中患者膨宫液吸收状态的水中毒风险等级(低风险或高风险)。随后,计算平均受试者工作曲线下面积(Area under receiver-operating characteristic curve,AUC)以评估模型识别性能。并利用SHAP(Shapley Additive ex Planations)方法分析AUC均值最高的模型中各临床特征的重要性,包括特征影响力大小和方向。 (4)宫腔镜图像手术损伤识别:利用深度学习卷积神经网络,建立子宫肌层损伤图像识别模型,以基于HA术中的宫腔镜图像,判断患者是否存在子宫肌层损伤这一危险性临床特征。随后,计算精确率、召回率、准确度以及AUC以评估模型识别性能。 结果:(1)装置研发和数据集建立:装置液体测量模块中使用量和丢弃量称重传感器的测量值与标准砝码的实际质量之间均无显著性差异(P>0.05)。前瞻性纳入525例IUAs患者,其中61例患者在HA术中触发了装置的异常告警(膨宫液吸收速率≥80m L/min)。HA多模态数据集统计结果:轻、中、重度IUAs分别为187、218和120例,患者的平均年龄为32.33±4.63岁,平均膨宫液吸收量为113.50(52.89,289.40)毫升,平均手术时长为622(410,859)秒。 (2)膨宫液吸收速率变化检测:从多模态数据集中纳入244例中重度IUAs患者。在训练集和测试集中,膨宫液吸收状态变化检测模型识别状态变化点的精确率分别为93.30%和87.88%,召回率分别为95.10%和90.63%。HA术中患者膨宫液吸收状态的水中毒风险系数增加主要发生在3个手术场景:在接近封闭或完全封闭的宫腔下段分离粘连时、在封闭的宫角处分离粘连时、以及分离周围型粘连,松解疤痕狭窄环时。子宫肌层损伤是3个手术场景中共同的

关键词： 宫腔粘连   宫腔镜宫腔粘连分离术   阿司匹林  

摘要： 背景 宫腔粘连(intrauterine adhesion,IUA)是指由创伤或炎症等原因使子宫内膜基底层受损、宫腔内形成瘢痕组织的情况,会造成月经过少、闭经、不孕等症状,严重影响女性的生活质量和生育健康。据报道多次人工流产、刮宫所致的IUA发生率高达25%～30%,目前已经成为月经量减少、继发不孕的主要原因。IUA的标准治疗方法是宫腔镜下进行宫腔粘连松解术(Transcervical resection of uterine adhesions,TCRA),但术后复发率高达30%-66%。如何预防IUA术后再发粘连,是治疗难点。阿司匹林可抑制血小板聚集,降低前列腺素(PG)合成酶活性,具有抗血栓和抗血管痉挛作用,近年广泛用于复发性流产的治疗。有文献报道阿司匹林可能通过抑制TGF-β1-Smad2/Smad3通路从而产生抑制子宫内膜纤维化的作用,对IUA后子宫内膜的生长和修复有积极作用。目前国内关于IUA患者术后联合应用阿司匹林的效果评价报道较少,不能说明其理论依据及临床效果。因此,本研究回顾性分析宫腔粘连分离术后联合使用阿司匹林的临床结局,为临床治疗决策提供参考。 目的 探讨宫腔粘连分离术后使用阿司匹林是否能促进子宫内膜的生长和修复,降低宫腔粘连的复发率,改善宫腔粘连患者术后的月经及生殖预后。为宫腔粘连患者的术后治疗决策提供参考。 方法 收集2019年1月至2021年12月在广州医科大学第六附属医院妇科住院部因IUA入院行宫腔粘连分离术的患者329例。建立调查表,记录患者的就诊年龄、孕产次数、流产次数、既往宫腔手术史、有无基础疾病、术前及术后月经情况、术后使用雌激素用量、放置宫腔球囊情况、是否使用阿司匹林、是否使用其它药物及辅助治疗、手术时宫腔粘连评分、再次宫腔镜检查时宫腔粘连评分、IUA分离术后妊娠情况、分娩情况及有无并发症。根据患者术后是否有使用阿司匹林治疗将患者分为对照组(n=221)和阿司匹林组(n=108)。再根据患者术前宫腔粘连评分情况分为三个亚组,分别为轻度宫腔粘连亚组(n=104)、中度宫腔粘连亚组(n=161)、重度宫腔粘连亚组(n=64),比较各组的一般资料、临床结局。术前粘连评分采用美国生育协会(American Fertility Society,AFS)评分标准。采用R语言(4.3.1版本)对数据进行统计学分析。对于连续变量,首先采用夏皮洛-威尔克检验进行正态性检验,若符合正态分布,则采用均数±标准差进行描述,组间比较采用两独立样本t检验,若不符合正态分布,则采用中位数(Q1,Q3)进行统计描述,组间比较采用独立样本秩和检验。对于计数分类资料,采用例数(%)进行描述,组间比较采用卡方检验,不满足卡方检验条件时采用Fisher精确概率法。 结果 1.阿司匹林组与对照组患者术后AFS改善值差异无统计学意义(P>0.05)。 2.阿司匹林组患者的月经改善率高于对照组(75.3%vs.68.5%),但两组差异无统计学意义(P>0.05)。 3.阿司匹林组患者的临床妊娠率高于对照组(63%vs.54.9%),但自然流产率也高于对照组(28.3%vs.17.9%),阿司匹林组分娩率低于对照组(66.7%vs.76.9%)。两组间的临床妊娠率、自然流产率和成功分娩率差异均无统计学意义(P>0.05)。 4.轻度宫腔粘连患者使用阿司匹林的术后月经改善率高于对照组(66.7%vs.43.8%),两组在月经改善方面差异有统计学意义(P<0.05)。 5.宫腔粘连分离术后留置宫腔球囊2-4周的患者AFS评分治疗前后差值优于球囊留置1周的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。 6.术后使用生物类材料、药物和局部理疗对患者术后AFS评分、月经改善及妊娠结局差异均无统计学意义(P>0.05)。 结论 ***患者行TCRA术后使用阿司匹林并未能明显降低二次宫腔镜检查中AFS评分。 2.轻度IUA患者行TCRA术后使用阿司匹林能改善月经情况。 ***术后口服阿司匹林并未改善IUA患者的生殖预后。 ***术后留置宫腔球囊时间2-4周较留置球囊支架1周时间更能降低患者AFS评分。 5.其它辅助治疗措施未能证实能促进IUA分离术后患者子宫内膜再生。

关键词： 宫腔粘连   补肾活血方   β-catenin   子宫内膜修复  

摘要： 目的:观察补肾活血方对重度宫腔粘连肾虚血瘀证患者术后子宫内膜修复及Wnt/β-catenin信号通路的影响,研究补肾活血方促进宫腔粘连子宫内膜修复的可能机制。方法:选择在2022年01月至2022年12月期间,就诊于湖南中医药大学第二附属医院妇科的患者,经宫腔镜检查确诊为重度宫腔粘连,辨证为肾虚血瘀证,共计60例,并随机分为对照组、治疗组,每组30例。两组都在我科接受了宫腔镜下宫腔粘连分离手术,手术时机为月经干净后第3～7天,继发性闭经者无时间限制。术后,对照组给予雌孕激素序贯疗法(戊酸雌二醇片联合地屈孕酮片),治疗组则在此基础上给予补肾活血方联合治疗,两组治疗时间均为3个月经周期。记录并对比两组患者治疗前后宫腔粘连评分,并对排卵日的子宫内膜厚度及子宫动脉血流搏动指数(PI)进行测量,使用HE染色法对子宫内膜的腺体数目进行检测,Masson染色法对子宫内膜的纤维化程度进行评价,免疫组织化学染色法用于检测各组子宫内膜组织中β-catenin、TCF-1、CD117的表达情况,并进行安全性评价。结果:经3个月经周期的治疗后,在子宫内膜厚度、PI、宫腔粘连评分方面,治疗组分别为7.73±0.45mm、1.94±0.40、3.40±1.16分,对照组分别为7.28±0.52mm、2.19±0.40、4.17±1.20分,治疗组的各项指标改善情况较对照组更为显著(P<0.05);与对照组相比,治疗组的子宫内膜腺体数量明显增多,子宫内膜纤维化面积明显减少,差异有统计学意义(P<0.001);治疗组β-catenin、TCF-1、CD117表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究过程中无治疗用药引起的副作用或不良反应。结论:重度宫腔粘连证属肾虚血瘀证患者,术后联合应用补肾活血方治疗的疗效确定,子宫内膜厚度以及腺体数得以增加,子宫内膜纤维化得到改善,改善了子宫血液微循环,有利于子宫内膜修复,有效防治重度宫腔粘连术后粘连复发;补肾活血方能上调β-catenin及TCF-1的表达水平,增加CD117蛋白的表达,对子宫内膜的修复生长有促进作用,此过程可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。

关键词： 司美格鲁肽   宫腔粘连   子宫内膜纤维化   上皮间充质转化  

摘要： 目的:本研究拟探究新型长效胰高血糖素样肽(Glucagon-Like Peptide-1,GLP-1)受体激动剂司美格鲁肽对宫腔粘连(Intrauterine Adhesions,IUA)细胞模型及动物模型的影响及其作用机制,为临床治疗IUA的药物研发提供新的思路和理论基础。方法:本研究中采用转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor-beta,TGF-β1)诱导人子宫内膜间质细胞(Human Endometrial Stromal Cells,HESC)和人子宫内膜上皮细胞(Human Endometrial Epithelial Cells,HEEC)的方法建立IUA细胞模型,采用机械损伤联合脂多糖刺激的方法建立IUA动物模型。在细胞水平上,通过CCK8法探究药物浓度对细胞活性的影响,然后采用qRT-PCR、Western Blot从mRNA和蛋白水平检测纤维化关键指标α平滑肌肌动蛋白(Α-Smooth Muscle Actin,α-SMA)、α1-1型胶原(Collagen type1-alpha 1,COL1A1)、纤维连接蛋白(Fibronectin,FN),上皮细胞间充质转化(EMT)关键指标TGF-βR、蜗牛家族转录抑制因子1(SNAIL1)、波形蛋白(VIM)、N-钙粘蛋白(N-cad)、E-钙粘蛋白(E-cad)和炎症关键指标TNF-α、IL-6、NF-κB、NOX2的表达情况,DCFH-DA法检测细胞内ROS水平,以分析药物对IUA细胞的影响及作用机制。在动物水平上,通过H&E、Masson染色观察子宫内膜腺体数量及胶原纤维沉积情况,通过qRT-PCR、WB检测小鼠子宫组织中纤维化和EMT关键指标α-SMA、COL1A1、FN、VIM、E-cad、TGF-β,通过qRT-PCR检测炎性及氧化应激指标NF-κB、NOX2,Elisa法检测小鼠血清中炎症因子IL-6、TNF-α水平,分析司美格鲁肽对IUA动物模型的作用及其机制。结果:在细胞水平上,经CCK8法筛选,浓度为10μM时司美格鲁肽对HEEC和HESC活力无明显影响,20μM时两种细胞活力明显降低。经TGF-β1诱导后纤维化标志物α-SMA、FN、COL1A1,EMT标志物TGF-βR、SNAIL1、VIM、N-cad,炎症相关指标NF-κB、TNF-α、IL-6的mRNA表达水平显著升高,在给予不同浓度司美格鲁肽处理后,纤维化标志物、EMT指标(TGF-βR未见明显下降)、炎性指标的mRNA表达量均较模型组下降。上述指标的蛋白表达量变化情况与mRNA表达结果一致。此外,DCFH-DA法检测显示经TGF-β1处理后两种细胞内ROS和NOX2表达明显增多,而高浓度司美格鲁肽处理后减少,提示IUA中存在氧化应激反应。在动物水平上,H&E、Masson染色结果显示,正常小鼠子宫腔表面分布大量分散的腺体和柱状上皮细胞,模型组和低剂量给药组小鼠子宫中腺体和血管数量明显减少,且有大面积蓝色胶原沉积,中剂量与高剂量治疗组小鼠子宫中腺体和血管数量有所增加,胶原面积显著减少。模型组小鼠中纤维化和EMT指标α-SMA、FN、COL1A1、VIM、TGF-β的mRNA含量以及α-SMA、VIM、TGF-β蛋白表达量显著上升,在中剂量和高剂量治疗组中均有所下降,而E-cad在模型组和低剂量给药组中显著减少,随着给药浓度升高显著增加。与正常组小鼠相比,模型组中NF-κB、NOX2相对mRNA含量以及血清中的TNF-α和IL-6含量显著增加,给与中、高浓度司美格鲁肽治疗后上述指标下调,差异具有统计学意义。结论:司美格鲁肽能够减少子宫腔内细胞外基质沉积、促进子宫内膜中腺体和血管增生、减少纤维化面积,从而对IUA产生良好治疗效果。初步的机制研究表明,该作用与司美格鲁肽对IUA形成过程中发生的EMT、炎症、氧化应激等相关信号通路的抑制作用有关。

关键词： 宫腔粘连   间充质干细胞   人胎盘间充质干细胞外泌体   雌激素   动物模型  

摘要： 目的 本研究通过构建重度宫腔粘连模型,观察人胎盘间充质干细胞外泌体联合雌激素治疗重度宫腔粘连（intrauterine adhesions,IUA）大鼠模型的效果,并探索人胎盘间充质干细胞外泌体在宫腔粘连中的治疗潜力。 方法 （1）外泌体（exosome,Exo）获取:由贵州汉氏生物有限公司提供。 （2）IUA动物模型构建及验证:机械损伤法构建IUA大鼠模型,模型组（Model group,n=6）,正常组（Normal group,n=6）仅开腹,不给予其他干预。建模后10天取两组内膜组织进行HE染色及Masson染色,观察Normal组与Model组内膜厚度、内膜腺体数量及内膜纤维化容积差异,验证IUA大鼠模型是否构建成功。 （3）实验分组及药物治疗分组:实验分组,阴性对照组（Negative control group）、IUA+生理盐水组（Control group）、IUA+E2组（E2group）、IUA+HPMSC-Exo组（Exo group）、IUA+HPMSC-Exo+E2组（Exo+E2group）,每组6只。阴性对照组（Negative control group）:取下腹正中约2cm纵切口进入腹腔内,不予刮宫处理,观察双侧子宫后用4.0可吸收丝线缝合腹部切口,术后不给予药物治疗;IUA+生理盐水组（Control group）:剖腹进入腹腔,沿右侧子宫（造模侧）上端纵切1cm左右,刮宫至宫壁产生粗糙感,用4.0可吸收丝线缝合右侧子宫切口。10天后,于右侧子宫造模段注射0.5ml生理盐水;IUA+E2组（E2group）:造模10天后开始给予戊酸雌二醇（E2）0.5mg/kg/d[1]灌胃治疗,连续21天;IUA+HPMSC-Exo组（Exo group）:造模后第10天,于造模侧宫腔内注射HPMSC-Exo悬液0.5 ml（7x10～6个/200μg/ml）(贵州汉氏生物有限公司提供);IUA+HPMSC-Exo+E2组（Exo+E2group）:造模后第10天,造模侧宫腔内注射HPMSC-Exo悬液0.5 ml（7x10～6个/200μg/ml）,同时予戊酸雌二醇（E2）0.5mg/kg/d灌胃治疗,连续21天。药物治疗3周后,大剂量麻醉药物处死大鼠,取出子宫组织。HE染色及Masson染色检测子宫内膜腺体数、内膜厚度及纤维化容积。免疫组化检测Ki-67及Vimentin蛋白表达水平。 结果 （1）机械损伤可成功构建IUA大鼠模型,与Normal组相比,Model组腺体数量减少（5.60±4.03μm vs 25.47±4.55μm,P≤0.001）,内膜菲薄（97.75±82.53μm vs759.18±48.30μm,P≤0.001）,纤维化容积增高（P≤0.01）。 （2）HE及Masson染色结果:与NC组相比,Ctrl组腺体数量减少（6.67±4.51μm vs 53.33±9.61μm,P≤0.001）,内膜变薄（252.24±25.00μm vs 741.34±16.71μm,p≤0.001）,胶原纤维沉淀增多（P≤0.001）。与Ctrl组相比,E2组腺体数量及内膜厚度无明显变化,纤维化容积有改善（P≤0.05）。与Ctrl组相比,Exo组内膜增厚（470.52±12.55μm vs 741.34±16.71μm,p≤0.01）,胶原纤维沉积得到改善（P≤0.05）,而腺体数量无统计学意义。与Ctrl组相比,Exo+E2组腺体总量增多（28.67±3.06μm vs 53.33±9.61μm,P≤0.01）,内膜增厚（637.54±10.90μm vs 741.34±16.71μm,P≤0.001）,胶原纤维沉积明显改善（P≤0.001）。与E2组相比,Exo组腺体数量无明显变化,内膜增厚（470.52±12.55μm vs 333.73±107.90μm,P≤0.05）,纤维化无明显差异。Exo+E2组比Exo组内膜增厚（637.54±10.90μm vs 470.52±12.55μm,P≤0.05）,内膜组织纤维化减少（P≤0.001）,腺体数量无统计学意义。 （3）免疫组化结果:与NC组相比,Ctrl组Ki-67表达水平下降（P≤0.001）,Vimentin蛋白表达水平上升（P≤0.001）。与Ctrl组相比,E2组Ki-67蛋白表达水平增加（P≤0.01）、Vimentin蛋白表达降低（P≤0.001）,Exo组Ki-67表达水平升高（P≤0.01）,Vimentin蛋白降低（P≤0.001）,Exo+E2组Ki-67表达增高（P≤0.001）,Vimentin蛋白表达下降（P≤0.001）。与E2组相比,Exo组Ki-67及Vimentin蛋白表达水平无明显变化。Exo+

关键词： 宫腔粘连   宫腔镜   交联透明质酸钠   再粘连   戊酸雌二醇  

摘要： 目的：应用交联透明质酸钠联合戊酸雌二醇治疗中、重度宫腔粘连分离术后宫腔恢复情况的影响，探讨其临床效果。方法：将2020年1月—2022年12月期间收录的133例于百色市人民医院治疗的中、重度宫腔粘连，并进行宫腔镜下粘连松解术的患者作为研究样本，采用随机分组处理，将采用口服戊酸雌二醇治疗的59例患者作为对照组，将采用术中宫腔内注入宫安康3mL后，再口服戊酸雌二醇进行联合治疗的74例患者作为实验组，两组患者的治疗周期均为3个月，比较治疗后第1个月宫腔形态变化，第3、6个月月经量变化以及子宫内膜厚度。结果：实验组治疗后宫腔形态有效率相较于于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；实验组月经量增多于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；实验组子宫内膜平均厚度多于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：在中、重度宫腔粘连的患者中，选择在宫腔镜下粘连松解术治疗的过程中，应用交联透明质酸钠联合戊酸雌二醇治疗，其效果显著，具有一定的推广价值。

关键词： 宫腔粘连   经阴道三维超声自由解剖成像技术   经阴道二维超声技术   诊断效能  

摘要： 目的 探讨经阴道三维超声自由解剖成像技术诊断宫腔粘连的临床应用价值。方法 选取52例疑似宫腔粘连患者为研究对象，均进行经阴道三维超声自由解剖成像技术和经阴道二维超声技术检查，比较两种检查方法的诊断效能。结果 经阴道三维超声自由解剖成像技术的特异度、敏感度以及准确率分别为71.43%、93.33%、88.46%，显著高于经阴道二维超声成像技术的14.2942.86%、68.89%、63.46%(P<0.05)。结论 经阴道三维超声自由解剖成像技术是一种可靠的宫腔粘连的有效诊断方式，有显著应用价值。