关键词： 去甲基雏菊叶龙胆酮   慢性酒精性脂肪肝   自噬   AKT-mTOR   TFEB  

摘要： 目的:去甲基雏菊叶龙胆酮(Demethylbellidifolin,DMB)是从龙胆科(Gentianaceae)假龙胆属植物尖叶假龙胆Gentianella acuta(Michx.)Hulten中提取得到的一种呫吨酮类化合物。本实验室在前期的研究中发现尖叶假龙胆的主要活性成分DMB能够减轻急性酒精性肝损伤小鼠的过度炎症反应,但其对慢性酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver disease,AFLD)的作用及调控机制尚不清楚。因此本课题将着重研究DMB对慢性酒精性脂肪肝(AFLD)的保护作用,并进一步探讨其可能的调控机制,为DMB及尖叶假龙胆的临床应用和相关新药开发提供依据。方法:1、DMB对慢性酒精性脂肪肝小鼠药效作用:75只雄性C57BL/6N小鼠随机分为五组,正常对照组、模型组、美他多辛阳性药组、DMB低剂量组和DMB高剂量组。模型小鼠饲喂含5%v/v酒精的Lieber-De Carli液体饲料,建立小鼠慢性酒精性脂肪肝模型,正常对照组小鼠给予等能量不含酒精的液体饲料配对喂养。实验开始后,各给药组按照DMB 10 mg/kg、20 mg/kg,美他多辛200 mg/kg的剂量灌胃给药7周。每天检测小鼠体重,观察小鼠粪便形态、毛色及活动状态等。实验结束后,收集小鼠血清和肝脏样本。全自动生化分析仪检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)、天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase,AST)、总胆固醇(Total cholesterol,T-CHO)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、谷氨酰基转移酶(Gamma glutamyltransferase,GGT)、高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的含量。苏木素-伊红染色法(Hematoxylin eosin staining,H&E)和油红O染色法观察肝脏病理损伤和脂质蓄积情况。使用商品化试剂盒检测小鼠肝脏组织中T-CHO和TG含量。采用免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)检测小鼠肝脏MPO和F4/80原位表达情况。使用商品化试剂盒检测小鼠肝脏中抗氧化相关分子CAT、SOD、GSH和GSH-Px的活性和脂质过氧化产物MDA含量。采用免疫组化技术(Immunohistochemical,IHC)分析小鼠肝脏脂质过氧化产物4-HNE的表达。运用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,q PCR)及蛋白质印迹法(Western Blot,WB)检测肝脏中氧化应激及脂质代谢相关基因及蛋白的表达情况。透射电镜观察小鼠肝脏亚细胞结构,明确DMB对酒精性脂肪肝的改善作用。2、DMB对酒精诱导条件下小鼠肝脏自噬的作用:体内实验:WB检测自噬指示蛋白微管关联蛋白-轻链3(Microtubule-associated protein-light chain 3,LC3)和泛素样结合蛋白(Sequestosome-1,p62),自噬体形成相关自噬相关蛋白5(Autophagy Related Protein5,ATG5)和自噬相关蛋白7(Autophagy Related Protein 7,ATG7),溶酶体相关溶酶体相关膜蛋白(Lysosome-associated membrane protein)LAMP1和LAMP2的表达情况,观察DMB对酒精性脂肪肝小鼠肝脏自噬的作用。体外实验:培养小鼠正常肝细胞AML12细胞系,两步胶原酶灌注法提取小鼠原代肝细胞。细胞培养基中加入酒精(200m M)处理24小时构建酒精性脂肪肝体外模型,给予指定的药物处理,并进行相关指标检测。首先油红O染色观察AML12细胞和原代肝细胞中脂滴数量变化。Bodipy染色观察AML12细胞及原代肝细胞中加入自噬抑制剂氯喹(Chloroquine,CQ)后脂滴数量变化,验证DMB对酒精性脂肪肝的改善作用与自噬的关联性。WB检测AML12细胞中自噬指示蛋白LC3、p62,自噬体形成相关ATG5、ATG7和溶酶体膜蛋白LAMP1、LAMP2的表达。对AML12细胞进行stub RFP-sens GFP-LC3腺病毒转染,观察DMB对自噬通量的影响。AML12细胞加入自噬抑制剂CQ和3-甲基腺嘌呤(3 Methyladenine,3MA)处理6小时后,WB检测自噬指示蛋白LC3、p62的表达情况,验证DMB对肝细胞自噬的激活作用。3、DMB调控肝脏脂质自噬的具体

关键词： 非酒精性脂肪肝病   五苓散   细胞自噬   氧化应激   腺苷酸活化蛋白激酶   哺乳动物雷帕霉素靶蛋白  

摘要： 目的:通过观察五苓散对NAFLD模型大鼠血脂、肝脏脂质、肝组织病理形态学、肝功能、氧化应激、炎症因子以及肝组织中AMPK/mTOR-TFEB通路相关基因和蛋白表达的影响,探讨其对NAFLD的防治效果及作用机制。 方法:60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药(多烯磷脂酰胆碱胶囊)组及五苓散低、中、高剂量组,每组10只。恒温恒湿饲养,适应性喂养1周后,除正常组外,其余各组均使用高脂饲料喂养2周,其后开始边造模边给药,模型组给予蒸馏水,其余各组给予相应药物治疗。给药6周后,麻醉状态取血及肝组织,检测血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、MDA、IL-1β、IL-6的含量及AST、ALT、SOD、GSH、CAT的活性;检测肝脏中TC、TG、FFA、MDA的含量及SOD、GSH、CAT的活性;透射电镜观察肝细胞超微结构;qRT-PCR法检测肝脏中Beclin1、ULK1、TFEB、LC3、p62 mRNA的表达,Western Blot法检测肝脏中AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、TFEB的蛋白表达情况;免疫组织化学法检测肝脏中Beclin1、ULK1、LC3、p62的蛋白表达;HE染色法、油红染色法观察肝脏病理形态学和脂质蓄积情况。 结果:与正常组比,模型组大鼠肝细胞出现大量脂滴和气球样病变,血清中TC、TG、LDL-C、MDA、IL-1β、IL-6含量及ALT、AST的活性升高(P<0.01),HDL-C的含量和SOD、GSH、CAT的活性降低(P<0.01);肝组织中TC、TG、FFA、MDA的含量和p-mTOR蛋白以及p62 mRNA表达升高(P<0.01),肝组织中SOD、GSH、CAT活性和p-AMPK蛋白以及Beclin 1、ULK1、TFEB、LC3蛋白含量和mRNA表达水平降低(P<0.01)。 与模型组比,各用药组大鼠肝细胞脂肪空泡积聚、气球样病变情况较轻,血清TC、TG、LDL-C、MDA、IL-1β、IL-6含量,ALT、AST的活性降低(P<0.01),HDL-C的含量,SOD、GSH、CAT的活性升高(P<0.01);肝组织中TC、TG、FFA、MDA的含量、p-mTOR蛋白及p62 mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01),肝组织中SOD、GSH、CAT活性与p-AMPK蛋白和Beclin 1、ULK1、TFEB、LC3蛋白及mRNA的表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。 与低剂量组相比,高剂量组血清HDL-C含量及GSH、CAT活性升高(P<0.05或P<0.01),TG、LDL-C、IL-1β含量及AST、ALT活性降低(P<0.05或P<0.01),肝组织SOD、CAT活性、p-AMPK蛋白及Beclin 1、ULK1、TFEB、LC3 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01),TC、TG、FFA含量及p62 mRNA与蛋白降低(P<0.05或P<0.01);中剂量组ULK1 mRNA、p-AMPK蛋白及TFEB的mRNA与蛋白升高(P<0.05或P<0.01),FFA含量及p62 mRNA表达降低(P<0.05)。 结论:五苓散能降低血脂及肝脏脂质含量,保护肝功能,减轻肝脏脂肪变性,具有良好的调脂保肝作用。其作用机制可能与调控AMPK/mTOR-TFEB信号通路相关蛋白和基因的表达,促进自噬,抑制氧化应激和炎症反应有关。

关键词： 肝脏重量   重度肥胖   脂肪肝   积极防治   任其发展   总脂   肝细胞   肝硬化  

摘要： 脂肪肝大家较熟悉,它是指脂类在肝细胞内过多堆积而言。正常人肝的总脂量占肝脏重量的5%,内含胆固醇、甘油三酯和磷脂等。若总脂量超过肝脏重量的5%,即称脂肪肝。如果对脂肪肝不积极防治,任其发展,有可能形成肝硬化,造成不良后果。近年来,脂肪肝患者呈现出年轻化趋势,20~40岁年龄段脂肪肝患病率在20%以上,以中青年男子患病为多;中小学生患脂肪肝的比率也日益增高。据一项研究显示,重度肥胖儿童脂肪肝的发病率高达80%,10个"胖墩儿"中就有8个患有脂肪肝。

关键词： 蛋鸡脂肪肝   诊疗   防治  

摘要： 笼养蛋鸡脂肪肝综合征是蛋鸡营养代谢病之一,可引起鸡群死淘率增加、产蛋率下降和经济损失等。笔者根据几年来临床诊疗观察和调查,总结了几点综合防治该病的技术措施。

关键词： 营养过剩   低蛋白日粮   喂养方法   高产蛋鸡   脂肪肝综合征   主要发病原因   养殖户   微量元素  

摘要： 1笼养鸡脂肪肝综合征的发病原因1.1饲料原因目前普遍认为,脂肪肝综合征的主要发病原因是喂养方法不科学,例如在喂养过程中选择了营养过剩的日粮,或者长期忽视了某些微量元素等都有可能诱发笼养鸡脂肪肝综合征。例如,在高产蛋鸡词养过程中,若养殖户大量地喂食低蛋白日粮会造成鸡的营养过剩,最终提高脂肪肝综合征的发病率。同时部分与一碳单位代谢相关的营养物质匮乏也会引发该病症,例如叶酸、维生素B、蛋氨酸等。甚至部分养殖户所喂养的词料质量不理想,存在重金属超标或者含有某些毒素的情况,这种情况下可能破坏鸡的肝脏组织,最终导致发病。

关键词： 蛋鸡   脂肪肝综合征   发病原因   临床症状   综合防治措施  

摘要： 肝脏是蛋鸡在脂质代谢过程中较为重要的器官之一,由于肝脏的脂质代谢旺盛,故容易引起体内脂肪代谢紊乱,出现脂肪肝综合征。介绍了蛋鸡脂肪肝综合征的发病原因、临床症状以及综合防治措施,以期为蛋鸡养殖户科学饲养管理提供参考。

关键词： 蛋鸡养殖   存在问题   脂肪肝综合症   危害与防治  

摘要： 鸡蛋是我国人民常食的食品之一,因此蛋鸡的饲养也成为影响民生水平的重要产业。蛋鸡在养殖中会受到脂肪肝综合症的影响,出现蛋鸡产蛋率下降甚至死亡的问题,带来巨大经济损失。本文将介绍蛋鸡养殖存在的问题及脂肪肝综合症的危害与治疗,供参考。

关键词： 脂肪肝   诊断   防控   措施  

摘要： 随着我国规模化、集约化养羊业的发展,羊的饲养管理方式发生了很大的变化,规模化圈养使羊活动量大幅度减少,强度育肥饲喂大量的精料,青贮食草饲喂量大,处理不科学,草料的不合理搭配、怀孕羊生理性营养需要不能满足,脂肪大量分解超越了肝脏的脂肪代谢功能等造成羊脂肪肝的发病率大幅度增加,同时在脂肪肝的临床症状方面发生了较大变化,育肥羊造成生长发育缓慢、肢蹄病;怀孕羊发生瘫痪、流产、早产、弱胎、死胎率增加,羔羊成活率大幅度降低等危害,所以我们暂称为脂肪肝综合征。为了方便该病的防治,我们对其发病原因和基本机制进行了调查与分析,探索了临床诊断与有效防控措施,为今后进一步研究该病提供依据。