关键词： 宫腔粘连   脂肪间充质干细胞   普兰尼克F127  

摘要： 目的:旨在构建新西兰白兔宫腔粘连(intrauterine adhesions,IUA)模型,宫腔内移植兔脂肪间充质干细胞(rabbit adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,rADSCs)、普兰尼克F127(Pluronic F-127,PF-127)水凝胶及两者复合物,研究比较其对子宫内膜的修复效应,探索促进受损子宫内膜再生、改善妊娠结局的可行治疗策略。方法:一、rADSCs-PF-127水凝胶复合物的制备及体外研究(一)rADSCs的分离、培养及鉴定1.无菌收集新西兰白兔腹股沟处脂肪,胶原酶消化法分离提取rADSCs,贴壁培养,传代纯化;2.流式细胞术分析检测rADSCs免疫表型:CD90、CD34及CD11b;***成脂、成骨诱导培养,鉴定其多向分化能力;***-8法检测rADSCs体外增殖能力。(二)PF-127水凝胶的制备及其温敏特性研究制备梯度浓度PF-127水凝胶溶液,恒温水浴测定其37℃下成胶所需时间,成胶后置于4℃鉴定其热可逆性。(三)rADSCs-PF-127水凝胶复合物的制备CCK-8法检测PF-127水凝胶与rADSCs的生物相容性,选择细胞亲和性最佳的PF-127水凝胶浓度包封细胞制备rADSCs-PF-127水凝胶复合物。二、新西兰白兔IUA模型的构建及造模效果的评估(一)新西兰白兔IUA模型的建立1.成年雌性新西兰白兔随机分为单纯机械损伤组及机械感染双损伤组,每组9只;2.两组分别通过机械刮宫及机械刮宫联合异物感染损伤新西兰白兔一侧子宫内膜模拟IUA形成,另一侧子宫作为假手术组进行自身对照不做任何处理;3.于造模术后7天、14天、28天分批处死新西兰白兔,收集双角子宫。(二)新西兰白兔IUA模型造模效果的评估通过HE染色及Masson染色观察比较子宫内膜形态、腺体数目及纤维化面积比例,选择造模稳定性更佳的造模方式。三、rADSCs-PF-127水凝胶复合物移植修复IUA兔子宫内膜(一)应用机械感染双损伤法构建新西兰白兔IUA模型,随机分为以下五组:1.假手术组(sham)、***模型组(IUA Model)、3.细胞组(rADSCs)、4.水凝胶组(PF-127)、5.复合物组(rADSCs+PF-127),造模术后 7 天分别将 rADSCs、PF-127水凝胶及rADSCs-PF-127水凝胶复合物注入宫腔,移植治疗后14天,处死新西兰白兔,收集子宫;(二)通过HE染色染色观察子宫内膜形态、计数腺体数目;(三)提取子宫组织总RNA,Real-time RT-PCR分析检测促纤维化信号通路相关因子(TGF-β 1、Smad3)、致炎细胞因子(IL-1 β)及子宫内膜容受性相关因子(整合素αvβ3、HOXA10)在基因水平的表达。成果:一、通过胶原酶消化法成功分离提取rADSCs,传代纯化后细胞呈梭形。流式细胞仪分析结果表明,rADSCs阳性表达CD90(99.7%),阴性表达CD34(1.72%)及CD11b(1.14%)。通过添加诱导分化培养基,rADSCs可以于体外定向诱导分化为脂肪细胞及骨细胞,具有多项分化潜能。第三代rADSCs体外增殖曲线呈“S”型,第1天增长速度较为缓慢,为潜伏期,第2-4天增长速度大幅提升,进入对数生长期,体外培养至第6-7天,生长速度再次趋于平缓,进入平台期,细胞数量变化不大。二、通过简单的机械刮宫,损伤后7天,新西兰白兔子宫内膜上皮基本实现完全再生,损伤后28天,新西兰白兔子宫内膜能够基本实现组织重建。而通过机械感染双损伤法建立的新西兰白兔IUA模型,于建模后28天病理学结果显示子宫内膜上皮未能实现完全再生,较单纯机械损伤法构建的IUA动物模型而言,是一种更为一种稳定的理想模型。三、HE染色观察结果显示,与假手术组相比,IUA模型组宫腔出现粘连甚至闭锁,光滑完整的腔体受到破坏,腺体数目显著减少(P=0.000<0.05)。然而,与IUA模型组子宫相比,在治疗组:细胞组、水凝胶组和复合物组中,受损的子宫腔形态均得到改善,腺体数目均显著上升(P<0.05)。复合物组新西兰白兔的腺体数目相较于细胞组(P=0.027<0.05)和支架组(P=0.019<0.05)而言,数目更多。Real-time RT-PCR 检测结果表明,与假手术组相比,IUA模型组中TGF-β1、Smad3和IL-1β mRNA的表达水平均显著增加(P<0.05),而整合素αvβ 3及HOXA10 mRNA的表达水平均显著下降(P<0.05);与IUA模型组相比,各治疗组(细胞组、水凝胶组和复合物组)中TGF-β1、Smad3和IL-1β mRNA的表达水平均显著下调(P<0.05),且整合素αvβ3及HOXA10 mRNA

摘要： 临床上会遇到很多宫腔粘连的患者。这些患者大都会问医生一个问题,那就是宫腔粘连影响生育吗?很多患宫腔粘连疾病的女性甚至还未结婚生子,所以她们的焦虑也是可以理解的。本文讲解宫腔粘连的相关知识,让大家更多地了解宫腔粘连相关问题。

关键词： 宫腔粘连   Asherman's 综合征   VEGFA   Smad7   Notch4  

摘要： 目的:探究宫腔粘连(IUA)即 Asherman's 综合征(Asherman's syndrome,AS)子宫内膜纤维化的机制,以及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)在宫腔粘连患者内膜中的表达改变及其对内膜纤维化的影响。方法:收集100例育龄妇女增殖晚期子宫内膜,其中50例为中重度IUA患者、50例为正常妇女。子宫内膜组织切片进行马松染色评估胶原的产生;免疫组织化学染色检测VEGFA、VEGFR1、VEGFR2、α-SMA和collagenl在组织中的分布和表达改变。qRT-PCR和western blot分别检测正常人和病人组织中VEGFA、VEGF165(VEGFA主要亚型)mRNA和蛋白水平的表达改变。取6例四环素诱导的条件性VEGFA敲除小鼠和6例VEGFA正常表达的对照组小鼠动情期子宫,组织切片进行马松染色来评估胶原的产生;子宫组织免疫组织化学染色检测VEGFA、Ki67、active caspase3和collagenl的表达与分布;免疫荧光检测α-SMA和E-cad的表达和分布;qRT-PCR和western blot分别检测子宫组织中VEGFA mRNA和蛋白水平的表达改变。分离和培养人原代子宫内膜间质细胞,并进行VEGFA、smad7、Notch1或Notch4的小RNA干扰实验以及Wnt通路、Notch通路和Hedgehog通路的抑制剂联合TGFβ1和VEGF165的蛋白刺激实验,通过qRT-PCR、western blot或免疫荧光检测相关指标的表达改变。结果:VEGFA在IUA患者增殖晚期子宫内膜间质细胞中表达明显减少,并伴有VEGFR1的表达升高和VEGFR2的减少以及内膜显著的纤维化改变。VEGFA敲除小鼠子宫内膜间质细胞VEGFA表达减少,伴有增殖相关分子Ki67表达减少和凋亡相关分子active caspase3表达增多;马松染色提示有内膜中大量胶原的沉积,纤维化相关指标明显的高表达。体外实验中,分离与培养内膜原代间质细胞并转染VEGF165的干扰序列后,间质细胞向肌成纤维细胞转分化;而外源性给予VEGF165则可显著抑制TGFβ1诱导的内膜间质细胞纤维化相关分子的表达,并可抑制TGFβ1信号通路的激活,且伴有smad7、Notch通路配体DLL4和受体Notch4的表达增多;VEGF165抑制肌成纤维细胞活化的能力会在使用smad7干扰序列、Notch信号通路抑制剂Notch4的干扰序列后被减弱。结论:IUA患者子宫内膜VEGFA表达明显减少,外源性给予VEGF165可通过DLL4/Notch4通路促进smad7的表达,从而抑制内膜间质细胞向肌成纤维细胞转分化,减轻纤维化。

关键词： 宫腔粘连   尿激酶   纤溶酶原激活物抑制剂-1   干细胞生长因子   发病机制  

摘要： 目的：为了研究uPA、PAI-1和HGF在宫腔粘连的形成机制中的作用及其相关性，本实验采用单侧刮宫法搔刮雌性SD大鼠左侧宫腔构建宫腔粘连模型，右侧子宫作为对自身对照。在此动物模型基础上，通过影像学、组织学评估子宫内膜受损情况。检测大鼠双侧子宫组织的uPA、PAI-1和HGF的表达量及其随时间的变化。探讨uPA、PAI-1和HGF在宫腔粘连的形成中的作用，为进一步研究宫腔粘连形成的分子机制提供参考，为宫腔粘连的医治与预防提供新的思路。　　方法：实验纳入20只成年雌性未交配SD大鼠，控制其体质量、生活环境、动情周期在相似水平，在同一天内进行造模，用特制刮匙搔刮大鼠左侧宫腔，作为实验组，右侧宫腔不做处理，作为自身对照组。在术后第1、3、6、15天B超检查大鼠双侧宫腔粘连情况，再分别处死大鼠，收集左侧子宫刮宫部位及右侧子宫对应部位的标本。标本固定、包埋、切片，分别行HE染色和Masson染色。光学显微镜下统计子宫内膜的厚度、腺体数量及内膜纤维化面积比率。比较实验组与对照组差异是否具有统计学意义，确定建模是否成功。qPCR及Western blot检测uPA、PAI-1和HGF在不同时间宫腔粘连组织及子宫内膜组织中的表达量，比较表达量差异。　　结果：B超下可见术后第6天大鼠左侧子宫内膜厚度不均，内膜线显示不清，而右侧子宫内膜线清晰，厚度均匀。标本HE染色后，实验组与对照组相比子宫内膜厚度及腺体数量的差异具有统计学意义（P＜0.05）。Masson染色后，实验组与对照组相比子宫内膜纤维化面积比率的差异具有统计学意义（P＜0.05）。HGF的蛋白与mRNA表达量在术后早期位于高值，此后有所降低，且实验组与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）。uPA的蛋白表达量在实验组中显著高于对照组表达量（P＜0.05），其蛋白表达量随着时间的变化而逐渐升高，在术后第6天达到最高值，之后逐渐下降;其mRNA表达量随着时间的变化逐渐升高，在术后第6天达到最高值，之后逐渐下降，但实验组与对照组的mRNA表达量无明显统计学差异（P＞0.05）。PAI-1的蛋白表达量在实验组中显著高于对照组表达量（P＜0.05），其蛋白表达量随着时间的变化而逐渐升高，在术后第6天达到最高值，之后逐渐下降;其mRNA表达量第1-6天无明显变化，到第15天达到最高值，但其实验组与对照组的mRNA表达量的差异无统计学意义（P＞0.05）。　　结论：单侧宫腔搔刮能够建立稳定的大鼠宫腔粘连模型。HGF参与了受损子宫内膜的早期修复，后期其表达减少可能促进了宫腔粘连的形成。uPA与PAI-1的表达与宫腔粘连存在相关性，但具体机制仍需进一步研究明确。

关键词： 宫腔粘连   理冲汤加减   补佳乐   致病原因  

摘要： 目的:本研究旨在:观察中药汤剂理冲汤加减,对气虚血瘀型宫腔粘连患者的临床治疗效果,发掘中药制剂的治疗优势;同时研究宫腔粘连的高危因素及发病原因,从而降低宫腔粘连的发病率。方法:收集2018年1月至2019年6月在山东省中西医结合医院接受诊治的符合气虚血瘀型宫腔粘连患者60例,行宫腔粘连分离术,随机分为两组。治疗组患者中药加西药治疗,对照组患者予以单纯西药治疗。术后三个月再次以宫腔镜进行检查,观察两组患者经治疗后的中医证候及临床症状积分变化等变量。同时统计造成患者宫腔粘连的所有病因,logistic回归分析探索造成宫腔粘连的致病原因及高危因素。结果:理冲汤加减加激素治疗组总有效率为93.33%,单纯激素组总有效率为83.33%,有显著性差异(P<0.01);稽留流产清宫、早孕人工流产、早孕药物流产后清宫与气虚血瘀型宫腔粘连发生的风险呈正相关(P<0.01),是宫腔粘连的独立危险因素;是否有炎症感染与宫腔粘连患者的程度存在统计学差异,比较差异均具有统计学意义(P<0.01),感染可能会加重宫腔粘连的程度。结论:理冲汤加减与激素治疗均可改善患者的症状,减少复发率,而中药联合西药治疗具有显著优势,提高总体治疗效果。稽留流产清宫、早孕人工流产、早孕药物流产后清宫是造成宫腔粘连的主要因素,感染是宫腔粘连的高危因素,减少流产的次数,注意预防盆腔的感染,是从病因学上减少宫腔粘连的发病率。

关键词： 冻干羊膜   透明质酸钠   人脐带间充质干细胞   宫腔粘连  

摘要： 目的:宫腔粘连(Intrauterine adshesions,IUA)是指各种原因引起的子宫内膜基底层损伤,导致宫腔部分或者全部粘连的一种妇科疾病。目前以宫腔镜下粘连分解术(Transcervical resection of adhesion,TCRA)为主要治疗方式,术后辅以雌激素、宫内节育器治疗为主要手段。但中重度宫腔粘连患者术后复发率高,生育功能经常规方法治疗后难以恢复。故提出将冻干羊膜(Frozen amniotic membrane,FZAM)联合干细胞移植这一新兴方法治疗中重度宫腔粘连,旨在为传统方法治疗无效的患者提供新的希望。方法:第一部分,人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)、冻干羊膜的制备以及羊膜负载人脐带间充质干细胞的制备;第二部分,冻干羊膜联合人脐带间充质干细胞治疗宫腔粘连的临床观察,纳入中、重度宫腔粘连30例,随机分为实验组1(7例)、实验组2(13例)和对照组(10例);所有患者均于月经干净第3-7天在我院行TCRA,实验组1使用冻干羊膜联合人脐带间充质干细胞与透明质酸钠凝胶治疗,实验组2使用冻干羊膜联合人脐带间充质干细胞治疗,对照组仅予透明质酸钠凝胶治疗;所有患者均于术后第一次月经干净3-7天至门诊复查妇科彩超及宫腔镜检查,记录患者术后子宫内膜厚度、美国生育协会(AFS)评分及妊娠情况。结果:(1)hUC-MSCs在冻干羊膜上能够正常生长、增殖。(2)冻干羊膜联合hUC-MSCs与冻干羊膜联合hUC-MSCs、HA宫腔内移植均能降低TCRA术后AFS评分、促进子宫内膜增长。结论:本实验结果表明冻干羊膜联合人脐带间充质干细胞能够有效治疗宫腔粘连,促进内膜的再生修复,说明冻干羊膜联合hUC-MSCs治疗IUA是可行的。且通过两种治疗方法的比较证明羊膜+hUC-MSCs这种方法更好。

摘要： 宫腔粘连是由于妊娠或非妊娠子宫的创伤,导致子宫内膜基底层受损,使宫腔部分闭塞或全部闭塞,从而导致月经异常、不孕或反复流产等.其本质是内膜纤维化.患者28岁,已婚已育,引产分娩后月经减少9个多月.

关键词： 宫腔粘连   宫腔镜下宫腔粘连分离术   COOK球囊支架   中药治疗   妊娠   相关因素  

摘要： 目的:探讨宫腔中重度粘连患者术后妊娠情况并分析影响妊娠相关因素.方法:选取2017年1月-2018年6月因宫腔中重度粘连在深圳市龙岗区中医院行宫腔镜下粘连分离术(TCRA)患者186例,术后放置COOK球囊及行人工周期治疗并观察妊娠情况.根据患者术后随访期内是否妊娠分为妊娠组及未妊娠组,对两组患者年龄、不孕时间、宫腔操作次数、粘连程度、月经改善情况以及是否中药助孕治疗进行单因素分析以评价对妊娠的影响.结果:随访期内妊娠患者共122例,妊娠率达65.6％.其中宫腔中度粘连、术后月经改善明显和术后配合中药助孕治疗的患者其妊娠率高于宫腔重度粘连、术后月经改善不明显及未配合中药助孕治疗的患者,差异有统计学意义(P<0.05).结论:中、重度宫腔粘连患者行TCRA术后,影响妊娠率与宫腔粘连程度、月经有无改善以及是否中药助孕有关.

关键词： 宫腔粘连   宫腔镜手术   中药清经散   有效率   复发率  

摘要： 目的:针对宫腔粘连患者采用宫腔镜手术联合中药清经散治疗,分析其临床应用效果.方法:选取我院2017年6月～2019年5月收治的宫腔粘连患者102例作为研究对象,按照随机数字表法分成两组,实验组51例,对照组51例.实验组采用宫腔镜手术联合中药清经散治疗方案加以治疗,对照组采用宫腔镜手术治疗,对比二组患者临床治疗总有效率以及复发率.结果:研究结果显示,实验组患者的临床治疗总有效率显著高于对照组,复发率显著低于对照组,对比差异具有统计学意义,P<0.05.结论:对于宫腔粘连患者的治疗,采用宫腔镜手术联合中药清经散治疗能够有效保证治疗效果,降低复发率,该治疗方案值得推广.

关键词： 宫腔镜   宫内妊娠   彩超   血HCC值  

摘要： 目的探究将彩超指引宫腔镜下宫腔黏连融入宫内妊娠物清除手术中的实际效果。方法在2018年12月～2019年12月间于我院施行治疗的患者中随机选取60例进行研究,对所有患者在彩超指引宫腔镜下分离宫腔黏连,再对患者施行妊娠物清除手术。结果患者手术一天后的血HCC值明显比患者手术前的血HCC值更低,差异极具统计学意义(P<0.05)。施行手术后患者并发症的发生概率明显比手术前更低,所有患者的治疗效果全部达到治愈标准,比率为100%,差异极具统计学意义(P<0.05)。结论将彩超指引宫腔镜下宫腔黏连融入宫内妊娠物清除手术中的实际效果明显,不仅实现了操作上的便捷,最主要的是能够帮助患者子宫尽快恢复健康状态。