关键词： 经血来源间充质干细胞   富血小板血浆   宫腔粘连  

摘要： 研究背景:宫腔粘连(Intrauterine adhesion,IUA)又称Asherman综合征,是严重威胁女性身心健康的常见生殖器官功能障碍性疾病。宫腔手术操作造成的子宫内膜基底层破坏是IUA形成的主要原因。由于宫腔手术的增加,IUA在我国的发病率逐年上升,现已经成为继发性不孕的第二大病因。宫腔镜去除宫腔粘连是较为主要的IUA治疗手段,然而对于部分中重度IUA患者,粘连复发及妊娠率低是目前临床治疗中亟待解决的问题。随着再生医学的发展,已经证实间充质干细胞在组织损伤修复中具有重要的作用。课题组前期研究证实自体月经血来源间充质干细胞(Menstrual blood-derived stromal cells,MenSCs)移植显著促进重度IUA患者子宫内膜再生和宫腔形态恢复,部分患者在内膜修复后成功妊娠。然而,宫内灌注MenSCs治疗的时效性有待提高,如何提高MenSCs的定植和治疗效率是干细胞治疗IUA临床转化需要解决的关键问题。富血小板血浆(Platelet-rich plasma,PRP)是一种人工制备的外周静脉血衍生产品,富含多种生长因子,被证实具有促进细胞功能、与组织原有细胞外基质相互作用、调节干细胞微环境、利于细胞增殖和伤口愈合等作用。多种组织来源的间充质干细胞均在PRP处理后呈现增殖、分化和募集等功能促进现象。此外,PRP在激活后表现为液体-凝胶双相的动态纤维蛋白支架结构,足以在体内维持其较长时间的生物活性,并提高干细胞疗法中移植细胞的生物学效力,是理想的干细胞支架材料。因此本研究拟明确PRP对MenSCs的促进作用,探索PRP中的关键效应因子,在前期研究基础上利用大鼠IUA疾病模型探究MenSCs联合PRP移植对IUA的治疗作用,进一步探究MenSCs修复子宫内膜损伤的分子机制,从组织水平、细胞水平、分子水平多层次进行研究,对干细胞治疗子宫内膜损伤的新策略进行评价。研究方法:(1)利用体外细胞实验探索PRP对MenSCs生物学功能的促进作用,应用CCK8、免疫荧光、细胞化学和流式细胞术等技术明确PRP对MenSCs的调节作用;(2)利用动物实验探究MenSCs联合PRP移植对IUA的治疗有效性及作用机制,应用免疫组化、免疫荧光、RT-PCR、Western-blot等技术,从组织水平和分子水平检测治疗后IUA子宫内膜厚度、纤维化等病理指标改变情况及子宫内膜干细胞标志表达情况,初步阐述MenSCs改善子宫内膜损伤的分子机制;根据大鼠的妊娠率和活胎率考察MenSCs联合PRP移植对IUA模型大鼠生育力改善情况,明确PRP能够有效提高MenSCs对IUA的治疗效率;(3)利用临床样本进行体外细胞实验,应用CCK8、免疫荧光、流式细胞术和Western-blot技术明确PDGFBB是PRP作用于MenSCs的关键效应因子,并结合第二部分结果对MenSCs改善IUA子宫内膜的作用分子途径进行验证,进一步明确MenSCs对子宫内膜纤维化的逆转作用。研究结果:第一部分结果表明,激活的PRP对MenSCs的生物学功能具有正向调节作用。PRP能够显著促进MenSCs增殖,提高S期细胞比例,抑制体外培养相关的细胞凋亡,提高MenSCs标志SUSD2,CD146和CD105的表达,促进MenSCs成骨分化和成脂分化。第二部分结果表明,PRP对MenSCs治疗大鼠IUA模型具有协同作用。PRP联合移植显著提高MenSCs在IUA大鼠子宫内膜内的定植效率,提高子宫内膜干细胞标志PDGFR的表达。MenSCs联合PRP的治疗效果显著优于单独MenSCs移植或PRP注射,MenSCs联合PRP移植显著促进子宫内膜增殖,促进子宫内膜基质、腺体和血管再生,提高IUA大鼠子宫内膜CK18和CD31表达水平,改善子宫内膜纤维化减少胶原沉积,显著提高IUA大鼠的妊娠率和活产率;旁分泌作用可能是MenSCs治疗子宫内膜损伤的重要作用方式,PRP提高大鼠子宫内人源间充质干细胞分泌因子IGF-1、SDF-1和TSP-1基因表达水平;MenSCs治疗显著调节Hippo通路下游关键分子CTGF、WNT5A和GDF5的表达,PRP对MenSCs的通路调节作用具有促进效应。第三部分结果表明,与正常MenSCs相比,IUA患者的MenSCs中PDGFR呈低表达,外源性PDGFBB对IUA患者的MenSCs具有显著的正向调节作用,与第一部分PRP培养结果接近,PDGFBB促进MenSCs增殖和迁移,提高S期细胞比例,同时激活Akt/NFκB通路并提高P65表达及核转位。MenSCs的条件培养基显著降低IUA患者子宫内膜YAP及CTGF表达,PDGFBB预处理对此现象有促进作用。研究结论:1、本研究证实PRP对MenSCs的生物学功能具有促进作用,PRP与MenSCs具

关键词： 宫腔粘连   阴道彩超   评分表   量化评估  

摘要： 目的:为减少侵入性检查的次数,提高超声诊断的准确性,本研究旨在通过基于临床特征及超声成像建立宫腔粘连诊断评分表,来预测有无宫腔粘连及宫腔粘连的严重程度。研究对象及方法:回顾性分析我院2016年5月至2019年9月因月经减少、闭经或临床不孕等因素行宫腔镜检查患者的临床特征及影像学资料。行logistic回归分析,筛选、赋值,建立并验证宫腔粘连诊断评分表。并进行一致性检验。统计分析采用软件SPSS 23.0。结果:1.初步建立宫腔粘连诊断评分表初步建立由月经情况、宫腔操作次数、宫腔形态、内膜连续性、内膜均质度、内膜与肌层分界情况6项变量组成的评分表,总分的分值范围为0-16分。2.评分表预测有无宫腔粘连及其严重程度的界值(1)当评分≥5分,预测宫腔粘连的灵敏度、特异度、准确度分别为87%、78%、84%。(2)当评分≥9分,预测重度宫腔粘连的灵敏度、特异度、准确度分别为63%、68%、66%。3.该宫腔粘连评分表预测有无宫腔粘连与宫腔镜检查有无宫腔粘连结果的Kappa值为0.651(P<0.001)。该宫腔粘连评分表预测宫腔粘连严重结果与宫腔镜检查分级结果的Weighted Kappa值为0.537(P<0.001)。讨论:本研究通过建立宫腔粘连诊断评分表,可初步诊断有无宫腔粘连并预测其严重程度,针对评分<5分的低风险人群建议随访,可减少侵入性检查的次数;针对评分≥5分的高风险人群建议进一步诊治,其分数与粘连严重程度相关,评分越高,粘连越重。

关键词： 富血小板血浆   宫腔粘连   TGF-β1   MMP-9  

摘要： 目的通过机械搔刮法建立大鼠宫腔粘连模型,评价模型建立的有效性;研究富血小板血浆预防大鼠宫腔粘连的效果。方法以雌性SD大鼠作为实验研究对象,通过机械搔刮法建立大鼠宫腔粘连动物模型,实验设置4组:对照组、模型组、富血小板血浆组、透明质酸钠组,每组9只大鼠,2周后处死大鼠,取子宫标本,肉眼大体观察子宫标本宫腔粘连情况,HE染色检测子宫内膜腺体数量,Masson染色检测子宫内膜纤维化面积,ELISA检测子宫组织中TGF-β1、MMP-9的含量,通过以上实验方法研究富血小板血浆对预防大鼠宫腔粘连形成的治疗效果。结果1.子宫组织大体观:对照组子宫表面光滑、红润、粗细均匀、弹性好,宫腔内未见粘连带,较易分离;模型组子宫表面粗糙、色泽发白、粗细不均、弹性差,宫腔内见粘连带,较难分离;富血小板血浆组和透明质酸钠组的表现介于正常组与生理盐水组之间,且两者之间的差异不明显。***染色检测子宫内膜腺体数量:与对照组(8.11±4.07个/HP)比,模型组(1.89±1.91个/HP)的腺体数量更少(P<0.05);与模型组比,富血小板血浆组(8.93±4.84个/HP)的腺体数量更多(P<0.05);与透明质酸钠组(10.26±5.00个/HP)比,富血小板血浆组的腺体数量更少(P<0.05)。***染色检测子宫内膜纤维化面积:与对照组(63.61±5.50%)比,模型组(75.70±4.61%)的纤维化面积更大(P<0.05);与模型组比,富血小板血浆组(68.18±6.49%)的纤维化面积更少(P<0.05);与透明质酸钠组(54.83±8.89%)比,富血小板血浆组的纤维化面积更大(P<0.05)。***检测子宫组织中TGF-β1含量:与对照组(14.19±14.51pg/ml)比,模型组(79.93±57.34pg/ml)的TGF-β1含量更多(P<0.05);与模型组比,富血小板血浆组(91.16±57.34pg/ml)的TGF-β1含量更多(P>0.05);与透明质酸钠组(53.62±45.07pg/ml)比,富血小板血浆组的TGF-β1含量更多(P>0.05)。***检测子宫组织中MMP-9含量:与对照组(272.84±160.51pg/ml)比,模型组(117.91±71.79pg/ml)的MMP-9含量更少(P<0.05);与模型组比,富血小板血浆组(214.33±89.36pg/ml)的MMP-9含量更多(P<0.05);与透明质酸钠组(129.71±36.12 pg/ml)比,富血小板血浆组的MMP-9含量更多(P>0.05)。结论1.通过机械搔刮法可有效建立大鼠宫腔粘连模型。2.富血小板血浆能预防大鼠宫腔粘连的形成。

关键词： 重度宫腔粘连   临床护理   妇科宫腔镜手术   优质护理  

摘要： 目的 研究重度宫腔粘连患者通过妇科宫腔镜手术治疗的临床护理观察.方法 抽取本院于2018年9月-2020年9月妇科收治的重度宫腔粘连患者共70例,均接受妇科宫腔镜手术治疗方案,将其依照随机抽样法分成对照组(35例,实施一般化妇科护理方式)与观察组(35例,额外实施优质护理方式),研究比对患者的并发症、月经改善率、满意度、生活质量等.结果 与对照组相比,观察组重度宫腔粘连患者的急性尿潴留、感染与水中毒等并发症发生率更低(P<0.05);观察组重度宫腔粘连患者的月经改善率为94.29％,对照组患者的月经改善率为77.14％,与对照组相比,观察组重度宫腔粘连患者的月经改善率更高(P<0.05),与对照组相比,观察组重度宫腔粘连患者的护理满意度更高(P<0.05).与对照组相比,观察组重度宫腔粘连患者的心理功能、躯体功能、社会功能与物质生活功能等GQOLI-74量表评分更高(P<0.05).结论 在妇科宫腔镜手术围术期,给予优质护理,对于减少并发症发生率,改善月经情况等有重要的意义.

关键词： 宫腔粘连   分离手术   宫腔粘连分离术   子宫内膜干细胞   再粘连   预防和治疗  

摘要： 宫腔粘连是对生育功能严重危害并且治疗效果较差的宫腔疾病,严重影响女性生殖健康。目前宫腔粘连在我国的发病率居高不下,并且随着宫腔手术的增加,该病呈逐年增长的趋势。宫腔粘连的确切发病机制尚不明确,由结核菌感染、宫腔操作等因素而引起的发生于子宫内膜基底层损伤后与子宫肌壁间的相互粘连,由于子宫内膜的创伤性修复多为不完全再生,其功能受损最终形成瘢痕。该病症将导致女性宫腔形态出现异常,

关键词： 宫腔粘连   雌二醇凝胶   雌二醇片/雌二醇地屈孕酮片   AFS评分  

摘要： 背景及目的:宫腔粘连(intrauterine adhesinon,IUA)是由于子宫内膜基底部损伤后纤维化组织修复后子宫或宫颈管部分或全部粘连,导致女性月经量减少甚至闭经、不孕等,严重危害了妇女的身体健康。目前其发病率逐渐升高,宫腔镜下宫腔粘连分离术(transcervical resection of adhesion,TCRA)是治疗宫腔粘连最理想的手术方法,但术后重度IUA复发率高达20%～62.5%。2015年宫腔粘连临床诊疗中国专家共识建议TCRA术后应使用雌激素,加或不加孕激素辅助治疗,但雌激素的治疗剂量、给药方式、是否加用孕激素意见尚不完全统一,相关对比研究较少,且均为小样本资料。因此,探讨宫腔粘连TCRA术后雌激素不同治疗方案的效果具有一定的意义。本文旨在探讨中重度宫腔粘连TCRA术后不同给药方式的雌激素治疗的临床治疗效果,为临床诊疗提供参考依据。方法:回顾性分析2018年9月-2020年11月在郑州大学第一附属医院确诊的中重度宫腔粘连患者共136例,根据术后雌激素给药方式不同,分为经皮雌激素组42例、口服雌激素组44例、口服雌孕激素组50例。所有患者于宫腔粘连松解术后第1天开始使用雌激素,经皮雌激素组使用经皮雌二醇凝胶外涂(2.5g,bid),口服雌激素组患者口服戊酸雌二醇片(3mg,qd),口服雌孕激素组患者口服雌二醇片/雌二醇地屈孕酮复合片(2mg:10mg,qd)+戊酸雌二醇片(lmg,qd)。所有患者均在我院行宫腔镜下宫腔粘连松解术,术毕宫腔内注射透明质酸,术后留置宫内尿管球囊5天,常规抗生素治疗3天,雌激素治疗2月后月经干净后返院行宫腔镜检查术。比较2月后三组患者月经改善情况、宫腔形态改善情况、美国生育协会(AFS)宫腔粘连分类评分和增殖中期(月经周期第8～10天)子宫内膜厚度变化。结果:1.三组患者治疗后月经改善明显,经皮雌激素组月经改善率为90.48%,口服雌激素组月经改善率为86.36%,口服雌孕激素组月经改善率为96.00%,但三组比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.三组患者治疗后宫腔形态改善明显,经皮雌激素组宫腔形态改善率为88.09%,口服雌激素组改善率90.91%,口服雌孕激素组改善率94.00%,但三组比较差异无统计学意义(P>0.05)。3.三组患者宫腔粘连AFS评分治疗后分别与治疗前相比,差异均有统计学意义(P<0.05),治疗后AFS评分下降明显。三组患者治疗后的AFS评分相比,差异有统计学意义(P<0.05)。两两比较差异均有统计学意义(P<0.05),治疗后AFS评分口服雌孕激素组<经皮雌激素组<口服雌激素组。4.三组患者增殖中期子宫内膜厚度治疗后分别与治疗前相比差异有统计学意义(P<0.05),治疗后子宫内膜厚度增加明显。三组患者治疗后子宫内膜厚度比较差异有统计学意义(P<0.05)。经皮雌激素组与口服雌激素组两两比较差异无统计学意义(P>0.05),口服雌孕激素组分别与经皮雌激素组、口服雌激素组相比,差异均有统计学意义(P<0.05),口服雌孕激素组增殖中期子宫内膜厚度增加明显。5.三种患者治疗中经皮雌激素组不良反应发生率为0.00%,口服雌激素组9.09%;口服雌孕激素组10%,三组患者不良反应发生率对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.宫腔镜下宫腔粘连分离术联合透明质酸、尿管球囊和雌二醇治疗宫腔粘连在改善月经和宫腔形态、降低宫腔粘连AFS评分、增加增殖中期子宫内膜厚度方面效果肯定。2.雌二醇凝胶治疗宫腔粘连与戊酸雌二醇效果相当,在降低宫腔粘连AFS评分方面效果更好,经皮给药方便,值得推广。3.与单用戊酸雌二醇相比,月经后半周期添加孕激素治疗宫腔粘连能明显降低宫腔粘连AFS评分,增加增殖中期子宫内膜厚度。

关键词： 宫腔粘连   滋肾化瘀方   补佳乐   子宫内膜容受性   临床研究  

摘要： 目的:通过临床研究,选用滋肾化瘀方联合补佳乐治疗宫腔粘连术后患者,观察治疗前后月经量、中医证候、宫腔粘连程度、炎性细胞因子(TNF-α、VEGF)、内膜厚度和血流分型及Salle评分的变化情况,探索本治疗方案的临床有效性及对子宫内膜容受性的影响,并初步探讨其作用机制。以期为临床上IUA术后患者提供有效且安全的治疗方法,增强远期疗效。方法:收集符合本研究纳入要求的患者55例,均行宫腔粘连分离术,最终顺利完成本研究的共52例,包括试验组26例和对照组26例。试验组予滋肾化瘀方联合补佳乐治疗,对照组给予补佳乐单独治疗。两组均治疗3个周期,观察2组患者在本次治疗后的总体临床疗效,并且对比月经量、中医证候积分、宫腔粘连程度、血清学指标(细胞因子TNF-α、VEGF)、子宫内膜厚度和内膜血流分型以及Salle评分的变化情况,并在停药后3～6个月内随访妊娠情况。结果:1.治疗后临床总疗效:试验组总有效率达96.15%,包括治愈8例(30.77%),有效17例(65.38%),无效1例(3.85%);对照组总有效率为73.08%,包括治愈3例(11.54%),有效16例(61.54%),无效7例(26.92%),试验组临床总疗效明显优于对照组。2.月经量对比:两组月经失血图积分均数较治疗前增加,P<0.05,表明两组治疗均有效,且试验组在增加月经量方面疗效高于对照组。3.中医证候对比:两组治疗后中医证候积分均较疗前下降,试验组、对照组总有效率分别为92.31%、69.23%,P<0.05,差异显著,试验组疗效更优。4.宫腔粘连评分及炎性细胞因子:通过组内自身治疗前后对比,发现两组的IUA评分、TNF-α、VEGF水平相比治疗前均有所下降,且组间比较P值均<0.05,差异显著,具有统计学意义,试验组治疗效果优于对照组。5.内膜-血流指标:试验组与对照组的内膜厚度及血流分型均较治疗前改善。两组血流分型组间对比P<0.05,具有差异性,试验组疗效显著优于对照组。而对比两组间治疗后内膜厚度相当,P>0.05,疗效无统计学差异。***评分:两组Salle评分均较治疗前增加,组间对比P<0.05,具有统计学差异,试验组疗效更佳。7.随访3～6月期间,试验组成功妊娠3例,对照组妊娠1例,B超提示均为活胎。8.安全性分析:两组治疗前后在三大常规、肝肾功能、心电图及双侧乳腺B超等安全性指标上均无异常,均未见明显不良反应,证实本试验研究临床安全性较好。结论:结合本研究结果,可以认为滋肾化瘀方联合补佳乐治疗宫腔粘连的临床疗效显著,且较单纯的补佳乐治疗效果更优。滋肾化瘀方联合补佳乐可以通过抑制促纤维化炎性因子TNF-α及VEGF的高表达,改善炎症状态,抑制纤维增生,疏松粘连组织,同时重建子宫血运,增加内膜血液灌注量,促进内膜修复生长,帮助患者恢复月经量,缓解其中医临床症状,提高子宫内膜容受性。在治疗期间未发现明显不良反应,因此认为滋肾化瘀方联合补佳乐是一种治疗肾虚血瘀型宫腔粘连的安全且有效的方法,可以降低术后复发,帮助恢复子宫内膜容受性,体现了中医药在治疗宫腔粘连方面独特的优势,同时也为临床治疗本病开辟了新思路。

关键词： 宫腔粘连   经血干细胞   雌激素   RGD水凝胶  

摘要： 目的:宫腔粘连是指由于子宫内膜损伤导致宫腔部分或完全闭塞。通过手术去除粘连组织并加以屏障是临床上的常规治疗方法,但存在预后不佳,复发率高的问题。近年来,干细胞移植治疗宫腔粘连的研究取得了突破性进展。经血干细胞是一种来源于女性月经血的成体干细胞,我们的前期研究证明自体经血干细胞移植能够改善重度宫腔粘连患者子宫内膜损伤,但治疗过程中移植细胞利用率低的问题有待解决。部分研究显示,通过三维细胞支架呈递细胞能显著提高细胞种植率,延长细胞体内存活时间,发挥其治疗作用。RGD凝胶支架是一种人工合成的可调谐水凝胶,生物相容性良好,能够为细胞生存提供适宜的微环境。本实验拟使用雌激素-RGD凝胶支架包封经血干细胞,以宫腔灌注的方式植入大鼠子宫内膜损伤模型,预防其宫腔粘连,并观察经血干细胞对大鼠子宫内膜损伤的治疗作用,探索其治疗机制。方法:体外实验,应用活细胞染色、细胞计数、乙酰胆碱酯酶活力检测、免疫荧光等技术明确雌激素-RGD凝胶培养体系的制备条件,及其与经血干细胞的生物相容性。体内实验,通过机械刮宫建立大鼠子宫内膜损伤模型,使用经血干细胞联合雌激素-RGD凝胶支架移植治疗,并于治疗后18天取材,通过组织切片染色、免疫荧光、Realtime-PCR等技术评估联合移植对大鼠模型受损子宫内膜的治疗效果。结果:1.经血干细胞能够粘附于RGD凝胶支架并维持细胞活性;雌激素能够促进经血干细胞的增殖(P=0.0140),提高其分泌能力(P=0.0326),并促进经血干细胞向子宫内膜上皮细胞分化。2.经血干细胞联合RGD凝胶宫内灌注能改善细胞在子宫中的定植情况,限制经血干细胞全身迁移。3.经血干细胞联合雌激素-RGD凝胶支架移植能够显著提高子宫内膜损伤大鼠子宫内膜厚度及子宫内膜腺体数量,降低子宫内膜纤维化面积,上调子宫内膜角蛋白和增殖细胞核抗原的表达。4.经血干细胞联合雌激素-RGD凝胶支架移植后子宫内膜组织中IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α表达量显著降低。结论:1.雌激素-RGD凝胶体系能够为经血干细胞生存提供适宜的微环境。2.经血干细胞联合RGD凝胶宫内灌注能够提高经血干细胞在子宫组织的局部作用效率。3.经血干细胞联合雌激素-RGD凝胶支架移植能够促进大鼠内膜细胞增殖,促进腺体再生,降低子宫内膜纤维化程度,恢复宫腔形态,并预防宫腔粘连。4.经血干细胞联合雌激素-RGD凝胶支架移植通过改善子宫内膜炎症反应,促进子宫内膜修复。

关键词： 中重度宫腔粘连分离术   Foley球囊导尿管   透明质酸钠   再粘连  

摘要： 目的 分析中重度宫腔粘连分离术后采用Foley球囊导尿管联合透明质酸钠预防再粘连的效果。方法 选取于本院行中重度宫腔粘连分离术的患者50例为研究对象，采用随机数字表法分为研究组与对照组，每组25例。术后，对照组采用普通不锈钢圆环联合透明质酸钠治疗，研究组采用Foley球囊导尿管联合透明质酸钠治疗。比较两组患者的宫腔再粘连情况、治疗效果及月经恢复状况。结果 研究组宫腔再粘连率为4.00%，明显低于对照组的24.00%，差异有统计学意义（P<0.05）。研究组治疗总有效率及月经恢复良好率分别为96.00%、96.00%，均显著高于对照组的76.00%、72.00%，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 中重度宫腔粘连分离术后采用Foley球囊导尿管联合透明质酸钠预防再粘连的效果良好，可减少宫腔再粘连，促进月经恢复，值得临床推广使用。