关键词： 宫腔粘连   子宫内膜修复   人羊膜间充质干细胞   PPCNg  

摘要： 目的:宫腔粘连(intrauterine adhesions,IUA)由子宫内膜基底层损伤引起,表现为间质纤维化和宫腔闭塞,可导致生育能力受损。人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)具有多系分化潜能和旁分泌功能,能够促进子宫内膜再生修复。PPCNg是一种温敏性、可降解的生物材料,由PPCN聚合物(polyethylene glycol citrate-co-N-isopropylacrylamide)与明胶(gelatin)混合而成,可作为干细胞移植的生物支架。本研究旨在探讨hAMSCs联合PPCNg宫腔移植修复子宫内膜损伤的疗效。方法:(1)细胞实验:采用酶消化法提取hAMSCs,通过流式细胞术检测细胞表面抗原。将hAMSCs与PPCNg混合后进行培养,通过CCK-8法和流式细胞术检测hAMSCs的增殖活性、凋亡率和细胞周期,通过免疫荧光检测间充质干细胞特异性表面抗原标志物(CD29、CD44、CD73、CD105、CD19、CD34和CD45)的表达,qRT-PCR检测间充质干细胞多能性基因(OCT4,SOX2,KLF4和C-MYC)的表达;诱导hAMSCs多向分化,通过茜素红染色、甲苯胺蓝染色、油红O染色和免疫荧光染色分别评估其成骨、成软骨、成脂和上皮细胞分化潜能,采用qRT-PCR进一步检测其成骨分化相关基因(ALP,RUNX2和BSP)、成软骨分化相关基因(SOX9,ACAN和COL-II)、成脂分化相关基因(PPARγ,LPL和ADIP)和上皮细胞分化相关基因(CK7,CK8,CK19和E-CAD)的m RNA表达情况。(2)动物实验:将80只雌性SD大鼠随机分为5组:Sham组(假手术组)、IUA组(模型组)、PPCNg组(PPCNg宫腔注射)、hAMSCs组(hAMSCs单独宫腔移植)和hAMSCs/PPCNg组(hAMSCs联合PPCNg宫腔移植),每组16只大鼠。采用化学损伤法(宫腔注射95%乙醇)构建IUA模型。移植前,采用Di R预先标记hAMSCs。通过动物活体荧光成像观察hAMSCs在损伤子宫内的定植情况。通过H&E染色和Masson染色观察子宫内膜结构形态。采用免疫组化检测子宫内膜上皮标志物(CK7、CK19)、细胞增殖指标(Ki-67)、血管生成相关因子(VEGF)和子宫内膜容受性相关标志物(ER、PR)的表达。通过妊娠试验评估再生子宫内膜的生殖能力。结果:(1)细胞实验:流式细胞术证实提取的hAMSCs表达间充质干细胞特异性表面抗原。当hAMSCs与PPCNg混合培养时,hAMSCs的增殖活性、凋亡率和细胞周期,与hAMSCs单独培养时相比,均无显著改变;免疫荧光显示hAMSCs表达CD29、CD44、CD73和CD105,不表达CD19、CD34和CD45,且表达水平与hAMSCs单独培养时相比无显著差异;qRT-PCR显示hAMSCs中OCT4,SOX2,KLF4和C-MYC的表达水平与hAMSCs单独培养时相比无显著差异;茜素红染色、甲苯胺蓝染色、油红O染色和免疫荧光染色证实hAMSCs具有成骨、成软骨、成脂和上皮细胞分化潜能,且分化能力与hAMSCs单独培养时相比无显著差异;诱导分化后,hAMSCs中成骨分化相关基因(ALP,RUNX2和BSP)、成软骨分化相关基因(SOX9,ACAN和COL-II)、成脂分化相关基因(PPARγ,LPL和ADIP)和上皮细胞分化相关基因(CK7,CK8,CK19和E-CAD)的表达显著上调,且各基因的表达水平与hAMSCs单独培养时相比无显著差异。(2)动物实验:活体荧光成像结果显示,hAMSCs/PPCNg组中损伤子宫区域的荧光强度显著高于hAMSCs组。H&E染色和Masson染色显示,hAMSCs/PPCNg组中子宫内膜厚度和腺体数目显著高于hAMSCs组、PPCNg组和IUA组,纤维化面积显著低于hAMSCs组、PPCNg组和IUA组。免疫组化显示,hAMSCs/PPCNg组中CK7、CK19、Ki-67、VEGF、ER和PR的表达均显著高于hAMSCs组、PPCNg组和IUA组。hAMSCs/PPCNg组的妊娠率和着床胚胎数量显著高于hAMSCs组、PPCNg组和IUA组。结论:PPCNg不影响hAMSCs的生长、表型特征和多向分化潜能。hAMSCs联合PPCNg宫腔移植通过提高hAMSCs的定植率和利用率,促进子宫内膜再生修复,改善子宫内膜容受性,恢复生殖能力。

关键词： 宫腔粘连   S100A8/A9   纤维化   MenSCs  

摘要： 研究背景:宫腔粘连(intrauterine adhesions,IUA)是一种因子宫内膜基底层受损导致的宫腔前后壁部分或全部粘连的妇科疾病。子宫内膜过度纤维化是IUA的主要病理特征。子宫内膜基底层被破坏后,促进内膜基质细胞大量增殖并转分化为肌成纤维细胞,导致细胞外基质大量分泌、沉积。研究表明,纤维化是由多种刺激因素诱导的慢性炎症反应的最终阶段。S100A8/A9属于S100钙结合蛋白家族成员,由S100A8和S100A9两个单体形成异源二聚体蛋白复合物,主要在中性粒细胞等髓系细胞中表达。在炎症过程中,S100A8/A9被主动释放,刺激白细胞募集和诱导细胞因子分泌。S100A8/A9能够促进成纤维细胞的增殖并且向肌成纤维细胞分化,加速细胞外基质分泌、沉积。然而,S100A8/A9在IUA中的作用尚未见报道。当机体发生应激损伤时,S100A8/A9可通过与晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)结合诱导炎症介质表达,参与炎症级联反应。RAGE是一种多配体受体,与配体结合激活JAK/STATs,参与促炎因子诱导的炎症反应。基于临床样本转录组测序结果提示IUA患者子宫内膜S100A8/A9的显著上调,我们推测S100A8/A9通过与RAGE受体结合激活JAK2/STAT3信号通路释放促炎因子和细胞因子,促进基质细胞增殖活化,增加细胞外基质表达,参与IUA子宫内膜纤维化。目前临床治疗IUA的主要方法是宫腔镜下粘连分离术,尽管可以提供解剖结构的修复但是缺乏功能的恢复,术后粘连复发率高。因此寻找更加安全有效的替代疗法成为研究热点。经血来源间充质干细胞(menstrual blood derived stromal cells,Men SCs)是一种来源于女性经血的具有间充质干细胞表型和多向分化潜能的子宫内膜再生细胞。课题组前期研究已经证实Men SCs能通过促进子宫内膜再生治疗IUA。巴马香猪与人的亲缘关系相近,基因组具有明显的同源性,复杂度和结构相似,器官大小和质量接近,有利于深入的机制探索。因此,本研究选用巴马香猪构建IUA动物模型,验证S100A8/A9在Men SCs治疗IUA中的关键作用。综上,本课题首先观察S100A8/A9在IUA患者子宫内膜组织中的表达水平;其次,探究S100A8/A9是否通过调节RAGR/JAK2/STAT3信号通路介导子宫内膜纤维化形成;最后,构建IUA巴马香猪动物模型,探究Men SCs治疗IUA的潜在机制是否与对S100A8/A9表达调控相关。研究方法:1、纳入因IUA于我院行手术治疗的患者,选取粘连部位的子宫内膜及内膜下方瘢痕组织作为IUA组标本,另选取行宫腔镜内膜活检术且术后病理未见异常的子宫内膜作为正常对照组。RT-PCR检测组织标本S100A8、S100A9、COLI、α-SMA基因表达;免疫组化检测S100A8/A9、COLI在子宫内膜组织中的表达;免疫荧光染色检测S100A8/A9与粒细胞共表达情况。2、原代培养子宫内膜基质细胞,选取不同浓度S100A8/A9刺激细胞,CCK8检测细胞增殖,RT-PCR检测炎症相关因子(IL-1、IL-6、TNF)表达。RT-PCR、Western blot、IF检测COLI及α-SMA的表达情况。WB检测RAGE、JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3。RAGE阻断剂(FPS-ZM1)或JAK2/STAT3通路抑制剂(AG490)预处理后,再次用S100A8/A9刺激细胞,观察上述指标变化。免疫荧光检测STAT3核转位。3、采用电灼伤法构建猪IUA动物模型,宫腔镜检查评估宫腔粘连程度,采用HE染色、Masson染色、免疫组化,测定子宫内膜厚度、子宫内膜胶原容积分数、计数内膜腺体和微血管数量,测定羟脯氨酸含量。Men SCs子宫内膜局部多点注射后,观察上述指标及S100A8/A9表达变化。结果:1、与对照组相比,IUA患者子宫内膜组织S100A8、S100A9、COLI、α-SMA的基因表达显著增加。免疫组化结果显示IUA患者子宫内膜组织内S100A8/A9、COLI表达量增加,Masson染色胶原含量增加。免疫荧光结果显示S100A8/A9阳性细胞与粒细胞标记物CD15阳性细胞高度重合,提示S100A8/A9可能主要由粒细胞分泌。2、原代培养子宫内膜基质细胞,100ng/ml S100A8/A9可显著促进子宫内膜基质细胞增殖,促进炎症因子IL-1、IL-6表达,促进纤维化相关蛋白COLI、α-SMA表达。S100A8/A9可促进子宫内膜基质细胞RAGE受体蛋白表达,并激活下游JAK2/STAT3信号通路,促进STAT3核转位。FPS-ZM1可抑制S100A8

关键词： 宫腔粘连   阴道三维宫腔超声造影   宫腔镜   血管指数   血流指数  

摘要： 目的 探究阴道三维宫腔超声造影（3D-CEUS）检测在宫腔粘连患者诊断中的应用价值，以提高临床诊断准确率。方法 选取2019年4月至2022年4月我院收治的81例宫腔粘连患者，均于入院后行3D-CEUS检测，以宫腔镜检查为金标准，观察3D-CEUS检测对宫腔粘连的诊断价值，并分析其在宫腔粘连分度、分型诊断中的应用价值。于静脉推助造影剂前后对比不同分度宫腔粘连患者血流参数[血管血流综合指数（VFI）、血流指数（FI）、血管指数（VI）]。结果 3D-CEUS诊断宫腔粘连分度、分型的整体准确率93.83%(76/83)、96.30%(78/81)均较高，Kappa指数分别为0.901(95%可信区间0.743～1.059)、0.943(95%可信区间0.787～1.098)；不同分度宫腔粘连患者子宫内膜厚度、容积、回声强度对比：重度<中度、轻度（P<0.05）；中度、轻度宫腔粘连患者子宫内膜厚度、容积对比，差异有统计学意义（P<0.05），造影剂注入后不同分度宫腔粘连患者内膜血流FI、VI、VFI值均较造影前增加，差异有统计学意义（P<0.05）；造影剂注入后不同分度宫腔粘连患者血流FI、VI、VFI对比：重度<中度、轻度（P<0.05）。结论 3D-CEUS应用于宫腔粘连诊断有利于区分不同分度、分型宫腔粘连，提高诊断准确率，有利于辅助定量测量子宫内膜厚度、血流等，客观评价宫腔粘连程度。

关键词： 宫腔粘连   宫腔声学造影   三维断层超声成像  

摘要： 目的 探讨三维断层超声成像(3D-TUI)联合宫腔声学造影(SHG)对宫腔粘连(IUA)的临床价值。方法 对88例疑似IUA患者行经阴道三维超声及SHG检查，联合3D-TUI模式，结果与宫腔镜检查进行对照评价其诊断效能。结果 3D-TUI联合SHG诊断IUA总准确率为96.59%、灵敏度为97.26%、特异度为93.33%、阳性预测值为98.61%、阴性预测值为87.50%,Kappa值为0.883,P<0.05。3D-TUI联合SHG诊断轻、中、重度IUA灵敏度、特异度、准确率分别为：轻度粘连84.00%、95.83%、91.78%,中度粘连100%、92.50%、95.89%,重度粘连均达到100%,Kappa值分别为0.814、0.918、1.000,P<0.05,两种检查方式高度一致。结论 3D-TUI联合SHG评价IUA及其严重程度分型与宫腔镜具有高度一致性，是临床评估IUA的有效方法，值得推广。

关键词： 自体月经血   干细胞移植   宫腔粘连   不孕症  

摘要： 目的 探讨自体月经血来源的干细胞治疗宫腔粘连性不孕症的应用效果。方法 选取54例宫腔粘连性不孕症患者，均采用自体月经血来源的干细胞移植联合胚胎移植治疗。对比患者治疗前后各项指标变化及治疗后妊娠情况。结果与治疗前比，治疗后患者月经期更长，月经周期更短，月经失血图评分更高，子宫内膜更厚，内膜形态A+B型占比升高，累及宫腔范围、月经类型、粘连类型及美国生育协会总分均更低，差异具有统计学意义（P<0.05）。54例患者治疗后临床妊娠率为46.30%。结论 自体月经血来源的干细胞移植联合胚胎移植治疗宫腔粘连性不孕症能够有效缓解宫腔粘连程度，改善月经情况，促进子宫内膜恢复，有助于成功妊娠。

关键词： 宫腔粘连   宫腔粘连分离术   雌孕激素   益肾调经方  

摘要： 目的 探讨中西医结合治疗中重度宫腔粘连分离术后患者的效果。方法 选取本院收治的中重度宫腔粘连患者200例为研究对象，根据随机数字表法分为两组，每组100例。两组均行宫腔镜下宫腔粘连分离术，术后，对照组采用常规西药治疗，研究组在此基础上采用益肾调经方治疗。比较两组治疗效果，对其随访1年，统计月经改善率及妊娠率。结果研究组宫腔复粘连率为14.00%，低于对照组的31.00%，差异有统计学意义（P<0.05）。研究组月经改善率、妊娠率分别为91.00%、39.00%，均高于对照组的77.00%、21.00%，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 中重度宫腔粘连分离术后患者采用益肾调经方联合雌孕激素治疗的效果显著，可降低复粘连率，改善月经情况，提高自然妊娠率，值得临床推广使用。

关键词： 养精通络汤   芬吗通(2-10),肾虚血瘀型   TCRA术后  

摘要： 目的:通过对养精通络汤联合芬吗通治疗TCRA术后肾虚血瘀型患者的疗效观察,以证实该治疗方法在增加患者子宫内膜厚度,改善月经量,影响子宫动脉血液动力学,促进术后内膜修复及预防再粘连方面的独特优势,从而为临床上中西医结合治疗宫腔粘连提供更多诊疗参考。方法:本研究采用随机、对照方法,将60例肾虚血瘀型TCRA术后患者随机分成两组,观察组、对照组各30例。分别记录患者术前一个月经周期黄体中期子宫内膜厚度、PI、RI值、中医证候评分及月经量情况。月经干净3-7天内,均对两组患者行宫腔粘连分离术,术后放置Foley导尿管球囊3天,并常规静滴抗生素3天以预防感染。对照组予以芬吗通(2-10)口服治疗,观察组在此基础上联合养精通络汤内服。连续治疗3个月经周期后,再次记录两组患者月经量情况、中医证候评分、内膜厚度及子宫动脉血流动力学指标,比较各组治疗前后的变化及组间差异性。结果:1.基线资料比较:治疗前,两组患者的年龄、病程、宫腔操作次数、宫腔粘连程度、子宫动脉血流动力学指标、中医证候评分、内膜厚度比较,无明显差异性。2.中医证候评分比较:与治疗前相比,两组中医证候评分均降低明显,差异有显著统计学意义。观察组治疗后中医证候评分较对照组降低,差异具有统计学意义。3.子宫动脉血流动力学指标比较:两组RI、PI值均较治疗前降低明显,差异具有统计学意义。与对照组相比,观察组治疗后PI、RI值较低,差异有统计学意义。4.子宫内膜厚度比较:两组子宫内膜治疗后均增厚,差异有显著统计学意义。其中,观察组子宫内膜增厚明显,差异有显著统计学意义。5.总体疗效比较:观察组月经量改善较对照组明显,总有效率为93.33%,对照组总有效率为70%,差异具有统计学意义。6.中医证候疗效比较:观察组肾虚血瘀证相关症状改善较对照组明显,总有效率为96.66%,对照组总有效率为46.66%,差异具有统计学意义。结论:肾虚血瘀型TCRA术后患者用养精通络汤联合芬吗通治疗临床疗效佳。研究结果显示养精通络汤联合芬吗通治疗可以增加内膜厚度,改善子宫动脉血流动力学,增加内膜血流灌注,抑制纤维组织增生,促进内膜再生修复,帮助患者恢复月经量和缓解中医临床症状,进而在一定程度上减少粘连的再发,提高子宫内膜容受性,为患者的再次妊娠提供可能。

关键词： 定坤丹   宫腔粘连   子宫内膜纤维化   TGF-β1/Smad通路  

摘要： 目的:通过观察定坤丹对IUA大鼠的影响,从TGF-β1/Smad信号通路方向分析定坤丹治疗IUA的机制。方法:通过机械联合感染双重损伤法复制IUA大鼠模型,将大鼠随机分成6组:假手术组、模型组、戊酸雌二醇组及定坤丹低、中、高剂量组,10只/组。灌胃28d后,肉眼观察大鼠子宫外观改变,HE染色计算其内膜厚度、腺体数,Masson染色测定其内膜纤维化面积,Q-RT-PCR检测TGF-β1以及Smad3、4、7的m RNA表达水平。结果:1.与假手术组大鼠比,模型组子宫内膜的厚度、腺体数均下降(P<0.05);与模型组大鼠比,戊酸雌二醇组和定坤丹各剂量组子宫内膜厚度、腺体数量均上升(P<0.05),但治疗组间差异无统计学意义(P>0.05)。2.假手术组大鼠子宫内膜间质组织仅可见少量蓝染区,而模型组可见大量蓝染。与假手术组大鼠比,模型组内膜纤维化面积明显增加(P<0.05);与模型组比,戊酸雌二醇组及定坤丹各剂量组纤维化面积明显减小(P<0.05)。3.与假手术组大鼠比,模型组TGF-β1及Smad3、4的m RNA表达增加,而Smad7的表达减少(P<0.05)。与模型组比,定坤丹各剂量组及戊酸雌二醇组大鼠TGF-β1及Smad3、4的m RNA表达减少,而Smad7的表达增加(P<0.05)。结论:1.机械联合感染双重损伤法可成功复制IUA大鼠模型。***的形成可能与子宫内膜受损后激活TGF-β1/Smad通路,从而纤维化增生有关。3.定坤丹可能通过下调TGF-β1及Smad3、4的表达,上调Smad7的表达来促进IUA大鼠的子宫内膜增生及修复,并改善内膜纤维化,从而抑制宫腔粘连的发展。

关键词： 宫腔粘连   危险因素   中医体质  

摘要： 目的:通过病例对照调查研究,探讨宫腔粘连患者易感中医体质类型及发病相关的危险因素。 方法:本研究选取2019年12月31日～2021年12月31日在河南中医药大学第一附属医院就诊的诊断为宫腔粘连的患者作为病例组,选取同期非宫腔粘连的患者作为对照组。查阅相关文献进行流行病学问卷设计,由调查者对所纳入的对象进行问卷调查并核对病历,并将资料进行统计整理。应用统计学方法分析比较两组的中医体质类型差异及相关的危险因素,所得数据进行二元Logistic回归分析。 结果: 1.两组的一般资料中年龄（χ2=15.784,P=0.015）、文化程度（χ2=8.447,P=0.015）、职业（χ2=4.219,P=0.040）因素差异有统计学意义;两组体重指数（BMI）、民族、婚姻状况、经济情况无统计学差异。 2.两组生活习惯资料中饮食因素（χ2=10.319,P=0.035）有统计学差异,与清淡饮食多重比较宫腔粘连组患者更喜食生冷、甘甜、肥厚油腻;两组吸烟、饮酒、接触放射线、睡眠习惯、睡眠时间等因素无统计学差异。 3.两组病史资料中盆腔感染（χ2=7.472,P=0.006）有统计学差异,初潮、孕次、产次、分娩方式、流产次数、避孕、不孕、输卵管造影、辅助生殖、盆腔放疗/化疗史、阴道炎等因素无统计学差异。 4.两组患者手术类型中对照组以宫腔镜手术（55.21%）、人工流产（17.71%）为主要类型;IUA组以人工流产（57.38%）、宫腔镜手术（21.31%）、中晚孕清宫（14.75%）为主要类型;宫腔操作次数与宫腔粘连分级无统计学差异。 5.与宫腔粘连具有相关性的中医体质包括气郁质（OR=0.2663,95%CI=0.1215-0.5836）;其中,两组体质对比及构成比分析,宫腔粘连患者中医体质以气郁质、阳虚质、血瘀质为主,对照组以平和质为主。 6.宫腔粘连相关危险因素分析,Logistic回归分析显示:盆腔感染（OR=0.431,95%CI=0.235-0.792）为宫腔粘连可能的危险因素,而22岁—37岁相对于41岁—45岁、高中相对于本科及以上、体力劳动相对于脑力劳动为宫腔粘连保护因素。 结论: 1.宫腔粘连存在易感体质。其中,气郁质较其它体质宫腔粘连的患病风险高。 2.宫腔粘连的危险因素主要包括:盆腔感染;而22岁—37岁相对于41岁—45岁、高中相对于本科及以上、体力劳动相对于脑力劳动为宫腔粘连保护因素。

关键词： 宫腔粘连   中医药治疗   综述  

摘要： 宫腔粘连（IUA）发病率逐年上升，目前该疾病主要采用宫腔镜下宫腔粘连分离术治疗，但对中重度宫腔粘连效果不佳，且术后再粘连的发生率高。本文拟从中医药治疗进展进行综述，为临床治疗该疾病提供参考。