关键词:
宫腔粘连
补肾活血方
TGF-β1/Smads信号通路
ADAM17/Notch信号通路
摘要:
宫腔粘连(intrauterine adhesion,IUA)是常见难治性妇科疾病,缺乏特异性有效药物及措施防治子宫内膜纤维化。该研究通过补肾活血方干预机械损伤联合感染双重介导法构建的大鼠IUA模型对子宫内膜氧化应激及纤维化调控的机制进行探讨。将72只8~10周龄SPF级SD雌性大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、补肾活血方低剂量组、补肾活血方中剂量组、补肾活血方高剂量组、雌激素组,对监测到处于动情周期的模型对照组及阳性对照组大鼠进行手术损伤+感染造模,假手术组仅做开关腹处理。造模成功后,模型对照组每天灌胃纯净水15μL·g^(-1);低、中、高剂量组灌胃补肾活血方7.8、15.6、31.2 g·kg^(-1),雌激素组灌胃戊酸雌二醇4.2 mg·kg^(-1)。连续干预28 d后禁食不禁水,全部处死后取血与组织待用。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色计算子宫腺体数目,马松(Masson)染色计算子宫胶原纤维面积,并结合HE、Masson染色对子宫内膜纤维化程度进行半定量评分;免疫组化检测大鼠子宫组织,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)及转录生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清中干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素(interleukin,IL)-1α、TGF-β1、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Ⅳ型胶原(collagen typeⅣ,Ⅳ-Col)、白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px);qPCR测定Smad2、Smad3、解整合素金素蛋白酶(adisintegrin and metalloproteinase,ADAM17)、TGF-β1 mRNA表达;Western blot检测大鼠子宫Notch和ADAM17的蛋白表达。结果显示,补肾活血方高剂量干预后子宫纤维化面积显著降低,水肿、粘连情况有效缓解;炎症因子和Ⅳ-Col水平显著降低、LIF及抗氧化酶水平显著升高;显著下调Smad2、Smad3、ADAM17、TGF-β1 mRNA表达;免疫组化结果显示补肾活血方可有效增加SDF-1的阳性表达、减少VEGF和TGF-β1的阳性表达,Western blot结果显示补肾活血方高、中、低剂量组Notch、ADAM17的蛋白表达量呈剂量依赖性显著下调,表明补肾活血方可能通过ADAM17/Notch信号通路途径抑制纤维化进程,提示补肾活血方是具有潜在应用价值的IUA治疗方式之一。