关键词:
多囊卵巢综合症
晚期糖基化终末产物
抗苗勒管激素
凋亡
增殖
摘要:
目的:晚期糖基化终末产物(AGEs)在多囊卵巢综合征(PCOS)女性的血液和卵泡液中显著升高,可能与PCOS的发病机制及其生殖功能有关,但AGEs参与多囊卵巢综合征的机制尚不清楚。研究发现,多囊卵巢综合征女性的血清抗苗勒氏激素(AMH)水平比正常妇女高2~3倍,且高浓度的AMH是PCOS患者无排卵的重要原因之一。临床研究提示,AGEs与AMH水平呈正相关。因此,AGEs对AMH的调控可能在PCOS的发生发展中起着重要作用。本课题旨在观察AGEs对卵巢颗粒细胞AMH表达及模型大鼠PCOS的影响,并初步探讨其可能的机制。方法:1)体外培养卵巢颗粒细胞(KGN细胞系),用不同浓AGEs(0,25,50,100,200μg/m L)或100μg/m L AGEs处理不同时间(0,3,6,12,24,48h),采用Western blot和q RT-PCR检测AMH和类固醇生成因子(SF1)的表达,MTT、Hoechst检测细胞的增殖和凋亡;2)采用si RNA或抑制剂分别干预AMH、SF1及PI3K等关键分子的表达,采用Western blot、TUNEL试剂盒分别检测相应蛋白的表达并观察细胞增殖和凋亡的变化;3)以SD雌性大鼠(40只)为研究对象,分别饲喂普通饲料或高AGEs饲料12周。最后3周增加来曲唑(1mg/Kg·d)灌胃,观察大鼠动情周期、卵巢体重比值变化,并采用HE染色观察大鼠卵巢组织结构的变化,采用q RT-PCR、Western blot、免疫组织化学和免疫荧光等方法分别检测大鼠卵巢中AMH、SF1及磷酸化PI3K表达的变化。结果:1)体外细胞实验发现,随着AGEs处理时间和浓度的增加,KGN细胞中AMH和SF1的表达上调(P<0.05);与对照组相比,AGEs处理后,细胞增殖相关蛋白PCNA的表达下调,而凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的比值逐渐增加,Hoechst染色发现凋亡细胞数量显著增多(P<0.05);2)瞬时转染si RNA沉默AMH表达后,AGEs所诱导的颗粒细胞凋亡受到抑制;干预SF1的表达后,AMH的表达降低(P<0.05);PI3K抑制剂处理后,SF1和AMH表达上调,细胞增殖相关蛋白PCNA的水平增加,凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的比值降低(P<0.05);3)与对照组相比,AGEs组和来曲唑组大鼠的动情周期出现紊乱,卵巢呈多囊样改变,卵巢皮质纤维化增多,且AMH和SF1表达上调(P<0.05),PI3K和Akt的磷酸化蛋白增加(P<0.05);与对照组比较,AGEs组和来曲唑组大鼠卵巢凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值增加,增殖相关蛋白PCNA水平降低(P<0.05)。结论:1)AGEs可上调卵巢颗粒细胞中AMH的表达,促进颗粒细胞凋亡,并抑制其增殖,促进大鼠多囊卵巢综合征的发生;2)SF1可能是介导AGEs调控AMH表达的重要靶点,其机制与PI3K/Akt信号通路磷酸化相关。