关键词： 诱导性多能干细胞来源的间充质干细胞   美洲大蠊提取物   宫腔粘连   铁死亡  

摘要： 研究背景: 宫腔粘连(Intrauterine adhesion,IUA)会导致流产和不孕,子宫内膜损伤是IUA的起始阶段,诱导多能性干细胞来源的间充质干细胞(Mesenchymal stem cells derived from induced pluripotent stem cells,iMSCs)在IUA的治疗中有抗纤维化和促进子宫内膜再生的潜力。然而,由于移植后细胞活性低和停留时间短,导致iMSCs在粘连宫腔发挥的临床效果受到限制。临床上中药美洲大蠊提取物(Periplaneta americana extractions,PAEs)能提升细胞活力,抗纤维化作用明显,提高组织的愈合能力。本研究观察PAEs对iMSCs的作用效果,研究其是否可以增加iMSCs活力,以提高iMSCs治疗IUA的效果。 研究目的: 通过PAEs干预iMSCs,探索PAEs是否可以提升iMSCs的细胞活力,从而提高iMSCs对IUA的疗效,并探索其中的机制。 研究方法: 1、研究第一部分:通过血清剥夺(模拟干细胞在生物体内移植的培养条件)培养iMSCs观察,CCK8实验观察细胞增殖生长状况,通过凋亡细胞试剂盒检测细胞凋亡情况及DCFH-DA探针检测细胞内的活性氧(ROS)水平,细胞培养基内加入PAEs,摸索PAEs作用iMSCs的最佳浓度,干预后重新检测增殖及凋亡情况,同时通过MDA试剂盒检测细胞内的脂质氧化程度。 2、研究第二部分:观察PAEs处理与否的iMSCs在生物体内的存活时间及两组iMSCs对IUA小鼠模型的抗纤维化效果。动物活体成像实验检测iMSCs在IUA小鼠模型体内的存留时间。并在IUA小鼠模型上观察PAEs处理前后的iMSCs分别的治疗效果,模型小鼠设置正常组、模型组、血清剥夺培养iMSCs组、PAEs处理iMSCs组。HE染色检测小鼠子宫内膜的形态和结构;Masson染色及免疫组化检测模型动物子宫内膜纤维化的改变,最后合笼实验检测治疗后模型动物的生育能力。 3、研究第三部分:探索PAEs提升iMSCs生物学功能的机制,转录组学测序技术分析PAEs处理与否iMSCs的基因差异,RT-q PCR和Western blot筛选验证iMSCs中铁死亡差异表达的m RNAs和FTH1、FTL蛋白。免疫荧光及Western blot法检测GPX4表达量来验证iMSCs铁死亡情况,C11 BODIPY 581/591荧光探针检测iMSCs的脂质过氧化程度,斑点杂交实验检测m5C甲基化水平,免疫荧光分析m5C表达水平,免疫荧光和Western blot来检测m5C的甲基化酶NSUN5的表达情况。 研究结果: 1、研究第一部分:对多能性诱导干细胞来源的iMSCs进行培养鉴定,通过血清剥夺培养模式来模拟iMSCs在生物体内的生存环境,在血清剥夺的情况下,iMSCs细胞增殖明显受限,iMSCs凋亡水平升高,细胞内的活性氧(ROS)水平上升。加入PAEs后,iMSCs的增殖能力增加,细胞凋亡情况及细胞内的活性氧水平降低,同时,PAEs也降低了iMSCs细胞的MDA水平,降低其脂质氧化程度。 2、研究第二部分:动物体外成像实验观察到PAEs处理的iMSCs在小鼠体内的存留时间更长。在IUA小鼠模型上观察到PAEs处理的iMSCs治疗IUA小鼠子宫内膜的厚度和腺体数量与正常对照组无差异;Masson染色及免疫组化检测发现模型小鼠子宫内膜纤维化降低;最后合笼实验观测iMSCs治疗IUA小鼠胚胎数量明显增加。 3、研究第三部分:转录组学测序技术分析PAEs处理与否iMSCs的基因差异,提示PAEs参与了iMSCs在血清剥夺条件下的铁死亡通路。免疫荧光及Western blot法提示PAEs显著提高了iMSCs铁死亡标志性蛋白GPX4的表达量,C11 BODIPY 581/591荧光探针检测提示PAEs显著降低iMSCs的脂质过氧化程度。RT-q PCR验证了PAEs能够提高iMSCs铁死亡机制相关的FTH1及FTL基因及蛋白表达水平。斑点杂交及免疫荧光实验检测到iMSCs细胞的m5C甲基化水平在PAEs处理后增高,且相应的m5C甲基化酶NSUN5表达也升高。 结论: PAEs能够提升iMSCs在血清剥夺培养条件下的细胞活性,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡及过氧化;PAEs干预的iMSCs在IUA小鼠体内存活时间延长,治疗效果更佳;PAEs通过激活m5C甲基化及m5C的甲基化酶NSUN5来调节iMSCs的铁死亡通路相关因子的表达水平,降低iMSCs的铁死亡水平。

关键词： 宫腔粘连   超声   光声   纤维化   血氧浓度   骨髓间充质干细胞   外泌体   超声   靶向递送   宫腔粘连   外泌体   超声   靶向递送   宫腔粘连   纤维化  

摘要： 目的:比较光声成像（Photoacoustic imaging,PAI）与高频超声（Ultrasound,US）检测不同级别宫腔粘连（Intrauterine adhesions,IUA）的敏感性,探讨PAI能否通过监测子宫内膜氧合无创、定量评估IUA。 方法:共17只大鼠用于本部分研究,5只大鼠的10个子宫作为（假手术）对照,12只大鼠的24个子宫用于建立机械性损伤IUA模型。建模前及建模后28天发情期应用高频超声子宫内膜二维成像及光声子宫内膜血氧成像。应用image J图像分析软件测量超声子宫内膜厚度（Endometrial thickness,EMT,US-EMT）,应用Vevo LAB 3.2.0光声后处理软件定量分析子宫内膜平均血氧浓度（Hemoglobin oxygen saturation,s O2 Avr,PA-s O2 Avr）。收集所有子宫标本进行组织学鉴定,HE染色下测量子宫内膜厚度（HE-EMT）、计数子宫内膜腺体数量（Endometrial gland,EMG,HE-EMG）;Masson染色计算子宫内膜（Endometrium,EM）纤维化面积比（Fibrosis area ratio,FAr,EM-FAr）;免疫荧光分析子宫内膜血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）平均荧光强度（Mean fluorescence intensity,VEGF-MFI）。 采用Mann-Whitney U双侧Student t检验或单因素方差分析,直线相关分析成像评估与组织学鉴定的相关性。以大鼠子宫内膜纤维化程度作为IUA分级标准分为正常（F0）、轻度（F1）、中度（F2）、重度（F3）,组间比较影像学及组织鉴定各项指标;采用受试者工作特征曲线（ROC）评价高频超声和光声成像对不同程度宫腔粘连的诊断效能。 结果:（1）活体影像学评估,模型组术后与模型组术前、对照组术前及对照组术后比较差异均有统计学意义（均p<0.01）,而其他两两比较无统计学差异（均p>0.05）;（2）US-EMT和PA-s O2 Avr与HE-EMT呈线性正相关（r=0.745和0.911）、与HE-EMG呈线性正相关（r=0.608和0.756）、与EMT-FAR呈线性负相关（r=-0.820和-0.903）、与VEGF-MFI均呈线性正相关（r=0.875和0.942）。（3）F0、F1、F2、F3各组间影像学评估参数及组织鉴定结果组间两两比较,F0和F1的US-EMT组间差异无统计学意义（p>0.05）,其余各参数组间差异均有统计学意义（均p<0.01）。（4）在对F1诊断的比较中,PA-s O2 Avr的ROC下面积高于US-EMT（0.983 vs 0.625,p<0.01）;而在对F2和F3的诊断比较中,PAI和2D-EMT的ROC下面积没有观察到差异（分别为0.990 vs 0.987,P=0.756;1.0 vs 1.0,P>0.99）。 结论:与高频超声测量内膜厚度相比,光声成像血氧浓度检测对轻度IUA的诊断更灵敏,有助于更准确地检测早期宫腔粘连,为早期治疗提供依据;同时,光声成像能对IUA进行分级。此外,通过光声成像检测子宫内膜平均血氧浓度能反映子宫内膜功能,为子宫内膜容受性评估提供新的方法。 目的:提取大鼠骨髓间充质干细胞外泌体（Bone marrow mesenchymal stem cells Exosome,BMSCs-Exos）,探索超声靶向微泡破坏（Ultrasound-targeted microbubble destruction,UTMD）技术促进BMSCs-Exos在IUA大鼠子宫的递送。 方法:培养SD大鼠BMSCs,采用差速超速离心法提取BMSCsExos,对其进行鉴定。选取30只健康SD大鼠随机分为6组（n=5）,评估不同剂量BMSCs-Exos悬液尾静脉注射后的短期及长期体内安全性;其中3组分别采用不同浓度的BMSCs-Exos（0μg、50μg、100μg）重悬液经尾静脉注射,常规饲养24h后进行评估;另外3组分别按照上述浓度注射,常规饲养30d后评估。用DiR标记BMSCs-Exos（DiR@BMSCs-Exos）,用声诺维干粉剂配制微泡悬液（Microbubbles,MBs）;将双侧子宫机械损伤IUA模型大鼠随机分为3组（n=6）,每组12个子宫;分别为（1）DiR@BMSCs-Exos组,（2）DiR@BMSCsExos+MBs组,（3）DiR@BMSCs-Exos+UTMD组。第（1）组经大鼠尾静脉快速注射0.5ml DiR@BMSCs-Exos PBS溶液+0.5ml生理盐水混合溶液,第（2）、（3）组经大鼠尾静脉

关键词： 宫腔粘连   间充质干细胞   外泌体   miRNAs   TGF-β  

摘要： 背景及目的:宫腔粘连(Intrauterine adhesion,IUA)是严重危害女性生育和身心健康的常见疾病。临床上常规的治疗手段效果并不理想,术后复发率仍然很高。因此亟需开发新的预防、逆转和修复子宫损伤的治疗策略。近年来研究发现间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)及其分泌的外泌体(Exosomes,Exos)在IUA的治疗中有较好的作用。但它们改善受损子宫内膜的分子机制并不明确,这也是间充质干细胞外泌体(Mesenchymal stem cells derived exosomes,MSC-Exos)目前还没有应用到临床治疗的原因之一,因此探究MSC-Exos详细的作用机制显得尤为重要。本研究旨在验证MSC-Exos对IUA的治疗作用,并且探究MSC-Exos在IUA治疗中的分子机制,为研究开发针对宫腔粘连新的治疗方法提供理论基础。 方法:***-Exos的提纯和鉴定:首先通过超速离心法从胎盘间充质干细胞(Placental mesenchymal stem cells,PMSCs)中提取 Exos 并对其进行鉴定。2.治疗作用和安全性评价:用TGF-β1诱导构建IUA细胞模型,电凝法构建大鼠IUA模型。分别通过构建好的体外和体内模型确定Exos的治疗效果,并且评估Exos治疗的安全性。3.分子机制研究:通过miRNA微阵列法和qRT-PCR法筛选特异性miRNAs。随后利用KEGG/GO富集分析、GEO数据库和Targetscan数据库等进行生物信息学分析,并且构建了蛋白互作网络图和miRNA-mRNA网络图。最后通过双荧光素酶报告基因实验、蛋白质印迹法(Western Blot,WB)和qRT-PCR等实验方法验证特异性miRNAs对TGF-β/smad通路的调控作用。 结果:1.动物研究表明:胎盘间充质干细胞来源的外泌体(PMSC-Exos)可以增加子宫内膜厚度、促进腺体增生和细胞增殖、减轻纤维化,并且恢复大鼠受损子宫的生育能力。此外,大鼠外周血生化和血常规检测证实宫内PMSC-Exos药物治疗是安全的。2.体外研究表明:PMSC-Exos可以促进子宫内膜细胞的增殖和迁移,抑制纤维化。3.特异性miRNAs的发现:筛选出了三个特异性miRNAs,它们在PMSC-Exos中含量较高且有抗纤维化的作用,被认为是PMSC-Exos治疗IUA 的关键。其中 miR-125b-5p/miR-30c-5p 和 miR-23a-3p 分别通过靶向 smad2和smad3的3'-UTR区抑制其表达,从而调节TGF-β/smad通路,发挥抗纤维化作用。 结论:综上所述,我们的研究表明PMSC-Exos可以有效的改善IUA,并通过传递miR-125b-5p,miR30c-5p和miR-23a-3p发挥抗纤维化和促进细胞增殖迁移的作用,为IUA的精准治疗和MSC-Exos的无细胞治疗提供了新思路。

关键词： 宫腔粘连   妊娠率   复发率   影响因素   列线图  

摘要： 背景:宫腔粘连(intrauterine adhesions,IUA)是指子宫内膜基底层损伤,子宫壁相互粘连,可使宫腔、宫颈管部分或全部闭塞的疾病。IUA的标准术式是宫腔镜宫腔粘连分离术(transcervical resection of adhesion,TCRA),尽管术后辅助治疗多样,但整体治疗效果不甚满意,表现出术后妊娠率低、复发率高的特点,给患者带来严重心理负担。目前针对TCRA术后妊娠和复发影响因素的研究结论尚不统一,且相关影响因素的评估无法直接指导临床诊疗,需要更为直观、可靠、个体化的评价方法来解决这一临床问题。 目的:观察TCRA术后妊娠与复发的情况,分别对TCRA术后影响妊娠、复发的各种因素进行分析,找到独立危险因素,建立列线图预测模型,为TCRA术后的个体化治疗提供依据。 方法:回顾性分析2018年01月～2022年6月在十堰市太和医院进行TCRA治疗的218例IUA患者的临床资料。收集术前、术中影响TCRA术后妊娠率、复发率的因素,通过SPSS及R语言统计学分析,建立临床预测模型。 结果:***、AFS、ESGE评分对妊娠有预测价值,AUC分别为0.550、0.605、0.585。Nasr评分在复发率上的差异不显著,March、AFS、valle、CSGE、ESGE评分对复发有预测价值,AUC分别为0.561、0.561、0.542、0.556、0.596。 ***术后总妊娠率48.17%(105/218),活产率31.19%(68/218),足月产率29.82%(65/218),早产率1.38%(3/218)。轻度、中度、重度粘连术后妊娠率分别为73.68%、50%、20.7%。不同粘连程度在不同时间段内的妊娠率具有统计学意义(P<0.05),术后7～12月妊娠率高于术后6月、1～2年内、2年后的妊娠率。 3.术后不良妊娠结局以稽留流产为主,胎盘异常率6.88%,胎盘异常组与胎盘正常组在不同粘连程度之间的分布无显著差异。单因素分析中有意义的指标有年龄、分娩次数、清宫原因、术前输卵管开口情况、其他宫腔操作、术后月经情况、术后输卵管开口情况。其中年龄、术后输卵管开口情况、术后月经恢复情况、其他宫腔操作史是术后妊娠率的独立危险因素,AUC分别为0.566、0.632、0.572、0.655。 4.术后总体复发率为49.54%(108/218),轻度粘连的复发率为36.84%,(7/19),中度粘连的复发率为47.06%(80/170),重度粘连的复发率为72.41%(21/29)。在术后3月内复发率高于术后4～6月及7～12月,不同粘连程度在不同时间段的复发率无统计学意义。单因素分析中有意义的指标有术前病程、月经情况(术前术后)、输卵管开口(术前术后)、宫角(术前术后)、粘连范围、粘连部位、子宫内膜厚度(术前术后)、电切次数。其中病程、术后输卵管开口情况、术后子宫内膜厚度是复发的独立危险因素,AUC分别为0.603、0.636、0.611、0.584。 5.将妊娠独立危险因素构建列线图预测模型,AUC为0.751(95%CI:0.687-0.815),约登指数0.414,其对应的灵敏度为0.724,特异度为0.690,准确度为0.706,截断值0.508。C-index为0.744(95%CI:0.678-0.807),模型拟合优度检验p=0.909,提示模型拟合较好。在15%-72%,74%-84%的风险阈值概率范围内,临床上是获益的。 6.将复发独立危险因素建立列线图,AUC为0.744(95%CI:0.680-0.809),提示模型预测效能较好,约登指数0.366,其对应的灵敏度为0.639,特异度为0.727,准确度为0.683,截断值0.515。C-index为0.751(95%CI:0.685-0.811),模型拟合优度检验p=0.804,提示模型拟合良好。在25%-89%的风险阈值概率范围内,临床上是获益的。 结论:***术后患者的妊娠率较低,在术后7～12月可能是妊娠的最佳时期,术后妊娠不良结局多见于稽留流产。 ***术后患者的复发率较高,术后3月内早期行宫腔镜检查可能会降低复发率,改善远期复发的严重程度。 3.年龄大于35岁、术后月经恢复较差、术前病程>1年、术后输卵管开口越少、多次行TCRA及其他宫腔操作的患者应为高危患者,可增加术后措施及随访提高妊娠率、减少复发率。 4.妊娠、复发预测模型具有较好的预测效能和临床价值,优于目前常用评分标准,可为患者的个体化治疗提供指导。

关键词： 宫腔粘连分离术   雌激素   阿司匹林   宫腔修复   子宫内膜厚度  

摘要： 【目的】 探讨宫腔粘连分离术(Transcervical resection of adhesionst,TCRA)后应用补佳乐、地屈孕酮联合阿司匹林对宫腔修复情况、月经量、子宫内膜厚度、药物不良反应的影响,针对TCRA手术后预防再粘连的有效策略进行深入研究,旨在为临床实践提供有价值的参考依据。 【方法】 本研究选择2020年1月-2023年1月在昆明医科大学第二附属医院生殖医学科行宫腔粘连分离术的患者178例作为研究对象,根据患者的入院时间随机分为研究组(n=89)与对照组(n=89)。对照组术后第1天口服补佳乐(戊酸雌二醇,2mg/次,2次/天),连续30天;补佳乐24天后加服地屈孕酮(10mg/次,2次/天),共吃7天(即与补佳乐同时停药)。研究组补佳乐与地屈孕酮治疗方案与对照组相同,在术后第3天开始口服阿司匹林(75mg/次,1次/天,月经期禁用,服药到和补佳乐一起停药)。比较2组治疗后宫腔修复情况、月经量、子宫内膜厚度、药物不良反应。 【结果】 (1)宫腔恢复情况:研究组治疗后宫腔恢复痊愈13例,显效72例,治疗有效率为95.51%(85/89),对照组治疗后宫腔恢复痊愈13例,显效66例,治疗有效率为87.64%(79/89),研究组治疗后宫腔恢复有效率高于对照组,但两组无统计意义(P>0.05)。(2)月经改善情况:研究组治疗后月经改善痊愈24例,显效63例,治疗有效率为97.75%(87/89),对照组治疗后月经改善痊愈17例,显效63例,治疗有效率为89.88%(80/89),研究组治疗后月经改善有效率高于对照组,具有统计意义(P<0.05)。(3)妊娠情况、子宫内膜厚度:研究组妊娠率为15.73%(14/89),对照组妊娠率为11.24%(10/89),研究组妊娠率高于对照组,但无统计意义(P>0.05);研究组术后子宫内膜厚度为(7.01±0.86)mm,对照组术后子宫内膜厚度为(6.57±0.78)mm,两组术后子宫内膜厚度均厚于术前,且研究组术后子宫内膜厚度厚于对照组,具有统计学意义(P<0.05)。(4)不良反应:研究组发生头痛2例,1例胃肠道反应,5例体重增加,不良反应发生率为8.99%(8/89),对照组发生头痛1例,1例胃肠道反应,4例体重增加,不良反应发生率为6.74%(6/89),两组不良反应发生率无统计意义(P>0.05)。 【结论】 TCRA术后应用补佳乐、地屈孕酮联合阿司匹林可以改善IUA患者的宫腔修复和月经量,增加子宫内膜厚度,术后不良反应较低,但对妊娠率无显著影响。

关键词： 宫腔粘连   纤维化   嵌合抗原受体T细胞   成纤维细胞活化蛋白   外泌体  

摘要： 一、研究目的 宫腔粘连（intrauterine adhesion,IUA）是一种以子宫内膜纤维化为主要病理特征的生殖系统疾病。临床上,宫腔操作可导致子宫内膜基底层受损,上皮细胞再生受阻,而纤维结缔组织增生,子宫腔或子宫颈因纤维粘连而部分或完全关闭,严重影响患者的生殖健康。目前,IUA手术治疗只能从物理层面消除粘连,复发率较高。为实现子宫内膜的功能性恢复,还需要探索IUA治疗新方法。在前期工作中,课题组利用自主构建的工程化免疫细胞组库在IUA小鼠模型体内进行筛选,确定成纤维细胞活化蛋白（fibroblast activated protein,FAP）为潜在治疗靶点,并制备了能够同时以高亲和力结合人鼠FAP抗原的单克隆抗体C21D5。FAP是活化成纤维细胞的特异性标志物,基于单克隆抗体C21D5的sc Fv序列,能够构建FAP靶向性的嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor,CAR）,在对T细胞进行工程化后,得到FAP靶向性CAR-T（FAP-CAR-T）细胞。FAP-CAR-T细胞能够直接识别和结合靶细胞表面的FAP,杀伤靶细胞。此外,课题组在2019年发现并报道,CAR-T细胞来源的外泌体同样携带特异性CAR,并具备亲本CAR-T细胞类似的生物靶向性和细胞杀伤活性,并且,相比于CAR-T细胞,CAR外泌体作用更加温和,不会引发炎性细胞因子的释放。因此,FAP-CAR-T细胞来源的外泌体可能对FAP阳性成纤维细胞有靶向杀伤作用,能够用于子宫内膜纤维化的治疗。 在本研究中,首先构建了FAP-CAR-T细胞,并对其体外靶细胞杀伤和体内抗纤维化作用进行了评估,然而,实验结果表明,FAP-CAR-T细胞治疗会引发小鼠体内细胞因子释放综合征（cytokine release syndrome,CRS）,导致小鼠死亡。接着,制备了FAP-CAR-T细胞来源的外泌体（FAP-CAR-Exos）,探究FAP-CAR-Exos在体外对FAP阳性NIH 3T3成纤维细胞的杀伤活性,以及在IUA小鼠模型中对子宫内膜纤维化的治疗作用,为基于CAR的免疫靶向疗法在IUA及其他纤维化疾病中的治疗研究提供新的依据。 二、研究方法 ***-CAR-T细胞构建 基于C21D5单克隆抗体sc Fv序列,设计FAP-CAR基因序列,插入p MP71-EGFP逆转录病毒载体,构建FAP-CAR-p MP71-EGFP重组质粒;利用HEK 293T细胞进行逆转录病毒的包装,并浓缩病毒;利用免疫磁珠法分选小鼠脾脏CD4+T和CD8+T细胞,并调整细胞比例为1:1;利用逆转录病毒感染T细胞,制备FAP-CAR-T稳转细胞株。 ***-CAR-T细胞对靶细胞的体外杀伤、对IUA小鼠的体内治疗作用研究 10 ng/m L TGF-β1刺激NIH 3T3成纤维细胞,将FAP-CAR-T细胞与FAP阳性NIH 3T3成纤维细胞共孵育;检测T细胞活化分子CD25、CD69的表达;Cr51释放法检测梯度效靶比下FAP-CAR-T细胞对FAP阳性NIH 3T3成纤维细胞的体外杀伤。 机械损伤法构建IUA小鼠模型,经尾静脉注射FAP-CAR-T细胞,剂量为1×10～6个/只;记录48 h内小鼠体重变化和生存率;获取小鼠外周血,ELISA检测IL-2、IL- 6水平;获取小鼠子宫组织,利用HE和Masson染色观察宫腔粘连和子宫内膜纤维化情况;流式细胞术检测子宫内膜组织FAP阳性细胞数量;利用IL-6抗体治疗CRS,经尾静脉同时注射FAP-CAR-T细胞和IL-6抗体,剂量分别为1×10～6个/只和10 mg/kg;记录48 h内小鼠体重变化和生存率;获取小鼠子宫组织,利用HE和Masson染色观察宫腔粘连和子宫内膜纤维化情况;流式细胞术检测小鼠子宫内膜组织FAP阳性细胞数量和外周血FAP-CAR-T细胞数量。 ***-CAR-Exos制备和鉴定 扩大培养FAP-CAR-T细胞,采用超速离心法从培养上清中富集制备FAP-CAR-Exos;在透射电子显微镜下观察外泌体形态;利用纳米颗粒跟踪分析技术检测外泌体粒径大小和颗粒浓度;采用western blot鉴定外泌体标志物及FAP-CAR表达情况;利用竞争法ELISA鉴定FAP-CAR-Exos对FAP的靶向结合活性。 ***-CAR-Exos对靶细胞的体外杀伤、对IUA小鼠的体内治疗作用研究 Cr51释放法检测梯度外泌体总蛋白浓度下,FAP-CAR-Exos对FAP阳性NIH 3T3成纤维细胞的体外杀伤情况。 机械损伤法构建IUA小鼠模型,将小鼠分为四组,高剂量治疗组于IUA造模后第7天开始,高剂量预防组于IUA造模当天开始,分别每间隔一天经尾静脉注射150mg/kg FA

关键词： 宫腔粘连   羊膜   子宫内膜   月经  

摘要： 目的:使用新鲜羊膜制品包裹的宫内节育器(羊膜环)预防中重度宫腔粘连患者术后再发粘连,通过观察新鲜羊膜制品移植后患者的月经改善情况、宫腔环境的改善情况、子宫内膜厚度的变化以及宫腔粘连AFS评分的改变等,评估新鲜羊膜制品移植在治疗中重度宫腔粘连患者的临床疗效和可行性。 方法:选取2021年09月至2023年12月在云南省第三人民医院妇科经宫腔镜检查术诊断为中重度宫腔粘连(Intrauterine adhesions,IUA)的患者为研究对象。符合条件的受试者接受了基于纳入和排除标准严格的筛选,最终70例有效病例患者纳入本研究,按照宫腔镜下宫腔粘连分解术(Trans-cervical resection of adhesions,TCRA)后预防宫腔再次粘连的不同方法及患者个人意愿,将研究对象分为实验组(羊膜环组)和对照组(单纯宫内节育器组),每组各35例。实验组患者在TCRA术后宫腔内放置人新鲜羊膜制品包裹的宫内节育器(羊膜环)以预防宫腔粘连的复发,对照组患者术后宫腔仅置入宫形宫内节育器以预防宫腔粘连的复发。两组患者在术后均予抗生素预防感染,并予人工周期治疗,所有患者均在术后三月再次返院复诊,复查妇科阴道三维B超和宫腔镜检查进一步评估。比较两组患者术前月经及术后月经改善情况、子宫内膜厚度、宫腔环境改善情况、宫腔粘连AFS评分。 结果:(1)在对比分析了两组患者的一般资料后,包括年龄、月经周期、生育经历(如怀孕次数,生产次数,流产次数)以及身体质量指数(BMI)等数据,我们发现这些变量之间的差异并没有达到统计学上的显著性(P>0.05)。(2)两组患者“月经减少”、“闭经”、“周期性下腹痛”这三种常见的临床特征比较差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)两组患者术中证实宫腔环境改变的比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者手术时长和术中膨宫液用量差异均无统计学意义(P>0.05)。(4)两组患者术前和术后3个月子宫内膜厚度的比较在统计学上未见显著差异性(P>0.05)。术前和术后3个月两组患者的子宫内膜厚度变化经过组内对比发现,实验组术后3个月子宫内膜厚度与其术前相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)两组患者术前宫腔粘连AFS评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组实验术后3个月宫腔粘连AFS评分变化的差异性具有统计学意义(P<0.001)。将两组患者宫腔粘连AFS评分变化进行组内比较发现,差异均具有统计学意义(P<0.001)。(6)两组术前术后AFS评分差值差异具有统计学意义(P<0.05)。(7)两组患者术后月经改善增多的比较差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论:本研究结果显示,新鲜羊膜制品移植治疗中重度宫腔粘连患者,可使月经量减少的患者月经得到更大程度的改善,新鲜羊膜制品移植有助于损伤的子宫内膜修复,新鲜羊膜制品移植更能改善宫腔粘连AFS评分,且降低更加明显。本研究证实由于羊膜具有的特殊生物学特性,将新鲜膜制品移植到宫腔内部,可以充当有效的生物屏障保护层,有助于刺激子宫内膜的修复和生长,这为中重度宫腔粘连的患者残存的内膜提供更多的生长时间。采取羊膜移植治疗中重度宫腔连患者,可有效改善其月经情况和宫腔环境,可有效降低宫腔粘连AFS评分,使再次粘连的发生风险降低。