关键词:
多囊卵巢综合症
卵泡液
免疫
T细胞亚群
细胞因子
摘要:
多囊卵巢综合症(Polycystic ovary syndrome,PCOS)是育龄妇女常见的内分泌紊乱疾病之一,是一种多病因、多层面、表现极不均一的异质性疾病,其临床特征包括雄激素过多症、排卵功能障碍以及多囊卵巢等,患者多有不孕、月经不调、痤疮、皮脂溢性皮炎、多毛症和肥胖等症状。PCOS的发病率在6%-10%之间,根据诊断标准的不同发病率会有差异。PCOS的发病机制尚未完全清楚,目前认为与下丘脑-垂体-卵巢轴功能失常、遗传、代谢等因素有关。近年来,有研究报道机体的免疫系统可能参与了PCOS的发病过程,已证实PCOS患者机体多处于慢性低程度炎症状态,包括促炎因子分泌失调、内皮细胞功能紊乱和白细胞增多等,同时在人类的排卵前卵泡中已检测到多种免疫活性细胞,包括B细胞、T细胞和单核/巨噬细胞等。但是目前,各类免疫细胞在PCOS发病过程中的作用以及相关的调控机制仍需进一步的研究阐明。本研究的目的在于利用流式细胞术检测PCOS患者及正常排卵的不孕女性卵泡液(follicular fluid,FF)中T细胞亚群的比例、活化状态和细胞因子的产量,明确在PCOS患者卵泡液中功能异常的T细胞亚群。同时进一步对相关亚群功能异常的原因进行检测,进而找出导致T细胞亚群功能异常的关键因子,为研究PCOS的发病机制提供新的实验依据,进一步证实免疫系统在其发病过程中的重要作用,同时为PCOS的治疗提供了新的思路和靶点。方法:选取20名经Rotterdam标准诊断为PCOS的不孕女性患者(PCOS组);36名排除脑垂体或卵巢内分泌紊乱,以及肾上腺或甲状腺功能异常的正常排卵不孕女性作为对照(NOW组)。所有患者均进行体外受精(in-vitro fertilization,IVF)-胚胎移植或卵母细胞胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)。收集所有患者的卵泡液并分离其中的淋巴细胞,用细胞表面染色法检测总T(CD3+)细胞、CD4+Th细胞、CD8+Tc细胞和CD4+CD25+T-reg细胞的比例;CD4+Th细胞、CD8+Tc细胞表面活化分子CD25和CD69的表达。卵泡液淋巴细胞经PMA和ionomycin联合处理后,利用胞内因子染色法检测CD4+Th和CD8+Tc细胞内IFN-γ和IL-17A的表达。最后,利用流式细胞术分别对CD4+Th和CD8+Tc细胞中PD-1和IL-10的表达进行了检测。结果:1.与NOW组相比,PCOS组患者卵泡液中CD3+T细胞的比例由66.2%±4.5%下降到54.8%±5.3%,差异具有统计学意义(P<0.05)。在检测的3个T细胞亚群中,CD8+Tc细胞的比例显著低于NOW组(28.4%±3.5%vs.16.8%±6.2%,P<0.01),而CD4+Th细胞和CD4+CD25+T-reg细胞的比例在两组间无明显变化(P>0.05)。***组患者卵泡液CD4+Th细胞和CD8+Tc细胞表面活化分子CD69的表达显著低于NOW组(P<0.05,P<0.01),而两组间CD25的表达在CD4+Th细胞和CD8+Tc细胞表面均无明显差异(P>0.05)。3.经PMA和ionomycin联合处理后,PCOS组患者卵泡液CD4+Th细胞和CD8+Tc细胞表达IFN-γ的能力显著低于NOW组(P<0.05,P<0.01),但两种细胞亚群内IL-17A的表达在PCOS组和NOW组间均无明显变化(P>0.05)。4.与PCOS组患者卵泡液CD4+Th细胞和CD8+Tc细胞功能下降一致,患者CD4+Th细胞和CD8+Tc细胞中功能抑制因子PD-1的表达显著高于NOW组,但两组间IL-10的表达在两细胞亚群内均无显著差异(P>0.05)。***组患者卵泡液CD4+Th细胞和CD8+Tc细胞功能抑制因子PD-1的表达与IFN-γ的表达呈明显的负相关性(PD-1 ***-γin CD4+and CD8+T:r2=0.537 and r2=0.499,respectively,P<0.05)。***组患者卵泡液CD4+Th细胞和CD8+Tc细胞功能抑制因子PD-1的表达与血清E2水平呈正相关性(PD-1on CD4+and CD8+*** E2:r2=0.486and r2=0.512,respectively,P<0.05)。结论:1.本研究表明,在PCOS患者卵泡液中,CD3+T细胞和CD8+Tc细胞的比例显著降低,CD4+Th细胞和CD8+Tc细胞的活化和功能均处于被抑制的状态。***患者卵泡液中CD4+Th细胞和CD8+Tc细胞功能因子IFN-γ的表达与PD-1的表达呈明显的负相关性,因此,T细胞亚群功能的抑制可能是由PD-1介导的。3.反映T细胞