摘要： 宫腔粘连的分类、病因 宫腔粘连已成为备受人们关注的妇科病症之一,根据欧洲妇科内镜协会针对宫腔粘连分类表现,其被划分为I级:纤维样粘连带,此时患者宫角、开口均处于正常状态;II级:宫腔纤维样粘连,此时宫腔前壁、后壁均呈致密状态;III级:纤维样粘连此时已造成宫角一侧或宫腔部分闭锁;IV级:纤维样粘连造成双侧宫角、大部分宫腔闭锁;Va级:宫腔出现狭窄、变形问题,粘连出现瘢痕化;Vb级:粘连导致宫腔彻底消失.通常宫腔粘连问题因感染、放射、手术操作等所致.产妇选择剖宫产手术分娩后,子宫压缩缝合即容易造成宫腔粘连.而人流术后女性出现宫腔粘连情况的概率甚至高达70％.通常来讲,女性正常月经周期期间,子宫内膜基底层完整是保证功能层再生的前提与基础,而一旦基底层、肌层受损出现瘢痕组织,即会造成宫腔粘连.

关键词： 宫腔粘连   子宫内膜间充质干细胞   温敏型水凝胶   3D细胞培养  

摘要： 背景宫腔粘连(intrauterine adhesions,IUAs)又称为 Asherman 综合征,该疾病可同时存在宫腔瘢痕形成或子宫内膜菲薄。临床表现无特异性,主要为月经稀发、不孕及一些妊娠并发症。目前,宫腔粘连采用的临床干预措施主要包括宫腔镜下粘连分离术、术后放置球囊并给予防粘连药物、口服雌激素治疗等。传统治疗方法存在临床局限,无法促进子宫内膜再生、提高生育能力。近年来研究发现人子宫内膜间充质干细胞(endometrial mesenchymal stem cells,enMSCs)具有来源广、低免疫原性、无成瘤性、无伦理学争议和可自体移植等优点,并且国内外大量研究已经证实通过宫腔原位注射方式移植enMSCs对修复子宫内膜有一定疗效,但这种移植方式间充质干细胞局部定植率低,而间充质干细胞/支架复合物(即组织工程子宫内膜)宫腔原位移植有助于间充质干细胞在局部损伤部位的粘附,大大提高了间充质干细胞的移植效率。聚N-异丙基丙烯酰胺(Poly-N-isopropylacrylamide,PNIPAM)水凝胶作为一种新型温敏型生物支架,优点在于细胞相容性好,可负载多种生物活性因子,可以随着温度变化进行溶胶-凝胶相转化,其相转变温度为32℃,当温度高于32℃由液体状变为凝胶状,便于细胞在宫腔内的定植;当温度低于32℃由凝胶状变为液体状,便于细胞注射操作,此过程可逆,为细胞的体外培养和体内移植提供了极大便利。现国内外尚未见用温敏型水凝胶构建组织工程子宫内膜的报道。因此,本研究拟以聚N-异丙基丙烯酰胺温敏水凝胶为支架构建组织工程子宫内膜,为提高自体子宫内膜干细胞移植治疗宫腔粘连所致薄型子宫内膜的疗效奠定基础。目的构建以人子宫内膜间充质干细胞为种子细胞、以聚N-异丙基丙烯酰胺温敏水凝胶为支架的组织工程子宫内膜,从而提高自体子宫内膜间充质干细胞移植治疗宫腔粘连所致薄型子宫内膜的成功率。方法1.采用组织块培养法从宫腔粘连患者的子宫内膜中分离enMSCs并于体外进行培养、鉴定;2.将体外扩增的enMSCs与PNIPAM温敏水凝胶共培养,利用流式细胞术和活死细胞鉴定试剂盒鉴定PNIPAM水凝胶对enMSCs的细胞毒性;3.将enMSCs与不同浓度PNIPAM温敏水凝胶共培养,寻找适合enMSCs体外培养的最佳温敏水凝胶浓度,应用CCK-8、活死细胞染色鉴定、流式细胞术等方法对温敏型水凝胶为支架构建的组织工程子宫内膜进行鉴定。结果1.应用组织块培养法成功从宫腔粘连患者子宫内膜中分离培养出enMSCs,约2周原代细胞达到80%-90%融合,细胞呈长梭形,辐射状生长,传代后可稳定生长。流式检测结果显示,enMSCs表现出CD44、CD73、CD90、CD105阳性,CD34、CD45、CD11b、CD19 及 HLA-DR 阴性;2.活死细胞鉴定显示:enMSCs在2.5%PNIPAM温敏水凝胶中细胞形态最佳,呈细胞团样生长;流式细胞术检测显示:enMSCs在温敏型水凝胶中培养第4天时细胞存活率达95%以上,且该水凝胶不影响细胞表面标记物的表达;***-8结果显示,2D培养组细胞在1～4天呈对数增长,4～7天进入平台期;3D培养组细胞7天内增殖效果不明显;活死细胞鉴定显示:enMSCs在PNIPAM温敏水凝胶中培养第14天,细胞较2D培养组存活良好。结论聚N-异丙基丙烯酰胺水凝胶具有温度敏感特性和良好的细胞相容性,对人子宫内膜间充质干细胞的细胞毒性较低,以该温敏型水凝胶为支架构建的组织工程子宫内膜有利于延长子宫内膜间充质干细胞的生存时间。

关键词： 宫腔粘连   人羊膜上皮干细胞   干细胞治疗   TGF-β   新生血管  

摘要： 宫腔粘连(intrauterine adhesions,IUA)是正常子宫内膜被大量致密的纤维化组织替代过程,属于难治性纤维化疾病的一种。宫腔镜下粘连松解术是诊断与治疗宫腔粘连的金标准,但是重度宫腔粘连病人手术后复发率较高,预后较差。随着干细胞再生医学领域的广泛研究,干细胞治疗为重度宫腔粘连的治疗提供了新思路。人羊膜上皮干细胞(human Amniotic Epithelial Cells,hAECs)是一类具有多分化潜能的干细胞,尚无研究报道其对于治疗宫腔粘连的作用。因此本研究通过建立大鼠宫腔粘连模型,以探寻其对于宫腔粘连是否有治疗作用。本实验通过机械搔刮大鼠子宫内膜的方法建立宫腔粘连模型。以HE染色观察到损伤后的大鼠子宫内膜变薄、腺体数量减少以及Masson染色结果提示内膜纤维化面积增加,确认模型建立成功。从人足月剖宫产分娩的胎盘中分离及培养具有多能干性的hAECs。为了明确hAECs在IUA大鼠子宫内的定位及其存活时间,用携带GFP基因的慢病毒感染hAECs并用表达GFP蛋白的hAECs移植入大鼠子宫内示踪。结果显示hAECs能够进入子宫内膜,并且最长可停留一周。本实验通过与IUA模型组大鼠子宫内膜对照,发现hAECs移植治疗后的大鼠子宫内膜可见到明显的增厚,子宫内膜腺体增加以及内膜纤维化面积的减少。为了进一步研究hAECs的治疗作用,通过免疫组织化学染色及逆转录-聚合酶链式反应(reverse-transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测子宫内膜纤维化相关因子。结果显示,hAECs移植能够逆转TGF-β介导的子宫内膜纤维化作用,并且促进子宫内膜新生血管生成。治疗后的大鼠子宫内膜内α-SMA、PDGF、Collagon I表达量明显减少,与纤维化相关的TGF-β1、TGF-β2表达量明显下降,与抑制纤维化相关的TGF-β3显著增加。除此之外,结果显示治疗后的大鼠子宫内膜雌激素受体表达量增加,IGF、IL-4、MTOR、ROCK等炎症因子表达量改变。最后,证实了hAECs能够抑制宫腔粘连大鼠的子宫内膜纤维化、促进子宫内膜新生血管生成,调节炎症因子。结论:(1)人羊膜上皮干细胞治疗能明显增加子宫内膜厚度,腺体数量,减少纤维沉积;(2)人羊膜上皮干细胞治疗宫腔粘连主要机制为抑制TGF-β介导的纤维化及促进新生血管生成;(3)人羊膜上皮干细胞能够促进内膜雌激素受体表达及改变宫腔内微环境。

关键词： 宫腔粘连   人羊膜间充质干细胞   NF-κB信号通路   移植修复   体外实验  

摘要： 目的：通过体内和体外实验共同探讨NF-κB信号通路在人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)移植修复宫腔粘连中的作用。　　方法：1.化学损伤法建立IUA模型：将6只SPF级、健康雌性SD大鼠随机分为两组：对照组、IUA1组，每组3只。对照组：仅开腹，子宫不予以任何处理，IUA1组：向大鼠右侧宫腔注射95%乙醇建立IUA模型。一周后处死，通过观察各组子宫大体形态，HE染色比较各组子宫内膜组织形态学变化、子宫内膜腺体数目，Masson染色比较各组子宫内膜纤维化面积百分比，判断建模是否成功;2.(1)酶消化法提取hAMSCs，PKH26标记后备用。(2)另取6只SPF级、健康雌性SD大鼠随机分为两组，并命名为：IUA2组、hAMSCs组，每组3只。向各组大鼠右侧宫腔注射95%乙醇建立IUA模型。一周后仅向hAMSCs组大鼠宫腔粘连部位注射约4×105个被PKH26标记的hAMSCs，IUA2组大鼠仅做开腹处理。四周后统一处死所有大鼠，收集右侧子宫标本。HE及Masson染色评估hAMSCs移植对IUA的修复作用。(3)免疫组化法检测IUA2组及hAMSCs组子宫内膜组织中IKKα/β、p-IκB-α、p65、snail、E-型钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)等蛋白表达水平，探索NF-κB信号通路是否参与hAMSCs移植的修复IUA。3.(1)用添加[10ng/ml(TGF-β1+EGF+PDGF-BB)]外源性生长因子的培养基诱导hAMSCs，分别按时间梯度(1d，3d，5d，7d)提取总RNA，qRT-PCR及检测：间质标志物(Vimentin)、上皮化标志物角蛋白(E-cadherin、CK-7)mRNA表达水平;WesternBlot检测诱导分化第7天E-cadherin、CK-7、Vimentin等蛋白表达水平;(2)在诱导分化成功的基础上，采用过表达IκB-α的腺病毒(Ad-IκB-α)感染hAMSCs，于诱导分化第3天qRT-PCR、WesternBlot检测IκB-α表达水平，并通过qRT-PCR及ICC检测过表达IκB-α对hAMSCsp65、E-cadherin、CK-7表达的影响(3)分别用过表达IκB-α的腺病毒和携带GFP的腺病毒分别感染PKH26标记的hAMSCs，并将其移植入宫腔粘连部位，通过HE及Masson染色观察抑制NF-κB通路的激活对人羊膜间充质干细胞移植对IUA的修复作用的影响。　　结果：1.形态学上可见IUA1组右侧子宫(建模处)子宫中段明显变细，近卵巢侧宫腔膨胀积水，对照组子宫粗细均匀，质软，色泽红润。组织学可见IUA1组与对照组比较：宫腔容积明显减少，腺体结构消失，子宫内膜发生明显的纤维化改变，表明成功建立IUA模型。2.(1)成功提取hAMSCs，并完成标记。(2)hAMSCs组与IUA2组比较：宫腔形态基本恢复，宫腔表面被上皮细胞覆盖，明显可见腺体生长，子宫内膜纤维化程度明显减轻，差异具有统计学意义(P均＜0.05)，表明hAMSCs对宫腔粘连子宫内膜具有修复作用。(3)hAMSCs组与IUA2组比较：IKKα/β、p-IκB-α、P65、snail表达均明显下降，差异具有统计学意义(P均＜0.05)，同时子宫组织中Vimentin表达明显下降，E-cadherin表达明显增加，差异均有统计学意义(P均＜0.001)，表明hAMSCs可能是通过下调子宫组织中NF-κB信号通路中IKKα/β、p-IκB-α、p65、snail等蛋白的表达从而促进IUA子宫内膜修复的作用。3.(1)qRT-PCR结果提示诱导组较对照组：在诱导分化的前5天E-cad、CK-7表达随着诱导时间的增加持续上升，差异具有统计学意义(P均＜0.05);而在诱导分化的第7天E-CAD、CK-7表达量较第5天下降，差异无统计学意义(P=0.175)，在此诱导过程中Vimentin表达持续下降，于第7天下降最明显，差异具有统计学意义(P＜0.05);诱导分化第7天的WesternBlot结果提示诱导组较对照组E-cadherin、CK-7表达均增加，Vimentin表达明显下降,表明hAMSCs具有向子宫内膜细胞分化潜能(2)过表达IκB-α的腺病毒(Ad-IκB-α)转染hAMSCs，以GFP作为对照，qRT-PCR及WesternBlot检测IκB-α表达，Westernblot、ICC均提示p65表达明显减低，且主要在细胞质表达，表明过表达IκB-α可抑制人羊膜间充质干细胞NF-κB信号通路的激活，此时过表达组较对照组：E-cad、CK-7表达均明显增加，差异均具有统计学意义(P均＜0.05)。***-IκB-α感染hAMSCs后移植宫腔粘连部位，HE及Masson染色结果提示：过表达I

关键词： 宫腔粘连   预防再粘连  

摘要： 宫腔粘连近年来发病率有所上升,影响患者生活质量,也造成妊娠不良结局。宫腔粘连切除术后再次出现粘连可能性高,因此宫腔粘连切除术后预防再粘连的发生是很必要的。因此,本文对预防再粘连的方法进行总结,为临床使用提供一定参考。

关键词： 宫腔镜冷刀   宫腔镜电切治疗   中重度宫腔粘连   有效性   应用价值  

摘要： 目的 探析中重度宫腔粘连的临床干预方面,宫腔镜冷刀与宫腔镜电切治疗的临床应用效果.方法 研究样本限定为本院于2018年9月到2020年7月期间收治的104例中重度宫腔粘连患者,基于随机数字分组法完成分组,其中接受宫腔镜电切干预的52例患者调研数据录入对照组,接受宫腔镜冷刀干预的52例患者治疗数据录入干预组,对比患者治疗有效率、手术指标、宫腔形态、月经量改善结果.结果 对照组患者临床干预有效率与干预组患者无显著差异(P>0.05);干预组患者手术指标与对照组存在明显差异,(P<0.05);干预组患者宫腔形态改善例数、月经量改善例数等相关数据较之对照组同项数据均存在明显的数据差异(P<0.05).讨论 在中重度宫腔粘连病症的医疗干预中,临床干预术式主要有宫腔镜辅助下冷刀治疗与电切治疗,研究结果冷刀治疗在临床疗效方面的应用价值要高于电刀治疗,应用价值显著.

关键词： 宫腔粘连   闭经   湿热瘀结证   调经理膜方   妇科千金胶囊  

摘要： 目的:通过观察宫腔粘连分离术+放置宫形环后予以调经理膜方与予以妇科千金胶囊对宫腔粘连分离术后预防再粘连的临床疗效对比,论证调经理膜方临床意义,为宫腔粘连分离术后预防再粘连的临床治疗提供指导意见。方法:筛选符合宫腔粘连分离术+放置宫形环后（湿热瘀结证）的患者60例（2019年1月～2019年12月就诊于湖南中医药大学第一附属医院）,采用随机、单盲的方法分到A、B两组,常规行宫腔粘连分离+术后放置宫形环,治疗组术后予以谈珍瑜教授调经理膜方口服,对照组术后予以妇科千金胶囊口服。术后第1、2、3月月经第12天复查经阴道B超观察内膜厚度、回声是否均匀及内膜分型,是否发现宫腔粘连带、是否有非经期宫腔内积血,观察宫形环是否在位,有无脱落或嵌顿情况;随访月经情况,术后3月行宫腔镜检查+取环,依据中国宫腔粘连诊断分级评分标准再次进行评分。观察治疗后两组患者月经情况、子宫内膜情况、治疗前后两组患者宫腔镜检查评分情况及症状积分情况等,并对两组用药的安全性进行评估。结果:（1）治疗前两组患者年龄、病情程度比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,具有可比性;（2）治疗后两组在月经量、改善中医症状方面均疗效显著,其中在改善中医症候主症及部分次症（经行腹痛、带下异常、纳呆、口干不欲饮）上以治疗组疗效更高（P＜0.05）;（3）治疗后两组患者子宫内膜厚度情况均较治疗前有改善（P＜0.05）,两组疗效相比无显著差异;（4）治疗后两组患者宫腔镜检查评分情况均较治疗前有改善（P＜0.05）,以治疗组疗效更为显著;（5）观察组和对照组在治疗期间无不良反应发生。结论:宫腔粘连分离术+术后放置宫形环术后联合谈珍瑜教授调经理膜方治疗宫腔粘连术后（湿热瘀结证）疗效显著,在月经量、改善患者中医症状方面都明显优于妇科千金胶囊组,与对照组相比还可有效改善宫腔环境,且临床用药安全,无不良事件发生。说明宫腔粘连分离+术后放置宫形环术后联合谈珍瑜教授调经理膜方治疗宫腔粘连术后（湿热瘀结证）有其临床应用价值,值得推广。

关键词： 不同剂量   补佳乐   宫腔粘连   不良反应  

摘要： 目的:分析宫腔镜下宫腔粘连分离术后不同剂量补佳乐治疗宫腔粘连的临床效果及不良反应。方法:选择本院2018年7月至2019年7月收治的162例宫腔粘连患者参与本研究,根据补佳乐的剂量高低将患者分为两组,其中对照组患者采用低剂量的补佳乐,观察组患者采用高剂量的补佳乐,两组患者均为81例;对比两组患者的临床效果、不良反应和复发情况,比较两组患者的相关指标。结果:对照组总有效率(85.19%)低于观察组的总有效率(96.30%)。观察组粘连复发率低于对照组,对照组和观察组均未出现严重不良反应。观察组患者的宫腔形态、月经量等情况均优于对照组患者。结论:对宫腔镜下宫腔粘连分离术后的宫腔粘连患者采用高剂量的补佳乐效果更好,不良反应发生率低,患者宫腔形态及月经恢复良好,粘连复发率低。

关键词： 中医药   宫腔粘连   骨髓间充质干细胞   补佳乐   子宫内膜容受性  

摘要： 第一部分 大鼠宫腔粘连模型的建立与稳定性评估目的:制备稳定的实验性宫腔粘连（IUAs）大鼠模型。方法:1选取36只动情期SD大鼠进行造模,分为三组,每组12只:（1）化学损伤组:0.5ml95%乙醇分别灌注双侧宫角5min后吸出。（2）双重损伤组:微型刮匙搔刮两侧宫角,后将细菌脂多糖（LPS）棉线置于宫腔内。（3）假手术组:仅行开关腹手术。2在术后7d,14d,21d分别处死各组SD大鼠4只,取材子宫,并通过HE及Masson染色,测量其子宫内膜的腺体数量、厚度及纤维化面积,免疫组织化学法检测MMP-9和VEGF在SD大鼠子宫内膜中的表达水平。结果:***染色和Masson染色:（1）化学损伤组:损伤7 d时,细胞破裂失去正常形态,伴见部分组织出现纤维增生粘连带;损伤14d及21d时,可观察到宫腔组织呈修复趋势。（2）双重损伤组:模型制备7d后,可见内膜上皮线完整性受损,伴见组织剥脱,碎片散落于体积缩小的宫腔内,粘连带出现,并见增生现象,损伤14d及21d时,内膜镜下与7d无明显差异,仅表现为纤维程度进行性加重,宫腔体积持续缩小且其内可见粘连带面积增加。2.病理形态学指标:（1）腺体个数:造模7d后和造模14天后,均发现假手术组腺体个数多于化学损伤组和双重损伤组,造模21d后,化学损伤组和假手术组腺体个数多于双重损伤组。（2）子宫内膜厚度:造模后7d,造模后14d,造模后21d时,均发现假手术组内膜厚度厚于化学损伤组和双重损伤组。（3）纤维化面积:造模后7d,造模后14d,造模后21d时,均发现双重损伤组纤维化程度重于化学损伤组和假手术组。***9表达:造模后7d和造模后14d时,假手术组表达显著于化学损伤组和双重损伤组;造模后21d时,假手术组和化学损伤组表达显著于双重损伤组。***表达:造模后7d时,化学损伤组和双重损伤组显著表达多于假手术组,同时,双重损伤组多于化学损伤组;造模后14d和造模后21d时,均为化学损伤组和双重损伤组表达显著于假手术组。结论:1 95%乙醇及刮宫+LPS感染两种造模方法均可损伤子宫内膜造成宫腔粘连。2机械+感染因素所致的双重损伤方法建造的模型具有更高的稳定性,亦更贴近宫腔粘连的临床表现,因此成为后续补肾活血方与骨髓间充质干细胞治疗宫腔粘连的理想动物模型。第二部分补肾活血方联合BMSCs治疗IUAs的疗效评价目的:研究补肾活血方联合骨髓间充质干细胞（BMSCs）原位移植对于宫腔粘连SD大鼠子宫内膜的影响。方法:1选取50只SD雌鼠基于第一部分稳定性高的双重损伤法造模,造模7天后实施不同治疗方案。2治疗方案分组:（1）模型组:造模7天后,连续灌胃生理盐水2ml15天;（2）补佳乐组:造模7天后,连续灌胃补佳乐混悬液2ml15天;（3）补肾活血组（BSHX组）:造模7天后,连续灌胃BSHX方混悬液2ml15天;（4）骨髓间充质干细胞组（BMSCs组）:造模7天后,连续灌胃生理盐水2ml天,第10天时,麻醉后开腹沿宫角纵轴肌壁间注射BMSCs混悬液1ml;（5）中药+BMSCs组:造模7天后,连续灌胃BSHX方混悬液2ml15天,于灌胃第10天,麻醉后开腹沿宫角纵轴肌壁间注射BMSCs混悬液1ml。并于治疗结束后的第5天将所有雌鼠与雄鼠以3:1的比例合笼,受精后7d处死所有老鼠取子宫标本。3子宫标本进行以下检测:（1）HE染色法,记录各组子宫形态及腺体数量,测量内膜厚度。Masson染色法,测量各组内膜纤维化程度。（2）PCR检测MMP-9、VEGF水平的表达。（3）免疫组织化学检测MMP-9、VEGF的表达。（4）记录各组子宫妊娠数量。结果:1病理形态学变化:（1）HE染色和Masson染色:模型组的内膜、宫腔等变化同第一部分所述内容相似,而治疗组均可见内膜修复现象,其中以补佳乐组和补肾活血组（BSHX组）改善最为明显,骨髓间充质干细胞组（BMSCs组）组的改善最微弱。（2）腺体个数:补肾活血组（BSHX组）、骨髓间充质干细胞组（BMSCs组）和中药+BMSCs组多于补佳乐组,骨髓间充质干细胞组（BMSCs组）和中药+BMSCs组少于补肾活血组（BSHX组）,同时,骨髓间充质干细胞组（BMSCs组）少于中药+BMSCs组;（3）内膜厚度:治疗组最终测量结果皆较模型组为厚,骨髓间充质干细胞组（BMSCs组）和中药+BMSCs组小于补佳乐组和补肾活血组（BSHX组）。（4）纤维化面积:补佳乐组、骨髓间充质干细胞组（BMSCs组）及中药+BMSCs组均大于补肾活血组（BSHX组）;补佳乐组和中药+BMSCs组均小于骨髓间充质干细胞组（BMSCs组）。2 PCR结果（1）MMP-9表达:补佳乐组高于骨髓间充质干细胞组（BMSCs组）和中药+BMSCs组;骨髓间充质干细胞组（BMSCs组）和中药+

关键词： 宫腔镜   宫腔粘连   延续性护理  

摘要： 目的:研究总结宫腔粘连患者经宫腔镜术治疗后进行延续性护理方式的临床效果.方法:截选我科2019年5月至2019年10月期间进行宫腔镜下宫腔粘连分离术的78例患者,按随机法平均分为延续性护理组和常规护理组,每组39例.常规护理组采取常规护理措施,延续性护理组在常规护理基础上加延续性护理,比较两组患者护理效果.结果:延续护理组患者月经量和月经周期正常的比率较常规护理组患者明显较高,差异有统计学意义(p＜0.05);延续护理组患者护理满意度较常规护理组高,差异有统计学意义(p＜0.05).结论:延续性护理能够保证治疗效果,有效恢复患者月经,提高护理满意度.