关键词： 宫腔粘连   自由解剖成像   三维能量多普勒超声  

摘要： 背景:宫腔粘连(Intrauterine adhesions,IUA)是一种源于妊娠或非妊娠期子宫创伤、感染等引起的子宫内膜基底层损伤,进而影响子宫内膜的正常修复过程,导致宫腔各壁粘连变窄、部分或完全闭塞的常见妇科疾病。IUA患者常表现为月经量减少、周期性盆腔不适,严重者可出现继发性闭经、不孕等症状,对育龄期妇女的身心健康均有潜在不良影响。研究显示,流产可能增加子宫内膜损伤和宫腔内的感染几率,进而引起IUA,随着我国流产率逐年增高,IUA的发病率也随之升高。如何精准诊断并个性化治疗IUA已成为当下研究热点。宫腔镜检查是诊断IUA的“金标准”,但宫腔镜检查是一种有创性操作,可能再次损伤子宫内膜。近年来,超声因其价格低、无创、准确性高、可重复性操作等优势普遍应用于妇产科疾病的筛查,三维超声已经成为诊断IUA的重要影像学检查,特别是经阴道三维自由解剖成像(Omniview)和三维能量多普勒超声(Three-dimensional power Doppler ultrasound,3D-PDU)因其独特优势,成为当前研究热点。Omniview不受传统三维超声正交平面的限制,通过自由描记不同形态宫腔,定位宫底及双侧宫角,可用于排查常规超声可能漏诊的粘连病变。3D-PDU可量化宫腔容积和血流灌注情况,弥补宫腔镜及其他影像学检查方法不能直接评估子宫内膜血流灌注方面的缺陷。 目的:探讨经阴道三维Omniview联合3D-PDU在IUA的诊断、分类、分型中的应用价值。 方法:选取2023年3月—2024年2月于襄阳市第一人民医院就诊的临床疑诊IUA患者213例,经排除后最终纳入患者共108例,所有患者均接受Omniview、3DPDU及宫腔镜检查。将宫腔镜检查结果作为IUA诊断的“金标准”,比较IUA组与非IUA组的子宫内膜厚度(Endometrial thickness,ET)、内膜容积(Endometrial volume,EV)、宫腔血流参数即血流指数(Flow index,FI)、血管化指数(Vascularization index,VI)、血管化血流指数(Vascularization-flow index,VFI);比较不同程度IUA患者ET、EV、VI、FI、VFI的差异。分析Omniview联合3D-PDU对IUA的诊断、分类、分型的应用价值。 结果: 1.在108例疑似IUA的患者中,经宫腔镜检查,最终诊断为89例IUA,19例非IUA。根据粘连程度分类,轻度粘连32例、中度粘连27例、重度粘连30例。根据粘连位置分型,周围型粘连27例、中央型粘连24例、混合型粘连38例。 ***诊断IUA的敏感度为93.26%、特异度为84.21%、准确率为91.67%,阳性预测值为96.51%、阴性预测值为72.73%、AUC值为0.887;Omniview检查与宫腔镜检查一致性较好,Kappa值为0.729(P<0.05)。 ***诊断不同程度IUA敏感度、特异度、准确率分别为:轻度粘连78.13%、94.74%、89.81%,中度粘连92.59%、96.30%、95.37%,重度粘连93.33%、98.72%、97.22%,AUC值分别为0.856、0.939、0.958。 ***组ET、EV、VI、FI、VFI均低于非IUA组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。 ***患者ET、EV、VI、FI、VFI与疾病严重程度呈负相关,差异均具有统计学意义(P<0.05)。 ***联合3D-PDU诊断IUA的灵敏度为96.63%、特异度为89.47%、准确率为95.37%、阳性预测值为97.73%、阴性预测值为85.00%、AUC值为0.931;Omniview联合3D-PDU检查结果与宫腔镜检查结果之间具备高度一致性,Kappa值为0.844(P<0.05)。 ***联合3D-PDU诊断不同程度IUA敏感度、特异度、准确率分别为:轻度粘连87.50%、96.05%、93.52%,中度粘连96.30%、97.53%、97.22%,重度粘连96.67%、100%、99.07%,AUC值分别为0.918、0.969、0.983。 ***联合3D-PDU诊断不同类型IUA敏感度、特异度、准确率分别为:周围型粘连85.19%、98.77%、95.37%,中央型粘连100%、96.43%、97.22%,混合型粘连94.74%、98.57%、97.22%,AUC值分别为0.920、0.982、0.967。 结论:Omniview联合3D-PDU在评价IUA及其严重程度、分型方面与宫腔镜具有高度一致性,值得临床推广应用。

关键词： 易医脐针   肾虚血瘀   宫腔粘连   宫腔粘连分解术   临床研究  

摘要： 目的:探讨运用填精化瘀方及易医脐针针法治疗宫腔粘连分解术后患者的临床疗效,寻求更加有效的预防宫腔粘连术后复发的治疗方案,指导临床用药。 材料与方法:本研究共纳入于辽宁中医药大学附属医院妇产科就诊的宫腔粘连(肾虚血瘀证)术后患者120例,均为2020年1月至2023年12月就诊于辽宁中医药大学附属医院的患者,按照随机数字表法将其分为西药组(采用西药治疗,n=40)、中药组(采用填精化瘀方+西药治疗,n=40)和脐针组(采用易医脐针+填精化瘀方+西药治疗,n=40),由相同资质的医师确诊宫腔粘连后行宫腔镜下TCRA手术;闭经患者则根据血清激素判断为早卵泡期时重复上述操作。术后共治疗3个月经周期,比较三组治疗前后以及组间的宫腔粘连评分、子宫内膜厚度、中医证候积分、临床妊娠率、宫腔粘连复发率及不良反应,最后运用统计学软件对三组疗效进行分析评价。 结果: 1.一般情况:三组基线资料比较(年龄、病程、宫腔操作次数、宫腔粘连评分、子宫内膜厚度和中医证候积分),均无显著差异(P>0.05),表明三组患者具有可比性。 2.宫腔粘连的评分:组内比较发现三组数据P均<0.05,表明患者在接受三种治疗方式后宫腔粘连评分均能得到有效降低。将治疗后的数据两两比较发现P皆<0.05,表明脐针组对宫腔粘连评分的改善最大,中药组次之,西药组对宫腔粘连评分的改善最小。 3.子宫内膜厚度:组内比较发现三组数据P均<0.05,表明三组治疗方式均能明显增加子宫内膜厚度。将三组数据进行两两比较发现P皆<0.05,表明脐针组对提高子宫内膜厚度的疗效优于中药组和西药组,中药组对提高子宫内膜厚度的疗效优于西药组。 4.中医证候积分:组内比较发现三组数据P均<0.05,表明三种治疗方式均能有效降低中医证候积分。将治疗后的数据两两比较发现P皆<0.05,表明脐针组的临床疗效最佳,中药组次之,西药组对降低中医证候积分的临床疗效再次之。 5.临床妊娠率:组内比较发现三组数据P均<0.05,表明三种治疗方式均能有效提高临床妊娠率。将三组数据进行两两比较,发现西药组与中药组P=0.363(P>0.017),差异不具有统计学意义;西药组和脐针组、中药组和脐针组P分别等于P=0.001和0.016(P<0.017),差异具有统计学意义,表明脐针组较中药组和西药组能明显提高临床妊娠率,中药组和西药组在提高临床妊娠率方面疗效相近。 6.宫腔粘连复发率:三组组间比较P<0.05,表示三种治疗方式均能有效降低宫腔粘连复发率。将三组数据进行两两比较发现P皆<0.017,表明脐针组在降低宫腔粘连复发率方面疗效最佳,其次是中药组,再次是西药组 7.安全性分析:西药组、中药组及脐针组均没有出现不良反应及副作用。 结论: 1.易医脐针联合填精化瘀方配合西药、填精化瘀方配合西药和仅西药单独治疗宫腔粘连(肾虚血瘀证)术后患者的三组治疗方式,较疗前均能降低宫腔粘连评分、增加子宫内膜厚度、降低中医证候积分、提高临床妊娠率和减少宫腔粘连复发率。 2.在降低宫腔粘连评分、增加子宫内膜厚度、降低中医证候积分和减少宫腔粘连复发率的临床疗效方面,易医脐针联合填精化瘀方配合西药的疗效最优,填精化瘀方配合西药的疗效次之,西药单独治疗的疗效再次之;此外脐针组较中药组和西药组能显著提高临床妊娠率,中药组和西药组在提高临床妊娠率方面疗效相近。 3.三者无不良反应事件,安全可靠,具有推广价值。

关键词： 宫腔粘连   子宫内膜基质细胞   富含亮氨酸重复序列受体家族蛋白6   信号转导和转录激活因子3   B淋巴酪氨酸激酶  

摘要： 目的: 宫腔粘连（Intrauterine Adhesion,IUA）是由于宫内创伤导致的子宫内膜基底层损伤,其病理表现为子宫内膜纤维化伴随宫腔部分或全部闭塞。近年来IUA发病率逐年增加,已成为女性不孕的主要原因,严重影响育龄女性的身心健康。IUA的发病主要与宫腔内手术操作和感染直接相关,但其确切分子机制尚不清楚。因此深入阐明IUA发病的分子机制,是预防IUA发生及有效促进内膜再生亟待解决的重要问题。 课题组前期利用高通量转录组测序技术比较了IUA及正常子宫内膜组织的基因表达差异,发现IUA子宫内膜中差异基因显著富集于NOD样受体感受器（NOD-like receptor,NLR）信号通路,其中NLR家族蛋白6（NLR family protein 6,NLRP6）高表达且差异最为显著。NLRP6是NLRs家族的主要成员,通过在细胞内与前体半胱氨酸蛋白酶1（Pro-Cysteinyl aspartate specific proteinase,Pro-Caspase-1）组装为炎症小体,在组织损伤修复中起到重要调控作用。目前NLRP6在IUA子宫内膜纤维化中的作用和分子机制尚不明确。 课题组前期研究发现Janus激酶2（Janus kinase 2,JAK2）/信号转导及转录激活蛋白3（Signal transducer and activator of transcription 3,STAT3）信号通路激活在IUA进展中具有关键作用。通过ENSEMBLE和JASPAR Software生物信息学软件预测发现,NLRP6启动子区存在STAT3转录因子的结合位点,推测二者存在转录调控关系。现有研究表明,NLRs家族分子的翻译后修饰是启动炎症小体组装的关键环节。高通量转录组测序提示IUA子宫内膜中高表达的蛋白激酶主要富集于Src家族,其中B淋巴酪氨酸激酶（B lymphoid tyrosine kinase,BLK）差异最为显著,但BLK与NLRP6间的调控关系尚无报道。 综上,本研究拟在IUA临床样本和动物模型以及子宫内膜基质细胞（Endometrial stromal cells,Endo SCs）纤维化细胞模型中探究NLRP6介导子宫内膜纤维化及IUA形成的关键作用和分子调控机制,为探寻IUA的预防及治疗新靶点提供理论支持,为开发提高育龄女性生育力的新策略提供研究基础。 方法: 1、临床样本检测:利用Real-time PCR、免疫荧光和Western-blot实验检测正常人和IUA患者子宫内膜组织中NLRP6、STAT3、BLK等关键分子的表达水平差异,验证高通量转录组测序结果。 2、动物实验:选取SPF级别10周龄雌性ICR小鼠,通过双侧宫腔机械损伤联合脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）埋线的方法建立IUA模型,并随机分为两组,每组10只:第一组,通过双侧子宫浆膜下注射NLRP6敲低慢病毒的方式干预IUA小鼠子宫内膜中的NLRP6表达(记为NLRP6KD组);第二组,双侧子宫浆膜下注射等量空载慢病毒（记为IUA组）。10只开腹后缝合腹壁的假手术处理的健康ICR小鼠作为对照（记为Control组）。一周后处死各组小鼠并收集子宫组织样本,比较各组小鼠子宫内膜中关键分子的表达水平和病理表型差异:通过Western-blot和免疫荧光比较各组小鼠子宫内膜中NLRP6表达水平及定位情况;通过HE染色法比较宫腔形态、测量内膜厚度并计数腺体数量;通过Masson染色法比较子宫内膜纤维化程度,测量子宫内膜纤维化面积;通过Western-blot和免疫荧光检测纤维化相关指标I型胶原蛋白（Collagen I）和α-平滑肌肌动蛋白（α-Smooth muscle actin,α-SMA）的表达水平;通过免疫荧光检测血管内皮标志CD31的表达情况,明确NLRP6在IUA形成中的作用。 3、细胞实验: （1）在人永生化子宫内膜间质细胞系（Human telomerase reverse transcriptase-immortalized endometrial stromal cells,HEn SCs）中给予50μg/ml LPS处理24h建立纤维化模型,分别转染沉默NLRP6的siRNA（记为si-NLRP6组）和si-阴性对照（记为si-NC组）,常规培养的HEn SCs作为对照组。通过Western-blot及免疫荧光检测各组HEn SCs中NLRP6的表达水平与定位情况,以及纤维化关键指标Collagen I和α-SMA的表达水平差异,明确炎症环境下NLRP6高表达及其介导子宫内膜基质细胞纤维化的作用。 （2）分别利用STAT3过表达慢病毒和STAT3敲低siRNA干预HEn SCs中STA

关键词： 诱导性多能干细胞来源的间充质干细胞   美洲大蠊提取物   宫腔粘连   铁死亡  

摘要： 研究背景: 宫腔粘连(Intrauterine adhesion,IUA)会导致流产和不孕,子宫内膜损伤是IUA的起始阶段,诱导多能性干细胞来源的间充质干细胞(Mesenchymal stem cells derived from induced pluripotent stem cells,iMSCs)在IUA的治疗中有抗纤维化和促进子宫内膜再生的潜力。然而,由于移植后细胞活性低和停留时间短,导致iMSCs在粘连宫腔发挥的临床效果受到限制。临床上中药美洲大蠊提取物(Periplaneta americana extractions,PAEs)能提升细胞活力,抗纤维化作用明显,提高组织的愈合能力。本研究观察PAEs对iMSCs的作用效果,研究其是否可以增加iMSCs活力,以提高iMSCs治疗IUA的效果。 研究目的: 通过PAEs干预iMSCs,探索PAEs是否可以提升iMSCs的细胞活力,从而提高iMSCs对IUA的疗效,并探索其中的机制。 研究方法: 1、研究第一部分:通过血清剥夺(模拟干细胞在生物体内移植的培养条件)培养iMSCs观察,CCK8实验观察细胞增殖生长状况,通过凋亡细胞试剂盒检测细胞凋亡情况及DCFH-DA探针检测细胞内的活性氧(ROS)水平,细胞培养基内加入PAEs,摸索PAEs作用iMSCs的最佳浓度,干预后重新检测增殖及凋亡情况,同时通过MDA试剂盒检测细胞内的脂质氧化程度。 2、研究第二部分:观察PAEs处理与否的iMSCs在生物体内的存活时间及两组iMSCs对IUA小鼠模型的抗纤维化效果。动物活体成像实验检测iMSCs在IUA小鼠模型体内的存留时间。并在IUA小鼠模型上观察PAEs处理前后的iMSCs分别的治疗效果,模型小鼠设置正常组、模型组、血清剥夺培养iMSCs组、PAEs处理iMSCs组。HE染色检测小鼠子宫内膜的形态和结构;Masson染色及免疫组化检测模型动物子宫内膜纤维化的改变,最后合笼实验检测治疗后模型动物的生育能力。 3、研究第三部分:探索PAEs提升iMSCs生物学功能的机制,转录组学测序技术分析PAEs处理与否iMSCs的基因差异,RT-q PCR和Western blot筛选验证iMSCs中铁死亡差异表达的m RNAs和FTH1、FTL蛋白。免疫荧光及Western blot法检测GPX4表达量来验证iMSCs铁死亡情况,C11 BODIPY 581/591荧光探针检测iMSCs的脂质过氧化程度,斑点杂交实验检测m5C甲基化水平,免疫荧光分析m5C表达水平,免疫荧光和Western blot来检测m5C的甲基化酶NSUN5的表达情况。 研究结果: 1、研究第一部分:对多能性诱导干细胞来源的iMSCs进行培养鉴定,通过血清剥夺培养模式来模拟iMSCs在生物体内的生存环境,在血清剥夺的情况下,iMSCs细胞增殖明显受限,iMSCs凋亡水平升高,细胞内的活性氧(ROS)水平上升。加入PAEs后,iMSCs的增殖能力增加,细胞凋亡情况及细胞内的活性氧水平降低,同时,PAEs也降低了iMSCs细胞的MDA水平,降低其脂质氧化程度。 2、研究第二部分:动物体外成像实验观察到PAEs处理的iMSCs在小鼠体内的存留时间更长。在IUA小鼠模型上观察到PAEs处理的iMSCs治疗IUA小鼠子宫内膜的厚度和腺体数量与正常对照组无差异;Masson染色及免疫组化检测发现模型小鼠子宫内膜纤维化降低;最后合笼实验观测iMSCs治疗IUA小鼠胚胎数量明显增加。 3、研究第三部分:转录组学测序技术分析PAEs处理与否iMSCs的基因差异,提示PAEs参与了iMSCs在血清剥夺条件下的铁死亡通路。免疫荧光及Western blot法提示PAEs显著提高了iMSCs铁死亡标志性蛋白GPX4的表达量,C11 BODIPY 581/591荧光探针检测提示PAEs显著降低iMSCs的脂质过氧化程度。RT-q PCR验证了PAEs能够提高iMSCs铁死亡机制相关的FTH1及FTL基因及蛋白表达水平。斑点杂交及免疫荧光实验检测到iMSCs细胞的m5C甲基化水平在PAEs处理后增高,且相应的m5C甲基化酶NSUN5表达也升高。 结论: PAEs能够提升iMSCs在血清剥夺培养条件下的细胞活性,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡及过氧化;PAEs干预的iMSCs在IUA小鼠体内存活时间延长,治疗效果更佳;PAEs通过激活m5C甲基化及m5C的甲基化酶NSUN5来调节iMSCs的铁死亡通路相关因子的表达水平,降低iMSCs的铁死亡水平。