关键词： 宫腔粘连   子宫内膜腺体开口密度   子宫内膜厚度   妊娠  

摘要： 目的:探讨一种新的可能有效预测宫腔粘连患者术后妊娠的指标-宫腔镜下子宫内膜腺体开口密度(The density of endometrial glandular openings,DEGO)与目前临床相对认可的子宫内膜厚度对宫腔粘连患者术后妊娠的预测价值。方法:前瞻性选取2020年10月至2021年9月于中南大学湘雅三医院医疗联合体长沙江湾生殖与遗传专科医院诊治的宫腔粘连患者为研究对象,收集研究对象的基本信息及研究变量(手术前后子宫内膜厚度及术后子宫内膜腺体开口密度,子宫内膜腺体开口密度为应用智能子宫内膜腺体开口自动计数软件识别);统计学分析筛选出有意义的变量(P<0.1有统计学意义),建立宫腔粘连患者术后妊娠的预测模型,分别计算以DEGO和内膜厚度为主变量的预测模型的曲线下面积,比较其预测精度(P<0.05有统计学意义)。结果:1.在本研究中,最终共纳入69名研究对象,治疗结束后半年随访,失访3人,末次DEGO分级中,G1级-G3级的妊娠率分别为60%、50%、21.4%,差异有统计学意义(P=0.029);以7mm为截断值,比较首次子宫内膜厚度,<7mm和≥7mm两组的妊娠率分别为31.4%、66.7%,差异有统计学意义(P=0.014),比较末次子宫内膜厚度,<7mm和≥7mm两组的妊娠率分别为26.1%、48.8%,差异有统计学意义(P=0.076)。2.分析末次DEGO分级(最后一次手术中)与IUA患者术后AFS评分下降的关系,不同DEGO分级AFS评分下降的平均值的差异有统计学意义(P<0.05),随着DEGO分级的上升AFS评分下降的平均值是呈下降趋势的,其中以G1级AFS评分下降最显著。3.分析末次DEGO分级与宫腔粘连患者EM变化值(末次EM-首次EM)的关系,不同DEGO分级EM变化值的平均值的差异是有统计学意义的(P<0.05),其中G2级EM变化值的平均值最大。4.分析各变量与妊娠的相关性,发现产次、流产次数、首次子宫内膜厚度、末次子宫内膜厚度、末次粘连面积、末次子宫内膜腺体开口密度与妊娠相关,差异有统计学意义(P<0.1)。5.最后将有意义的变量进行二分类多因素Logistic回归分析,最终分别以末次子宫内膜腺体开口密度或首次子宫内膜厚度为主变量建立的宫腔粘连患者术后妊娠的预测模型的曲线下面积(ROC)分别为0.796、0.693。结论:子宫内膜腺体开口密度可能是一个潜在的有效的预测宫腔粘连患者术后妊娠的指标,其似乎还可以用于评估宫腔粘连患者粘连恢复情况和子宫内膜厚度改善情况,且其对宫腔粘连患者术后妊娠的预测价值似乎要高于目前常用的子宫内膜厚度。图5副,表17个,参考文献51篇

关键词： 电针   宫腔粘连   自主神经   关元   三阴交   α7烟碱型乙酰胆碱受体   JAK2/STAT3信号通路  

摘要： 背景与目的:宫腔粘连(intrauterine adhesions,IUA)是以月经量少、闭经、反复流产、不孕等为特征性临床表现的子宫内膜损伤性疾病,内膜纤维化为其主要病理特征。免疫炎症反应伴随着子宫内膜组织再生修复及纤维化形成的整个过程,是其有效修复的关键,而神经系统和免疫系统的相互作用对于炎性反应的调节至关重要。课题组前期实验研究中观察到电针能修复大鼠损伤子宫内膜,提高胚胎着床率,但其深入机制尚未明确。本研究旨在:(1)比较三种不同方法建立的IUA大鼠模型,以探寻最理想的IUA造模方法;(2)明确腹部关元穴和下肢三阴交穴电针对IUA大鼠的效应;(3)初步探究不同部位腧穴电针治疗IUA的神经免疫机制。方法:实验一:以健康SPF级SD雌性大鼠为研究对象,分别采用95%乙醇宫腔灌注、单纯机械搔刮和机械搔刮联合脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)双重损伤三种方法建立IUA模型,两个动情周期后各组雌鼠与性成熟雄性大鼠交配,部分大鼠于孕8天取子宫组织观察胚胎着床情况;另一部分则于孕5天取子宫组织,采用HE染色观察子宫内膜组织形态;Masson染色及I型胶原蛋白(Collagen I,COLI)和转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)的免疫组化染色来评估子宫内膜纤维化程度;免疫组织化学染色检测细胞角蛋白(Collagen I,COL I)和波形蛋白(Vimentin,Vim)的表达来评估子宫内膜的损伤程度;蛋白免疫印迹(Western Blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测子宫内膜整合素 avβ3、白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF)和同源框基因 10(Homeobox gene,HOXA10)的表达以评价子宫内膜容受性。实验二:在实验一的研究基础上,采用机械搔刮联合LPS感染的方法建立IUA大鼠模型,将大鼠分为假手术组、模型组、电针关元组、电针三阴交组,两个电针组均用双极针行单穴电针,电针参数为2/15Hz,2mA,15min/次,连续治疗两个动情周期后与雄鼠合笼,部分大鼠于孕8天观察各组胚胎着床情况,另一部分则于孕5天取大鼠子宫组织,分别从子宫内膜组织形态、子宫内膜纤维化程度、子宫内膜上皮细胞和基质细胞的修复情况、子宫内膜容受性及子宫组织促炎因子的表达水平几个方面评价电针治疗IUA大鼠的效应。实验三:在实验二的研究基础上,检测电针对未孕状态下大鼠子宫局部炎症因子的调节作用;采用电生理记录仪对心电信号进行采样并用频域指标分析心率变异性;检测子宫组织交感神经标志物酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)、副交感神经标志物乙酰胆碱转移酶(Choline acetyl transferase,ChAT)、子宫巨噬细胞中α7烟碱型乙酰胆碱受体(alpha7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR)的表达及 JAK2/STAT3 信号通路相关蛋白的表达。实验四:在实验三的研究基础上,将SD雌性大鼠分为假手术组、模型组、电针三阴交组、α7nAChR特异性拮抗剂MLA+电针三阴交组、JAK2/STAT3信号通路抑制剂AG490+电针三阴交组。电针组电针治疗参数同实验二,连续治疗两个动情周期后一部分与雄鼠合笼,孕8天观察胚胎着床情况;另一部分大鼠于动情后期/间期取材,HE染色观察大鼠子宫内膜组织形态;Masson染色观察子宫内膜纤维化情况;酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbrnt assay,ELISA)和RT-qPCR检测子宫组织促炎因子白细胞介素-1 β(Interleukin-1 β,IL-1 β)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor,TNF-α)的表达;Western Blot检测JAK2/STAT3信号通路相关蛋白的表达。结果:1.宫腔粘连大鼠模型的建立及评价:(1)单纯机械搔刮组子宫内膜上皮细胞和基质细胞完整且腺体丰富;与假手术组相比,子宫内膜纤维化面积、内膜容受性相关分子的表达及胚胎植入数目均无明显差异。(2)95%乙醇宫腔灌注组部分可见近卵巢端子宫水肿,有透明积液;内膜层坏死严重,上皮细胞和基质细胞结构不完整,间质区可见大量胶原纤维聚集形成致密粘连;与假手术组相比,子宫内膜纤维化面积显著增加,子宫内膜腺体数目、内膜容受性相关分子的表达及胚胎植入数目均明显减少。(3)联合损伤组子宫内膜层结构不完整,宫腔狭小,间质充满蓝色胶原纤维,结构紊乱;与假手术组相比,子宫内膜纤维化面积显著增加,子

关键词： 宫腔粘连   羊膜移植   低频电刺激   子宫内膜再生  

摘要： 目的:观察新鲜羊膜移植联合低频电刺激治疗对中重度宫腔粘连患者术后的月经情况、宫腔恢复情况、子宫内膜厚度、宫腔粘连评分、临床疗效以及妊娠率的影响。方法:选择2019年7月至2021年8月期间就诊我院妇科门诊,并经宫腔镜检查诊断为中、重度宫腔粘连的患者,按照纳入及排除标准筛选符合条件的研究对象,共收集有效病例77例,根据患者意愿分为对照组(42例)、研究组(35例),对照组、研究组均在宫腔粘连分离术后予以新鲜羊膜移植,研究组在对照基础上予以低频电刺激治疗。术后1个月、3个月行妇科B超及宫腔镜检查,比较两组子宫内膜厚度、月经改善情况、宫腔恢复情况、宫腔粘连评分以及临床疗效,随访6个月记录妊娠率。结果:1.对照组、研究组年龄、孕次、产次、人工流产次数、宫腔操作次数、术前宫腔粘连程度及月经模式相比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。2.研究组术后1个月、3个月子宫内膜厚度大于对照组(P1=0.018,P2=0.002);组内比较显示,研究组、对照组术后1个月、3个月子宫内膜厚度均大于术前(P<0.05)。3.研究组术后1个月、3个月月经改善情况均优于对照组(P1=0.016,P2=0.018);研究组术后1个月、3个月宫腔恢复均优于对照组(P1=0.009,P2=0.015)。4.研究组术后3个月宫腔粘连评分、术后3月宫腔粘连评分与术前评分差值均低于对照组(P1=0.007,P2=0.004)。组内比较显示,术后3月两组宫腔粘连评分均较术前明显下降(P<0.001)。5.研究组临床疗效的有效率为88.57%,高于对照组的76.19%,但差异无统计学意义(P>0.05)。6.研究组术后6月妊娠率为25.71%,高于对照组的14.29%,但两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:新鲜羊膜移植联合低频电刺激治疗更能改善中重度宫腔粘连患者的月经情况,恢复宫腔形态,降低宫腔粘连评分,促进子宫内膜生长,但对临床疗效的影响尚需更多的证据支持,而对妊娠率的影响需长期随访。

关键词： 宫腔粘连   发病机制   TUG1   ChREBP网络成员  

摘要： 【目的】通过构建宫腔粘连大鼠模型了解TUG1和ChREBP网络成员在IUA大鼠模型的子宫内膜细胞的细胞质和细胞核内的表达,从而探讨TUG1是否参与宫腔粘连的发生及其意义。【方法】采用机械刮宫法+脂多糖感染建立大鼠宫腔粘连模型。大鼠分为对照组、IUA组两个组。造模2周后解剖大鼠,大体观察IUA程度,收集大鼠子宫内膜组织。分别使用HE、Masson染色评估对照组及IUA组子宫内膜的腺体数量和纤维化程度;抽取对照组、IUA组大鼠的血清,使用ELISA法检测IL-1β、TNF-α和IL-6表达;通过Western blot分别检测两组中ChREBP网络成员(ChREBP、Mlx、Max、Mxd1、HDAC1)在子宫内膜细胞的细胞质和细胞核内的蛋白表达量;通过RT-q PCR分别检测两组中TUG1在子宫内膜细胞的细胞质和细胞核内的表达水平。【结果】与对照组相比,IUA组大鼠宫腔可见环形狭窄、粘连。HE染色结果显示:与对照组相比IUA组子宫内膜的腺体数量明显下降。Masson染色结果显示:与对照组相比IUA组子宫内膜纤维化程度高。与对照组相比IUA组IL-1β、TNF-α和IL-6的表达水平升高,细胞核中ChREBP、Mix、Max、Mxd1、HDAC1表达水平下降,而细胞质中ChREBP、Mix、Max、Mxd1、HDAC1表达水平升高,细胞核中TUG1的表达水平下降,而细胞质中TUG1表达水平升高。【结论】1.机械刮宫法+脂多糖感染可成功建立大鼠宫腔粘连模型。***-1β、TNF-α和IL-6可能参与IUA的发生。***1、CHREBP网络成员在子宫内膜组织细胞中表达增加,TUG1、CHREBP网络成员共同参与宫腔粘连的发生。

关键词： 宫腔粘连   LAMB3   RhoA/ROCK1/MYL9信号通路   肌成纤维化  

摘要： 目的和意义:通过转录组测序确定重度宫腔粘连差异基因层粘连蛋白亚单位β3(Laminin beta-subunitβ3,LAMB3),探究LAMB3调控子宫内膜间质细胞肌成纤维化转化的影响,通过生物信息学分析下游调控通路,探索LAMB3在宫腔粘连的作用机制。 方法:第一部分,通过转录组测序在宫腔粘连组和对照组子宫内膜组织中发现差异表达基因。应用基因本体论(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析寻找差异显著的通路。通过实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)验证转录组测序的可靠性。利用qRT-PCR和免疫组织化学染色验证差异显著LAMB3基因的信使核糖核酸(Messenger Ribonucleic Acid,mRNA)和蛋白在宫腔粘连组和对照组子宫内膜表达。第二部分,构建了沉默和过表达LAMB3的子宫内膜间质细胞(Endometrial stromal cells,ESC)的稳定转染细胞株。通过检测肌成纤维化生物标记物在子宫内膜间质细胞表达变化情况,阐明LAMB3对子宫内膜间质细胞肌成纤维细胞表型转化的作用。采用了鬼笔环肽对细胞内纤维状肌动蛋白(Filamentous actin,F-actin)的定位,探究LAMB3对ESC细胞骨架重构的影响。第三部分,通过构建大鼠宫腔粘连动物模型,通过动物体内实验进一步验证LAMB3对宫腔粘连大鼠子宫内膜纤维化、胚胎植入和活产数的影响。第四部分,通过RhoA/ROCK1/MYL9通路的激活剂油酰基-L-α-溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid,LPA)和抑制剂Y-27632在ESC细胞中双向验证沉默LAMB3和过表达LAMB3对通路蛋白的影响和肌成纤维化逆转作用。在大鼠子宫粘连动物模型,验证Y-27632对宫腔粘连大鼠子宫内膜纤维化、胚胎植入和活产数的影响。 结果: 1、通过转录组测序技术(transcriptome sequencing,RNA-seq)在宫腔粘连组和对照组的子宫内膜组织中发现了399个差异表达基因。GO富集分析富集评分由高到低的依次包括金属内肽酶活性、电压门控钾通道活性、肌肉收缩和细胞外区。KEGG富集分析差异显著性的通路涵盖了血管平滑肌收缩、粘着斑、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)信号通路。 2、通过qRT-PCR证实转录组测序的可靠性。转录组测序、qRT-PCR、免疫组织化学染色结果均显示宫腔粘连组LAMB3的mRNA和蛋白表达量高于对照组,确定LAMB3作为下一步研究的目的基因。 3、通过检测肌成纤维化生物标记物在ESC表达变化情况,阐明LAMB3促进子宫内膜间质细胞肌成纤维细胞表型转化。 4、LAMB3的激活和沉默促进ESC细胞骨架的重构,导致细胞形态和肌动蛋白丝的分布改变。 5、通过动物体内实验进一步验证干扰LAMB3后缓解了宫腔粘连大鼠子宫内膜纤维化,沉默LAMB3可改善胚胎植入数和活产数。 6、LAMB3通过RhoA/ROCK1/MYL9通路调控子宫内膜间质细胞肌成纤维化转化。 7、RhoA/ROCK1/MYL9通路抑制剂Y-27632对宫腔粘连大鼠子宫内膜纤维化、胚胎植入数和活产数有明显改善作用。 结论:本研究从临床组织样本、体外细胞分子实验、动物体内实验证实了LAMB3通过RhoA/ROCK1/MYL9通路调控子宫内膜间质细胞肌成纤维化转化,最终影响子宫内膜纤维化、胚胎植入和活产数。可将LAMB3作为宫腔粘连的异质性生物学分子,参与子宫内膜纤维化过程,通过干预RhoA/ROCK1/MYL9通路调控为基因治疗和药物干预提供新的靶点。

关键词： 宫腔粘连   中医综合疗法   人工周期   血清炎症因子  

摘要： 目的 通过观察中医综合疗法加人工周期治疗宫腔粘连的临床疗效,探讨其治疗机理,进而探索出一个安全有效的治疗方案,以期更好地指导临床。方法 1.查找中西医诊疗宫腔粘连的文献,包括治疗宫腔粘连已有的临床研究、关于宫腔粘连的机制研究和临床研究。2.将52例宫腔镜检查术后确诊为宫腔粘连的患者,随机分为对照组和试验组,每组各26人。对照组患者术后予中药汤剂加人工周期治疗1月后再次住院复查宫腔镜。试验组在前者基础上加用中药保留灌肠1个月。治疗前后分别记录填写患者病史信息、中医证候评分、宫腔镜术中宫腔情况、辅助检查结果等。结果 1.中医证候评分:两组患者治疗后中医证候评分皆优于治疗前,有显著性差异(P<0.05);对照组治疗有效率为20.8%,试验组治疗有效率为24%。两组疗效类似,无统计学差异。2.宫腔镜评分:两组患者治疗后宫腔镜评分均优于治疗前;对照组有效率91.67%,试验组有效率92.00%。两组疗效类似,无统计学差异。3.血清炎症因子:两组患者治疗前后血清中IL-4、IL-10、IFN-γ、IL-2、TNF、IL-6试验结果没有差异。结论 1.宫腔镜手术后采用中医综合疗法联合人工周期对于预防宫腔再次粘连有一定的治疗作用;2.本研究中,中医综合疗法联合人工周期治疗宫腔粘连患者,对其血清炎症因子的影响不大;3.中药、灌肠、人工周期、宫腔镜手术治疗具有一定的安全性,此治疗方案可以考虑进一步深入研究,进行推广。

关键词： 宫腔粘连   透明质酸钠   Foley球囊   月经模式   妊娠结局  

摘要： 目的观察中、重度宫腔粘连患者宫腔粘连电切术后不同干预方案的临床效果。方法选取2016年01月-2020年06月南京医科大学附属常州第二人民医院妇科收治的中、重度宫腔粘连患者(中度粘连128例,重度粘连61例)作为研究对象,患者均接受宫腔粘连电切术治疗。根据术后预防再粘连方案将患者分为凝胶组(采用自交联透明质酸钠凝胶方案)、球囊组(采用Foley球囊方案)和联合组(采用自交联透明质酸钠凝胶联合Foley球囊方案)。观察并比较3组术后粘连复发、月经模式改变情况,并随访有生育要求患者的妊娠结局及产科并发症情况。分析探讨宫腔粘连程度、宫腔操作次数、月经模式、年龄对妊娠结局的影响。结果联合组术后再粘连发生率低于凝胶组、球囊组,差异有统计学意义(P<0.05);3组术后月经模式改变情况及术后妊娠率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。有生育要求的患者中,自然妊娠率62.5%(50/80),活产率为76.00%(38/50)。产科并发症方面:3例早产,10例先兆流产,7例胎盘粘连,3例前置胎盘,3例产后出血,2例输血。Logistic回归分析结果显示,术前宫腔粘连程度和术后月经模式为中重度宫腔粘连患者妊娠结局的独立影响因素。结论1.自交联透明质酸钠凝胶联合Foley球囊预防宫腔再粘连的效果优于单独使用自交联透明质酸钠凝胶或Foley球囊。2.重度宫腔粘连患者的预后相对较差,术前宫腔粘连程度和术后月经模式会影响患者的妊娠结局。

关键词： 宫腔粘连   补肾活血方   雌孕激素序贯治疗   回顾性研究  

摘要： 目的:通过回顾性研究,观察补肾活血方联合雌孕激素治疗宫腔粘连术后的临床疗效,探讨二者是否具有协同作用,旨在为多途径预防宫腔粘连再粘连提供新思路、新方法。方法:通过收集2019年1月至2020年12月在我院住院行宫腔镜检查明确诊断为宫腔粘连并行宫腔粘连分离术(TCRA)的病例,筛选出符合纳入标准的133例轻、中度且辨证为肾虚血瘀型宫腔粘连患者的病例资料进行回顾性研究。根据治疗方法将其分为中药组、西药组、中西药组。中药组予补肾活血方治疗,共38例;西药组予雌孕激素序贯治疗,共41例;中西药组予补肾活血方+雌孕激素序贯治疗,共54例。观察三组治疗前后子宫内膜厚度、月经情况、中医证候积分、宫腔粘连分级评分及随访1年内的妊娠情况。结果:1.一般资料比较:三组患者的一般资料(年龄、病程、宫腔操作次数、宫腔粘连程度、术前子宫内膜厚度、中医证候积分)对比,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。2.子宫内膜恢复情况:治疗前后比较,三组患者的子宫内膜厚度均增加,组内差异具有统计学意义(P<0.05);中西药组子宫内膜厚度较中药组、西药组增加明显,差异有统计学意义(P<0.05),中药组与西药组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。说明中西药组在促进子宫内膜修复方面较中药组、西药组效果更显著。3.宫腔粘连改善情况:治疗前后比较,三组患者的宫腔粘连评分均下降,组内差异具有统计学意义(P<0.05),说明三种治疗方式均能够有效改善宫腔粘连情况。中药组、西药组、中西药组三组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05),说明三种治疗方式在改善宫腔粘连程度上无显著差别。4.中医证候改善情况:在主症(月经情况)总积分方面,中西药组在主症总积分改善上优于中药组及西药组(P<0.05),中药组与西药组在主症总积分改善上相一致(P>0.05);在中医次症总积分方面,中西药组在次症总积分改善上要优于中药组及中西药组(P<0.05),中药组要优于西药组(P<0.05);在中医证候总积分方面,中西药组在中医证候总积分改善方面要优于中药组及西药组(P<0.05),中药组与西药组在中医证候总积分改善方面相一致(P>0.05),说明中西药组在主症及次症改善方面均优于中药组及西药组;中药组在主症改善方面与西药组疗效相当,在次症改善方面要优于西药组。5.妊娠情况:治疗后随访1年,中药组轻度粘连患者18人,妊娠14人,妊娠率为78%;中度粘连患者18人,妊娠7人,妊娠率为39%;西药组轻度粘连患者18人,妊娠13人,妊娠率为72.2%;中度粘连患者23人,妊娠9人,妊娠率为39%;中西药组轻度粘连患者25人,妊娠21人,妊娠率为84%;中度粘连患者29人,妊娠20人,妊娠率为69%。卡方检验结果显示,妊娠率在三组间的分布具有显著性差异(P<0.05),说明中西药组在提高妊娠率方面要优于中药组及中药组。6.总疗效方面:治疗后,中西药组的总有效率为90.7%,中药组总有效率为73.2%,西药组总有效率70.0%,中西医组总疗效高于西药组及中药组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:中药组、西药组、中医药组三组比较,中西药组即补肾活血方联合雌孕激素治疗轻、中度宫腔粘连术后(肾虚血瘀证)效果更佳,中西药结合治疗在促进子宫内膜修复、改善月经情况及中医证候、改善妊娠情况等方面具有良好的临床疗效,值得临床推广。

关键词： 电针   宫腔粘连   子宫内膜修复   纤维化   外泌体  

摘要： 目的: 1.明确电针对宫腔粘连模型大鼠的子宫内膜修复治疗效应。 2.明确子宫内膜干细胞外泌体在电针修复宫腔粘连模型大鼠子宫内膜的治疗靶点作用,初步揭示电针治疗宫腔粘连模型的效应机制。 方法: 实验一、将45只雌性SD大鼠按随机数字表法随机分为3组,空白组、模型组、电针组各15只。通过机械搔刮联合脂多糖感染双重损伤法建立大鼠宫腔粘连模型。电针组在右侧子宫造模后第2天予以针刺“关元”、电针“子宫”“三阴交”,1次/d,15 min/次,连续干预2个动情周期;空白组、模型组予相同方法麻醉固定。各组随机选取5只雌鼠,分别于造模后第2个动情期过量麻醉后脱颈椎处死,取子宫组织;各组其余10只雌鼠,于造模后第2个动情期合笼,于妊娠第8天取出子宫组织,比较各组大鼠子宫内胚胎着床数目。HE染色法观察大鼠子宫内膜形态及腺体数目变化,Masson染色法观察大鼠子宫内膜纤维化面积,免疫组织化学法检测大鼠子宫内膜组织中Ⅰ型胶原蛋白、转化生长因子β1的蛋白表达,Western Blot法检测大鼠子宫内膜组织中整合素αγβ3的蛋白表达。 实验二、将45只雌性SD大鼠按随机数字表法随机分为3组,空白组、模型组、电针外泌体(electroacupuncture exosomes,EA-exo)组各15只。造模方法同实验一。另有10只雌性SD大鼠造模后连续电针干预2个动情周期,取出子宫组织并提取、分离EA-exo,通过透射电镜、纳米颗粒示踪分析、Western Blot法进行鉴定。EA-exo组于动情期右侧子宫造模后进行EA-exo移植。各组随机选取5只雌鼠,分别于造模后第2个动情期过量麻醉后脱颈椎处死,取子宫组织;各组其余10只雌鼠,于造模后第2个动情期合笼,于妊娠第8天取出子宫组织,比较各组大鼠子宫内胚胎着床数目。HE染色法观察大鼠子宫内膜形态及腺体数目变化。 结果: 1.电针对宫腔粘连大鼠子宫内膜修复的效应研究 (1)各组大鼠子宫内膜形态及腺体数目比较:空白组大鼠动情期的子宫组织结构完整,可见清晰的内膜层,宫腔通畅,形态规则,内膜层腺体分布较为密集;模型组大鼠动情期的子宫内膜层连续性差,宫腔明显狭窄呈粘连状态,腺体稀疏;电针组大鼠动情期的子宫组织结构基本完整,部分区域新生腺体较多,趋近于正常。与空白组相比,模型组大鼠子宫内膜腺体数目明显减少(P<0.01);与模型组相比,电针组大鼠子宫内膜腺体数目显著增多(P<0.01)。 (2)各组大鼠子宫内膜纤维化情况:空白组大鼠动情期子宫内膜见少量浅蓝色胶原纤维,呈梭形分布,排列规则;模型组大鼠动情期子宫内膜大量深蓝色胶原纤维生成,排列杂乱;电针组大鼠动情期子宫内膜可见少量蓝色胶原纤维,颜色变浅,恢复梭形排列。与空白组相比,模型组大鼠子宫内膜纤维化面积增大(P<0.01);与模型组相比,电针组大鼠子宫内膜纤维化面积明显减小(P<0.01)。 (3)各组大鼠子宫内膜组织中Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、转化生长因子β1(TGF-β1)的蛋白表达:在模型组中,棕黄色颗粒为Col-Ⅰ、TGF-β1阳性染色,上皮细胞及间质细胞均可见,质染及核染均可见。与空白组相比,模型组大鼠子宫内膜组织中Col-Ⅰ、TGF-β1蛋白表达均升高(P<0.01,P<0.01);与模型组相比,电针组子宫内膜组织Col-Ⅰ、TGF-β1蛋白表达均降低(P<0.01,P<0.05)。 (4)各组大鼠子宫内膜容受性标志分子整合素αγβ3(Integrin αγβ3)的蛋白表达:与空白组相比,模型组大鼠子宫内膜组织中Integrin αγβ3蛋白表达下调(P<0.01);与模型组相比,电针组大鼠子宫内膜组织中Integrin αγβ3蛋白表达上调(P<0.01)。 (5)各组大鼠胚胎着床情况:分别计数子宫未损伤侧及损伤侧胚胎数目,比较各组大鼠胚胎着床数。与空白组相比,模型组损伤侧子宫胚胎着床数明显下降(P<0.01);与模型组相比,电针组损伤侧子宫胚胎着床数明显增加(P<0.05)。 2.电针调控子宫内膜干细胞外泌体对宫腔粘连的治疗效应研究 (1)EA-exo的鉴定 ①透射电镜下外泌体形态:外泌体形态完整,大小不均匀,为典型的椭圆形囊泡,其外周清晰,可见膜状结构,囊泡内可见低密度物质。 ②纳米颗粒示踪分析检测外泌体粒径:大多数外泌体粒径范围在100-200 nm之间,峰值为123 nm,与外泌体理论值(30-200nm)相符。 ③外泌体特异性蛋白CD9、CD81的蛋白表达:Western Blot结果显示,外泌体表面特异性CD9、CD81蛋白存在表达,提示外泌体纯化效果较好。 (2)各组大鼠子宫内膜形态及腺体数目比较:空白组大鼠动情期的子宫组织结构完整,内膜层清晰可见,宫腔通畅,形态规则,腺体丰富密集;模型组大鼠动情期的子宫内膜层连续性被破坏,宫腔狭窄,各壁